一种祛痰平喘的药物、制备方法及其用途

摘要

本发明涉及一种祛痰平喘的药物，及其制备方法和用途。具体地，取沙漠嘎药材，采用乙醇回流提取后进一步制备成本发明药物。

权利要求

1.一种祛痰平喘的药物，采用下述方法制备而成：

(1)取沙漠嘎或沙漠嘎种子药材，粉碎，乙醇回流提取得提取液，浓缩，蒸干得干燥粗浸膏A；

(2)将上述干燥粗浸膏A上硅胶柱采用氯仿进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

(3)将步骤2中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱，所得洗脱液重结晶得提取物B。

2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于：步骤1中沙漠嘎或沙漠嘎种子药材粉碎过40目筛，采用70％～90％乙醇回流提取两次，其用量为药材量的8～12倍，每次2小时。

3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于：步骤1中采用80％的乙醇回流提取，其用量为药材量的10倍。

4.根据权利要求1所述的药物，其特征在于步骤2中硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为2～6∶1。

5.根据权利要求4所述的药物，其特征在于步骤2中硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为4∶1。

6.根据权利要求1所述的药物，其特征在于步骤3中，环己烷-丙酮梯度洗脱的条件采用薄层层析法进行控制，薄层层析的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷∶丙酮＝2∶1，显色剂为1％三氯化铝溶液，对照品为异樱花素。

7.根据权利要求1所述的药物，其特征在于步骤3中梯度洗脱的步骤如下：先采用环己烷作为溶剂对硅胶柱进行洗脱，收集洗脱液，同时采用薄层层析法进行对洗脱液中的异樱花素跟踪鉴别，显色后置UV365下有绿色荧光斑点产生时，弃去该段洗脱液并改用环己烷∶丙酮＝10∶1溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下除绿色荧光斑点外无其它杂质产生时，弃去该段洗脱液并改用环己烷∶丙酮＝6∶1溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有无绿色荧光斑点时，洗脱结束，收集该段洗脱液，以丙酮为溶剂进行重结晶。

8.权利要求1-7中任一药物在制备祛痰平喘药物中的应用。

说明书

一种祛痰平喘的药物、制备方法及其用途

技术领域

[0001] 本发明涉及中药领域，具体涉及一种祛痰平喘的药物，及其制备方法和用途。

背景技术

[0002] 沙漠嘎，原植物为菊科蒿属植物差把嘎蒿Artemisia halodendron Turcz.，味辛性温，具有止咳祛痰平喘，解表祛湿的功效。主治慢性气管炎，哮喘；风湿性关节炎。我国药典(2005版)尚未对其收载。

[0003] 支气管哮喘是由多种细胞和细胞组份参与的气道慢性炎症疾病。这种慢性炎症导致气道高反应性的增加，临床以反复发作性喘息、气急、胸闷或咳嗽等为其主要症状特征。

[0004] 过去哮喘的治疗是以应用支气管扩张剂为主，随着对哮喘研究的深入，发现哮喘随变应性炎症的变化特点，在90年代初将哮喘定义为一种慢性气道炎症疾病。

[0005] 用于哮喘治疗的支气管支气管扩张剂主要为β2受体激动剂，茶碱和抗胆碱药物三类。吸入β2受体激动剂长期应用可以引起β2受体功能下调，和气道反应性增加，故不主张长期应用。茶碱是用于哮喘长期治疗及控制夜间哮喘较好方法之一。但其控制症状稍差，治疗量与中毒量接近，主要副作用为恶心、呕吐、心率失常等。抗胆碱药的不良反应很少，但其扩张支气管作用比β2受体激动剂弱，起效也慢。

[0006] 用于抗炎治疗的药物主要有糖皮质激素、抗白三烯药物和色苷酸钠。糖皮质激素的疗效较为确切，但具有局部和全身性的不良反应。抗白三烯药物不良反应较少，但价格较为昂贵。

[0007] 虽然治疗祛痰的药物很多，但目前尚无公认的、快速控制哮喘急性发作和显著预防哮喘复发的中药制剂。

发明内容

[0008] 本发明目的在于克服现有技术中的不足，提供了一种祛痰平喘的药物。

[0009] 本发明又一目的在于提供了上述药物的制备方法。

[0010] 本发明再一目的在于提供了一种含有上述药物为活性成分的组合物及其制备方法。

[0011] 本发明再一目的在于提供了上述药物的用途。

[0012] 本发明一种祛痰平喘的药物通过以下技术方案予以实施。

[0013] 本发明一种祛痰平喘的药物通过下述方法进行制备：取沙漠嘎或沙漠嘎种子药材，粉碎，乙醇回流提取得提取液，浓缩，蒸干，得干燥粗浸膏A。

[0014] 其中，上述药材粉碎过40目筛，70％～90％乙醇回流提取两次，优选为80％，其用量(V)为药材量(W)的8～12倍(L/Kg)，优选为10倍，每次2小时。

[0015] 通过长期实验，发明人发现为了实现更好的治疗效果，上述方法得到的干燥粗浸膏A还可以通过下述两种方法之一进行精制，得到提取物B、C和D。根据使用提取溶剂的不同分为“氯仿提取法”和“乙酸乙酯提取法”，具体步骤如下：

[0016] 氯仿提取法

[0017] 1.将上述方法得到的干燥粗浸膏A上硅胶柱采用氯仿进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0018] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱，所得洗脱液重结晶得提取物B。

[0019] 其中，步骤1中硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为2～6∶1(Kg/Kg)，优选为4∶1。

[0020] 步骤2中，环己烷-丙酮梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，即采用一定的溶剂对硅胶柱进行洗脱的同时采用薄层层析法(TLC)以欲分离的目标成分为对象，对所收集的洗脱液进行定性的跟踪鉴别，根据不同的鉴别情况，调整所使用的洗脱液的种类或比例，以达到最佳的分离效果。本发明的技术方案中，薄层层析的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮(2∶1)，显色剂为1％三氯化铝溶液，对照品为异樱花素；具体的梯度洗脱的步骤如下：先采用环己烷作为溶剂对硅胶柱进行洗脱，收集洗脱液，同时采用TLC法进行对洗脱液中的异樱花素跟踪鉴别，显色后置UV365下有绿色荧光斑点产生时，弃去该段洗脱液并改用环己烷-丙酮(10∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下除绿色荧光斑点外无其它杂质产生时，弃去该段洗脱液并改用环己烷-丙酮(6∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有无绿色荧光斑点时，洗脱结束，收集该段洗脱液进行重结晶，重结晶溶剂为丙酮。

[0021] 经HPLC测定，上述“氯仿提取法”制得提取物A中异樱花素含量达95％以上。异樱花素的结构为5，7-二羟基-4’-甲氧基二氢黄酮。化合物结构如下：

[0022]

[0023] 异樱花素(isosakuranetin)C15H14O5

[0024] 乙酸乙酯提取法

[0025] 1.将上述方法得到的干燥粗浸膏上硅胶柱采用乙酸乙酯进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0026] 2.浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱洗脱，得洗脱液反复重结晶得提取物C和提取物D。

[0027] 其中，步骤1中硅胶的用量与干燥浸膏的重量比为2～6∶1，优选为4∶1。

[0028] 步骤2中，环己烷-丙酮梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制。薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮(2∶1)，显色剂为10％硫酸乙醇溶液，对照品为圣草酚-7-甲醚；具体的梯度洗脱的步骤如下：先采用环己烷-丙酮(6∶1)进行洗脱，同时采用TLC法进行跟踪鉴别，待喷显色后有红色斑点产生时，弃去该段洗脱液并改用环己烷-丙酮(4∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷显色剂后除红色斑点外无其它杂质产生时，弃去该段洗脱液并改用环己烷-丙酮(2∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到10％硫酸乙醇溶液后无红色斑点时，洗脱结束，收集该段洗脱液得到提取物C和D。重结晶溶剂为丙酮。

[0029] 经HPLC测定，上述“乙酸乙酯提取法”制得提取物C中圣草酚-7-甲醚含量达95％以上。圣草酚-7-甲醚的结构为3’，4’-二羟基-7-甲氧基二氢黄酮，化合物结构如下：

[0030]

[0031] 圣草酚-7-甲醚(eriodictyol-7-methylether)C16H14O6

[0032] 经HPLC测定，上述“乙酸乙酯提取法”制得提取物D中鼠李素含量达95％以上。鼠李素的结构为3’，4’-二羟基-7-甲氧基黄酮醇，化合物结构如下：

[0033]

[0034] 鼠李素(rhamnetin)C16H12O7

[0035] 本发明所述的药物A、B、C、D，加入药剂学上接受的辅料按照常规的制备方法可以制成药剂学上接受的任一制剂。

[0036] 所述的制剂包括但不限于胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、丹剂、喷雾剂、滴丸剂、口崩片、微丸、气雾剂等。

[0037] 本发明公开了上述药物的制备方法。

[0038] 本药物A的采用下述方法制备而成：

[0039] 取沙漠嘎或沙漠嘎种子药材，粉碎，乙醇回流提取得提取液，浓缩，蒸干，得干燥粗浸膏A。

[0040] 本发明药物B采用下述步骤制备而成：

[0041] 1.将上述方法得到的干燥粗浸膏A上硅胶柱采用氯仿进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0042] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱，所得洗脱液重结晶得提取物B。

[0043] 其中，步骤1中硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为2～6∶1(Kg/Kg)，优选为4∶1。

[0044] 步骤2中，环己烷-丙酮梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，即采用一定的溶剂对硅胶柱进行洗脱的同时采用薄层层析法(TLC)以欲分离的目标成分为对象，对所收集的洗脱液进行定性的跟踪鉴别，根据不同的鉴别情况，调整所使用的洗脱液的种类或比例，以达到最佳的分离效果。本发明中，先采用环己烷进行洗脱，同时采用TLC法进行跟踪鉴别，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有绿色荧光斑点产生时，改用环己烷-丙酮(10∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下除绿色荧光斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(6∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有无绿色荧光斑点时，洗脱结束。重结晶溶剂为丙酮。

[0045] 本发明药物C和D采用下述步骤制备而成：

[0046] 1.将上述方法得到的干燥粗浸膏上硅胶柱采用乙酸乙酯进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0047] 2.浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱洗脱，得洗脱液反复重结晶得提取物C和提取物D。

[0048] 其中，步骤1中硅胶的用量与干燥浸膏的重量比为2～6∶1，优选为4∶1。

[0049] 步骤2中，环己烷-丙酮梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制。在本发明中，先采用环己烷-丙酮(6∶1)进行洗脱，同时采用TLC法进行跟踪鉴别，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，直到喷10％硫酸乙醇溶液后有红色斑点产生时，改用环己烷-丙酮(4∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷10％硫酸乙醇溶液后除红色斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(2∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到10％硫酸乙醇溶液后无红色斑点时，洗脱结束，收集洗脱液得到提取物C和D。重结晶溶剂为丙酮。

[0050] 本发明药物A、B、C和D具有很好的祛痰效果。

[0051] 试验例1沙漠嘎提取物祛痰药效的研究

[0052] 1.实验材料

[0053] 1.1实验动物

[0054] ICR小鼠，雌雄各半，体重(20±2)g；由北京维通利华动物技术有限公司提供，许可证编号：SCXX(京)2002-0003。

[0055] 1.2样品制备：

[0056] 本发明药物A，按照实施例1方法进行制备。

[0057] 本发明药物B，按照实施例2方法进行制备。

[0058] 本发明药物C和D，按照实施例3方法进行制备。

[0059] 阳性药：太极急支糖浆，太极集团涪陵制药厂，产品批号：88041247。

[0060] 2.实验方法

[0061] 2.1实验分组 小鼠随机分6组，每组12只，即对照组、阳性药对照组、药物A组、药物B组、药物C组和药物D组。

[0062] 2.2方法

[0063] 灌胃给药3天：阳性药对照组给予太极急支糖浆5mL/kg，对照组给予等量蒸馏水，A、B、C、D组给予等剂量对应提取物。

[0064] 实验前禁食不禁水12h，给药，给药后0.5h腹腔注射0.5％酚红溶液0.5mL，30min后处死小鼠(尽量不损伤气管)，仰位固定于手术板上，剪开颈正中皮肤，分离气管，于喉头下将平头针头插入气管内0.3cm，用丝线结扎固定后以1mL注射器吸取5％NaHCO3溶液0.5mL，通过针头来回灌洗呼吸道3次(每次不作停留)，将灌洗液注入-试管中，重新吸取
5％NaHCO3溶液0.5mL如上再灌洗3次，再同样灌洗3次，如此共抽洗9次，合并洗出液，用分光光度计在波长546nm处测OD值。

[0065] 3.实验结果，见表1。

[0066] 表1沙漠嘎不同有效部位的祛痰效果比较

[0067]组别 剂量 气管酚红排泌量(μg/mL)
对照组 1.98±0.53
阳性药物对照组 3.05±0.75**
药物A组 5ml/kg 2.75±0.72*
*
药物B组 66g/kg 2.68±0.88
药物C组 66g/kg 2.89±0.56*
药物D组 66g/kg 2.99±0.53**
66g/kg

[0068] 与空白组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

[0069] 结果表明，阳性药太极急支糖浆祛痰效果好，与空白组比较，差异极显著；药物A、B和C部位祛痰效果较好，与空白组比较，差异显著；D部位祛痰效果最好，与空白组比较，差异极显著，达到了急支糖浆的效果。

具体实施方式

[0070] 实施例1

[0071] 取沙漠嘎或沙漠嘎种子药材，粉碎，过40目筛，加10倍量80％乙醇加热回流提取2次，每次2小时，合并滤液，浓缩蒸干，得药物A。

[0072] 实施例2

[0073] 1.将实施例1得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为4∶1(Kg/Kg)，采用氯仿进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0074] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，显色剂为1％三氯化铝溶液。采用首先环己烷进行洗脱，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有绿色荧光斑点产生时，改用环己烷-丙酮(10∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下除绿色荧光斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(6∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有无绿色荧光斑点时，洗脱结束，所得洗脱液重结晶得药物B。

[0075] 实施例3

[0076] 1.将实施例1得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为4∶1(Kg/Kg)，采用乙酸乙酯进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0077] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮(6∶1)梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，直到喷10％硫酸乙醇溶液后有红色斑点产生时，改用环己烷-丙酮(4∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷10％硫酸乙醇溶液后除红色斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(2∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到10％硫酸乙醇溶液后无红色斑点时，洗脱结束，收集洗脱液得到提取物C和D。

[0078] 实施例4

[0079] 取沙漠嘎或沙漠嘎种子药材，粉碎，过40目筛，加8倍量70％乙醇加热回流提取2次，每次2小时，合并滤液，浓缩蒸干，得药物A。

[0080] 实施例5

[0081] 取沙漠嘎或沙漠嘎种子药材，粉碎，过40目筛，加12倍量70％乙醇加热回流提取2次，每次2小时，合并滤液，浓缩蒸干，得药物A。

[0082] 实施例6

[0083] 取沙漠嘎或沙漠嘎种子药材，粉碎，过40目筛，加12倍量90％乙醇加热回流提取2次，每次2小时，合并滤液，浓缩蒸干，得药物A。

[0084] 实施例7

[0085] 1.将实施例4得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为4∶1(Kg/Kg)，采用氯仿进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0086] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，显色剂为1％三氯化铝溶液。采用首先环己烷进行洗脱，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有绿色荧光斑点产生时，改用环己烷-丙酮(10∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下除绿色荧光斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(6∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有无绿色荧光斑点时，洗脱结束，所得洗脱液重结晶得药物B。

[0087] 实施例8

[0088] 1.将实施例5得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为4∶1(Kg/Kg)，采用氯仿进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0089] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，显色剂为1％三氯化铝溶液。采用首先环己烷进行洗脱，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有绿色荧光斑点产生时，改用环己烷-丙酮(10∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下除绿色荧光斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(6∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有无绿色荧光斑点时，洗脱结束，所得洗脱液重结晶得药物B。

[0090] 实施例9

[0091] 1.将实施例6得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为4∶1(Kg/Kg)，采用氯仿进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0092] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，显色剂为1％三氯化铝溶液。采用首先环己烷进行洗脱，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有绿色荧光斑点产生时，改用环己烷-丙酮(10∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下除绿色荧光斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(6∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有无绿色荧光斑点时，洗脱结束，所得洗脱液重结晶得药物B。

[0093] 实施例10

[0094] 1.将实施例4得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为4∶1(Kg/Kg)，采用乙酸乙酯进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0095] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮(6∶1)梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，直到喷10％硫酸乙醇溶液后有红色斑点产生时，改用环己烷-丙酮(4∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷10％硫酸乙醇溶液后除红色斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(2∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到10％硫酸乙醇溶液后无红色斑点时，洗脱结束，收集洗脱液得到提取物C和D。

[0096] 实施例11

[0097] 1.将实施例5得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为4∶1(Kg/Kg)，采用乙酸乙酯进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0098] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮(6∶1)梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，直到喷10％硫酸乙醇溶液后有红色斑点产生时，改用环己烷-丙酮(4∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷10％硫酸乙醇溶液后除红色斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(2∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到10％硫酸乙醇溶液后无红色斑点时，洗脱结束，收集洗脱液得到提取物C和D。

[0099] 实施例12

[0100] 1.将实施例6得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为4∶1(Kg/Kg)，采用乙酸乙酯进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0101] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮(6∶1)梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，直到喷10％硫酸乙醇溶液后有红色斑点产生时，改用环己烷-丙酮(4∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷10％硫酸乙醇溶液后除红色斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(2∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到10％硫酸乙醇溶液后无红色斑点时，洗脱结束，收集洗脱液得到提取物C和D。

[0102] 实施例13

[0103] 1.将实施例1得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为2∶1(Kg/Kg)，采用乙酸乙酯进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0104] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮(6∶1)梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，直到喷10％硫酸乙醇溶液后有红色斑点产生时，改用环己烷-丙酮(4∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷10％硫酸乙醇溶液后除红色斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(2∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到10％硫酸乙醇溶液后无红色斑点时，洗脱结束，收集洗脱液得到提取物C和D。

[0105] 实施例14

[0106] 1.将实施例1得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为6∶1(Kg/Kg)，采用乙酸乙酯进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0107] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮(6∶1)梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，直到喷10％硫酸乙醇溶液后有红色斑点产生时，改用环己烷-丙酮(4∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷10％硫酸乙醇溶液后除红色斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(2∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到10％硫酸乙醇溶液后无红色斑点时，洗脱结束，收集洗脱液得到提取物C和D。

[0108] 实施例15

[0109] 1.将实施例1得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为2∶1(Kg/Kg)，采用氯仿进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0110] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱，梯度洗脱的条件采用薄层层析法(TLC)进行控制，薄层分离的条件如下：固定相为硅胶G板，展开剂为环己烷-丙酮＝2∶1，显色剂为1％三氯化铝溶液。采用首先环己烷进行洗脱，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有绿色荧光斑点产生时，改用环己烷-丙酮(10∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下除绿色荧光斑点外无其它杂质产生时，改用环己烷-丙酮(6∶1)溶剂进行洗脱，同样采用前述薄层层析的方法和条件进行跟踪鉴别，直到喷1％三氯化铝溶液后置UV365下有无绿色荧光斑点时，洗脱结束，所得洗脱液重结晶得药物B。

[0111] 实施例16

[0112] 1.将实施例1得到的药物A上硅胶柱，硅胶的重量与干燥粗浸膏的重量比为6∶1(Kg/Kg)，采用氯仿进行洗脱，洗脱液浓缩得浸膏；

[0113] 2.将步骤1中得到的浸膏继续上硅胶柱采用环己烷-丙酮梯度洗脱，梯度洗脱的