见血封喉中的强心苷类化合物的抗肿瘤用途

摘要

本发明涉及医药技术领域，具体是具有通式(I)的强心苷类化合物在制备肿瘤治疗药物中的新用途，其中R＝2-O-甲基-β-D-海藻糖、6-去氧-β-D-古洛糖或6-去氧-2-O-甲基-β-D-阿洛糖。上述强心苷类化合物可利用多种常规分离手段从见血封喉中分离获得或者通过合成以及半合成手段获得。

权利要求

1.具有通式(I)的强心苷类化合物作为唯一的活性成分在制备治疗人体肝癌、胃癌、乳腺癌和慢性骨髓性白血病肿瘤疾病药物中的用途，通式(I)的强心苷类化合物的结构式：

(1)R＝2-O-甲基-β-D-海藻糖(2-O-methyl-β-D-fucose)：毒见血封 喉苷A(toxicarioside A)(2)R ＝ 6-去 氧 -β-D-古 洛 糖 (6-deoxy-β-D-gulose)：α- 见 血 封 喉 苷(α-antiarin)(3)R＝6-去氧-2-O-甲基-β-D-阿洛糖(6-deoxy-2-O-methyl-β-D-allose(javose))：见血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)其中，具有通式(I)的上述各强心苷类化合物单独与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型在制备上述肿瘤疾病药物中的应用。

说明书

见血封喉中的强心苷类化合物的抗肿瘤用途

技术领域：

[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体是一类强心苷化合物在制备肿瘤治疗药物中的新用途。背景技术：

[0002] 见血封喉[Antiaris toxicaria(Pers.)Lesch.]为桑科见血封喉属(Antiaris)植物。别名：加布、剪刀树、箭毒木。见血封喉属植物全世界约有4个种3个变种，分布于东南亚。我国仅产1种，即见血封喉，分布于海南、云南、广东和广西等地。据说是世界上木本植物中最毒的树种之一，生长于海拔300-1000m的山地常绿阔叶雨林和季雨林中。见血封喉鲜树汁乳白色，有剧毒，入药用于泄泻，催吐，强心，还可用作麻醉剂；种子也有毒，入药解热止泻，用于痢疾。

[0003] 见血封喉乳汁和种子的主要成分为强心苷类化合物。强心苷类化合物是治疗心力衰竭不可缺少的重要药物，临床上用以治疗心力衰竭及节律障碍等心脏疾病。对见血封喉中分离得到的强心苷的强心作用已有报道，但未见有抑制肿瘤细胞活性方面的报道。发明人对见血封喉中的强心苷类化合物进行了分离和抗肿瘤活性测试，发现了见血封喉中具有通式(I)的强心苷类化合物在抗肿瘤方面的新用途。发明内容：

[0004] 本发明的目的在于公开一类具有通式(I)的强心苷类化合物在制备肿瘤治疗药物中的新用途。

[0005] 具有通式(I)的强心苷类化合物可以利用包括吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析，减压柱层析等多种常规分离手段从见血封喉中获得，或者通过合成以及半合成手段获得。采用以单体化合物或者选择其中任意两个或者多个单体以任意比例进行组合的复方形式，使之与适宜的赋形剂相结合，按照常规方法制成各种剂型。用于制备治疗包括肺癌、肾癌、胃癌、鼻咽癌、膀胱癌、大肠癌、骨肿瘤、乳腺癌、子宫癌、口腔癌、胆癌、胆道癌、胆管癌、胰腺癌、卵巢癌、急性白血病、恶性淋巴瘤、脑瘤等多种癌症疾病的药物。

[0006] 其中通式(I)中的强心苷类化合物的结构如下：

[0007]

[0008] (1)R＝2-O-甲基-β-D-海藻糖(2-O-methyl-β-D-fucose)：毒见血封喉苷A(toxicarioside A)

[0009] (2)R＝6-去 氧-β-D-古 洛糖(6-deoxy-β-D-gulose)：α-见 血封 喉 苷(α-antiarin)

[0010] (3)R＝6-去氧-2-O-甲基-β-D-阿洛糖(6-deoxy-2-O-methyl-β-D-allose (javose))：见血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)

[0011] 本发明对通式(I)中的化合物进行了抗肿瘤活性测试，结果表明该类化合物对多种肿瘤细胞株具有较强的抑制作用。

具体实施方式

[0012] 下面结合具体实例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

[0013] 实施例1：强心苷类化合物毒见血封喉苷A(toxicarioside A)，α-见血封喉苷(α-antiarin)，见血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)的提取分离：

[0014] 见血封喉乳汁(4L)用95％的乙醇室温浸提3次，减压回收乙醇至无醇味。将乙醇提取物分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚部分(6.87g)，然后用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部分(8.69g)，剩下的水液经过滤后上大孔吸附树脂(D-101)柱层析，先后用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，经浓缩得到甲醇部分(228.4g)。得到的乙酸乙酯部分和甲醇部分分别过减压柱分成若干馏分，再经硅胶柱、反相硅胶柱和葡聚糖凝胶柱反复柱层析得到化合物毒见血封喉苷A(14.2g)，α-见血封喉苷(7.96g)和见血封喉爪哇糖苷(8.46g)。

[0015] 实施例2：强心苷类化合物毒见血封喉苷A(toxicarioside A)，α-见血封喉苷(α-antiarin)，见血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)的结构鉴定：

[0016] 利用光谱技术，包括紫外、红外、核磁共振及高分辨质谱分析，鉴定了实施例1中的强心苷类化合物毒见血封喉苷，α-见血封喉苷，见血封喉爪哇糖苷的结构。首次运用13 1
2D-NMR技术对某些化合物，如见血封喉爪哇糖苷等糖上的 C-NMR，H-NMR数据进行了归属。(见附表1、2)

[0017] 实施例3：强心苷类化合物毒见血封喉苷A(toxicarioside A)，α-见血封喉苷(α-antiarin)，见血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)的体外抑瘤实验：

[0018] 采用MTT法测试了强心苷类化合物毒见血封喉苷A，α-见血封喉苷，见血封喉爪哇糖苷对人体的肝癌细胞SMMC-7721、胃癌细胞SGC-7901、乳腺癌细胞MCF-7、慢性骨髓性白血病细胞K562的体外抑瘤活性(结果见附表3)。活性测试方法如下：实验设阴性对照组(水)、DMSO溶剂对照组、阳性对照组(丝裂霉素C)和8个不同浓度(0.8，1.6，3.2，6.3，12.5，25，50，100)的待测样品，每个浓度设2个平行。收集对数生长期细胞，血球计数板计数，按每孔4500个癌细胞量接种于96孔平底细胞培养板中，置于5％CO2、湿度90％以上、
37℃温箱中培养。24h后取出加入一定量的待测样品，继续培养3d后取出置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况，接着每孔加入5mg/mL的MTT溶液(溶于平衡盐溶液PBS)50μL，37℃反应4h后，将细胞培养液吸出，每孔加入100μL DMSO将Formazane充分溶解，将细胞培养板置于MK3酶标仪上，用570nm波长测各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率。

[0019]

[0020] 以样品浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，作图并求出抑制率为50％时样品的浓度(IC50)，样品活性结果即以半数抑制浓度(IC50)表示。

[0021] 实施例4：强心苷类化合物毒见血封喉苷A(toxicarioside A)10g与微晶纤维素80g及硬脂酸镁10g混合，混合物用单冲压片机打成直径5mm，重量200mg的片剂。本片剂中每片含毒见血封喉苷A 20mg。结合病症，每次1-2片，每日服用2-3次。

[0022] 实施例5：强心苷类化合物α-见血封喉苷(α-antiarin)与见血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)各40g与乳糖110g及硬脂酸镁10g混合，以每500mg填充胶囊。本胶囊剂中，每个胶囊含α-见血封喉苷和见血封喉爪哇糖苷各100mg。结合病症，每次1-2个，每日服用3-4次。

[0023] 附表1、实施例2中的毒见血封喉苷A，α-见血封喉苷，见血封喉爪哇糖苷的理25
化常数毒见血封喉苷A：白色针状结晶，[α]D +0.24(c 0.23，MeOH)，UV(MeOH)λmax216，-1 -1
296nm ；IR(KBr)3401，2943，2890，1734，1638，1066cm ；HRMS(CI，ammonia，140eV)m/+
z([M+1])581.2953 calc′d for C30H45O11 581.2949.

[0024] α-见血封喉苷：白色固体，[α]D25-4.0(MeOH)，Mp 238-240°，HRMS(CI，ammonia，+140eV)m/z([M+1])566.644calc′d for C30H44O11 566.273.

[0025] 见血封喉爪哇糖苷：无色胶状物质，[α]D25+5.4(c，0.9in 80％MeOH.)，Mp +206-212°，HRMS(CI，ammonia，140eV)m/z([M+1])580.671calc′d for C30H44O11 580.288.[0026] 附表2、实施例2中的毒见血封喉苷A，α-见血封喉苷，见血封喉爪哇糖苷
13
的 C-NMR数据

[0027]

[0028] 附表3、实施例1-3中的毒见血封喉苷A，α-见血封喉苷，见血封喉爪哇糖苷体外抑瘤结果