一种用于癌症辅助治疗药物组合物、其制剂及质量控制方法

摘要

本发明提供了一种用于癌症辅助治疗药物组合物、其制剂及质量控制方法。本发明的用于癌症辅助治疗的药物组合物，以党参和黄芪为原料制成，其特征在于所述的组合物的高效液相指纹图谱中至少有6个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积10％的吸收峰有3个。

权利要求

1.一种用于癌症辅助治疗的药物组合物，以党参和黄芪为原料制成，其特征在于所述的组合物的高效液相指纹图谱中至少有6个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积10％的吸收峰有3个，分别为：

1号峰，平均保留时间RT为12.807min，RSD为0％，峰面积为1158.519，RSD为4.5％；

3号峰，平均保留时间RT为28.032min，RSD为0％，峰面积为1555.306，RSD为2.46％；

5号峰，平均保留时间RT为43.481min，RSD为0％，峰面积为2578.959，RSD为1.52％药物组合物及其制剂采用包括如下步骤的方法制备：(1)取等量的党参和黄芪饮片，加低元醇回流提取，得提取液和药渣，提取液经弱极性大孔吸附树脂柱纯化，收集洗脱液并浓缩干燥得党参、黄芪总皂苷提取物；

(2)步骤(1)得到的药渣去除溶剂后，经水提、50-80％的低元醇沉淀，沉淀加水溶解后再用30-40％的低元醇沉淀，取上清，用三氯乙酸法去除蛋白，进一步用70-90％的低元醇沉淀，得粗多糖，用水溶解后，采用截流分子量为3000的膜进行超滤，浓缩液进一步用

70-90％的低元醇沉淀，取沉淀，干燥粉碎得党参、黄芪总多糖提取物；

(3)合并步骤(1)和步骤(2)的党参、黄芪总皂苷提取物和党参、黄芪总多糖提取物，加入适当的药学上可接受的载体，制成冻干粉针制剂。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的组合物的指纹图谱中至少有6个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积5％的吸收峰有5个，分别为：

1号峰，平均保留时间RT为12.807min，RSD为0％，峰面积为1158.519，RSD为4.5％；

2号峰，平均保留时间RT为19.439min，RSD为0％，峰面积为358.374，RSD为1.08％；

3号峰，平均保留时间RT为28.032min，RSD为0％，峰面积为1555.306，RSD为2.46％；

5号峰，平均保留时间RT为43.481min，RSD为0％，峰面积为2578.959，RSD为1.52％；

6号峰，平均保留时间RT为48.72min，RSD为0％，峰面积为538.678，RSD为5.42％。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述的组合物的指纹图谱中至少有6个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积2％的吸收峰有6个，分别为：

1号峰，平均保留时间RT为12.807min，RSD为0％，峰面积为1158.519，RSD为4.5％；

2号峰，平均保留时间RT为19.439min，RSD为0％，峰面积为358.374，RSD为1.08％；

3号峰，平均保留时间RT为28.032min，RSD为0％，峰面积为1555.306，RSD为2.46％；

4号峰，平均保留时间RT为31.238min，RSD为0％，峰面积为145.988，RSD为0.13％；

5号峰，平均保留时间RT为43.481min，RSD为0％，峰面积为2578.959，RSD为1.52％；

6号峰，平均保留时间RT为48.72min，RSD为0％，峰面积为538.678，RSD为5.42％。

4.含权利要求1、2或3的药物组合物的制剂，该制剂是注射液、输液剂或者冻干粉针制剂。

5.权利要求4的药物组合物的检测方法，包括下述步骤：

(a)对照指纹图谱的建立

取权利要求4的药物制剂对照样品，加水溶解，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为对照品溶液；

(b)对照指纹图谱的测定：

吸取上述对照样品溶液注入液相色谱仪，使用高效液相色谱法进行测定，得到对照指纹图谱，色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相为：乙腈-水线性梯度洗脱，检测波长为250-280nm；

(c)待测产品指纹图谱的测定：

取待测产品，按照上述(a)中所述步骤及条件测定该待测产品的指纹图谱；

(d)将所述待测产品指纹图谱与所述对照指纹图谱进行比较，识别二者所具有的共同的吸收峰的数量，以确定产品质量是否合格。

6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述(a)步骤中流动相的流速0.5～

1.5ml/min，检测波长265～275nm，柱温20～40℃。

7.如权利要求6的检测方法，其特征在于，所述待测产品指纹图谱与所述对照指纹图谱比较，二者指纹图谱有3个或3个以上相同的吸收峰时，认为所述待测产品的质量合格。

8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述待测产品指纹图谱与所述对照指纹图谱比较，二者指纹图谱有4个或4个以上相同的吸收峰时，认为所述待测产品的质量合格。

9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述待测产品指纹图谱与所述对照指纹图谱比较，二者指纹图谱有5个或5个以上相同的吸收峰时，认为所述待测产品的质量合格。

10.如权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述待测产品指纹图谱与所述对照指纹图谱比较，二者指纹图谱有6个相同的吸收峰时，认为所述待测产品的质量合格。

说明书

一种用于癌症辅助治疗药物组合物、其制剂及质量控制方

法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种用于癌症辅助治疗药物组合物、其制剂及质量控制方法，特别涉及一种以中草药为原料的癌症辅助治疗药物组合物、其制剂及质量控制方法。

背景技术

[0002] 黄芪来源豆科植物蒙古黄芪A.membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus Bge.Hsiao干燥根，为传统的补气药，具有补气固表，利尿排脓，敛疮生肌的功效。传统用于提高人体免疫力等功效，同时也被用来补气，比如疲劳，缺乏精力等症状。黄芪的化学成分研究报道很多，从中分离出多糖、皂苷、黄酮、氨基酸、微量元素等。近代药理研究证明，黄芪多糖(polysaccharides)和黄芪皂苷(total Astragloside)为其中的主要成分。其中，黄芪多糖(Astragaluspolysaccharids，APS)具有促进免疫功能、提高巨噬细胞活性、抑制EAS、双向调节血糖等作用。党参为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.的干燥根，具有补中益气，健脾生津的功效。党参含有多糖、皂苷、挥发油等。

[0003] 以党参和黄芪为原料制备的参芪扶正注射液是目前临床应用较广的中药制剂，它由等量的党参和黄芪组方而成，临床上对气虚型的晚期肿瘤患者有良好的疗效，具有扶正固本、益气补虚的功效，能帮助癌症患者顺利完成放疗、化疗，减少化疗药物的毒副作用，保护机体的造血功能，能使患者血象升高，改善免疫功能及消化道症状等，提高患者的生存质量，并可治疗心、脑血管等疾病。

[0004] 中药指纹图谱是指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，中药指纹图谱对于有效控制中药材或中成药的质量具有重要的意义。日本汉方药主要生产企业在20世纪80年代就已经在企业内部采用高效液相指纹图谱控制质量。德国、法国在对银杏叶提取物联合开发的过程中，发现银杏叶提取物的医疗作用是提取物所得物质群的整体作用结果，而对这样一个整体的质量控制，亦采用高效液相指纹图谱方法。美国FDA最近几年制定的植物草药指南中已经明确把指纹图谱作为混合物质群的质量控制方法(FDA.Guidance of Industry：Botanical Drug (Draft).2000August)。随着研究的深入，人们发现，作为中医理论的实践产物，中药，尤其是复方中药，其中所含的任一成分都不能代表其整体疗效。人们逐渐认识到，现行的参照西药(合成药)质量控制模式的质量标准不能恰当地反映中药内在的质量。从发展趋势看，从现行的质量控制模式向一种综合的、宏观的、可量化的鉴别与主要有效成分含量测定结合已是发展的趋势。

[0005] 中药质量评价的现行标准是利用光谱或色谱手段鉴别和测定某一种或几种有效成分、活性成分或指标成分，以及药典规定的常规检查项目。如中国药典2000年版[一部]共收载602种药材及成药品种。其中有992个薄层色谱鉴别，308个品种有含量测定〔容量法、光谱法、液相色谱法、气相色谱法及薄层色谱扫描法〕，大多数品种有一般的检查项目。显然.这些质量标准的设置是模仿了化学药品的模式。其它国家如英国、印度、美国草药典、日本药局方中的汉药及德国CommissionE编辑的德国草药专论等也采用了基本相同的内容。对于化学药品而言，其药效成分为结构清晰的单一化合物，构效关系明确，其含量和纯度直接表达其有效及安全性。然而，中医用药的特点是复方配伍，任何单一的有效或活性成分的含量高低均不能表达其整体的疗效。例如，黄芪所含的黄芪甲苷(aastraga losideIV)是当前被选择为质量标准的鉴别和含量测定的最为常见的目标，但并没有依据证明黄芪甲苷与黄芪的功能主治的明确联系。同样，黄连、黄柏、三棵针均含小梁碱，一般都以它作为检测的目标，但是三者的功能主治却截然不同。复方制剂的情况就更加复杂。中医这种不是一对一的非线性的理论和实践说明中药质量应该采用某种宏观的综合的质量评价手段。

[0006] 参芪扶正注射液是由党参、黄芪为主要原料制成的，其治疗效果已经得到临床的验证，而是否能够保证药物的质量是决定其疗效的基础。如果用一、二种活性成分来说明其内在质量，具有一定的片面性，更不用说无药效的指标成分了。要控制其功效，只针对其一、二个化学成分进行表征和控制是不够的，必须对它的物质群整体予以控制。所以，除了“微观分析”外，还应该用某种“宏观分析”方法，从整体上有效地表征中药质量。指纹图谱作为中草药及其提取物质量控制方法，目前已经成为国际共识。现在，对参芪扶正注射液中活性成分的测定方法较多，但如何能够从更宏观的角度对其进行质量控制的宏观质量控制方法尚未见报道。

发明内容

[0007] 本发明的目的是提供一种用于癌症辅助治疗药物组合物、其制剂及质量控制方法。

[0008] 本发明的用于癌症辅助治疗的药物组合物，以党参和黄芪为原料制成，其特征在于所述的组合物的高效液相指纹图谱中至少有6个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积10％的吸收峰有3个，分别为：

[0009] 1号峰，平均保留时间RT为12.807min，RSD为0％，峰面积为1158.519，RSD为4.5％；

[0010] 3号峰，平均保留时间RT为28.032min，RSD为0％，峰面积为1555.306，RSD为2.46％；

[0011] 5号峰，平均保留时间RT为43.481min，RSD为0％，峰面积为2578.959，RSD为1.52％。

[0012] 本发明的药物组合物，优选的是，组合物的指纹图谱中至少有6个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积5％的吸收峰有5个，分别为：

[0013] 1号峰，平均保留时间RT为12.807min，RSD为0％，峰面积为1158.519，RSD为4.5％；

[0014] 2号峰，平均保留时间RT为19.439min，RSD为0％，峰面积为358.374，RSD为1.08％；

[0015] 3号峰，平均保留时间RT为28.032min，RSD为0％，峰面积为1555.306，RSD为2.46％；

[0016] 5号峰，平均保留时间RT为43.481min，RSD为0％，峰面积为2578.959，RSD为1.52％；

[0017] 6号峰，平均保留时间RT为48.72min，RSD为0％，峰面积为538.678，RSD为5.42％。

[0018] 本发明的药物组合物，更优选的是，指纹图谱中至少有6个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积2％的吸收峰有6个，分别为：

[0019] 1号峰，平均保留时间RT为12.807min，RSD为0％，峰面积为1158.519，RSD为4.5％；

[0020] 2号峰，平均保留时间RT为19.439min，RSD为0％，峰面积为358.374，RSD为1.08％；

[0021] 3号峰，平均保留时间RT为28.032min，RSD为0％，峰面积为1555.306，RSD为2.46％；

[0022] 4号峰，平均保留时间RT为31.238min，RSD为0％，峰面积为145.988，RSD为0.13％；

[0023] 5号峰，平均保留时间RT为43.481min，RSD为0％，峰面积为2578.959，RSD为1.52％；

[0024] 6号峰，平均保留时间RT为48.72min，RSD为0％，峰面积为538.678，RSD为5.42％。

[0025] 本发明的药物组合物可以根据需要，加入或者不加药学上可接受的载体，制成任何形式的药物制剂，如片剂、胶囊、散剂、丸剂、口服液、注射液、输液剂或者冻干粉针制剂等，优选注射液、输液剂或者冻干粉针制剂。

[0026] 本发明的药物的组合物或者制剂的指纹图谱的检测是采用如下方法进行的：

[0027] 照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。

[0028] 色谱条件和系统适用性试验Diamonsil C18柱(迪马公司)，粒度5μm，体积250×4.6mm；流动相∶乙腈-水线性梯度洗脱(见下表)；柱温30℃；流速1ml/min；检测波长为270nm；记录时间：55分钟。理论板数按最大峰计算应不低于3000。

[0029] 线性梯度洗脱流动相配比变化程序

[0030]

[0031] 供试品溶液的制备

[0032] 取本品1瓶，加水5ml使溶解，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。

[0033] 测定法精密吸取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。

[0034] 供试品指纹图谱与对照用指纹图谱比较，并经计算机模拟相似度计算软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(中国药典会出版，版本2004A或B)计算，相似度应为0.90～1.00之间。

[0035] 本发明的药物组合物及其制剂的可采用包括如下步骤的方法制备：

[0036] (1)取等量的党参和黄芪饮片，加低元醇回流提取，得提取液和药渣，提取液经弱极性大孔吸附树脂柱纯化，收集洗脱液并浓缩干燥得党参、黄芪总皂苷提取物；

[0037] (2)步骤(1)得到的药渣去除溶剂后，经水提、50-80％的低元醇沉淀，沉淀加水溶解后再用30-40％的低元醇沉淀，取上清，用三氯乙酸法去除蛋白，进一步用70-90％的低元醇沉淀，得粗多糖，用水溶解后，采用截流分子量为3000的膜进行超滤，浓缩液进一步用70-90％的低元醇沉淀，取沉淀，干燥粉碎得党参、黄芪总多糖提取物。

[0038] (3)合并步骤(1)和步骤(2)的党参、黄芪总皂苷提取物和党参、黄芪总多糖提取物，加入适当的药学上可接受的载体，制成冻干粉针制剂。

[0039] 此处的低元醇的概念同前，优选乙醇。

[0040] 所述的步骤(1)所用弱极性大孔树脂可以是任何常规的或者已知的弱极性大孔树脂，例如常用的D101型大孔吸附树脂、AB-8型大孔吸附树脂、ZTC-1型大孔吸附树脂和DidaionHP20型大孔吸附树脂等，优选AB-8型大孔吸附树脂和D101型大孔吸附树脂，更优选D101型大孔吸附树脂，采用树脂的纯化过程可以按照本领域常规或者已知的方法进行。

[0041] 本发明提供的制备方法，优选的是包括以下步骤：

[0042] (1)取党参和黄芪饮片，加用6-10倍量的60-80％乙醇，回流提取1-3次，每次1.5-3小时，得提取液和药渣，提取液经D101型大孔吸附树脂柱纯化，收集洗脱液并浓缩干燥得党参、黄芪总皂苷提取物；

[0043] (2)步骤(1)得到的药渣去除溶剂后，加6-10倍量的水，于60-100℃，浸提1-3次，每次1.5-3小时，60-80％的乙醇沉淀，沉淀加水溶解后再用30-40％的乙醇沉淀，取上清，去除蛋白，进一步用70-90％的乙醇沉淀，得粗多糖，用水溶解后超滤，浓缩液进一步用70-90％的乙醇沉淀，取沉淀，干燥粉碎得党参、黄芪总多糖提取物。

[0044] (3)合并步骤(1)和步骤(2)的党参、黄芪总皂苷提取物和党参、黄芪总多糖提取物，加入适当的药学上可接受的载体，制成冻干粉针制剂。

[0045] 本发明还提供了所述的药物组合物及其制剂的质量控制方法，包括下述步骤：

[0046] (a)对照指纹图谱的建立

[0047] 取所述的药物组合物或者制剂对照样品，加水溶解，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为对照品溶液；

[0048] (b)对照指纹图谱的测定：

[0049] 吸取上述对照样品溶液注入液相色谱仪，使用高效液相色谱法进行测定，得到对照指纹图谱，色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相为：乙腈-水线性梯度洗脱，检测波长为250-280nm；

[0050] (c)待测产品指纹图谱的测定：

[0051] 取待测产品，按照上述(a)中所述步骤及条件测定该待测产品的指纹图谱；

[0052] (d)将所述待测产品指纹图谱与所述对照指纹图谱进行比较，识别二者所具有的共同的吸收峰的数量，以确定产品质量是否合格。

[0053] 所述(a)步骤中优选的色谱条件是：流动相的流速0.5～1.5ml/min，检测波长265～275nm，柱温20～40℃。

[0054] 优选的党参药材指纹图谱的建立采用如下方法：

[0055] (a)对照指纹图谱的建立

[0056] 取所述的药物组合物或者制剂对照样品，加水溶解，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为对照品溶液；

[0057] (b)对照指纹图谱的测定：

[0058] 吸取上述对照样品溶液注入液相色谱仪，使用高效液相色谱法进行测定，得到对照指纹图谱，色谱条件：Diamonsil C18柱(迪马公司)，粒度5μm，体积250×4.6mm；流动相∶乙腈-水线性梯度洗脱(见下表)；柱温30℃；流速1ml/min；检测波长为270nm；记录时间：55分钟。理论板数按最大峰计算应不低于3000。

[0059] 线性梯度洗脱流动相配比变化程序

[0060]

[0061] (c)待测产品指纹图谱的测定：

[0062] 取待测产品，按照上述(a)中所述步骤及条件测定该待测产品的指纹图谱；

[0063] (d)将所述待测产品指纹图谱与所述对照指纹图谱进行比较，识别二者所具有的共同的吸收峰的数量，以确定产品质量是否合格。

[0064] 在对照指纹图谱的建立中，使用高效液相色谱法测定所获得的党参药材的对照指纹图谱中有6个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积10％的吸收峰有3个，分别为：

[0065] 1号峰，平均保留时间RT为12.807min，RSD为0％，峰面积为1158.519，RSD为4.5％；

[0066] 3号峰，平均保留时间RT为28.032min，RSD为0％，峰面积为1555.306，RSD为2.46％；

[0067] 5号峰，平均保留时间RT为43.481min，RSD为0％，峰面积为2578.959，RSD为1.52％。

[0068] 在对照指纹图谱的建立中，使用高效液相色谱法测定所获得的党参药材的对照指纹图谱中有6个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积5％的吸收峰有5个，分别为：

[0069] 1号峰，平均保留时间RT为12.807min，RSD为0％，峰面积为1158.519，RSD为4.5％；

[0070] 2号峰，平均保留时间RT为19.439min，RSD为0％，峰面积为358.374，RSD为1.08％；

[0071] 3号峰，平均保留时间RT为28.032min，RSD为0％，峰面积为1555.306，RSD为2.46％；

[0072] 5号峰，平均保留时间RT为43.481min，RSD为0％，峰面积为2578.959，RSD为1.52％；

[0073] 6号峰，平均保留时间RT为48.72min，RSD为0％，峰面积为538.678，RSD为5.42％。

[0074] 在对照指纹图谱的建立中，使用高效液相色谱法测定所获得的党参药材的对照指纹图谱中有6个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积2％的吸收峰有6个，分别为：

[0075] 1号峰，平均保留时间RT为12.807min，RSD为0％，峰面积为1158.519，RSD为4.5％；

[0076] 2号峰，平均保留时间RT为19.439min，RSD为0％，峰面积为358.374，RSD为1.08％；

[0077] 3号峰，平均保留时间RT为28.032min，RSD为0％，峰面积为1555.306，RSD为2.46％；

[0078] 4号峰，平均保留时间RT为31.238min，RSD为0％，峰面积为145.988，RSD为0.13％；

[0079] 5号峰，平均保留时间RT为43.481min，RSD为0％，峰面积为2578.959，RSD为1.52％；

[0080] 6号峰，平均保留时间RT为48.72min，RSD为0％，峰面积为538.678，RSD为5.42％。

[0081] 本发明采用如下方法控制药物组合物和制剂的质量，取待测组合物或者制剂，采用与对照样品的制备方法、色谱条件、测定方法完全相同的方法进行测定，获取指纹图谱，将组合物或者制剂待测产品指纹图谱与对照指纹图谱比较，二者指纹图谱有3个或3个以上相同的吸收峰时，便认为待测产品是合格产品。

[0082] 优选地，党参药材待测产品指纹图谱与所述党参药材对照指纹图谱比较，二者指纹图谱有4个或4个以上相同的吸收峰时，认为所述党参药材待测产品的质量合格。

[0083] 较为优选地，党参药材待测产品指纹图谱与所述党参药材对照指纹图谱比较，二者指纹图谱有5个或5个以上相同的吸收峰时，认为所述党参药材待测产品的质量合格。

[0084] 最为优选地，被测的党参药材产品指纹图谱与对照党参药材指纹图谱比较，二者指纹图谱有6个相同的吸收峰时，认为所述党参药材待测产品的质量合格。

[0085] 本发明把药物组合物或者制剂中的各种成分指纹图形作为一个整体看待，注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征，避免了因只测定一、二个化学成分而判定其整体质量的片面性，为完整、准确评价其质量提供了新的对照标准。

[0086] 本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。

[0087] 稳定性试验(S1～S5分别表示同一批次的样品5份)

[0088]

[0089] 精密度试验(S1～S5分别表示同一批次的样品5份)

[0090]

[0091] 重现性试验(S1～S5分别表示同一批次的样品5份)

[0092]

[0093] 对于本领域技术人员而言，根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其它实施方案，本发明实施例仅作为示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进。例如，使用不同的检测仪器所获得的测定结果可能有所不同，但只要使用本发明所述的质量控制方法，均在本发明保护范围之内。

附图说明

[0094] 实施例1的药物制剂的指纹图谱。

具体实施方式

[0095] 下面列举实施例进一步详细说明本发明，该实施例仅用于说明本发明，对本发明并不构成限制。

[0096] 实施例1

[0097] 药物组合物及制剂的制备：

[0098] (1)取党参、黄芪饮片各5000g，加6倍量70％乙醇，回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液(药渣挥去溶剂后备用)，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.25(60℃)的稠膏，加4倍量水使溶解，静置，离心，取上清液加于已处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，先用2倍量的蒸馏水洗涤树脂柱，再用80％乙醇的洗脱皂苷类成分，收集4倍于树脂柱体积的80％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，浓缩物在60℃下干燥得党参、黄芪总皂苷提取物。

[0099] (2)上述挥去溶剂后的药渣，加10倍量水，于60℃浸提2次，每次1.5小时，合并水提液，浓缩至1∶1(每毫升含原生药材1克)，加入乙醇，使醇浓度达到70％，静置24h，倾出上清液，沉淀离心，将离心所得沉淀加适量水(水∶原生药为1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇浓度达到35％，静置24h，离心，取上清液，回收尽乙醇，加适量水调整体积至相对密度为1.00~1.05，以1∶1等体积加入5％三氯乙酸溶液，静置4小时，离心，取上清液，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，得粗多糖，加适量水(水∶原生药材为1∶1)溶解，用截留分子量3000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20~1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物。

[0100] (3)取重量比为1∶3的党参、黄芪总皂苷及总多糖提取物，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％注射用甘露醇、0.5％聚维酮K30，并用10％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.5，补加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，灌装7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷冻干燥，压盖，封口，即得。

[0101] 指纹图谱检测：

[0102] 〖指纹图谱〗照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。

[0103] 色谱条件和系统适用性试验Diamonsil C18柱(迪马公司)，粒度5μm，体积250×4.6mm；流动相∶乙腈-水线性梯度洗脱(见下表)；柱温30℃；流速1ml/min；检测波长为270nm；记录时间：55分钟。理论板数按最大峰计算应不低于3000。

[0104] 线性梯度洗脱流动相配比变化程序

[0105]

[0106] 供试品溶液的制备

[0107] 取本实施例制备的产品1瓶，加水5ml使溶解，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。

[0108] 测定法精密吸取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。

[0109] 供试品指纹图谱(见附图)与对照用指纹图谱比较，并经计算机模拟相似度计算软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(中国药典会出版，版本2004A或B)计算，相似度为0.99。

[0110] 实施例2

[0111] 按照实施例1的方法制备本发明的药物制剂，只是第(1)步中取党参3500g，黄芪6500g，所用的大孔吸附树脂是AB-8型大孔吸附树脂，第(2)步提取所用的低元醇是正丁醇，沉淀所用的低元醇是异丙醇。

[0112] 供试品指纹图谱与对照用指纹图谱比较(按实施例1的方法)，并经计算机模拟相似度计算软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(中国药典会出版，版本2004A或B)计算，相似度为0.98。

[0113] 实施例3

[0114] (1)取党参、黄芪饮片各5000g，加10倍量60％乙醇，回流提取1次，3小时，提取液(药渣挥去溶剂后备用)减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.25(60℃)的稠膏，加3倍量水使溶解，静置，离心，取上清液加于已处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，先用10倍量的蒸馏水洗涤树脂柱，再用80％乙醇的洗脱皂苷类成分，收集3倍于树脂柱体积的80％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，浓缩物在50℃下干燥得党参、黄芪总皂苷提取物。

[0115] (2)上述挥去溶剂后的药渣，加6倍量水，于100℃浸提2次，每次3小时，合并水提液，浓缩至1∶1(每毫升含原生药材1克)，加入乙醇，使醇浓度达到60％，静置24h，倾出上清液，沉淀离心，将离心所得沉淀加适量水(水∶原生药为1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇浓度达到35％，静置24h，离心，取上清液，回收尽乙醇，加适量水调整体积至相对密度为1.00~1.05，以1∶1等体积加入5％三氯乙酸溶液，静置4小时，离心，取上清液，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，得粗多糖，加适量水(水∶原生药材为1∶1)溶解，用截留分子量3000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20~1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达90％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物。

[0116] (3)取重量比为1∶0.1的党参、黄芪总皂苷及总多糖提取物，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％注射用甘露醇、0.5％Tween-80，并用10％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.5，补加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，灌装7ml西林瓶中，每瓶
2.5ml，压盖，封口，即得。

[0117] 供试品指纹图谱与对照用指纹图谱比较(按实施例1的方法)，并经计算机模拟相似度计算软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(中国药典会出版，版本2004A或B)计算，相似度为0.99。

[0118] 实施例4

[0119] (1)取党参、黄芪饮片各5000g，加8倍量60％乙醇，回流提取2次，每次2小时，提取液(药渣挥去溶剂后备用)减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.25(60℃)的稠膏，加5倍量水使溶解，静置，离心，取上清液加于已处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，先用5倍量的蒸馏水洗涤树脂柱，再用80％乙醇的洗脱皂苷类成分，收集2倍于树脂柱体积的80％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，浓缩物在60℃下干燥得党参、黄芪总皂苷提取物。

[0120] (2)上述挥去溶剂后的药渣，加8倍量水，于80℃浸提3次，每次2小时，合并水提液，浓缩至1∶1(每毫升含原生药材1克)，加入乙醇，使醇浓度达到80％，静置24h，倾出上清液，沉淀离心，将离心所得沉淀加适量水(水∶原生药为1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇浓度达到40％，静置24h，离心，取上清液，回收尽乙醇，加适量水调整体积至相对密度为1.00~1.05，以1∶1等体积加入5％三氯乙酸溶液，静置4小时，离心，取上清液，加乙醇至含醇量达70％，静置过夜，滤过，得粗多糖，加适量水(水∶原生药材为1∶1)溶解，用截留分子量6000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20~1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达70％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物。

[0121] (3)取重量比为1∶8的党参、黄芪总皂苷及总多糖提取物，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％葡萄糖，并用10％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.5，补加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，灌装7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，压盖，封口，即得。

[0122] 供试品指纹图谱与对照用指纹图谱比较(按实施例1的方法)，并经计算机模拟相似度计算软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(中国药典会出版，版本2004A或B)计算，相似度为0.97。

[0123] 实施例5

[0124] (1)取党参、黄芪饮片各5000g，加9倍量60％乙醇，回流提取2次，每次1.5小时，提取液(药渣挥去溶剂后备用)减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.25(60℃)的稠膏，加5倍量水使溶解，静置，离心，取上清液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱上，先用5倍量的蒸馏水洗涤树脂柱，再用80％乙醇的洗脱皂苷类成分，收集3倍于树脂柱体积的70％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，浓缩物在60℃下干燥得党参、黄芪总皂苷提取物。

[0125] (2)上述挥去溶剂后的药渣，加8倍量水，于70℃浸提3次，每次3小时，合并水提液，浓缩至1∶1(每毫升含原生药材1克)，加入乙醇，使醇浓度达到70％，静置24h，倾出上清液，沉淀离心，将离心所得沉淀加适量水(水∶原生药为1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇浓度达到350％，静置24h，离心，取上清液，回收尽乙醇，加适量水调整体积至相对密度为1.00~1.05，以1∶1等体积加入5％三氯乙酸溶液，静置4小时，离心，取上清液，加乙醇至含醇量达70％，静置过夜，滤过，得粗多糖，加适量水(水∶原生药材为1∶1)溶解，用截留分子量6000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20~1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达70％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物。

[0126] (3)取重量比为1∶4的党参、黄芪总皂苷及总多糖提取物，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％葡萄糖，并用10％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.5，补加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，灌装7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷冻干燥，压盖，封口，即得。

[0127] 供试品指纹图谱与对照用指纹图谱比较(按实施例1的方法)，并经计算机模拟相似度计算软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(中国药典会出版，版本2004A或B)计算，相似度为0.96。

[0128] 实施例6抗肿瘤增效试验

[0129] 对环磷酰胺抗Lewis肺癌作用的增效试验

[0130] 于无菌条件下摘取荷Lewis肺癌小鼠的瘤块，除去坏死组织，用玻璃匀浆器匀浆，按1∶4倍用无菌生理盐水稀释，然后无菌条件下每只小鼠(C57BL/6种)右前肢腋窝皮下注射0.2ml，24h后称动物体重并分组。第一组为荷瘤对照组，给等容积生理盐水；第二组为化疗药物组，给环磷酰胺注射剂30mg/kg；第三、四、五组为本发明的药物制剂+化疗药物组，同时给本发明的药物制剂(按实施例1的方法制备)3g生药/kg、6g生药/kg、12g生药/kg和环磷酰胺注射剂30mg/kg。接种肿瘤后第二天开始腹腔注射给药，0.2ml/10g，每天1次，连续10天；接种肿瘤后第二天和第六天分别腹腔注射环磷酰胺注射剂。第10天给药后24h称动物体重，处死小鼠，剥离瘤块并称重，抑瘤率计算同上。试验结果见表1。

[0131] 表1本发明的药物制剂对环磷酰胺抗Lewis肺癌作用的影响(x±s)

[0132]

[0133] 与荷瘤对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与环磷酰胺组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

[0134] 由表12可见，本实验所用剂量的环磷酰胺能减轻Lewis肺癌小鼠的瘤重，与荷瘤对照组比较有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。本发明的药物制剂与环磷酰胺联合应用，抗小鼠Lewis肺癌的作用增强，大、中、小剂量组抑瘤率依次为69.77％、44.65％和36.74％，与单独应用环磷酰胺(抑瘤率为35.81)比较，大剂量组有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，说明本发明的药物制剂能增强环磷酰胺抗小鼠Lewis肺癌作用。

[0135] 对放疗抗H22肝癌作用的增效试验

[0136] 于无菌条件下抽取荷H22肝癌8天的小鼠腹水，按1∶4倍用无菌生理盐水稀释，然后无菌条件下每只小鼠(ICR种)腹腔注射0.2ml，24h后称动物体重并分组。第一组为为荷瘤对照组，给等容积生理盐水；第二组为放疗组，给小剂量X线照射；第三组为参芪扶正注射液组，给参芪扶正注射液6g生药/kg；第四、五、六组为本发明的药物制剂和小剂量X线照射，同时给本发明的药物制剂(按实施例一的方法制备)3g生药/kg、6g生药/kg、12g生药/kg和小剂量X线照射。接种肿瘤后第二天开始开始腹腔注射给药，0.2ml/10g，每天1次，连续10天；接种肿瘤后第五天给一次性小剂量X线照射(全身照射剂量为12.5mGy/min，总剂量为75mGy)。第10天给药后24h称动物体重，处死小鼠，剥离瘤块并称重，抑瘤率计算同上。试验结果见表13。

[0137] 表2本发明的药物制剂对放疗抗H22肝癌作用的影响(x±s)

[0138]

[0139] 与荷瘤对照组比较，##P＜0.01；与放疗组比较，**P＜0.01

[0140] 由表13可见，本实验所用剂量的放疗能减轻H22肝癌小鼠的瘤重，与荷瘤对照组比较，有显著性差异(P＜0.01)。本发明的药物制剂与放疗联合应用，抗小鼠H22肝癌的作用增强，大、中、小剂量组抑瘤率依次为56.38％、47.87％和25.00％，与单独应用放疗组(抑瘤率为24.47)比较，有显著性差异(P＜0.01)，，说明本发明的药物制剂能增强放疗抗小鼠H22肝癌作用。参芪扶正注射液与放疗联合应用，抗小鼠H22肝癌的作用轻度增强，抑瘤率为36.28％，但与单独应用放疗组比较无显著性差异(P＞0.05)；与同剂量本发明的药物制剂比较，有显著性差异(P＜0.01)，说明本发明的药物制剂增强放疗抗小鼠H22肝癌作用强于参芪扶正注射液。