一种新型抗癌复方药物的配伍方法

摘要

本发明提供了一种新型复方抗癌药物的配伍方法。本发明将乳香挥发油与紫草素通过一定的比例配伍，研究其对抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用，发现配伍后的药物对肝癌SMMC-7721细胞株增殖有很强的杀伤作用可达90％左右。

权利要求

2

1.一种新型抗癌复方药物，其由乳香SFE-CO 萃取物和紫草素组成，两种组分的重量配2 2

比是乳香SFE-CO 萃取物∶紫草素＝0.7mg∶10.0μg，其中所述将乳香SFE-CO 萃取物是2

在超临界CO 萃取实验仪以压力25MPa，温度55℃，萃取时间6h的条件萃取得到的。

说明书

一种新型抗癌复方药物的配伍方法

技术领域：

[0001] 本发明属于中药新药研发的技术领域，确切地说是涉及一种新型抗癌药物的研究。技术背景：

[0002] 目前肝癌的治疗仍以手术治疗为主，但手术仅适用于某些局部性肝癌早期和中期的治疗；而放疗和化疗常引起骨髓抑制、免疫低下等毒副反应，值得注意的是，化疗药物的耐药性已成为目前临床肿瘤治疗中的难题之一。因此，从天然药物中寻找既能杀伤肿瘤细胞，毒副作用又较少的活性药物分子或者有效部位，已成为临床医学、药学领域关注的热点。

[0003] 中药乳香为橄榄科植物卡氏乳香(BoswelliacarteriiBirdwood)的胶状树脂，有活血行气、通经止痛、消肿生肌等功效。主治心腹疼痛、风湿痹痛、经闭痛经、跌打淤痛等。文献研究表明，乳香挥发油具有较强的抗白血病活性。

[0004] 细胞周期有若干个调节点，其中以G1/S期转换最为重要。肿瘤细胞能顺利地通过这2个关卡。因此，肿瘤细胞的特点是细胞周期运行失控，细胞群体主要处于DNA合成活跃的S期；而分化细胞群体主要处于DNA合成静止的G0/G1期。本实验结果表明，0·07mg·mL-1乳香挥发油作用24h，能明显抑制SMMC-7721细胞增殖；作用48h、72h后，均能检测到细胞凋亡，且阻止细胞由G1期向S期转变，出现G0/G1期阻滞，DNA合成和分裂速度逐渐减慢，从而抑制细胞增殖，最终诱导细胞凋亡。作用24h时，未检测到凋亡，可能只是损伤细胞DNA。延长作用时间后，则诱发了凋亡，核酸内切酶活化，双链DNA断裂成
180-200bp片段。Bcl-2是主要的抗凋亡基因，它可以抑制多种途径的凋亡，Bcl-2蛋白主要分布于线粒体膜内外侧，核膜、内质网膜也有分布。Bax是促凋亡基因和bcl-2都属于bcl-2基因家族成员，通过编码相应功能蛋白起作用，Bax蛋白主要存在于胞质中。Bcl-2家族蛋白质的活性形式一般是二聚体，Bax不仅能和Bcl-2形成异源二聚体抑制凋亡，而且其自身还能形成同源二聚体诱导凋亡。有研究表明，与Bax分离的Bcl-2失去了抗凋亡能力，说明Bcl-2与Bax的结合是Bcl-2发挥作用的前提。而当Bax在细胞内超表达，并形成同源二聚体时，细胞对死亡信号的反应增强。所以Bcl-2与Bax的比例，即Bax-Bcl-2异源二聚体与Bax-Bax同源二聚体的比例，是决定细胞接受致病信号刺激后成活与否的关键因素，较绝对量对于细胞的影响更为重要。作者的实验证明，0·07mg·mL-1乳香挥发油诱导人肝癌细胞株SMMC-7721发生凋亡时，促凋亡基因bax值升高，抑凋亡基因bcl-2值变化不明显，bax/Bcl-2比值升高。bcl-2与bax是细胞凋亡与否的上游调控因子，因此我们推测，bcl-2与bax的表达变化是乳香挥发油诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡，调控机制的一部分。

[0005] 现代药理研究表明，乳香提取物对急性非淋巴细胞白血病细胞有诱导分化作用，能诱导急性非淋巴细胞白血病细胞凋亡，能降低HL-60细胞端粒酶活性。综上所述，乳香挥发油能够抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡。乳香挥发油作为一种抗肿瘤的天然药物，有效果明显、毒副作用小的特点，作者正在对它的化学成分、抗肿瘤作用及其机制做深入的研究。

[0006] 紫草为药典收戴临床常用传统中草药。它最初记载于《神农本草经》，属于紫草科多年生草本植物，根用于药，其中主要含有萘醌类色素、多糖两大类有效成分。具有抗炎、抗肿瘤、保肝和免疫调节、避孕、杀菌抗病毒等作用。抗炎即消炎、收敛和解毒，其水提物、醇提物、醚提物都有此作用。新疆紫草素是从新疆紫草根中提取的萘醌类化合物。新疆紫草含β，β-二甲基丙烯紫草素、紫草素、乙酰紫草素、异丁酰紫草素、异戊紫草素等，据报道，紫草根对绒毛膜上皮癌、小鼠腹水型肉瘤S180及恶性葡萄胎有一定疗效。路桂荣等的研究证明紫草素对人胃癌细胞(BGC823)和人食道癌细胞(Ega109)具有明显的抑制作用。但紫草素对肝癌细胞的抑制作用的研究还鲜见报道。我们的实验中，可以看出新疆紫草素三个剂量10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml均能不同程度抑制人肝癌细胞系增殖。对SMMC-7721肿瘤细胞的杀伤作用中新疆紫草素组的杀伤活性分别为47.2％、31.9％、24.8％。新疆紫草素组对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为66.32％、53.30％、50.02％。新疆紫草素10mg/kg、5mg/kg、2.5mg/kg体重对小鼠肝癌具有明显抑制作用，不同浓度的新疆紫草素均提高H22荷瘤小鼠NK细胞活性及淋巴细胞转化率，并且与对照组相比10mg/kg、5mg/kg、2.5mg/kg体重组，提高NK细胞活性具有统计学意义。而10mg/kg、5mg/kg体重组提高淋巴细胞转化率具有统计学意义。由此我们认为，新疆紫草素具有抗肿瘤效用，是一种调控机体免疫功能的中药。
发明内容：

[0007] 本发明的一个目的基于上述开发的研究背景，独创将两种药物通过一定的浓度配伍，以便开发出新型的抗癌复方制剂。

[0008] 具体是实施方式：

[0009] 方法1：

[0010] 将乳香粉碎，超临界CO2萃取实验仪以压力25MPa，温度55℃，萃取时间6h的条件萃取。得到乳香SFE-CO2萃取物。

[0011] 药物：SFE-CO2萃取物：紫草素＝0.7mg：10.0μg/ml(溶媒DMSO浓度0·1％)。

[0012] 给药方法：MTT法取对数生长期细胞，以台盼蓝染色活细胞数大于95％。0.25％胰蛋白酶消化人肝癌SMMC-7721细胞，用含10％胎牛血清的RP-MI1640培养液配制成单细胞悬液，以每毫升5×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积100μl。将培养板置于CO2孵箱中，24小时后加入药物，每孔100μl，在37℃、5％CO2饱和湿度下培养48小时。并设空白对照(不加药物)和溶媒(DM-SO)对照，置于37℃含5％CO2孵箱中培养24h后，每孔加MTT(5mg·mL-1)20uL，作用4h后弃上清。各孔加入150uL DMSO，振荡10min，使甲结晶物充分溶解。在酶标仪570nm波长处读取吸光度A值。纪录结果。

[0013] 方法2：

[0014] 1、一种新型抗癌复方药物的配伍，其特征在于配伍方法包括以下步骤：

[0015] (1)实验仪器：超临界CO2萃取实验仪(山东大学，山东省医药工业研究所共同研制开发)；FW100高速万能粉碎机。

[0016] (2)药材及试剂：乳香，购于山东科信医药科技有限公司。紫草素由长春中医学院提供，乙醇溶解，过滤灭菌。细胞株人肝癌细胞系SMMC-7721、小鼠肝癌细胞系H22均由吉林省肿瘤防治研究所提供。α-蒎烯对照品(中国药品生物制品检定所)；乙酸正辛酯(中国