烟草病毒病砂纸摩擦接种法

摘要

本发明公开了一种烟草病毒病砂纸摩擦接种法，该法包括以下步骤：①取典型烟草病毒病症状的病叶组织在研钵中研碎，加水，用纱布过滤并挤出汁液，然后用蒸馏水定容，得到接种液，现配现用；②取市售的砂纸，分成等份小块，对折形成棱；③用砂纸的棱蘸取接种液在接种植株叶片上轻轻从棱的一端划到另一端，即完成接种。该方法取材容易，操作简单、快速、误差小，操作只需三步，接种成功率100％。本方法适用烟草普通花叶病(TMV)、烟草黄瓜花叶病(CMV)、烟草马铃薯Y病毒病(PVY)、烟草马铃薯X病毒病(PVX)和烟草蚀纹病毒病(TEV)等通过机械汁液传染的烟草病毒病，特别适用于烟草品种抗性筛选和鉴定及烟草病毒病防治药剂的试验。

权利要求

1.烟草病毒砂纸摩擦接种法，其特征在于该法包括以下步骤：①取典型烟草花叶病症状的病叶组织，加水，在研钵中研碎，用纱布过滤并挤出汁液，然后用蒸馏水定容，得到接种液，现配现用；

②取市售的砂纸，直接使用或分成小块，对折形成棱；

③用砂纸的棱蘸取接种液在接种植株叶片上轻轻从棱的一端划到另一端，即完成接种。

2.按照权利要求1所述的烟草病毒砂纸摩擦接种法，其特征在于在上述接种过程的第一步中，所述加水量达到便于组织研磨即可；所述的定容是在剔出病叶的叶脉后称重，然后按质量体积比用蒸馏水稀释至一定比例，典型病毒病叶片组织研磨汁液稀释比例如下：烟草普通花叶病 1∶50～100烟草马铃薯Y病毒病 1∶10～50

烟草黄瓜花叶病 1∶5～10。

3.按照权利要求1所述的烟草病毒砂纸摩擦接种法，其特征在于在上述接种过程的第二步中，所述将砂纸分成的小块是等分的小块，对折形成棱，逐块使用。

4.按照权利要求1所述的烟草病毒砂纸摩擦接种法，其特征在于在上述接种过程的第三步中，所述用砂纸的棱蘸取接种液划的次数依据具体接种试验和病毒种类而定，但每个接种植株划的次数要相同。

说明书

烟草病毒病砂纸摩擦接种法

技术领域

[0001] 本发明涉及烟草病害的接种方法，具体涉及烟草病毒病的机械摩擦传播接种方法。技术背景

[0002] 接种试验是植物病害研究最重要的工作，在研究植物对病原物抗性、病害循环、病害流行、病害控制、侵染过程和病原物致病性的分化等各个方面接种试验是前提。烟草普通花叶病(Tobacco Mosaic Virus，TMV)、烟草黄瓜花叶病(Cucumber Mosaic Virus，CMV)和烟草马铃薯Y病毒病(Potato Virus Y，PVY)是烟草主要病毒病，这些烟草病毒病具有机械摩擦传染途径，现在机械摩擦传染的烟草病毒病接种方法主要有病株汁液摩擦接种法、喷枪接种法、病组织直接接种法等，就目前的烟草病毒病接种方法而言，在接种材料非常多的情况下，每种接种方法的问题就暴露出来，如植株间接种病毒量误差大、费时费力和操作难度较大等。病株汁液摩擦接种法是最常用的接种方法，其步骤是取病叶组织在研钵中研碎，加少量的水，用纱布过滤并挤出汁液，最后用稀磷酸缓冲溶液稀释一定的比例备用。接种时，将少量细金刚砂加在汁液中或撒在接种的叶面上作为磨料，然后用手指、纱布、毛笔或小的扁刷等，蘸取汁液在叶片上来回轻轻摩擦，再用清水将叶面多余的汁液和磨料轻轻洗去。其缺点是程序繁琐，费时费力，植株间接种病毒量误差大，特别是在大面积接种和材料多的时候尤为明显。喷枪接种法是在病株汁液中加金刚砂，在相同的时间内，用相同的喷射压力，将含有少量金刚砂的病株汁液打在被接种的植株上进行接种，其缺点是操作难度较大，控制在相同时间和相同压力缺乏一定的可操作性；喷枪设备较昂贵，使试验成本较高。病组织直接在叶面上接种，又称“干接法”，适用于少量接种或病组织材料很少和病毒不稳定的情况，其缺点是无法进行大量接种试验、传染率较低和植株间接种病毒量误差大。

[0003] 经过检索，还没有采用砂纸进行接种的方法问世，也还没有新的接种方法申请专利。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种烟草病毒病砂纸摩擦接种法，使之能够减小植株间接种病毒量的误差、降低实验成本，实现操作简单、快速，提高传染率，从而克服现有技术的缺陷。

[0005] 发明人长期从事烟草普通花叶病(Tobacco Mosaic Virus，TMV)、烟草黄瓜花叶病(Cucumber Mosaic Virus，CMV)和烟草马铃薯Y病毒病(Potato Virus Y，PVY)在烟草品种抗性筛选和鉴定及其防治等方面的研究，这些烟草病毒病(如TMV、CMV、PVY和TEV等)具有汁液机械摩擦传染途径。发明人结合在基层单位和接种大量材料的实际，基于上述接种方法的缺陷加以改进为烟草病毒病砂纸摩擦接种法。

[0006] 发明人所提供的烟草病毒病砂纸摩擦接种法包括以下步骤：

[0007] 1.取典型烟草病毒病症状的叶片，在研钵中研碎，加水，用纱布过滤并挤出汁液，然后用蒸馏水定容，得到接种液，现配现用；

[0008] 2.取市售的砂纸，直接使用或分成小块，对折形成棱；

[0009] 3.用砂纸的棱蘸取接种液在接种植株叶片上轻轻从棱的一端划到另一端，即完成接种。

[0010] 在上述接种过程的第一步中，加水的量到达便于组织研磨即可；所述的定容是在剔出病叶的叶脉后称重，然后按质量体积比(W∶V)用蒸馏水稀释至一定比例，典型病毒病叶片组织研磨汁液稀释比例如下：

[0011] 烟草普通花叶病(TMV) 1∶50～100(W/V)

[0012] 烟草马铃薯Y病毒病(PVY) 1∶10～50(W/V)

[0013] 烟草黄瓜花叶病(CMV) 1∶5～10(W/V)

[0014] 在上述接种过程的第二步中，通常将市售的砂纸分成4块等面积的小块，对折形成棱，逐块使用。

[0015] 在上述接种过程的第三步中，用砂纸棱蘸取接种液轻划的次数依据具体接种试验和病毒种类而定，但每个接种植株划的次数要相同。

[0016] 发明人指出：砂纸材料易得、成本低，砂面相当于金刚砂，起到磨料的作用，可增加病毒侵入伤口和侵入点，提高侵染率和接种率；由于砂纸面积相等，只有棱接触要接种的植株，这样能够保证接种病毒量在最小的误差范围内；而现配现用接种液，对不稳定的病毒效果明显，还可减少缓冲溶液配制步骤。

[0017] 采用本发明的烟草病毒病砂纸摩擦接种法，取材容易，操作简单、快速、误差小，操作步骤只有三步，接种成功率为100％。适用于烟草普通花叶病(TMV)、烟草黄瓜花叶病(CMV)、烟草马铃薯Y病毒病(PVY)、烟草马铃薯X病毒病(PVX)和烟草蚀纹病毒病(TEV)等通过机械摩擦传播的病毒病。本方法在基层单位开展病毒病田间试验效果非常明显，特别适用于烟草品种抗性筛选和鉴定及其烟草病毒病防治药剂的试验。

附图说明

[0018] 图1为砂纸平面示意图，图2为砂纸折叠后示意图。图中1为砂面，2为砂纸对角线，3为纸面，4为棱。

具体实施方式

[0019] 实施例2004～2006年，每年都在贵州省大方县进行烟草普通花叶病病田间药效试验，3亩多地的烤烟约有3500株烤烟；2004～2006年，每年都在贵州省金沙县中国烟草良种繁殖基地进行花叶病品种筛选和鉴定，试验材料有5亩地左右，约5000～6000株烤烟。

[0020] 1.取典型烟草普通花叶病症状的叶片(剔出叶脉)20g，加少量水在研钵中研碎，用纱布过滤并挤出汁液，然后用1～5L蒸馏水定容，得到接种液；

[0021] 2.取市售的砂纸2张，分成等面积的8小块，对折形成棱；

[0022] 3.用砂纸的棱蘸取接种液在接种植株叶片上轻轻从棱的一端划到另一端，即完成接种。

[0023] 采用烟草病毒病砂纸摩擦接种法，一个人将TMV接种到1000株烤烟上，完成接种的操作时间近1个小时左右；而用原来的病株汁液摩擦法接种，接种1000株烤烟，4个人操作要近1个小时左右完成。烟草病毒病砂纸摩擦接种法与病株汁液摩擦接种法在用工效率上节省了3倍用工；烟草病毒病砂纸接种法基本没有技术要求，操作简单、快速，人与人之间的接种误差也不显著，接种成功率为100％。