白介素2作为制备治疗鼻炎药物的应用

摘要

本发明公开了白介素2(白介素-2)及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用，属于生物医药领域。本发明的优点是：本发明首次使用重组人白介素2治疗鼻炎，结果表明其能够明显缓解鼻炎的症状体征，明显改善鼻部的病变，疗效确切。

权利要求

1.白介素2作为制备治疗鼻炎药物的应用，其特征在于，所述药物为鼻喷剂，由50万u/ml的重组人白介素2和药剂学可接受的辅料组成。

2.根据权利要求1所述的白介素2作为制备治疗鼻炎药物的应用，其特征在于：所述鼻炎为过敏性鼻炎。

说明书

白介素2作为制备治疗鼻炎药物的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及白介素2(白介素-2)及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用，属于生物医药领域。

背景技术

[0002] 鼻炎是指鼻腔粘膜出现炎症，表现为充血或者水肿，患者经常会出现鼻塞，流清水涕，鼻痒，喉部不适，咳嗽等症状。鼻炎分过敏性鼻炎、慢性鼻炎、慢性鼻窦炎等，鼻炎发病的临床症状各异，危害极大，当影响鼻腔的生理功能时，会出现呼吸障碍，引发血氧浓度降低，影响其它组织和器官的功能与代谢，而出现一些如头痛、头晕、记忆力下降，胸痛、胸闷、精神萎糜等症状，甚至会并发肺气肿、肺心病、哮喘等严重并发症。而当鼻炎未能得到及时治疗，影响嗅觉粘膜时，就会出现嗅觉障碍，导致闻不着香臭等气味。当长期反复发作的鼻窦炎未得到及时治疗，炎症就会扩散至邻近器官、组织，而并发如额骨骨髓炎、眶骨壁骨炎及骨膜炎、眶壁骨膜下脓肿、眶内蜂窝织炎、球后视神经炎、硬脑膜外脓肿、硬脑膜下脓肿、化脓性脑膜炎、脑脓肿、海绵窦血栓性静脉炎等多种危重急症。

[0003] 目前治疗鼻炎的主要药物及其优缺点如下：(1)抗组胺药，口服吸收较快，能较迅速地改善鼻痒、喷嚏、流涕症状，但对鼻堵症状无效，且嗜睡等副作用较大，有一些抗组胺药物还有严重的心脏毒副作用。(2)鼻粘膜减充血药，可以局部应用也可以全身应用，局部用药如麻黄素等起效很快，可迅速解除鼻堵塞症状，但这类药不能长期应用，通常不应超过4天，因为它具有血管扩张的副作用，导致鼻堵加重，长期应用必然引起药物性鼻炎，增加了鼻炎的复杂性和治疗的困难。(3)皮质类固醇，保护鼻腔组织不受过敏源的刺激，能有效的抑制过敏性鼻炎的各种症状，减少鼻黏膜肿胀及减缓鼻痒、打喷嚏、流鼻水等症状。皮质类固醇药物有口服及鼻喷剂两种，在症状比较严重时，可以选择口服类固醇来治疗，但副作用较大，一般建议服用几天后就停药。鼻喷剂型类固醇直接作用于鼻黏膜上，经局部吸收治疗来缓解症状，低剂量，使用类固醇鼻喷剂通常一周后才会改善症状。

[0004] 白介素2(InterLeukin-2)是T淋巴细胞分泌的一种细胞因子(由133个氨基酸组成的多肽，分子量约为15KD)。它是人体免疫应答的核心物质，具有免疫增强、抗肿瘤和抗感染等作用。临床上已用于肾癌、黑色素瘤、淋巴瘤、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肠癌、膀胱癌、头颈部肿瘤、白血病及癌性胸腹水等病症的治疗，与放、化疗比较，白介素-2对正常细胞毒副作用轻微，能减轻肿瘤患者的疼痛，提高其生活质量。此外结核病、肝炎、艾滋病、性病、成瘾性吸毒者及其它免疫功能低下病人均可使用白介素-2。国外更是应用大剂量(1000万单位)治疗艾滋病患者。迄今为止，国内外尚未有应用白介素2治疗鼻炎的报道。

[0005] 我公司产品“基因工程人白细胞介素-2”是国家重点科技项目(攻关)计划和“863”高技术研究开发项目。该项目1995年获得中国发明协会“中国发明成果金杯奖”，1996年获得国家“国家八五攻关重大科技成果奖”和“北京国际发明展览会金牌奖”，1997年获得“国家科技进步二等奖”。至投产以来，我们相继对该产品进行了深度挖掘，并在2002年获得了水针剂的专利。在已有基础上，我们开发出了该产品的新用途。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用。

[0007] 其中白介素2及其衍生物尤指人的白介素2及其衍生物。

[0008] 为了提高白介素2的生物活性或者便于以基因工程方式大规模生产，人们对白介素2的天然结构进行了各式各样的改造，形成了很多白介素2衍生物。包括天然结构在内的白介素2及其衍生物，都适用于本发明所公开的新适应症。本发明可以单独作为药物使用，也可以与其他治疗鼻炎的药物联合使用，以协同增效。

[0009] 所述鼻炎包括但不限于过敏性鼻炎，白介素2及其衍生物对各种类型鼻炎的炎症症状均有改善作用。

[0010] 所述药物由治疗有效量的白介素2或其衍生物和药剂学可接受的辅料组成。

[0011] 所述药物为鼻粘膜给药剂型。鼻粘膜给药避免了药物的首过效应，鼻粘膜面积大，血管丰富，用药方便，吸收快，损伤小，易于被患者接受。

[0012] 所述鼻粘膜给药剂型为鼻喷剂或滴鼻剂。

[0013] 本发明药效学动物实验针对治疗过敏性鼻炎，对大鼠建立过敏性鼻炎的动物模型，试验重组人白介素-2对治疗过敏性鼻炎的效果，并同已上市的，治疗效果比较好的化学药：伯克纳鼻气雾剂(丙酸倍氯米松鼻气雾剂，葛兰素史克制药有限公司生产)进行对比。主要是从动物体征(动物的鼻痒、喷嚏、清涕出现的时间、次数与轻重程度)和组织病理观察两个方面比较和确定药物的治疗效果。

[0014] 从动物体征方面观察，中剂量(100ku.kg-1)重组人白介素-2的治疗效果和阳性对照药基本相当。

[0015] 从组织病理方面观察。在“中性粒细胞浸润”方面，重组人白介素-2鼻喷剂100ku.-1kg 、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“中性粒细胞浸润”病变。在“粘膜上皮变性、坏-1 -1
死”方面，重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg 、50ku.kg 、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“粘膜上皮变性、坏死”病变。在“血管充血、水肿”方面，重组人白介素-2鼻喷剂100ku.-1
kg 、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“血管充血、水肿”病变。

[0016] 本发明的优点是：本发明首次使用重组人白介素2治疗鼻炎，结果表明其能够明显缓解鼻炎的症状体征，明显改善鼻部的病变，疗效确切。

[0017] 下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明，凡依照本发明公开内容所作出的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。

附图说明

[0018] 图1为正常对照组鼻粘膜切片。

[0019] 图2为模型组鼻粘膜切片。

[0020] 图3为低剂量组鼻粘膜切片。

[0021] 图4为中剂量组鼻粘膜切片。

[0022] 图5为高剂量组鼻粘膜切片。

[0023] 图6为阳性组鼻粘膜切片。

[0024] 图7为阴性组鼻粘膜切片。

具体实施方式

[0025] 实施例.抗鼻炎动物试验

[0026] 一.试验目的

[0027] 观察重组人白介素—2鼻喷剂对于过敏性鼻炎动物模型的影响，为其临床应用提供药理学实验依据。

[0028] 二.试验材料

[0029] 1.动物：清洁级SD大鼠，70只，雌雄各半，南京市军区总医院提供，体重220～250克，动物合格证号：SCXK(苏2003-0004)，在本实验室饲养3～5天后使用。

[0030] 2.药品

[0031] (1)重组人白介素—2鼻喷剂。北京四环生物制药有限公司生产，规格：100万-1u·ml ，3ml/支。活性成分为白介素2，采用常规辅料按常规操作制备。

[0032] (2)伯克纳鼻气雾剂(丙酸倍氯米松鼻气雾剂)。葛兰素史克制药有限公司生产，规格：0.154％，丙酸倍氯米松50μg/喷，200喷/瓶，批号：H10960001。

[0033] (3)阴性对照液。按重组人白介素—2鼻喷剂处方配制，内含除活性成分重组人白介素—2外的所有成分。

[0034] 三.试验方法

[0035] 1.药液配制

[0036] (1)阳性药

[0037] 规格：每喷含丙酸倍氯米松50μg。

[0038] 配制方法：4喷鼻喷剂，加50μl无水乙醇均匀分散，加入灭菌注射用水稀释至2.0ml，得0.1μg/μl。

[0039] (2)致敏剂

[0040] 配制方法：用移液枪取100μl的甲苯—2，4—二异氰酸酯(TDI)，向其中加入0.9ml的橄榄油，得浓度为10％的TDI溶液。

[0041] (3)高剂量

[0042] 北京四环生物制药有限公司提供的鼻喷剂，浓度为100万u/ml的鼻喷剂。

[0043] (4)中剂量

[0044] 对重组人白介素-2鼻喷剂以阴性对照液稀释成为浓度为50万u/ml的鼻喷剂。

[0045] (5)低剂量

[0046] 对重组人白介素-2鼻喷剂以阴性对照液稀释成浓度为25万u/ml。

[0047] (6)阴性对照液

[0048] 按重组人白介素—2鼻喷剂处方配制，内含除主药重组人白介素—2的所有成分。

[0049] 2.滤纸条的准备

[0050] 将滤纸剪成5mm×40mm大小，一端为1mm×13mm。

[0051] 3.重组人白介素—2的治疗作用

[0052] (1)致敏(建立模型)

[0053] 70只健康，体重220～250g的SD大鼠，按体重随机分为7组，即正常对照组，模型组，阳性药组，阴性对照组，重组人白介素—2鼻喷剂高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。除正常对照组外，其余各组每天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天，连续5天，然后再于第7日、第9日给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次
10μl。正常对照组每天给予橄榄油，每侧鼻腔每次10μl，1次/天，连续5天，然后再于第
7日、第9日给予橄榄油，每侧鼻腔每次10μl。

[0054] (2)给药治疗

[0055] 致敏期(9天)后，于第10天至第16天进行给药治疗，治疗期为7天。各组进行如下处理：

[0056] A.正常对照组：正常饲养，于第11、13、15天给予橄榄油，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

[0057] B.模型组：正常饲养，于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

[0058] C.阳性药组：正常饲养，于第11天至第16天，每天鼻腔给予阳性药液，用药剂量20μg/kg体重，每天两次，连续7天，同时于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

[0059] D.阴性对照组：正常饲养，于第11天至第16天，每天鼻腔给予阴性对照液，给药容积为200μl/kg体重，每天两次，连续7天，同时于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

[0060] E.重组人白介素-2鼻喷剂低剂量(50ku.kg-1)组：正常饲养，于第11天至第16天，每天鼻腔给予浓度为25万u/ml的鼻喷剂，给药容积为200μl/kg体重，每天两次，连续7天，同时于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

[0061] F.重组人白介素-2鼻喷剂中剂量(100ku.kg-1)组：正常饲养，于第11天至第16天，每天鼻腔给予浓度为50万u/ml的滴鼻剂，给药容积为200μl/kg体重，每天两次，连续7天，同时于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

[0062] G.重组人白介素—2鼻喷剂高剂量(200ku.kg-1)组：正常饲养，于第11天至第16天，每天鼻腔给予浓度为100万u/ml的滴鼻剂，给药容积为200μl/kg体重，每天两次，连续7天，同时于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

[0063] (3)症状和体征观察

[0064] A.实验期间每天在给完致敏剂后观察动物体征30分钟，内容包括喷嚏数目，抓痒，鼻粘膜色泽，鼻通气情况。

[0065] B.鼻分泌量的测定：用滤纸法收集鼻分泌量，将剪好的滤纸条插入大鼠鼻腔内，5min后取出称重，比较滤纸条插入前后的质量差，计算鼻分泌量。

[0066] (4)组织病理学观察

[0067] 实验结束后，于第二天乙醚麻醉，断头处死，驳除上颌骨部皮肤并将上颌骨从颅骨中游离出来，沿鼻中线切开，暴露鼻中隔及双侧鼻腔，将鼻中隔前中段剪下，固定于10％福尔马林中，一周后剥离粘膜，脱水，石蜡包埋，制片，HE染色，光镜观察。

[0068] 四.试验结果

[0069] 1.体征观察

[0070] 记录每次激发后30min内动物的鼻痒、喷嚏、清涕出现的时间、次数与轻重程度，并评分(评分标准如下：对每只动物以以下3个指标分别记分后以叠加法记总分，[1]鼻痒：轻度1分，轻擦鼻数次；重度2分，抓挠鼻、面不止，到处摩擦。[2]喷嚏：1～3个为1分，，4～10个为2分，11个以上为3分。[3]清涕：流到鼻前孔为1分，超过鼻前孔为2分，涕流满面3分。当症状平均积分超过5分为造模成功。对各组动物每天的记分取均值记录如下)

[0071] 模型组与正常对照组相比有极显著性差异(p<0.01)，阳性组，重组人白介素鼻喷剂低、中、高剂量组与模型组相比均有极显著性差异(p<0.01)。结果见表1。

[0072] 表1.rhIL-2鼻喷剂对大鼠过敏性鼻炎体征的影响

[0073]

[0074] 与正常对照组比较：**p<0.01

[0075] 与模型组比较：##p<0.01

[0076] 2.鼻分泌量

[0077] 模型组与正常对照组相比有极显著性差异(p<0.01)，重组人白介素鼻喷剂中、高剂量与模型组相比均有显著性差异(p<0.05)。结果见表2。

[0078] 表2.rhIL-2鼻喷剂对各组大鼠鼻分泌量(mg)的影响

[0079]

[0080] 与正常对照组比较：**p<0.01

[0081] 与模型组比较：#p<0.05

[0082] 3.动物病理切片检查，参见图1—图7所示。

[0083] (1)正常对照组

[0084] 本组鼻粘膜均呈正常形态。粘膜上皮无变性坏死及脱落，未见炎细胞浸润；粘膜下层血管无扩张充血，无炎细胞浸润。

[0085] (2)模型组

[0086] 本组鼻粘膜均可出现中至重度炎症表现。粘膜上皮细胞变性、坏死明显，可见大量中性粒细胞浸润，粘膜下层血管扩张充血，组织水肿。

[0087] (3)阳性药组

[0088] 本组鼻粘膜总体病变程度比模型组减轻。出现轻至中度炎症表现。部分粘膜上皮细胞变性、坏死，可见中性粒细胞浸润，粘膜下层可见充血，组织水肿。

[0089] (4)低剂量组

[0090] 本组鼻粘膜出现轻至中度炎症表现，总体病变程度比模型组有所减轻。部分粘膜上皮细胞变性、坏死，可见中性粒细胞浸润，粘膜下层充血，组织水肿。

[0091] (5)剂量组

[0092] 本组鼻粘膜出现轻至中度炎症表现，总体病变程度亦比模型组减轻。部分粘膜上皮细胞变性、坏死，可见一定量中性粒细胞浸润，粘膜下层未见明显充血及组织水肿。

[0093] (6)高剂量组

[0094] 本组鼻粘膜出现轻至中度炎症表现。部分粘膜上皮细胞变性、坏死，可见中性粒细胞浸润，粘膜下层可见充血，组织水肿。

[0095] (7)阴性组

[0096] 本组鼻粘膜总体病变程度与模型组相当。

[0097] 2.数理统计

[0098] (1)t检验

[0099] 在病理学表征方面，分别以“中性粒细胞浸润”、“粘膜上皮变性、坏死”、“血管充血水肿”等3个指标，对各组进行积分，即以“-”计为0分，以“+”计为1分，以“++”计为2分，以“+++”计为3分，以“++++”计为4分。并进行t检验。

[0100] 表3.各组动物病理学指标的比较(x±s，n＝10)

[0101]

[0102] 与正常对照组比较：**p<0.05

[0103] 与模型组相比：#p<0.05

[0104] (1)模型组与正常对照组相比，在“中性粒细胞浸润”、粘膜上皮变性、坏死”、“血管充血水肿”等方面均有极显著性差异(p<0.01)。

[0105] (2)在“中性粒细胞浸润”方面，阳性组、重组人白介素-2鼻喷剂中剂量(100ku.-1kg-1)组与模型组之间均有显著性差异(p<0.05)。说明重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg 、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“中性粒细胞浸润”病变。

[0106] (3)在“粘膜上皮变性、坏死”方面，阳性组、重组人白介素-2鼻喷剂中(100ku.-1 -1kg )、低剂量(50ku.kg )组与模型组之间均有显著性差异(p<0.05)。说明重组人白介素-2-1 -1
鼻喷剂100ku.kg 、50ku.kg 、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“粘膜上皮变性、坏死”病变。

[0107] (4)在“血管充血、水肿”方面，、阳性组、重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg-1组与-1模型组之间均有显著性差异(p<0.05)。说明重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg 、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“血管充血、水肿”病变。

[0108] 五.结论

[0109] 经给药后，用药组大鼠鼻粘膜病变在形态学上与模型组相比均有不同程度的减-1轻，其中以中剂量组(100ku.kg )的病变减轻较为明显。

[0110] RhIL-2鼻喷剂可以明显缓解大鼠过敏性鼻炎的症状体征，明显改善其鼻部的病变。