川芎嗪衍生物、其制备方法及其医药用途

摘要

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类通式(I)的川芎嗪衍生物、它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医药用途，特别是作为抗心肌缺血再灌注损伤药物的用途。

权利要求

1.通式I的化合物或其药学上可接受的盐：

其中R代表：氢、氯、溴、氟、甲氧基、乙氧基、烯丙氧基、硝基、三氟甲基、氰基、乙酰基、C1～C4烷基磺酰基、氨磺酰基、C1～C4烷胺基磺酰基、烯丙胺基磺酰基、吗啉-1-基磺酰基、哌啶-1-基磺酰基、4-甲基哌啶-1-基磺酰基、吡咯-1-基磺酰基或

2 2

X代表：氧、硫或NR ；R 代表：氢、C1～C4烷基、烯丙基、甲酰基、乙酰基、丙酰基、甲磺酰基、乙磺酰基或R1代表：氢、C1～C4烷基、氯、溴、氟、甲氧基、硝基、三氟甲基或乙酰基，两个R1取代基团可以同时代表相同的基团，也可以各自代表不同的基团。

2.权利要求1的化合物，其中R代表：氢、氯、溴、氟、甲氧基、硝基、三氟甲基、乙酰基、甲磺酰基、氨磺酰基、吗啉-1-基磺酰基、哌啶-1-基磺酰基、4-甲基哌啶-1-基磺酰基或吡咯-1-基磺酰基。

3.权利要求2的化合物，其中R代表：氢、氯、溴、氟、硝基、三氟甲基、甲磺酰基或氨磺酰基。

4.权利要求1的化合物，其中X代表：氧或NR2，R2代表：氢、C1～C2烷基、烯丙基、甲酰基、乙酰基或甲磺酰基。

5.权利要求4的化合物，其中X代表氧或NH，X基团位于酰胍基的对位或邻位。

6.权利要求1的化合物的药学上可接受的盐，其中药学上可接受的盐是通式I化合物与下列酸形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、碳酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸或对甲苯磺酸。

7.权利要求1的化合物的制备方法，包括：

其中R和X的定义如权利要求1中所述。

8.一种药物组合物，含有权利要求1至6中任一项的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。

9.权利要求1至6中任一项的化合物用于制备预防或治疗心肌缺血-再灌注损伤相关的疾病的药物的用途。

10.权利要求9的用途，其中心肌缺血-再灌注损伤相关的疾病是心律失常、心室纤维化、心肌梗死、心绞痛、心力衰竭、心肌缺血、外周或中枢神经系统缺血症状、中风的缺血症状、外周组织器官或四肢缺血、休克、缺血或再灌注引起的组织器官急慢性损伤、失调或间接后遗症。

说明书

川芎嗪衍生物、其制备方法及其医药用途

技术领域

[0001] 本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类川芎嗪衍生物、它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医药用途，特别是作为抗心肌缺血再灌注损伤药物的用途。

背景技术

[0002] 川芎嗪(ligustrazine)，化学名为四甲基吡嗪(tetramethylpyrazine，TMP)，是从伞形科植物川芎(ligusticum wallichii Franch)中分离提纯得到的生物碱单体。具有扩张血管、抗凝、抗血小板聚集、抗心肌缺血再灌注损伤等多种心脑血管药理作用，20世纪70年代初在我国用于临床，治疗冠状动脉粥样硬化症和缺血性脑血管疾病。

[0003]

[0004] Na+/H+交换器(Na+/H+exchanger，NHE)是一种在许多哺乳动物的各类细胞中均有表达的蛋白质，NHE能够调节细胞内pH(pHi)，并通过排出质子，移入钠离子来调节细胞容量。目前已经有9个NHE亚型被确证，分别是NHE1～9，它们分布于人体各器官。大量的实验证明，在哺乳动物的心肌细胞上以NHE-1为主，其在心肌缺血再灌注过程中起着重要作用。

[0005] NHE-1抑制剂通过抑制Na+/H+交换，避免过多Na+进入细胞内，进而使Na+/Ca2+交2+ + +
换减少，防止Ca 过度增加引起细胞挛缩，坏死。NHE-1抑制剂还通过抑制Na/H 交换，减+
少细胞内的Na 浓度，使渗透压下降，防止水分进入细胞内，因此能防止或减轻缺血后微血管内皮细胞肿胀，防止细胞坏死。由于NHE-1在正常心肌细胞中是无活性的，因此NHE-1抑制剂只特异性地作用于缺血区域，因而副作用较小。

[0006] 目前NHE-1抑制剂如：卡立泊来德(Cariporide，HOE-642)已处于III期临床，它具有较好的NHE-1抑制活性。

[0007]

发明内容

[0008] 本发明以川芎嗪为先导化合物，将苯甲酰胍结构引入到川芎嗪分子中，设计并合成一系列新型化合物，经血小板肿胀试验(Platelet Swelling Assay，PSA)显示，本发明化合物对NHE1均有一定的抑制作用，部分化合物的NHE1抑制活性明显好于阳性药卡立泊来德。经初步的动物试验显示，本发明化合物对大鼠心肌缺血一再灌注损伤均有一定的保护作用。

[0009] 本发明的化合物通式I如下：

[0010]

[0011] 其中R代表：氢、氯、溴、氟、甲氧基、乙氧基、烯丙氧基、硝基、三氟甲基、氰基、乙酰基、甲磺酰基、乙磺酰基、丙磺酰基、氨磺酰基、甲胺基磺酰基、乙胺基磺酰基、丙胺基磺酰基、烯丙胺基磺酰基、吗啉-1-基磺酰基、哌啶-1-基磺酰基、4-甲基哌啶-1-基磺酰基、吡咯-1-基磺酰基或2

[0012] X代表：氧、硫或NR ；2

[0013] R 代表：氢、C1～C4烷基、烯丙基、甲酰基、乙酰基、丙酰基、甲磺酰基、乙磺酰基或[0014]

[0015] R1代表：氢、C1～C4烷基、氯、溴、氟、甲氧基、硝基、三氟甲基、乙酰基，两个R1取代基团可以同时代表相同的基团，也可以各自代表不同的基团。

[0016] X基团可以处于酰胍基的对位、邻位或间位。

[0017] 通式I化合物中R优选代表：氢、氯、溴、氟、甲氧基、硝基、三氟甲基、乙酰基、甲磺酰基、氨磺酰基、吗啉-1-基磺酰基、哌啶-1-基磺酰基、4-甲基哌啶-1-基磺酰基或吡咯-1-基磺酰基。

[0018] R进一步优选代表：氢、氯、溴、氟、硝基、三氟甲基、甲磺酰基或氨磺酰基。

[0019] X优选代表：氧或NR2，其中R2优选代表：氢、C1～C2烷基、烯丙基、甲酰基、乙酰基或甲磺酰基。

[0020] X进一步优选代表氧或NH。

[0021] X基团优选位于酰胍基的对位或邻位。

[0022] 通式I化合物可以与药用盐形成酸加成盐，优选的盐是：盐酸、氢溴酸、硫酸、碳酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸或对甲苯磺酸。最优选的盐是盐酸。

[0023] 本发明部分化合物是：

[0024] 4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(代号I-1，下同)

[0025] 3-氯-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-2)

[0026] 3-硝基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-3)

[0027] 3-溴-4-(3-5-6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-4)

[0028] 3-甲氧基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-5)

[0029] 3-甲磺酰基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-6)

[0030] 3-氨磺酰基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-7)

[0031] 3-吗啉-1-基磺酰基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-8)[0032] 2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-9)

[0033] 5-氯-2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍(I-10)

[0034] 5-溴-2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍(I-11)

[0035] 5-硝基-2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍(I-12)

[0036] 5-甲磺酰基-2-(3-5-6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-13)

[0037] 4-三氟甲基-2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-14)

[0038] 3-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-15)

[0039] 4-氯-3-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍(I-16)

[0040] 4-硝基-3-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-17)

[0041] 4-溴-3-(3-5-6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-18)

[0042] 4-甲氧基-3-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-19)

[0043] 4-甲基-3-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-20)

[0044] 4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-21)

[0045] 3-甲基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-22)

[0046] 3-溴-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-23)

[0047] 3-氯-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-24)

[0048] 3-硝基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-25)

[0049] 3-氨磺酰基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-26)

[0050] 2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-27)

[0051] 5-氯-2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍(I-28)

[0052] 5-溴-2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍(I-29)

[0053] 5-硝基-2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍(I-30)

[0054] 5-甲磺酰基-2-(3-5-6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-31)

[0055] 下面药理试验中化合物的代号等同于此处的代号所对应的化合物结构。

[0056] 本发明的通式I化合物可以用以下方法制备：

[0057]

[0058] 更为详细的制备方法是：

[0059]

[0060] 其中a和b代表反应条件：

[0061] a：催化剂为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、乙醇钠、氨基钠、氢化钠、氢化钾或氢化碱；

[0062] 溶剂为丙酮、乙腈、四氢呋喃、乙二醇单甲醚、乙二醇二甲醚、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺或二甲亚砜，或上述溶剂之中的两种或两种以上的混合溶剂；

[0063] 反应温度为室温至回流。

[0064] b：溶剂为异丙醇、乙醇、甲醇、正丁醇、异丁醇、四氢呋喃、乙二醇单甲醚、乙二醇二甲醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺或二甲亚砜，或上述溶剂之中的两种或两种以上的混合溶剂；反应温度为室温至回流。

[0065] 反应物为氯化氢的甲醇溶液、氯化氢的乙醇溶液、氯化氢的丙酮溶液、氯化氢的乙酸乙酯溶液、氯化氢的四氢呋喃溶液、氯化氢的乙醚溶液或氯化氢的水溶液；

[0066] 反应温度为-5℃至回流。

[0067] 用此方法可以直接制备出通式I化合物的盐酸盐。如果需要制备成其它的盐，则只需将反应条件b中的反应物换成所需的酸即可。

[0068] 如果需要制备得到通式I化合物，只需将上述反应制备得到的通式I化合物的盐酸盐或其它盐用适量的碱处理即可。

[0069] 2-溴甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(II)的制备可以以四甲基吡嗪(川芎嗪，TMP)为原料制备，制备方法如下：

[0070]

[0071] 羟基(或氨基)苯甲酸乙酯及其衍生物(III)来自商业供应或按文献方法进行制备而得。

[0072] 部分化合物的药理活性测试方法如下：

[0073] (1)NHE1抑制活性的测定(血小板肿胀试验)

[0074] 实验参考Rosskopf等人(Hypertens.1991，9(3)：231～237)的方法，略加改动。

[0075] 为测定所合成化合物对NHE1活性的影响，进行了血小板肿胀试验(Platelet SwellingAssay，PSA)。将血小板富集血浆(Platelet-rich plasma，PRP)加入丙酸钠介质+ +中，细胞NHE被激活，H 被转运到细胞外，同时细胞内Na 增加。这一过程引起了细胞的渗透压改变，为了恢复细胞内正常渗透压，细胞外液进入细胞，导致细胞肿胀。血小板的这种肿胀引起了光密度(OD)降低。

[0076] 以卡立泊来德为阳性对照，通过PSA对目标化合物的NHE1抑制活性进行评估。绘制浓度一抑制率曲线，确定抑制50％细胞肿胀的药物浓度(IC50)。结果如下：

[0077] 表1.本发明部分化合物抑制NHE1的IC50值

[0078]-8 -8
化合物 IC50(×10 M) 化合物 IC50(×10 M)
卡立泊来德 6.50 川芎嗪 NA
*
I-1 20.4 I-2 1.47
* *
I-3 0.57 I-4 0.30
*
I-5 3.28 I-9 0.66
I-14 1.17* I-21 7.80
I-22 8.69 I-23 9.57
* *
I-24 0.30 I-25 0.16
I-27 13.4 I-33 5.47

[0079] (2)抗大鼠心肌缺血再灌注损伤试验

[0080] 测试方法如下：大鼠(SD大鼠，雌雄各半，上海BK生物公司)静脉注射乌拉坦(上海化学试剂公司)麻醉，在胸骨左侧，与胸骨平行作长约2cm的纵开口，切开皮肤，胸大肌，暴露肋骨。用棉线将皮肤与肌肉做荷包缝合，打一松结。套上呼吸机，用止血钳在距胸骨2mm处插入第3、4肋骨之间，扩大切口，小心用镊子破心包膜，挤压腹部，暴露心脏于体外，用无损伤缝合圆针于左心耳下缘水平进针，穿过左前降支下面，从肺动脉圆锥左缘出针。穿线后放置2min，如无明显出血、血压呼吸稳定，则将丝线两端穿过一根长1cm，直径2mm的聚乙烯小管。静脉给予受试药物(0.01mmol/kg)后，立刻轻轻抽紧丝线的两端，并用止血钳夹持细管，细管下端便压迫前降支阻断血流，在心电图上可见R波明显增大伴有J点即刻抬高，表明心肌确已缺血。闭合胸壁，记录II导联心电图，以J点抬高与高耸T波融合呈弓背向上的单相曲线作为判断结扎成功的指标。缺血60min后松开止血钳，拔去细管，使前降支血流再通，再灌注2h。再次结扎前降支，静脉内注入2％Evans Blue 1ml。待鼠口唇兰染后，取血并处死动物，制备血清，用肌酸激酶(CK)测试盒(南京建成生物工程研究所)计算酶的活力。另取心脏，将左室切成均匀的5片。置预温37℃，0.5％TTC(氯化四硝基唑蓝上海化学试剂一厂)磷酸缓冲液中染色10min，左室兰染区为非缺血区，坏死心肌呈白色，缺血未坏死心肌(濒危心肌)呈红色。待色差明显后，取出左室断面，置10％甲醛溶液中，固定1～2h。用数码相机拍照，放大后将左室各区分开，电子天平称重，计算坏死区与危险区的重量比。酶活力计算方法：

[0081] CK活力(U/mi)＝(测定管OD值-测定空白管OD值)/(标准管OD值-标准空白管OD值)

[0082] *标准品活力(4*35U/ml)

[0083] 以上药理活性测试方法参照文献报道的方法(王淑侠，兰小莉等.解剖科学进展2000，116(14)：371-373)。

[0084] 本发明部分化合物的药理测试结果

[0085]

[0086]

[0087] *p<0.05，**p<0.01与空白对照；

[0088] a血浆CK值表达为平均值±标准偏差，n≥6；

[0089] b梗死面积(Infarct size(％))表达为坏死区与濒危区的重量比(IM/RM)。数值为平均值±标准偏差，n≥6。

[0090] 卡利泊来德：阳性对照药，NHE1选择性抑制剂，已进入III期临床研究阶段，用于治疗不稳定型心绞痛和非Q波心肌梗死，作为辅助药物用于高危经皮腔内冠状动脉血管成形术(PTCA)以及用于高危冠状动脉搭桥术(CABG)病人。

[0091] 药理测试结果表明，受测试的通式I化合物及其药学上可接受的盐对大鼠心肌缺血一再灌注损伤均有不同程度的保护作用，因此，式I化合物及其药学上可接受的盐可以用于预防或治疗心肌缺血一再灌注损伤有关的临床病症。这些病症包括心律失常、心室纤维化、心肌梗死、心绞痛、心力衰竭、充血性心力衰竭、心肌缺血、外周及中枢神经系统缺血症状、中风的缺血症状、外周组织器官及四肢缺血、休克、缺血或再灌注引起的组织器官急慢性损伤、失调或间接后遗症。本发明的化合物还可以用于外科手术及器官移植以及移植器官的保存。

[0092] 一种治疗心肌缺血一再灌注损伤的药物组合物，其中含有治疗通式I化合物和药学上可接受的载体。所述药物组合物可以是普通片剂或胶囊、缓释片剂或胶囊、控释片剂或胶囊、口服液、注射剂等制剂学上常规的制剂形式。

[0093] 一般地，本发明的川芎嗪衍生物用于治疗时，人用剂量范围为2mg～1000mg/天。也可根据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。

具体实施方式

[0094] 部分活性化合物的制备实例如下：

[0095] RY-1型熔点管；Nicolet Impact 410型红外光谱仪，KBr压片；1H-NMR用BRUKER AM-500型核磁共振仪，内标TMS；HP1100型质谱仪；元素分析仪为Carlo Erba 1106型。

[0096] 实施例1

[0097] 4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-1)的制备

[0098] 2-溴甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(II)：

[0099] 称取无水四甲基吡嗪10g(72mmol)，加入无水四氯化碳60ml，N-溴代丁二酰亚胺12.8g(72mmol)以及催化量的过氧化苯甲酰，升温至65℃光照搅拌反应10小时。反应液冷却至5℃以下，抽滤除去丁二酰亚胺，减压蒸除四氯化碳，得橙黄色液体即2-溴甲基-3，5，
6-三甲基吡嗪粗品15g。收率：96.9％。粗品经减压蒸馏得无色液体(II)9.2g，收率59.4％，b.p.127～131℃/10mm(文献99～100℃/2mm，复旦大学学报(自然科学版)，1980，19(4)：
390～394).4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酸乙酯(IVl)：

[0100] 将化合物(II)2g(0.01mol)，对羟基苯甲酸乙酯(III-1)1.6g(0.01mol)置于反应瓶中，加无水丙酮50ml，无水碳酸钠0.5g(0.0047mol)，TEBA催化量，电磁搅拌下回流反应24小时。过滤，向滤液中通入HCl气体至溶液pH＝2～3，过滤，滤饼用少量水洗涤，得浅黄色固体1.8g.

[0101] 将所得的浅黄色固体用甲醇溶解，用甲醇钠溶液调节pH＝7，过滤，减压蒸去大部分甲醇，冷却，过滤得白色固体(IV-1)1.4g，收率46.7％，m.p.62～64℃.

[0102] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)，8(ppm)：1.37(t，3H，-C-CH3，J ＝ 7.1Hz)，2.51(s，6H，-CH3)，2.57(s，3H，-CH3)，4.34(q，2H，-CH2-C-，J ＝ 7.1Hz)，5.20(2H，s，-CH2-O)，
7.02(dd，2H，ArH，J1＝2Hz，J2＝6.9Hz)，7.99(dd，2H，ArH，J1＝2Hz，J2＝6.9Hz).[0103] 将胍2g(0.0035mol)和3mi无水异丙醇加入反应瓶，电磁搅拌下升温到70℃。另将化合物(IVl)0.5g(0.0017mol)溶于3ml无水异丙醇，滴入反应瓶中，滴毕，升温回流反应
30min。待反应液冷却后，通入HCl气体至pH＝2，过滤，滤液柱层析，用二氯甲烷：甲醇＝
10：1洗脱，得白色固体(I-1)0.5g，收率85％，m.p.102～106℃.

[0104] 1H-NMR(500MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.44(s，3H，-CH3)，2.45(s，3H，-CH3)，2.49(s，3H，-CH3)，5.23(s，2H，-CH2-O)，7.10～7.13(m，2H，ArH，J＝8.9)，7.88～7.90(m，2H，ArH，-1
J ＝ 8.9)，12.61(bs，lH，NH)IR(KBr，cm )3435，3352，3129，2952，2924，2853，1701，1666，
1606，1543，1463，1261，1174，991，809，762.

[0105] MS(ESI(+)70V，m/z)：314.1([M+H]+，base peak).

[0106] Anal.(C16H19N5O2·HCl·H2O，C％，H％，N％)：52.25，6.03，19.04，Found：51.81，6.18，18.70.

[0107] 实施例2

[0108] 3-氯-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-2)的制备

[0109] 3-氯-4-羟基苯甲酸乙酯(III-2)：

[0110] 将对羟基苯甲酸乙酯(III-1)5g(30mmol)溶于50ml冰醋酸中，搅拌下向其中滴加磺酰氯2.5ml(30mmol)，滴毕，升温至50℃继续反应2小时。将反应液倒入300ml水中，有白色固体析出。过滤，滤饼用水洗涤数次，干燥，得白色固体(III-2)4.5g，收率74.8％，m.p.77～78℃(文献77℃，J Chem Soc.1955，2921～2926).

[0111] 3-氯-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酸乙酯(IV-2)：

[0112] 以化合物II和化合物III-2为原料，类似化合物IV-1的方法，得白色固体IV-2(34.1％)，m.p.146～148℃.

[0113] 1H-NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.37(t，3H，-C-CH3，J＝7.1Hz)，2.51～2.52(d，6H，-CH3)，2.63(s，3H，-CH3)，4.34(q，2H，-CH2-C-，J＝7.1Hz)，5.30(s，2H，-CH2-O)，7.16(d，
1H，ArH，J＝8.6Hz)，7.90(dd，1H，ArH，J1 ＝2.1Hz，J2＝8.6Hz)，8.04(d，1H，ArH，J ＝
2.1Hz).

[0114] 以化合物IV-2为原料，类似化合物I-1的方法，得类白色固体I-2(38.4％)，1
m.p.162～164℃。H-NMR(500MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.45(s，3H，-CH3)，2.47(s，3H，-CH3)，
2.52(s，3H，-CH3)，5.35(s，2H，-CH2-O)，7.22(bs，2H，NH)，7.40(d，1H，ArH，J ＝ 8.6Hz)，
7.88～7.91(m，2H，ArH)，12.9(bs，3H，NH).

[0115] IR(KBr，em-1)3371，3130，2945，2929，2872，1705，1659，1599，1520，1440，1267，1175，989，813755.

[0116] MS(ESI(+)70V，m/z)：348.1([M+H]+，base peak).

[0117] Anal.(C16H18ClN5O2HClH2O，C ％，H％，N％ )：47.77，5.26，17.41，found：47.59，5.31，17.27.

[0118] 实施例3

[0119] 3-硝基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-3)的制备[0120] 3-硝基-4-羟基苯甲酸乙酯(III-3)：

[0121] 将对羟基苯甲酸乙酯5g(30mmol)和浓硫酸10ml置三颈瓶中，搅拌使其溶解。另将5ml浓硫酸和1.5ml 63％硝酸制成混酸。在冰浴冷却下将混酸慢慢滴入三颈瓶中，控制温度不超过5℃。滴毕，室温继续反应2小时。将反应液慢慢顷入50ml冰水中，有黄色固体析出。过滤，滤饼用水洗涤，干燥，得黄色固体(III-3)5g，收率78.7％，m.p.65～68℃(文献67～68℃，J OrgChem.1961，26∶2223～2225).

[0122] 3-硝基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酸乙酯(IV-3)：

[0123] 以化合物II和化合物III-3为原料，类似化合物IV-1的方法，得黄色固体IV-3(31.2％)，m.p.156～157℃.

[0124] 1H-NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.38(t，3H，-C-CH3，J ＝ 7.1Hz)，2.51(s，3H，-CH3)，2.52(s，3H，-CH3)，2.62(s，3H，-CH3)，4.37(q，2H，-CH2-C-，J＝7.1Hz)，5.38(s，
2H，-CH2-O)，7.39(d，1H，ArH，J ＝ 8.9Hz)，8.17(dd，1H，ArH，J1 ＝ 2.1Hz，J2 ＝ 8.8Hz)，
8.45(d，1H，ArH，J＝2.1Hz).

[0125] 以化合物IV-3为原料，类似化合物I-1的方法，得类白色固体I-3(48.9％)，1
m.p.127～130℃.H-NMR(300MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.44(s，3H，-CH3)，2.46(s，3H，-CH3)，
2.49(s，3H，-CH3)，5.41(s，2H，-CH2-O)，7.88(bs，2H，NH)，7.55(d，1H，ArH，J ＝ 8.9Hz)，
8.27(dd，1H，ArH，J1＝2.2Hz，J2＝8.8Hz)，8.49(d，1H，ArH，J＝2.1Hz).

[0126] IR(KBr，cm-1)3429,3314,2923,2853,1710,1681，1618，1462,1414,1534,1383,1274,1089,1150,983,755,708.

[0127] MS(ESI(+)70V，m/z)：359.1([M+H]+)，381.1([M+Na]+，base peak).

[0128] Anal.(C16H18N6O4·HCl·0.5H2O，C％，H％，N％)：47.59，4.99，20.81，Found：47.48，5.07，20.50.

[0129] 实施例4

[0130] 3-溴-4-(3-5-6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-4)的制备

[0131] 3-溴-4-羟基苯甲酸乙酯(III-4)：

[0132] 将对羟基苯甲酸乙酯10g(60mmol)，冰醋酸100ml和水20ml置于三颈瓶；另将3ml液溴9.6g(60mmol，d＝3.12)溶于20ml冰醋酸所得溶液置滴液漏斗中。搅拌下，将溴的冰醋酸溶液慢慢滴入三颈瓶中，约1小时滴毕，继续室温搅拌反应2小时。将反应液倒入500ml水中，有大量白色固体析出，过滤，滤饼用水洗数次，干燥，得白色固体(III-4)13.7g，收率93.7％，m.p.101～103℃(文献102.2～103.1℃，J Chem Soc C：1968(7)，850～853).[0133] 3-溴-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酸乙酯(IV-4)：

[0134] 化 合 物(III-4)1.2g(5mmol)，化 合 物 (II)1.1g(5mmol)，无 水 碳 酸 钠0.53g(5mmol)和无水DMF5ml加入反应瓶，电磁搅拌下加热至120℃反应2小时。反应完毕，待反应液冷至室温后，倒入50ml冰水中，有土黄色固体析出，过滤，干燥，得土黄色固体
1
1.4g，收率73.7％，m.p.260℃.H-NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.37(t，3H，-C-CH3，J＝
7.1Hz)，2.51(s，3H，-CH3)，2.52(s，3H，-CH3)，2.64(s，3H，-CH3)，4.34(q，2H，-CH2-C-，J＝
7.1Hz)，5.30(s，2H，-CH2-O)，7.13(d，1H，ArH，J＝8.7Hz)，7.95(dd，1H，ArH，J1＝2.1Hz，J2＝8.7Hz)，8.21(d，1H，ArH，J＝2.1Hz).

[0135] 以化合物IV-4为原料，类似化合物I-1的方法，得类白色固体I-4(52.1％)，1
m.p.175～176℃.H-NMR(500MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.50(s，6H，-CH3)，2.59(s，3H，-CH3)，
5.29(s，2H，-CH2-O)，7.20(d，1H，ArH，J＝8.8Hz)，7.65(bs，2H，NH)，8.06(dd，1H，ArH，J1＝
1.9Hz，J2＝8.7Hz)，8.32(d，1H，ArH，J＝2.0Hz).

[0136] IR(KBr，cm-1)3380，3189，2954，2921，2877，2850，1706，1657，1595，1551，1494，1442，1359，1265，1043，1176，1148，1043，990，811，786，755.

[0137] MS(ESI(+)70V，m/z)：394.0([M+H]+，base peak).

[0138] Anal.(C16H18BrN5O2·HCl·H2O，C％，H％，N％)：43.02，4.74，15.68，found：42.87，4.82，15.57.

[0139] 实施例5

[0140] 3-甲氧基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-5)的制备[0141] 3-甲氧基-4-羟基苯甲酸乙酯(III-5)：

[0142] 将硝酸银6.75g(0.04mol)溶于35ml水中，搅拌下将硝酸银水溶液加入到20ml8％氢氧化钠溶液中，立即有大量棕黑色固体生成，过滤，滤饼用水洗涤，即得氧化银。

[0143] 将得到的氧化银，氢氧化钠6.5g和水55ml加入三颈瓶，在充分搅拌下加热至70℃，分批加入3—甲氧基—4—羟基苯甲醛。保温反应10min。趁热过滤，滤饼用适量热水洗涤。向滤液中通入SO2气体至沉淀出现，加入体积比为1∶1的稀盐酸，冷却至10℃以下，过滤，干燥得白色固体3-甲氧基-4-羟基苯甲酸4.5g，收率82.4％，m.p.209～212℃(文献211℃，J ChemSoc C：1968(7)，850～853).

[0144] 将上述化合物2g(0.013mol)，无水乙醇5ml和三氯化铝0.15g加入反应瓶，电磁搅拌下回流反应7小时。减压蒸去溶剂，向残留物中加入水50ml，用乙酸乙酯(30ml×2)萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠溶液(20ml×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸去溶剂得棕色油状物(III-5)1.6g，收率62.8％.

[0145] 3-甲氧基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酸乙酯(IV-5)：

[0146] 化合物II和化合物III-5为原料，类似化合物IV-4的方法，得灰白色固体IV-5(65.2％)，m.p.98～101℃，m.p.156～157℃.

[0147] 1H-NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.40(t，3H，-C-CH3，J ＝ 7.1Hz)，2.53(s，6H，-CH3)，2.63(s，3H，-CH3)，3.91(s，3H，-OCH3-)，4.37(q，2H，-CH2-C-，J＝7.1Hz)，5.28(s，
2H，-CH2-O)，7.08(d，1H，ArH，J＝8.4Hz)，7.57(d，1H，ArH，J＝2.0Hz)，7.66(dd，1H，ArH，J1＝2.0Hz，J2＝8.4Hz)

[0148] 以化合物IV-5为原料，类似化合物I-1的方法，得类白色固体I-5(57.7％)，1
m.p.197 ℃ .H-NMR(300MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.44(s，3H，-CH3)，2.46(s，3H，-CH3)，
2.49(s，3H，-CH3)，3.84(s，3H，-OCH3)，5.24(2H，s，-CH2-O)，7.27(d，1H，ArH，J＝8.3Hz)，
7.79～7.80(m，2H，ArH)，8.70(bs，4H，NH)，12.10(bs，1H，NH).

[0149] IR(KBr，cm-1)3329，3186，2950，1695，1625，1597，1521，1462，1271，1027，1218，1174，1135，991，825，756.

[0150] MS(ESI(+)70V，m/z)：344.1([M+H]+，base peak).

[0151] Anal.(C17H21N5O3·HCl·1.5H2O，C％，H％，N％)：50.18，6.19，17.21，Found：49.80，6.22，17.38.

[0152] 实施例6

[0153] 2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-9)的制备

[0154] 邻羟基苯甲酸乙酯(III-9)：

[0155] 将邻羟基苯甲酸2g(15mmol)，无水乙醇12ml以及浓硫酸0.75ml加入反应瓶，电磁搅拌下回流反应5小时。减压蒸去溶剂，向残留物中加入碳酸氢钠饱和溶液调节pH＝8，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，蒸去溶剂，得无色液体(III-9)2.1g，收率84.3％.

[0156] 2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酸乙酯(IV-9)：

[0157] 将化合物(III-9)2g(12mmol)，化合物(II)2.6g(13mmol)，无水碳酸钠1.2g和无水DMF10ml加入反应瓶，电磁搅拌下，加热至120℃反应2小时。待反应液冷却后，倒入50ml冰水中，用氯仿(20ml×3)萃取，氯仿层用饱和食盐水(20ml×3)洗涤，无水硫酸镁干燥。石油醚：乙酸乙酯＝4∶1柱层析，得白色固体(IV-9)1.8g，收率50％，m.p.61～64℃.[0158] 1H-NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.27(t，3H，-C-CH3，J ＝ 7.1Hz)，2.51(s，6H，-CH3)，2.63(s，3H，-CH3)，4.29(q，2H，-CH2-C-，J＝7.1Hz)，5.24(s，2H，-CH2-O)，6.98～
7.01(m，1H，ArH)，7.13～7.16(m，1H，ArH)，7.39～7.42(m，1H，ArH)，7.76(dd，1H，ArH，J1＝1.8Hz，J2＝7.7Hz).

[0159] 以化合物IV-9为原料，类似化合物I-1的方法，得浅黄色固体I-9(43.4％)，1
m.p.185～187℃.H-NMR(300MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.46(s，3H，-CH3)，2.52(s，3H，-CH3)，
2.60(s，3H，-CH3)，5.52(s，2H，-CH2-O)，7.08 ～ 7.13(m，1H，ArH)，7.39(d，1H，ArH，J ＝
8.4Hz)，7.55～7.61(m，1H，ArH)，7.70(dd，1H，ArH，J1＝1.4Hz，J2＝7.7Hz)，8.78(bs，4H，NH)，11.66(bs，1H，NH).

[0160] IR(KBr，cm-1)3356，3271，3126，3028，2754，1701，1687，1596，1558，1458，1278，1014，1240，1211，1170，979，752.

[0161] MS(ESI(+)70V，m/z)：314.1620([M+H]+，base peak).

[0162] Anal.(C16H19N5O2·HCl·0.5H2O，C％，H％，N％)：53.56，5.90，19.52，Found：53.27，5.97，19.49.

[0163] 实施例7

[0164] 4-三氟甲基-2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酰胍盐酸盐(I-14)的制备[0165] 4-三氟甲基-2-羟基苯甲酸乙酯(III-14)：

[0166] 以对三氟甲基水杨酸为原料，操作同III-9得无色油状物4.5g。收率：80.1％4-三氟甲基-2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲氧基)苯甲酸乙酯(IV-14)：

[0167] 以化合物II和化合物III-14为原料，类似化合物IV-9的方法，得无色液体1
IV-14(68.7％).H-NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.30(t，3H，-C-CH3，J＝7.1Hz)，2.51(s，
6H，-CH3)，2.64(s，3H，-CH3)，4.33(q，2H，-CH2-C-，J＝7.1Hz)，5.32(s，2H，-CH2-O)，7.22(d，
1H，ArH，J＝8.0Hz)，7.55(s，1H，ArH)，7.81(d，1H，ArH，J＝8.0Hz).

[0168] 以化合物IV-14为原料，类似化合物I-1的方法，得白色固体I-14(44.9％)，m.p.193～195℃.

[0169] 1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.42(s，3H，-CH3)，2.44(s，3H，-CH3)，2.51(s，3H，-CH3)，5.45(s，2H，-CH2-O)，7.41(d，1H，ArH，J ＝ 7.92)，7.74 ～ 7.76(m，2H，ArH)，
8.24(bs，4H，NH)，11.78(bs，1H，NH).

[0170] 1H-NMR(500MHz，MeOD)，δ(ppm)：2.48(s，3H，-CH3)，2.50(s，3H，-CH3)，2.58(s，3H，-CH3)，5.55(s，2H，-CH2-O)，7.40(dd，1H，ArH，J1＝0.8Hz，J2＝8.0Hz)，7.70(s，1H，ArH)，
7.89(d，1H，ArH，J＝8.0Hz).

[0171] IR(KBr，cm-1)3356,3281,3047,2927,1697,1679,1622,1585,1562,1500,1440,1325,1211,1170,1132,979,719,696.

[0172] MS(ESI(+)70V，m/z)：382.1([M+H]+，base peak).

[0173] Anal.(C17H18N5O2·HCl，C％，H％，N％)：48.87，4.58，16.76，Found：49.17，4.61，16.27.

[0174] 实施例8

[0175] 4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-21)的制备

[0176] 4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酸乙酯(IV-21)：

[0177] 将化合物对氨基苯甲酸乙酯0.8g(0.0048mol)，化合物(II)1g(0.0047mol)，无水碳酸钠0.5g(0.0048mol)和无水丙酮30ml置于反应瓶，加热回流反应24小时。趁热过滤，滤去碳酸钠，将反应液略浓缩，冷却，有白色固体析出，过滤，得(IV-21)0.25g，收率1
15％，m.p.138～141℃.H-NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.36(t，3H，-C-CH3，J＝7.1Hz)，
2.53(s，6H，-CH3)，2.55(s，3H，-CH3)，4.30 ～ 4.37(m，4H，-CH2-C-&-CH2-N)，5.85(bs，
1H，-NH-)，6.73(d，2H，ArH，J＝8.7Hz)，7.93(d，2H，ArH，J＝8.7Hz).

[0178] 以化合物IV-21为原料，类似化合物I-1的方法，得类白色固体I-21，收率42.3％，m.p.251～255℃.

[0179] 1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.43(s，3H，-CH3)，2.44(s，3H，-CH3)，2.48(s，3H，-CH3)，4.43(d，2H，-CH2-N，J＝5.3Hz)，6.79(d，2H，ArH，J＝8.9Hz)，7.19(bs，
1H，-C-NH-)，7.91(d，2H，ArH，J＝8.4Hz)，8.53(bs，4H，NH)，11.39(bs，1H，NH).[0180] IR(KBr，cm-1)3361,3297,3125,2987,2918,1691,1605,1563,1540,1482,1272,125
8,1191,1116,827,687.

[0181] MS(ESI(+)70V，m/z)：313.2([M+H]+)，base peak).

[0182] Anal.(C16H20N6O·HCl，C％，H％，N％)：55.09，6.07，24.09，Found：54.98，6.24，23.66.

[0183] 3-甲基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-22)的制备[0184] 3-甲基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酸甲酯(IV-22)：

[0185] 以3-甲基-4-氨基苯甲酸甲酯和化合物II为原料，类似化合物IV-21的方法，得浅黄色固体IV-22(32.7％)，m.p.168～170℃.

[0186] 1H-NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)：2.29(s，3H，-O-CH3)，2.54～2.55(m，9H，-CH3)，3.86(s，3H，-CH3)，4.38(s，2H，-CH2-N)，5.90(bs，1H，-NH-)，6.66(1H，d，ArH，J＝8.4Hz)，
7.79(1H，d，ArH，J＝1.2Hz)，7.88(dd，1H，ArH，J1＝1.9Hz，J2＝8.4Hz).

[0187] 以化合物IV-22为原料，类似化合物I-1的方法，得浅黄色固体I-22，收率54.8％，m.p.267℃.

[0188] 1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.22(s，3H，-CH3)，2.43(s，3H，-CH3)，2.45(s，3H，-CH3)，2.49(s，3H，-CH3)，4.50(s，2H，-CH2-N)，6.77(d，1H，ArH，J＝8.7Hz)，7.81(s，1H，ArH)，7.86(dd，1H，ArH，J1＝2.1Hz，J2＝8.6Hz)，8.50(bs，4H，NH).

[0189] IR(KBr，cm-1)3368，3153，2993，1689，1606，1564，1450，1261，1151，1113，990,810，760.

[0190] MS(ESI(+)70V，m/z)：327.2([M+H]+)，base peak).

[0191] 实施例10

[0192] 3-溴-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-23)的制备

[0193] 3-溴-4-氨基苯甲酸乙酯(III-23)：

[0194] 将对氨基苯甲酸乙酯10g(60mmol)，冰醋酸60ml和水20ml加入三颈瓶，冰浴下滴加Br24ml(60mmol)的冰醋酸溶液20ml，约4小时滴毕。将反应液倒入300ml水中，过滤，滤饼用50％乙醇200ml溶解，过滤，滤液减压蒸去溶剂得白色固体(III-23)7.2g，收率49.2％，m.p.86～90℃(文献92℃，J Pharm Chim.1028，8：58).

[0195] 3-溴-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酸乙酯(IV-23)：

[0196] 化合物(II1-23)5g(20mmol)，化合物(II)4.3g(20mmol)，无水碳酸钠2g(19mmol)和无水DMF20ml加入反应瓶，电磁搅拌下加热回流反应6小时。趁热过滤，除去碳酸钠，待反应液冷却后有大量固体析出，过滤，得黄色粉末(IV-23)3.2g，收率42.3％，m.p.182～1
183℃.H-NMR(500MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.38(t，3H，-C-CH3，J＝7.1Hz)，2.53(s，6H，-CH3)，
2.57(s，3H，-CH3)，4.33(q，2H，-CH2-C-，J＝4.3Hz)，4.39(s，2H，-CH2-N)，6.69(d，1H，ArH，J＝8.6Hz)，7.92(dd，1H，ArH，J1＝2.0Hz，J2＝8.6Hz)，8.16(d，1H，ArH，J＝2.0Hz).[0197] 将胍1.5g(0.0025mol)和3ml无水异丙醇加入反应瓶，电磁搅拌下升温到70℃。
另将化合物(IV-23)0.5g(0.0013mol)溶于3ml无水异丙醇，滴入反应瓶中，滴毕，升温回流反应1h。待反应液冷却后，通入HCl气体至pH＝2，过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，得黄色固体(I-24)0.4g，收率72.7％，m.p.218～220℃.

[0198] 1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.48(s，3H，-CH3)，2.52(s，6H，-CH3)，4.56(s，2H，-CH2-N)，6.94(d，1H，ArH，J ＝ 8.6Hz)，7.10(bs，lH，-C-NH-)，8.20(d，1H，ArH，J ＝
8.3Hz)，8.34(d，1H，ArH，J ＝ 1.1Hz)，8.55(bs，2H，NH)，8.87(bs，2H，NH)，11.96(bs，1H，NH).

[0199] IR(KBr，cm-1)3407，2923，2770，1692，1632，1596，1542，1461，1267，1229，1092，+755，701.MS(ESI(+)70V，m/z)：391.1([M+H])，base peak).

[0200] Anal.(C16H19BrN6O·HCl·H2O，C％，H％，N％)：43.11，4.97，18.85，Found：43.46，4.82，19.10.

[0201] 实施例11

[0202] 3-氯-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-24)的制备

[0203] 3-氯-4-氨基苯甲酸乙酯(III-24)：

[0204] 将对氨基苯甲酸乙酯5g(0.03mol)溶于50ml冰醋酸，置于三颈瓶中。搅拌下，缓缓滴入磺酰氯2.5ml(0.03mol)，约0.5小时滴毕。将反应液倒入100ml水中，用乙酸乙酯(40ml×3)萃取，有机层合并，用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸去溶剂得红棕色油状物，加少量乙酸乙酯10ml溶解，有固体析出，过滤，得黄色固体(II1-24)3.7g，收率61.6％，m.p.82～84℃(文献81～83℃，Australian J Chem 1982，35(2)：319～329).

[0205] 3-氯-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酸乙酯(IV-24)：

[0206] 以化合物II和化合物III-24为原料，类似化合物IV-23的方法，得浅黄色固体IV-24(53.2％)，m.p。155～158℃.

[0207] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.38(t，3H，-C-CH3，J＝7.1Hz)，2.53～2.56(m，9H，-CH3)，4.33(q，2H，-CH2-C-，J＝7.1Hz)，4.40(s，2H，-CH2-N)，6.61(s，1H，-NH-)，6.73(d，
1H，ArH，J＝8.5Hz)，7.89(dd，1H，ArH，J1 ＝1.8Hz，J2＝8.5Hz)，8.00(d，1H，ArH，J ＝
1.8Hz).

[0208] 以化合物IV-24为原料，类似化合物I-23的方法，得白色固体I-24，收率69.3％，m.p.207～210℃.

[0209] 1H-NMR(500MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.44(s，3H，-CH3)，2.47(s，3H，-CH3)，2.48(s，3H，-CH3)，4.46(s，2H，-CH2-N)，6.48(bs，1H，NH)，6.84(d，1H，ArH，J＝8.6Hz)，7.65(bs，4H，NH)，7.85(dd，1H，ArH，J1＝1.8Hz，J2＝8.5Hz)，8.02(d，1H，ArH，J＝1.8Hz).[0210] IR(KBr，cm-1)3356，3281，3045，2926，1697，1680，1622，1579，1562，1500，1325，
1209，1170，1132，1002，979，719，696.

[0211] MS(ESI(+)70V，m/z)：347.1([M+H]+)，base peak).

[0212] 实施例12

[0213] 3-硝基-4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-25)的制备[0214] 3-硝基-4-氨基苯甲酸乙酯(III-25)：

[0215] 3-硝基-4-氨基苯甲酸4.5g(25mmol)，无水乙醇11.4g(250mmol)和浓硫酸1.4ml加入反应瓶，加热回流反应24小时。减压蒸去乙醇，向残留物中加入饱和碳酸钠溶液调节pH＝9，有黄色固体析出，过滤，得化合物(II1-25)2.6g，收率49.5％，m.p.126～128℃(文献132℃，Indian JChem Sect B.1988，27B(12)，1106～1109).

[0216] 3-硝基4-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酸乙酯(IV-25)：

[0217] 将氢化钠0.05g(2mmol)和无水DMF1ml加入三颈瓶，电磁搅拌下使其均匀分布；另将化合物(III-25)0.5g(2.4mmol)溶于2ml无水DMF，室温下滴入三颈瓶中，滴毕，室温搅拌1小时，反应液呈血红色。

[0218] 将化合物(II)0.5g(2.4mmol)溶于2ml无水DMF，缓缓滴入上述三颈瓶中，反应液血红色褪去，出现黄色固体。滴毕，继续反应4小时，反应结束后，加入乙酸乙酯5ml，有黄色固体析出，过滤，滤饼用氯仿溶解，过滤，滤液旋干，得化合物(IV-25)0.3g，收率38％，m.p.206～210℃.

[0219] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.4l(t，3H，-C-CH3，J ＝ 7.2Hz)，2.70(s，3H，-CH3)，2.75(s，3H，-CH3)，2.77(s，3H，-CH3)，4.38(q，2H，-CH2-C-，J＝7.2Hz)，4.64(d，
2H，-CH2-N，J＝2.7Hz)，6.98(d，1H，ArH，J＝8.9Hz)，8.15(dd，1H，ArH，J1＝2.0Hz，J2＝
8.9Hz)，8.95(d，1H，ArH，J＝2.0Hz)，9.73(s，1H，NH).

[0220] 以化合物IV-25为原料，类似化合物I-23的方法，得黄色固体I-25，收率34.2％，m.p.207～210℃.

[0221] 1H-NMR(500MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.55(s，3H，-CH3)，2.56(s，3H，-CH3)，2.59(s，3H，-CH3)，3.16(s，2H，-CH2-N)，7.18(bs，1H，-C-NH-)，7.90(d，1H，ArH，J＝g.6Hz)，8.21(d，
1H，ArH，J＝8.6Hz)，8.54(s，IH，ArH)，8.79(bs，2H，NH)，8.92(bs，2H，NH)，12.33(bs，1H，NH).

[0222] IR(KBr，cm-1)3406,1697,1627,1566,1359,1421,1296,1093,1186,993,831,790.[0223] 实施例13

[0224] 2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酰胍盐酸盐(I-27)的制备

[0225] 邻氨基苯甲酸乙酯(III-27)：

[0226] 邻氨基苯甲酸5g(0.0365mol)，无水乙醇25ml和浓硫酸3.6ml。加入反应瓶，加热回流4.5小时。减压蒸去乙醇，向残留物中加饱和碳酸钠溶液调节pH＝9，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤，蒸除乙酸乙酯，得黄色液体(III-27)4.4g，收率73.3％.2-(3，5，6-三甲基吡嗪-2-甲胺基)苯甲酸乙酯(IV-27)：

[0227] 化合物(III-27)1.4g(0.0085mol)，化合物(II)2g(0.009mol)，无水碳酸钠0.9g(0.0085mol)和无水DMF加入反应瓶，电磁搅拌下加热至120℃反应2小时。反应液冷至室温后倒入50ml冰水中，有棕黄色糖浆状物质析出，用氯仿(30ml×3)萃取，氯仿层用饱和食盐水洗涤数次，用无水硫酸镁干燥，蒸去氯仿，得红棕色油状物。用石油醚：乙酸乙酯＝
4：1柱层析，得类白色固体(IV-27)1g，收率39.3％，m.p.113～115℃.

[0228] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)，δ(ppm)：1.38(t，3H，-C-CH3，J ＝ 7.1Hz)，2.51(s，3H，-CH3)，2.54(s，3H，-CH3)，2.57(s，3H，-CH3)，4.35(q，2H，-CH2-C-，J＝7.1Hz)，4.44(d，
2H，-CH2-N，J＝4.6Hz)，6.62～6.65(m，1H，ArH)，6.82(d，1H，ArH，J＝8.4Hz)，7.37～
7.40(m，1H，ArH)，7.96(dd，1H，ArH，J1＝1.7Hz，J2＝8.0Hz)，8.63(1H，s，-NH-).[0229] 以化合物IV-27为原料，类似化合物I-23的方法，得类白色固体I-27，收率
28.7％，rm.p.247～250℃.

[0230] 1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)，δ(ppm)：2.40(s，3H，-CH3)，2.45(s，3H，-CH3)，2.47(s，