丹参酚酸或其盐磷脂复合物及其制备方法

摘要

本发明涉及药物制剂及食品化妆品添加剂领域，提供丹参酚酸或其盐磷脂复合物及其制备方法。本发明采用丹参酚酸或其盐为活性成分，与磷脂制成生物膜通透性高的复合物。所制备的复合物，其理化性质改变，使丹参酚酸及其盐的亲脂性增加，并利用磷脂与细胞膜的高度亲和性，促进丹参酚酸及其盐分子与细胞膜结合而增加其生物膜通透性。将丹参酚酸及其盐磷脂复合物溶于一种或多种中及长链脂肪酸甘油酯中制备成组合物，动物试验表明可显著提高丹参酚酸的生物利用度。本发明制备工艺简单，重现性好，适用于改善其他类似亲水性分子药物的吸收。

权利要求

1.丹参酚酸或其盐磷脂复合物，其特征在于其由下述方法制得：由丹参酚酸或其盐为活性成分，与磷脂制成磷脂复合物，将磷脂复合物溶于油相中，制成磷脂复合物油性制剂，所述的磷脂与丹参酚酸或其盐的质量比为0.2-5∶1，所述的磷脂为大豆卵磷脂或氢化大豆卵磷脂，所述的丹参酚酸或其盐磷脂复合物与油相的质量比为1∶0.5-20，所述的油相是中链和/或长链脂肪酸甘油酯，所述的中链脂肪酸甘油酯选自具有8-10个碳原子链长的脂肪酸甘油单、双、三酯或其混合物；所述的长链脂肪酸甘油酯选自具有12-18个碳原子链长的脂肪酸甘油单、双、三酯或其混合物；所述的油相不含或还含有选自下述中的一种或多种的两亲性物质： M1944CS、 OLEIQUE CC497、司盘60和司盘80。

2.按权利要求1所述的丹参酚酸或其盐磷脂复合物，其特征在于所述的丹参酚酸或其盐是以中药丹参为原料，经过提取纯化得到的水溶性提取物，其中丹参酚酸是以游离酸型或盐型形式存在，以紫外分光光度法测定，其中以丹酚酸B计的丹参总酚酸的含量为

50％～100％；以高效液相测定丹酚酸B的含量为不低于40％。

3.权利要求1的丹参酚酸或其盐磷脂复合物的制备方法，其特征在于通过下述步骤：

称取权利要求1所述的磷脂和丹参酚酸或其盐，加入介电常数小的有机溶剂，混合、反应后，减压干燥或冷冻干燥除去有机溶剂后，加入惰性溶剂，使未形成复合物的丹参酚酸或其盐沉淀后与复合物分离，除去惰性溶剂后，得纯化的丹参酚酸或其盐磷脂复合物，将制得的丹参酚酸或其盐磷脂复合物溶于油相中，制成磷脂复合物油性制剂；所述的丹参酚酸或其盐磷脂复合物与油相的质量比为1∶0.5-20，所述的油相是中链和/或长链脂肪酸甘油酯，所述的中链脂肪酸甘油酯选自具有8-10个碳原子链长的脂肪酸甘油单、双、三酯或其混合物；所述的长链脂肪酸甘油酯选自具有12-18个碳原子链长的脂肪酸甘油单、双、三酯或其混合物。

4.按权利要求3所述的方法，其特征在于所述的介电常数小的有机溶剂是指丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二氧环己烷、正己烷、乙醚、甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的一种或两种以上的混合溶剂。

5.按权利要求3所述的方法，其特征在于所述的磷脂与丹参酚酸或其盐在有机溶剂中的混合、反应温度为10～80℃，反应时间为0.5～48小时。

6.按权利要求3所述的方法，其特征在于所述的丹参酚酸或其盐与磷脂在有机溶剂中混合、反应温度为20～50℃，反应时间为2～18小时；所述的惰性溶剂为氯仿。

7.按权利要求3所述的方法，其特征在于所述的油相还含有两亲性物质，选自M1944CS、 OLEIQUE CC497、司盘60和司盘80中的一种或几种。

8.按权利要求3所述的方法，其特征在于所述的磷脂复合物油性制剂用软胶囊囊材包裹制成软胶囊；或加入吸附型材料制成经胃肠道、口腔黏膜、直肠或皮肤途径给药的制剂。

说明书

丹参酚酸或其盐磷脂复合物及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及药物制剂及食品化妆品添加剂领域，具体涉及丹参酚酸或其盐磷脂复合物及其制备方法。

背景技术

[0002] 丹参为唇形科植物丹参(Salvia mitiorrhiza Bge.)干燥根及根茎。性苦，微寒；归心、心包、肝经，具有祛瘀止痛，活血通经，清心除烦的功效。丹参的药理活性成分主要分为两大类，即脂溶性成分及水溶性成分。近年的药效学研究证明丹参水溶性总酚酸物质具有抗脂质过氧化、消除自由基、抗肝纤维化、抗凝血和细胞保护、治疗慢性肾功能不全等多种重要的生物活性，是治疗冠心病、心绞痛的活性成分。现有技术公开了利用丹参酚酸活血化瘀，改善微循环障碍，抗脂质过氧化、消除自由基、抗衰老，抗菌抗炎的药理作用，丹参酚酸还应用于美容、护肤、洗发用品等化妆品。

[0003] 丹参酚酸陆续分离及其结构确证了数十种水溶性有效成分，主要是酚酸类物质：原儿茶醛(protocatechualdehyde)、丹参素(danshensu)、咖啡酸(caffeic acid)、迷迭香酸(rosmarinic acid)、紫草酸(lithospermic acid)、丹参酚酸(salvianolicacid)A，B，C，D，E，F，G等。其中丹参酚酸B含量最高，药理活性最强。丹参酚酸B可形成盐，植物体内可以镁盐形式存在。

[0004]

[0005] 丹参酚酸B 丹参酚酸B镁盐

[0006] (M.W.718.614) (M.W.739.614)

[0007] 有文献报道，丹参酚酸及其盐水溶性极大，生物膜通透性极差，丹酚酸B口服生物利用度极低，自由活动大鼠口服后绝对生物利用度为2.3％，限制活动大鼠仅0.02％，而且给药4h后发现仍有60％丹酚酸B在胃肠道中。因此改善丹参酚酸脂溶性，将有助于提高其生物膜通透性，提高生物利用度，增强药效。

[0008] 磷脂复合物(phytosome或phospholipid complex)系指在非质子传递体系溶剂中，药物与磷脂以一定配比关系结合而形成的复合物。意大利学者Bombardelli等首先研究发现，某些天然活性成分与磷脂结合形成的复合物表现出与原化合物显著不同的理化性质和生物特性。

[0009] 由于磷脂分子的两亲性，其不仅是非常有效的乳化剂，更是细胞膜的重要组成部分。药物通过与磷脂的极性基团相互作用而被固定，而磷脂的2个长脂肪酸链不参与复合反应，可自由移动，包裹了磷脂的极性部位，形成一个亲脂性的表面，多个磷脂复合物分子有序排列，形成不同于脂质体的球状体，通常药物分子与磷脂的比例为1∶1或者1∶2，因不同药物而异。因此，磷脂复合物具有能够增强药物的脂溶性和稳定性，增加生物膜渗透性，从而显著提高药物生物利用度；能够延缓释药，降低体内消除速率等优点。

[0010] 尚未见关于丹参酚酸及其盐的磷脂复合物的研究报道。

发明内容

[0011] 本发明的目的是提供丹参酚酸或其盐的生物膜通透性高的复合物，具体涉及丹参酚酸或其盐磷脂复合物及其制备方法。

[0012] 本发明所制备的复合物生物利用度高，而且制备工艺简单，重现性好，适用于改善其他类似亲水性分子药物的吸收。

[0013] 本发明采用丹参酚酸或其盐为活性成分，与磷脂组成生物膜通透性高的复合物。本复合物的磷脂与丹参酚酸或其盐的质量比为0.1～10∶1，优选0.2～5∶1。

[0014] 所述的丹参酚酸或其盐来源于中药丹参(Salvia mitiorrhiza Bge.)经过提取纯化得到的水溶性提取物(可市购)。所述的丹参酚酸是以游离酸型或是盐型尤其是镁盐形式存在。经紫外分光光度法测定，其中以丹酚酸B计的丹参总酚酸的含量为50％～100％；高效液相测定丹酚酸B的含量为不低于40％。

[0015] 本发明采用的磷脂选自天然磷脂和/或合成磷脂。其中，天然磷脂选自大豆卵磷脂和/或蛋黄卵磷脂；合成磷脂选自氢化大豆卵磷脂和/或氢化蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的一种或一种以上磷脂混合物。

[0016] 本发明的丹参酚酸磷脂复合物的制备方法是：将磷脂溶解于一定量适宜介电常数小的溶剂中，加入丹参酚酸或其盐；或在一定量适宜溶剂中同时加入磷脂和丹参酚酸或其盐，反应适当时间，至反应体系澄清，回收溶剂，干燥，粉碎，过筛即得。

[0017] 本发明所述的介电常数小的有机溶剂为非质子传递溶剂，选自丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚、二氧环己烷、正己烷、甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中的一种或一种以上的溶剂混合物。

[0018] 本发明所述磷脂与丹参酚酸或其盐在溶剂中反应温度为10～80℃，反应时间为0.5～48小时，减压干燥或冷冻干燥除去有机溶剂后，加入惰性溶剂使没有形成复合物的丹参酚酸或其盐沉淀后分离，而复合物溶于惰性溶剂，除去惰性溶剂后，得到纯化的丹参酚酸或其盐的磷脂复合物。

[0019] 所述的丹参酚酸或其盐与磷脂在有机溶剂中混合反应温度优选20～50℃，反应时间优选2～18小时；优选充入氮气条件下加热搅拌；纯化丹参酚酸或其盐的磷脂复合物时加入的惰性溶剂优选氯仿。

[0020] 上述制备的丹参酚酸或其盐磷脂复合物溶于油相中，可制成磷脂复合物油性制剂，其中，丹参酚酸或其盐的磷脂复合物与油相的质量比为1∶0.5～20。

[0021] 上述的油相是中链和/或长链脂肪酸甘油酯，其中，所述的中链脂肪酸甘油酯是具有8-10个碳原子链长的脂肪酸甘油单、双、三或其混合物；所述的长链脂肪酸甘油酯是具有12-18个碳原子链长的甘油单、双、三酯或其混合物。

[0022] 必要时，上述油相中还含有两亲性物质，所述的两亲性物质选自LABRADFILM1944CS、PLUROL OLEIQUE CC497、聚乙二醇辛基苯基醚、单硬脂酸丙二醇、单硬脂酸乙二酯、司盘60、司盘80或司盘80中的一种或几种。

[0023] 所述的丹参酚酸或其盐磷脂复合物的油性制剂可以直接用软胶囊囊材包裹制成软胶囊，或加入吸附型材料使其固化后添加药用辅料制备成各种制剂，如片剂、胶囊、微丸、颗粒剂、凝胶剂、栓剂、贴剂等制剂形式，可通过胃肠道、口腔、直肠、皮肤等给药途径应用。

[0024] 上述所制备的丹参酚酸或其盐磷脂复合物可以加入药用辅料，制备成各种制剂，如胶囊、片剂、颗粒剂、混悬剂、栓剂、凝胶剂、贴剂等剂型，可通过胃肠道、口腔、直肠、皮肤等给药途径应用。

[0025] 上述发明制备的丹参酚酸或其盐磷脂复合物可以采用本领域技术人员常用技术用于保健食品添加剂。

[0026] 上述发明制备的丹参酚酸及其盐磷脂复合物可以采用本领域技术人员常用技术用于美容、护肤、洗发等化妆品领域。

[0027] 本发明将丹参酚酸或其盐制备成磷脂复合物后，通过下述生物利用度和Caco-2细胞试验的比较，证实其脂溶性明显改善，说明本发明丹参酚酸或其盐磷脂复合物具有显著的有益效果和实用性。

[0028] 一、丹参酚酸或其盐与所形成的磷脂复合物在不同溶剂中溶解性能

[0029] 丹参酚酸或其盐与磷脂形成复合物后，其亲脂性有明显改善。

[0030] 按照《中国药典》2005版二部溶解度测定方法，分别称取丹参酚酸或其盐粉末、丹参酚酸或其盐与磷脂的物理混合物(按照磷脂复合物配比)、丹参酚酸或其盐磷脂复合物，于25℃±2℃加入一定容量溶剂中，每5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒时，即视为完全溶解。

[0031] 本发明所涉及的药品近似溶解度以下列名词术语表示：易溶解，系指溶质1g能在溶剂1～10ml中溶解；溶解，系指溶质1g能在溶剂10～30ml中溶解；微溶，系指溶质1g能在溶剂100～1000ml中溶解；几乎不溶，系指溶质1g在溶剂10000ml中不能完全溶解。

[0032] 试验结果表明，丹参酚酸或其盐的磷脂复合物的脂溶性明显大于丹参酚酸或其盐以及丹参酚酸或其盐与磷脂的物理混合物。

[0033] 表1是丹参酚酸及其盐在不同溶剂中近似溶解度。

[0034] 表1

[0035]溶剂 水 甲醇 丙酮 四氢呋喃 氯仿
丹参酚酸 溶解 易溶 易溶 易溶 几乎不溶
丹参酚酸及磷脂物理混合物 溶解 易溶 易溶 易溶 微溶
丹参酚酸磷脂复合物 微溶 易溶 易溶 易溶 易溶
丹参酚酸镁盐 易溶 微溶 几乎不溶 几乎不溶 几乎不溶
丹参酚酸镁盐及磷脂物理混合物 溶解 微溶 微溶 微溶 微溶
丹参酚酸镁盐磷脂复合物 微溶 溶解 微溶 易溶 溶解

[0036] 二、丹参酚酸或其盐与所形成的磷脂复合物差示热扫描分析

[0037] 采用动态热流式扫描(NETZSCH-Geratebau GmbH，德国，DSC/1/G Phoenix，以金属铝作为参比试剂，测定丹参酚酸或其盐、物理混合物、磷脂复合物差示热曲线。结果显示，丹参酚酸或其盐与磷脂形成复合物后，磷脂放热峰消失，丹参酚酸盐吸热峰前移；而丹参酚酸或其盐与磷脂物理混合后，虽然磷脂放热峰前移，但是仍然存在。试验结果验证了丹参酚酸或其盐与磷脂形成的磷脂复合物不是简单的物理混合物，而是一种新的结合状态(见图1)。

[0038] 三、丹参酚酸或其盐与磷脂复合物紫外扫描分析

[0039] 采用紫外分光光度计分别对磷脂、丹参酚酸、丹参酚酸盐、不同配比丹参酚酸磷脂复合物、丹参酚酸盐磷脂复合物的甲醇溶液进行紫外扫描。上述磷脂复合物分别来源于具体实例1～5。

[0040] 试验结果显示，丹参酚酸或其盐与磷脂复合物具体有相似的紫外吸收曲线，具有相同最大吸收波长(285～289nm和204～207nm)。分别计算其在286nm及204nm的百分1％ 1％
吸光系数E1cm 。结果表明不同配比磷脂复合物具有特定E1cm 。表2是丹参酚酸及其盐与不同配比磷脂复合物(甲醇溶液)百分吸光系数。

[0041] 表2

[0042]

[0043] 丹参酚酸 252 971[0044] 丹参酚酸磷脂复合物(磷脂∶丹参酚酸＝1∶3) 180 721[0045] 丹参酚酸磷脂复合物(磷脂∶丹参酚酸＝1∶1) 100 456[0046] 丹参酚酸磷脂复合物(磷脂∶丹参酚酸＝2∶1) 79 393[0047] 丹参酚酸磷脂复合物(磷脂∶丹参酚酸＝4∶1) 47 253[0048] 丹参酚酸盐 222 822[0049] 丹参酚酸盐磷脂复合物(磷脂∶丹参酚酸盐＝1∶1) 100 486[0050] 大豆卵磷脂 -- 91[0051] 四、丹参酚酸磷脂复合物在Caco-2细胞中的吸收

[0052] 以Caco-2细胞为模型，考察丹参酚酸、丹参酚酸与磷脂物理混合物、丹参酚酸磷脂复合物中丹参酚酸B的转运。计算转运系数Papp(cm/s)。试验分为丹参酚酸溶液组、丹参酚酸与磷脂物理混合物组和丹参酚酸磷脂复合物组，给药剂量以丹参酚酸B计算为400μg/ml，采用高效液相测定丹参酚酸B含量。

[0053] 试验结果表明，溶液组、物理混合物组和磷脂复合物组丹参酚酸B的转运系数(Papp)(Apical-Basolateral)分 别为(4.1±0.4)×10-7cm/s、(6.0±0.5)×10-7cm/s 和(39.9±0.3)×10-7cm/s。磷脂复合物组丹参酚酸B的转运系数提高了约10倍。结果证实，本发明复合物能显著改善药物生物膜透过率。

[0054] 五、大鼠口服丹参酚酸磷脂复合物油性制剂生物利用度试验

[0055] 取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，禁食不禁水12小时后，灌胃给药，于一定时间点眶后静脉丛取血，肝素抗凝。分为溶液组和磷脂复合物油制剂组，每组6只，参照相对生物利用度试验方法，数据经3p97软件计算AUC值，计算相对生物利用度。给药剂量以丹参酚酸B计算为200mg/kg。高效液相测定血浆中丹参酚酸B含量。结果SD大鼠口服丹参酚酸组AUC0→∞2849.7±289ng/ml.h，磷脂复合物组AUC0→∞12823.6±500ng/ml.h，相对生物利用度为450％。结果证实，本发明复合物能够显著提高药物口服生物利用度。

附图说明

[0056] 图1是丹参酚酸及其盐磷脂复合物差示热曲线，其中，

[0057] A：丹参酚酸；B：丹参酚酸磷脂复合物；C：丹参酚酸盐；D：丹参酚酸盐磷脂复合物；E：磷脂；F：丹参酚酸磷脂物理混合物；G：丹参酚酸盐磷脂物理混合物。

[0058] 具体实施例方式

[0059] 下列实施例旨在进一步具体描述本发明，而不是以任何形式限制本发明。

[0060] 实施例1

[0061] 丹参酚酸磷脂复合物(磷脂∶丹参酚酸＝1∶3)

[0062] 称取2.56g大豆卵磷脂溶于乙酸乙酯100ml中，50℃加热，加入丹参酚酸7.64g，反应2小时，减压回收溶剂，加入适量氯仿，充分振摇，过滤除去沉淀，滤液干燥，粉碎，即得黄色固体粉末。

[0063] 实施例2

[0064] 丹参酚酸磷脂复合物(磷脂∶丹参酚酸＝1∶1)

[0065] 称取5.3g大豆卵磷脂溶于乙酸乙酯100ml中，40℃加热，加入丹参酚酸4.96g，反应4小时，减压回收溶剂，加入适量氯仿，充分振摇，过滤除去沉淀，滤液干燥，粉碎，即得黄色固体粉末。

[0066] 实施例3

[0067] 丹参酚酸磷脂复合物(磷脂∶丹参酚酸＝2∶1)

[0068] 称取6.2g大豆卵磷脂溶于乙酸乙酯100ml中，30℃加热，加入丹参酚酸3.1g，反应4小时，减压回收溶剂，加入适量氯仿，充分振摇，过滤除去沉淀，滤液干燥，粉碎，即得黄色固体粉末。

[0069] 实施例4

[0070] 丹参酚酸磷脂复合物(磷脂∶丹参酚酸＝4∶1)

[0071] 称取8.6g大豆卵磷脂溶于乙酸乙酯100ml中， 室温，加入丹参酚酸2.1g，反应8小时，减压回收溶剂，加入适量氯仿，充分振摇，过滤除去沉淀，滤液干燥，粉碎，即得黄色固体粉末。

[0072] 实施例5

[0073] 丹参酚酸盐磷脂复合物(磷脂∶丹参酚酸盐＝1∶1)

[0074] 称取1.1g大豆卵磷脂溶于四氢呋喃100ml中，40℃加热，加入丹参酚酸盐1.0g，反应12小时，减压回收溶剂，加入适量氯仿，充分振摇，过滤除去沉淀，滤液干燥，粉碎，即得黄色固体粉末。

[0075] 实施例6

[0076] 称取丹参酚酸2.0g溶于丙酮50ml中，室温使之溶解，加入大豆卵磷脂0.5g，反应24小时，减压回收溶剂，干燥，粉碎，即得黄色固体粉末。

[0077] 实施例7

[0078] 称取10.0g蛋黄卵磷脂溶于乙酸乙酯100ml中，40℃加热使之溶解，加入丹参酚酸1.0g，反应12小时，减压回收溶剂，干燥，粉碎，即得黄色固体粉末。

[0079] 实施例8

[0080] 称取1.1g合成磷脂二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)溶于四氢呋喃100ml中，加热至40℃，使之溶解，加入丹参酚酸1.0g，反应4小时，减压回收溶剂，干燥，粉碎，即得黄色固体粉末。

[0081] 实施例9

[0082] 称取1.2g大豆卵磷脂溶于乙酸乙酯50ml中，加热至80℃，使之溶解，加入丹参酚酸1.1g，边反应边充入氮气，反应1小时，减压回收溶剂，干燥，粉碎，即得黄色固体粉末。加入10g中链脂肪酸甘油酯，搅拌均匀，得到丹参酚酸磷脂复合物油制剂。

[0083] 实施例10

[0084] 称取6.0g氢化大豆卵磷脂和4.0g丹参酚酸盐，加入200ml乙醇-四氢呋喃混合溶液中，室温，反应36小时，回收溶剂，干燥，粉碎，得到黄色固体粉末。加入2g司盘80和50g中链脂肪酸甘油酯，搅拌均匀，得到丹参酚酸盐磷脂复合物油制剂。

[0085] 实施例11

[0086] 称取1.5g大豆卵磷脂和1.0g丹参酚酸酸盐，加入50ml甲醇-四氢呋喃混合溶液中，室温反应24小时，回收溶剂，干燥，粉碎，得到黄色固体粉末。加入1.0g PLUROLOLEIQUE CC497，9g长链脂肪酸甘油酯，搅拌均匀，得到丹参酚酸盐磷脂复合物油制剂。

[0087] 实施例12

[0088] 用丹参酚酸盐油制剂制备软胶囊

[0089] 处方组成：丹参酚酸盐油制剂(约相当于200mg丹参酚酸盐)0.5g(实施例11方法制得)

[0090] 工艺过程：将丹参酚酸盐油制剂及明胶、甘油、山梨醇、水配制明胶溶液，置铺展箱中备用。在室温25±2℃、相对湿度40％的条件下用滴制法制成胶丸，在25±2℃、相对湿度40％的条件下冷风干燥24小时即得。