茋氧代酸酯或其盐在制备降血脂药物中的用途

摘要

本发明公开了芪氧代酸酯在制备降血脂药物中的用途，所述氧代酸酯为式(I)化合物：R1为H、CH2COO R4、C(CH3)2COO R4，R2为R1或葡萄糖基，R3为H、CH2COOR4、C(CH3)2COOR4，其中R4为C1-C6直链或支链烷基，优选C1-C4直链或支链烷基。R1和R3不同时为H。通过在体实验动物病理模型证实，式(I)化合物具有显著的降血脂作用，其降低血清甘油三酯(TG)水平的作用尤为显著；此外，对血清总胆固醇(TC)也具有显著的降低作用，能够有效抑制高血脂动物模型之动脉粥样硬化斑块的形成。

权利要求

1.芪氧代酸酯在制备降血脂药物中的用途，所述的芪氧代酸酯如式(I)所示，其中：R1为H、CH2COOR4、C(CH3)2COOR4，R2为R1或葡萄糖基，

R3为H、CH2COOR4、C(CH3)2COOR4，其中R4为C1-C6直链或支链烷基，并且R1和R3不同时为H。

2.根据权利要求1所述的用途，其式(I)化合物中，所述R4为C1-C4直链或支链烷基。

3.权利要求1所述的用途，所述降血脂为降低人或哺乳动物血清甘油三酯和/或总胆固醇水平。

4.权利要求1所述的用途，所述降血脂药用于预防和/或治疗高脂血症。

5.权利要求1所述的用途，所述降血脂药用于预防和/或治疗动脉粥样硬化。

6.权利要求1所述的用途，所述降血脂药用于预防和/或治疗动脉粥样硬化相关的高血压、冠心病、脑中风。

7.含有权利要求1所述的式(I)化合物的药物组合物在制备降血脂药物中的用途，所述药物组合物包括有效治疗和/或预防剂量的式(I)化合物和药学上可接受的辅料。

8.权利要求7所述的用途，其所述药物组合物单位制剂中含有0.25μM～1mM的式(I)化合物。

9.权利要求7所述的用途，所述药物组合物用于预防和/或治疗高脂血症。

说明书

茋氧代酸酯或其盐在制备降血脂药物中的用途

技术领域

[0001] 本发明涉及茋氧代酸酯类化合物在制备药物中的用途，尤其涉及该化合物在制备降血脂药物中的用途。

背景技术

[0002] 中国专利(专利号200310112539.8，公开号CN1546455A)公开了一类新型的白藜芦醇衍生物及其制备方法，该专利所述新型白藜芦醇衍生物包括白藜芦醇和/或虎杖苷衍生的茋氧代酸以及茋氧代酸酯系列化合物，并且公开了此类化合物的抗血栓活性。本发明进一步发现，其所述茋氧代酸酯化合物具有良好的降血脂作用，证明其降血脂活性与其PPARα受体激活作用机制相关，由此发现此类化合物在治疗和/或预防高脂血症、动脉粥样硬化及其相关的高血压、冠心病、脑中风等疾病中具有重要的潜在应用价值。

[0003] 鉴于中国专利CN1546455A所述新型茋氧代酸酯类化合物是本发明所述用途的基础，因此该专利公开全文作为参考文献结合于本说明书中。

[0004] 高脂血症是一种常见的心血管疾病，主要是由于血脂代谢紊乱引起的，在临床上常表现为高胆固醇血症(TC升高)，高甘油三酯血症(TG升高)或二者兼有。血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)和肝脏TC、TG水平是反映机体脂质代谢的常用指标，其与动脉硬化以及心血管疾病的发生发展有紧密的联系。由血脂异常，如高低密度脂蛋白胆固醇血症、高甘油三脂血症、尤其低高密度脂蛋白胆固醇血症引起的血管疾病，如外周血管疾病、冠心病、中风疾病、血管再狭窄等血管疾病，成为严重威胁人类健康的危险因素。

[0005] 因为高脂血症主要表现为高胆固醇血症(TC升高)，高甘油三酯血症(TG升高)或二者兼有，故，降低血清总胆固醇或甘油三酯是治疗和预防高脂血症的重要方法。

[0006] 动脉粥样硬化(atherosclorosis，AS)的机制研究一直是心血管疾病研究领域中的热点。脂质代谢异常是AS独立的危险因素。循证医学的结果显示：高甘油三酯(TG)，高低密度脂蛋白(LDL)与临床心血管事件发生率密切相关。国外大病例数的流行病学调查.如“Stockholm”前瞻性研究证实血TG增高也是男、女患者发生心肌梗死的独立危险因素。“PROCAM”和“Helsink”心脏研究结果表明，高TG、低HDL-C、高LDL-C对冠心病事件发生的危险性增高2倍多。

[0007] PPAR即过氧化 物酶体增殖 物激活型受 体(peroxisome proliferator activatedreceptors，PPARs)，是一类由配体激活的核转录因子，与高血脂症有着密切的关系。

[0008] PPARα是PPARs的一个亚型。PPARα与AS的发生发展有密切关系，血脂代谢中，富含TG的脂蛋白参与形成AS。现已发现PPARα在巨噬细胞、泡沫细胞中的表达能减少炎症因子的产生，在血管内皮有抗炎作用。PPARα配体贝特类在临床观察上已明确能延缓AS损伤的进程。对PPARα合成配体，降脂药贝特类进行的二项国际多中心临床试验VA-HIT试验显示PPARα激活剂能显著降低CHD危险；BECAIT也显示它延缓了冠状动脉动脉粥样(atherosclorosis，AS)硬化斑块的进展，降低青年男性心肌梗死存活者心脏病事件的发生，显示了该制剂能形成不易发生AS的血脂谱。

[0009] PPARα是脂质、脂肪酸、脂蛋白代谢的调节因子，参与脂质代谢的许多过程：(1)增加人肝脏脂蛋白酯酶的活性；(2)通过上调脂肪酸转运蛋白和脂肪酸移位酶，增加乙酰辅酶A合成酶的表达，刺激脂肪酸的摄入和向脂酰辅酶A的转化，通过诱导肌肉和肝脏特异性肉毒碱棕榈酰转移酶I的表达而调控脂肪酸向线粒体的转运；(3)调节线粒体内脂肪酸转运酶、脂肪酸催化酶的表达，促进脂肪酸β-氧化过程而达到降低脂肪酸和TG合成的作用；(4)参与许多载脂蛋白的调节；(5)PPARα激活物诱导肝细胞Apo-AI、AII基因表达，升高血液HDL水平；(6)增加Apo-AE和LDL基因表达，加速血液富含TG的脂蛋白如乳糜微粒及VLDL分解代谢，降低血TG水平。众所周知的降血脂药物贝特类(如氯贝特，苯扎贝特，环丙贝特等)即是PPARα的合成配体，临床上广泛用于治疗高甘油三酯血症和混合型高酯血症。

[0010] PPARα受体激活剂可通过PPARα激活作用降低血清脂质水平，进而产生预防和/或治疗动脉粥样硬化的作用。由于高血脂是动脉粥样硬化肇始危险因子之一，高血脂、动脉粥样硬化可引发多种心血管疾病，故PPARα受体激活剂又可进一步用于预防和/或治疗动脉粥硬化相关性疾病，例如高脂血症、高血压、脑中风等临床病症。

发明内容

[0011] 本发明的一个目的在于在提供茋氧代酸酯在制备降血脂药物中的用途，所述氧代酸酯为式(I)化合物：

[0012]

[0013] R1为H、CH2COO R4、C(CH3)2COO R4，

[0014] R2为R1或葡萄糖基，

[0015] R3为H、CH2COO R4、C(CH3)2COO R4，其中R4为C1-C6直链或支链烷基，优选C1-C4直链或支链烷基。

[0016] R1和R3不同时为H。

[0017] 中国专利CN1546455A公开了式(I)化合物在抗血栓形成方面生理学活性和潜在应用价值。本发明人通过试验研究现已惊奇发现，上述化合物具有PPARα激活作用。

[0018] 高血脂是动脉粥样硬化的最重要的肇始危险因子之一。如本发明背景所述，PPARα是脂质、脂肪酸、脂蛋白代谢的调节因子，PPARα受体激活剂可通过PPARα激活作用降低血清脂质水平，对血清甘油三酯水平的调节作用尤为重要，因此，PPARα受体激活剂可以通过血脂调节机制产生预防和/或治疗动脉粥样硬化的作用。

[0019] 本发明进一步通过在体实验动物病理模型证实，式(I)化合物具有显著的降血脂作用，其降低血清甘油三酯(TG)水平的作用尤为显著；此外，式(I)化合物对血清总胆固醇(TC)也具有显著的降低作用，能够有效抑制高血脂动物模型之动脉粥样硬化斑块的形成。

[0020] 高血脂、动脉粥样硬化可引发多种心血管疾病，例如高脂血症、高血压、脑中风等临床病症。显然，PPARα受体激活剂在预防和/或治疗这些动脉粥硬化相关性疾病中具有重要的潜在应用价值。

[0021] 本发明中，优选的式(I)化合物包括：

[0022]

[0023]

[0024] 本发明人对式(I)化合物进行的PPARα受体激动活性检测以及高血脂实验动物降血脂量效关系实验结果提示，以成人计，本发明所述式(I)化合物或其盐的降血脂作用的合适的有效给药剂量可以是约每日1μM～10mM；其中优选的有效给药剂量可以是约每日5μM～1mM；更优选的有效给药剂量可以是约每日50μM～500μM。

[0025] 本发明进一步涉及含式(I)化合物的药用组合物的新用途，即，所述药用组合物可用作治疗和预防高血脂、动脉粥样硬化、高血压、脑中风以及脂肪肝等疾病的药物。

[0026] 由此，本发明的另一个目的在于在提供含有式(I)茋氧代酸酯的药物组合物在制备降血脂药物中的用途，所述降血脂药物可用于治疗和/或预防高脂血症、动脉粥样硬化、高血压、脑中风以及脂肪肝等临床病症。

[0027] 本发明所述药物组合物可含有有效治疗和/或预防剂量的式(I)化合物和药学上可接受的辅料，所述药学上可接受的辅料包括但不限于药用载体、矫味剂、助流剂、润滑剂等本领域内技术人员熟知的药用辅料。优选地，该药物组合物单位制剂中含有约0.25μM～1mM的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。该药物组合物可以经口给药，也可以通过胃肠外途径给药，其制剂剂型可以是口服片剂、胶囊剂、软胶囊剂、口服溶液和或混悬液等，也可以是胃肠外给药的注射用溶液、混悬液等。

[0028] 显然，本发明所述药物组合物的用途包括显著降低血清总胆固醇和/或甘油三酯水平，尤其是显著降低血清甘油三酯水平，临床上应用于治疗和/或预防高甘油三酯血症和/或高胆固醇血脂症，优选用于治疗和/或预防高甘油三酯血症。

[0029] 本发明所述式(I)化合物具有PPARα激活作用，已知PPARα受体激活剂可通过PPARα激活作用降低血清脂质水平，进而产生预防和/或治疗动脉粥样硬化的作用，因此本发明所述药物组合物可用于预防和/或治疗动脉粥硬化相关性疾病，例如高脂血症、高血压、脑中风、脂肪肝、代谢综合症等。

[0030] 显然，由于PPARα受体激活是本发明所述式(I)化合物的主要药效机制，对于混合型高脂血症以及其它特定的遗传性高脂血症，式(I)化合物与其它降血脂药物如他汀类、烟酸类、树脂类等药物联用可能会产生更好的治疗效应，因此式(I)化合物还可以与其它降血脂联合用药来治疗高血脂以及与高血脂、动脉粥样硬化相关的心血管疾病。联合用药可以分别顺次或同时给药，也可以复方制剂形式给药，用药时可根据特定的疾病情况调整给药剂量。本发明的范围包括式(I)化合物在制备联用(I)化合物和其它降血脂药物的复方药物中的用途。

具体实施方式

[0031] 实施例1 对PPARα受体的激活作用

[0032] PPARs是核受体超家族成员，参与脂肪细胞分化、脂代谢调节等重要的生理过程。PPARα主要存在于与脂肪酸分解代谢密切相关的组织中，包括肝脏、肾脏、心脏以及肌肉中。目前认为，PPARα在肝脏脂代谢中发挥重要作用。

[0033] 1.材料与药品

[0034] 化合物1：白藜芦醇-3，4’，5-三-O-乙酸乙酯

[0035] 化合物2：虎杖苷-4’，5-二-O-乙酸乙酯

[0036] 化合物3：白藜芦醇-3，4’，5-三-O-二甲乙酸乙酯

[0037] 化合物4：虎杖苷-4’，5-二-O-二甲乙酸乙酯

[0038] 化合物5：白藜芦醇-3，4’-二-O-二甲乙酸乙酯

[0039] 化合物6：虎杖苷-4’-二甲乙酸乙酯

[0040] 化合物7：白藜芦醇-3，4’，5-三-O-乙酸异丁酯

[0041] 化合物8：虎杖苷-4’-二甲乙酸异丁酯

[0042] 上述化合物由海王药业技术中心化学合成室根据CN1546455A专利公开的方法制备，化合物纯度均不低于95％。

[0043] 2.实验方法

[0044] 原理：荧光素酶报告基因系统分析化合物激活RXR/PPARα异二聚体活性的激活作用。该分析方法构建了一个报告基因质粒，将核受体DNA结合序列(NRE)插到荧光素酶基因的上游，使荧光素酶基因的表达受到核受体的控制。该报告基因质粒与核受体被同时转入培养细胞，将受试化合物以不同浓度加入培养基，检测发光强度计算受试化合物对核受体的激活强度(当核受体被激活时，激活的受体可诱导荧光素酶基因表达，而荧光素酶的产量可通过其发光底物检测)。实验结果以转染内参质粒进行矫正。

[0045] 检测：本实验中观察样品在不同浓度条件下对PPARα受体的激活情况。

[0046] 分析：计算半数有效浓度EC50(产生50％最大激活效应的受试物浓度)[0047] 3.实验结果

[0048] 实验结果表明，化合物1-8对PPARα受体均有显著激活作用，其EC50如表1所示：

[0049] 表1茋氧代酸酯(化合物1-8)体外激活PPARα受体的EC50值

[0050]受试化合物 EC50
化合物1 18.3μg/ml
化合物2 48.6μg/ml
化合物3 2.4μg/ml
化合物4 23.1μg/ml
化合物5 25.4μg/ml
化合物6 104.4μg/ml
化合物7 35.2μg/ml
化合物8 95.3μg/ml

[0051] 实施例2 小鼠降脂试验

[0052] 1.材料与药品

[0053] 化合物1(白藜芦醇-3，4’，5-三-O-乙酸乙酯)：白色粉末状，含量95.4％，由深圳海王药业有限公司技术中心化学合成室合成。

[0054] 化合物4(虎杖苷-4’，5-二-O-二甲乙酸乙酯)：白色粉末状，含量97.2％，由深圳海王药业有限公司技术中心化学合成室合成。

[0055] 洛伐他汀(阳性对照药)：白色粉末，市售原料药。

[0056] 2.方法

[0057] 昆明小鼠，雌雄各半，随机分组：(1)正常对照组；(2)模型对照组；(3)～(6)化合物1之2、6、18、54mg/kg剂量给药组；(7)～(10)化合物4之2、6、18、54mg/kg剂量给药组；(11)洛伐他汀阳性对照组。

[0058] 除正常对照组进行基础饲料喂饲外，其它各组动物均以高脂饮食造模：将重量比为10％胆固醇、20％猪油、2％胆盐、1％丙基硫氧嘧啶、10％蔗糖等高脂材料用15％吐温-80、5％丙二醇配成乳剂。造模小鼠上午灌服高脂乳剂0.5ml/只，下午给予各受试药0.2ml/10g。空白和模型组给予溶剂对照。连续造模、给药14天后，停止造模，继续给药7天，停药后次日取血，测血清TC(总甘油三酯)、TG(总胆固醇)。

[0059] 3.数据及统计学处理

[0060] 实验数据均以 (均值±标准差)表示。用t检验比较组间差异的显著性。

[0061] 4.试验结果

[0062] 表2结果表明，小鼠造模后，血清TC、TG显著升高。阳性对照洛伐他丁可显著降低高脂模型动物的TG，同时对TC也呈降低作用趋势。

[0063] 化合物1各给药组显示出良好的降血脂作用，降TC的作用显著，对显著升高的血清TG也呈现出良好的降低作用，，试验剂量下给药组血清TC水平与模型组比较均有显著的统计学差异。化合物4同样显示出良好的降血脂活性。表2化合物1、4对高脂模型小鼠血清总胆固醇的影响( )

[0064]率
低 - - ％9 ％9 ％9 ％3 ％0 ％7 ％0 ％0 ％0
降 - - 1 3 4 5 2 3 4 5 7
* 3 * * * * * * *
)L/ 93. 1.5 43. 80. 77. 13. 21. 65. 62. 29. 49.
lo 0 ± 3 3 2 2 4 3 3 2 1
mm( ±43 80. ±54 ±86 ±48 ±54 ±23 ±88 ±65 ±37 ±29
CT .2 11 .9 .7 .6 .6 .9 .7 .7 .6 .4

低降 率 -- -- ％05 ％16 ％87 ％28 ％84 ％65 ％27 ％67 ％02
* * * * * * * *
)L/ 13. 59. 86. 25. 84. 13. 45. 37. 34. 44. 55.
lo 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1
mm( ±20 ±68 ±39 ±25 ±69 ±27 ±30 ±17 ±90 ±39 ±31
GT -- -- .1 .4 .2 .2 .1 .1 .3 .2 .2 .1 .4

)
物 只 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
动 数 ( 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

)
gk
量 /gm - - 8 4 8 4 0.0
剂 ( - - 2 6 1 5 2 6 1 5 1

组 组
照 照 1 4 汀
对 对 物 物 他
别 白 型 合 合 伐
组 空 模 化 化 洛

[0065] 与模型组比较*P＜0.05

[0066] 实施例3 鹌鹑降脂及抗动脉粥样硬化作用

[0067] 1.药物

[0068] 化合物1(白藜芦醇-3，4’，5-三-O-乙酸乙酯)：白色粉末状，含量95.4％，由深圳海王药业有限公司技术中心化学合成室合成。

[0069] 化合物4(虎杖苷-4’，5-二-O-二甲乙酸乙酯)：白色粉末状，含量97.2％，由深圳海王药业有限公司技术中心化学合成室合成。

[0070] 洛伐他汀(阳性对照药)：白色粉末，市售原料药。

[0071] 3.试验方法

[0072] 实验动物：鹌鹑，雄性，体重110±15g，各组动物分笼饲养。

[0073] 胆固醇颗粒及高脂饲料配方(重量百分比)：胆固醇∶猪油∶蛋黄粉∶丙基硫氧嘧啶∶基础饲料为0.12∶12∶12∶0.004∶76。基础饲料等均为市售原料。为了保证每只动物能准确摄入胆固醇，将胆固醇36g与丙基硫氧嘧啶1.2g加面粉和水做成面团，充分揉匀，均分做成300粒小丸，粒/只/天，即鹌鹑每天摄入胆固醇120mg，丙基硫氧嘧啶4mg。猪油及蛋黄粉按比例加入基础饲料中，12g/只/天。受试药分别按给药剂量、动物体重，每周给药总量称取，加入淀粉作赋型剂，制成药丸口服。连续造模(4周)及给药(4周)共八周。

[0074] 观察指标及检测时间：造模的同时给药，给药后八周从鹌鹑右翅前臂静脉处取血，测定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C含量。实验结束后，处死动物，剖取主动脉、头臂动脉，10％中性福尔马林固定。取固定后的主动脉、头臂动脉各横切两小段，自来水冲洗12h后常规脱水、包埋，HE染色，Verhooff氏法染弹力纤维，观察主动脉、头臂动脉血管壁及内膜的病变情况。观察指标包括：

[0075] (1)检测头臂动脉内膜厚度；

[0076] (2)内膜泡沫细胞分级计分：

[0077] 0级(0分)--内膜光滑完整；

[0078] 1级(1分)--内膜有散在泡沫细胞，多半仅位于膜下或内膜表面；

[0079] 2级(2分)--泡沫细胞增多，灶性或弥漫性分布整个内膜，可有少量浸润中层；

[0080] 3级(3分)--细胞外脂质聚集增加，有数量不等的细胞外脂质核出现，可有纤维和平滑肌细胞增生。

[0081] 6.数据及统计学分析

[0082] 实验数据均以 (均值±标准差)表示。用t检验比较组间差异的显著性。

[0083] 7.试验结果

[0084] (1)对高脂模型鹌鹑血清TC的影响

[0085] 表3-1所示结果表明，模型组与正常组比较，TG、LDL明显升高。

[0086] 阳性对照药洛伐他丁显著降低TC和LDL-C，但对TG仅有降低作用趋势。

[0087] 化合物1和化合物4各剂量组有显著降低鹌鹑高脂模型血清TC、LDL-C作用，其强度弱于洛伐他丁，而降TG作用做强于洛伐他丁，且其效应具有统计学上的显著性意义。

[0088] (2)对高脂模型鹌鹑头臂动脉内膜病变的影响

[0089] 表3-1所示结果表明，高脂模型鹌鹑可见头臂内膜增厚，内膜泡沫浸润显著，具有典型的动脉粥样硬化表征。

[0090] 试验剂量下的洛伐他丁和化合物1、化合物4均能显著抑制高脂模型鹌鹑的血管内膜增厚；减轻血管内膜下的泡沫细胞浸润，减轻动脉粥样硬化症状。

[0091] 表3-1.化合物1和和化合物4对高脂模型鹌鹑血清TC、TG的影响(n＝10)[0092]剂量
组别 TG TC HDL-C LDL-C
mg/kg
0.62±0.36* 3.78±0.95* 1.24±0.34 0.93±0.54*
正常对照 --
模型对照 -- 2.54±0.94 9.83±3.44 1.26±0.39 6.22±2.74
洛伐他汀 7.5 2.01±0.63 4.65±2.36* 1.20±0.28 2.14±0.79*
* * *
化合物1 20 0.74±0.43 5.63±2.72 1.25±0.32 3.45±1.65
5 1.22±0.51* 7.23±3.36* 1.33±0.57 3.89±2.11*
化合物4 20 1.08±0.48* 7.08±3.29* 1.37±0.49 2.97±1.39*
5 1.64±0.69* 8.60±3.64* 1.23±0.46 4.26±2.64*
*

[0093] 与模型对照组比较：P＜0.05

[0094] 表3-2.化合物1和化合物4对鹌鹑高血脂模型头臂动脉内膜病变的影响(n＝10)

[0095]剂量 内膜厚度 内膜泡沫细胞分级
组 别
mg/kg (μm)
0 1 2 3 P值
35.9±8.7*
正常对照 -- 10 0 0 0 *
75.7±20.3 1 4 3 2 --
模型对照 --
洛伐他汀 7.5 52.8±10.4* 7 2 1 0 *
化合物1 20 41.5±9.8* 7 3 0 0 *
5 49.9±10.2* 8 1 1 0 *
化合物4 20 50.4±11.6* 6 3 1 0 *
5 58.7±9.5* 5 3 1 1

[0096] 与模型对照组比较：*P＜0.05

[0097] 实施例4 化合物1(白藜芦醇-3，4’，5-三-O-乙酸乙酯)片剂制备[0098] 下列成分以常规方法混合并制备成每片含10mg化合物1的片剂1000片。

[0099] 化合物1 10g

[0100] 乳糖 120g

[0101] 淀粉 50g

[0102] 硬脂酸镁 0.5g

[0103] 羧甲基纤维素钙 35g

[0104] 合计 210.5g