一种免疫增强剂β-葡聚糖的制备方法

摘要

本发明涉及一种碱不溶性β-葡聚糖的制备方法，其特征是将由新鲜酵母菌体或干酵母粉得到的酵母细胞壁，或者直接采用酵母提取后废弃的酵母细胞壁，用0.70～0.80mol/L NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持15～20分钟，冷却，3000～4500r/min离心得沉淀，沉淀用0.70～0.80mol/L NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持15～20分钟，降温至65～80℃，恒温保持12～18小时，冷却后用HCl调pH至4.0～5.0，3000～4500r/min离心得到的沉淀用蒸馏水均匀悬浮后，煮沸8～15分钟，3000～4500r/min离心得到沉淀，重复处理2～3次，除去水分，得到产物。本发明工艺简单，设备投资少，产品纯度高，还提高了废弃物酵母渣的利用价值，因而具有良好的应用前景。

权利要求

1.一种碱不溶性β-葡聚糖的制备方法，其特征包括以下的步骤：

(1)将酵母细胞壁用0.70～0.80mol/L NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持15～20min，冷却，3000～4500r/min离心去上清液得到沉淀，所述的酵母细胞壁是直接采用酵母提取内含物后的酵母渣；

(2)将步骤(1)得到的沉淀用0.70～0.80mol/L NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持15～20min，再降温至65～80℃，恒温保持12～18h，冷却后用HCl调pH至4.0～5.0，3000～4500r/min离心去上清液得到沉淀；

(3)将步骤(2)得到的沉淀用蒸馏水均匀悬浮后，煮沸8～15min，3000～4500r/min离心去上清液得到沉淀，此过程重复2～3次，除去离心获得的沉淀中的水份，得到产物。

2.根据权利要求1的一种碱不溶性β-葡聚糖的制备方法，其特征是步骤(3)中所述的沉淀采用真空干燥、冷冻干燥或用无水乙醇、无水乙醚分次脱水然后风干除去水分。

3.根据权利要求2的一种碱不溶性β-葡聚糖的制备方法，其特征是步骤(3)中采用冷冻干燥除去水分。

说明书

技术领域

本发明涉及一种葡聚糖的制备方法，具体来说是涉及一种碱不溶性β-葡聚糖的制备方法。

背景技术

葡聚糖存在于酵母菌等真菌细胞壁中，是D-葡萄糖的聚合物。碱不溶性β-葡聚糖是一种良好的生物免疫调节剂，被广泛应用于食品、医药等行业。目前国内外制备碱不溶性β-葡聚糖的方法主要是酶法、Sevage法、酸法或酸法与有机溶剂相结合的方法，这些方法各有利弊：酶法工艺复杂且提取的葡聚糖纯度不高；酸法会使设备受到腐蚀，而且产物中还含有甘露聚糖，葡聚糖的纯度也不高；Sevage法只适用于提取水溶性葡聚糖。

发明内容

本发明的目的在于开发出一种能得到高纯度的碱不溶性β-葡聚糖的方法。
我们以酵母细胞壁为原料，用稀碱提取得到的碱不溶性β-葡聚糖不含有甘露聚糖，因此纯度很高，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种碱不溶性β-葡聚糖的制备方法，其特征包括以下的步骤：
(1)将酵母细胞壁用0.70～0.80mol/L NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持15～20min，冷却，3000～4500r/min离心去上清液得到沉淀；
(2)将步骤(1)得到的沉淀用0.70～0.80m0l/L NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持15～20min，再降温至65～80℃，恒温保持12～18h，冷却后用HCl调pH至4.0～5.0，3000～4500r/min离心去上清液得到沉淀；
(3)将步骤(2)得到的沉淀用蒸馏水均匀悬浮后，煮沸8～15min，3000～4500r/min离心去上清液得到沉淀，此过程重复2～3次，除去离心获得的沉淀中的水份，得到产物。
步骤(1)所述的酵母细胞壁可以通过将面包酵母(Baking yeast)、啤酒酵母(Brewingyeast)等新鲜酵母菌体或干酵母粉重新悬浮，自溶或加酶处理后使细胞破裂除去内含物得到，或者直接采用酵母提取内含物后废弃的酵母渣——酵母细胞壁，得到的酵母细胞壁还可以进一步用蒸馏水离心洗涤1～2次除去残留的细胞内含物等水溶性成分，获得较纯的酵母细胞壁。
步骤(3)所述的沉淀可以采用真空干燥、冷冻干燥或用无水乙醇、无水乙醚分次脱水然后风干等方法除去水分，最好采用冷冻干燥除去水分。
本发明原料来源广泛，工艺简单，设备投资少，产品纯度高，不含甘露聚糖，可避免酸法中酸对设备的腐蚀和对工人健康的损害，另外还可以提高废弃物酵母渣的利用价值，因而本发明具有良好的应用前景。

附图说明

图1：样品红外吸收图谱。
图2：标准β-(1，3)葡聚糖样品红外吸收图谱。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
将酵母提取内含物后的酵母渣30g，用蒸馏水1000mL均匀悬浮，4000r/min离心15分钟，去上清得沉淀，重复一次上述悬浮离心步骤得到纯酵母细胞壁。
将纯酵母细胞壁用1000mL浓度是0.75mol/L的NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持15min，冷却后4000r/min离心15min，去上清液，沉淀再用1000mL浓度0.75mol/L的NaOH溶液悬浮，加热煮沸保持15min，降温至70℃水浴中维持13h，冷却后用HCl调pH至4.6，然后4000r/min离心15min去上清液得沉淀。
将上一步得到的沉淀加300mL蒸馏水均匀悬浮，然后加热煮沸10min，冷却，4000r/min离心10min，去上清液，如此重复两次，得到的沉淀用300mL无水乙醇分两次脱水，再用300mL无水乙醚分两次脱水，所得物质38℃条件下风干，得到浅灰白色产物5.40g，委托广东省农业科学院兽医研究所进行红外图谱分析，结果表明其红外吸收图谱(见图1)与标准β-葡聚糖(见图2)相近，具有的特征峰证明其糖苷键为β-(1，3)构型，产品主要含有β-(1，3)葡聚糖，而无甘露聚糖吸收峰，表明不存在甘露聚糖。
实施例2
取鲜啤酒酵母菌体300g，用1L的0.5％木瓜酶溶液悬浮，60℃恒温水浴中维持水解12h，并在水解过程中间歇搅拌，结束后水解液冷却，4000r/min离心10min，去上清，沉淀用蒸馏水离心洗涤2次，得到纯酵母细胞壁。
将纯酵母细胞壁用1000mL浓度是0.70mol/L的NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持18min，冷却后3000r/min离心15min，去上清液，沉淀再用1000mL浓度为0.70mol/L的NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持18min，降温至65℃水浴中维持18h，冷却，用HCl调pH至4.0，然后3000r/min离心15min去上清液得沉淀。
将上一步得到的沉淀加300mL蒸馏水均匀悬浮，然后加热煮沸8min，冷却，3000r/min离心15min，去上清液，如此重复两次，得到的沉淀冷冻干燥得到浅灰白色产物5.8g，委托广东省农业科学院兽医研究所进行红外图谱分析，结果表明其红外吸收图谱与标准β-葡聚糖相近，具有的特征峰证明其糖苷键为β-(1，3)构型，产品主要含有β-(1，3)葡聚糖，而无甘露聚糖吸收峰，表明不存在甘露聚糖。
实施例3
取干面包酵母粉100g，用1mol/L的NaOH溶液1000ml均匀悬浮，90℃下搅拌中自溶反应3小时，反应液冷却后4000r/min离心15min。沉淀用1000mL浓度是0.80mol/L的NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持20min，冷却后4500r/min离心10min，去上清液，得到沉淀，沉淀1000mL浓度是0.80mol/L的NaOH溶液均匀悬浮，加热煮沸保持20min，降温至80℃水浴中维持12h，冷却，用HCl调pH至5.0，然后4500r/min离心15min去上清液得沉淀。
将上一步得到的沉淀加300mL蒸馏水均匀悬浮，然后加热煮沸15min，冷却，4500r/min离心10min，去上清液，如此重复两次，得到的沉淀用真空干燥得到浅灰白色产物5.88g，委托广东省农业科学院兽医研究所进行红外图谱分析，结果表明其红外吸收图谱与标准β-葡聚糖相近，具有的特征峰证明其糖苷键为β-(1，3)构型，产品主要含有β-(1，3)葡聚糖，而无甘露聚糖吸收峰，表明不存在甘露聚糖。