本发明涉及一种用于治疗脾胃虚寒型胃脘痛的中药胶囊剂及其制法和质量控制方法；该中药胶囊剂由白芍、黄连、吴茱萸、干姜、麸炒白术、肉桂、姜制厚朴、草豆蔻、荜澄茄、莪术、麸炒枳壳、党参、乌梅、甘草制成；该中药胶囊剂的质量控制方法包括：吴茱萸、黄连、白芍、荜澄茄、白术、肉桂的薄层鉴别，芍药的含量测定。
1.一种用于治疗脾胃虚寒型胃脘痛的中药胶囊剂的检测方法，胶囊剂是通过以下方法制得的：白芍150g、黄连75g、吴茱萸75g粉碎成细粉，过筛，备用；干姜75g、麸炒白术150g、肉桂75g、姜制厚朴127.5g、草豆蔻75g、荜澄茄75g、莪术127.5g、麸炒枳壳75g加水蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液和药渣分别另器收集；药渣与党参150g、乌梅97.5g、甘草75g加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，煎煮液与蒸馏后的水溶液合并，滤过，滤液减压浓缩成70℃相对密度为1.10～1.15的清膏，喷雾干燥，加入上述细粉，混匀，以70％乙醇制粒，≤60℃低温干燥，喷入挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒；其特征在于该方法为：(1)吴茱萸、黄连的薄层鉴别：取胶囊剂内容物3g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加水饱和的正丁醇提取二次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，置已处理好的200～300目，3g，内径0.9cm的中性氧化铝柱上，以1∶1的醋酸乙酯-甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取吴茱萸对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理5分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶1∶2的正丁醇-醋酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同黄色的荧光斑点；
(2)白芍的薄层鉴别：取(1)项下的供试品溶液作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶1的氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点；
(3)荜澄茄的薄层鉴别：取胶囊剂内容物10g，加乙醚30ml，振摇放置1小时，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取荜澄茄对照药材
0.5g，加乙醚30ml，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以27∶1的苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)白术的薄层鉴别：取胶囊剂内容物10g，加乙醚30ml，超声处理3分钟，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液；另取白术对照药材1g，加乙醚10ml，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同硅胶G薄层板上，以
50∶1的60～90℃石油醚-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)肉桂的薄层鉴别：取(4)项下的供试品溶液作为供试品溶液；另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1ml含1μl的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以85∶15的60～
90℃石油醚-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)白芍的含量测定：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；25∶75的甲醇-水为流动相；检测波长为230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；精密称取芍药苷对照品
10mg，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；取胶囊剂10粒，倾出内容物，混匀，约取0.6g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，残渣及容器用少量甲醇分数次洗涤，洗涤液滤入同一量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取25ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，置于已处理好的200～300目，3g，内径约0.9cm的中性氧化铝柱上，用25％甲醇50ml分次洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并分次转至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液4μl、
8μl，供试品溶液10μl注入液相色谱仪，照《中国药典》高效液相色谱法测定，胶囊剂每粒含芍药以分子式为C23H28O11的芍药苷计，不得少于0.90mg。
一种治疗脾胃虚寒型胃脘痛的中药胶囊剂的检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种中药制剂，特别是一种用于治疗脾胃虚寒型胃脘痛的中药胶囊剂及制法和质量控制方法。
[0002] 背景技术
[0003] 脾胃虚寒型胃脘痛是消化系统的常见病与多发病，该病有多种致病病因，病程长，可见于任何年龄段，若防治不当，可引起严重的并发症，因而是影响人类身体健康的一大类疾病。2005年2月2日中国专利公报公开了由本申请人申报的名称为“用于治疗胃脘痛的中成药及其制备方法“、公开号为1572315的专利申请，该申请公开了发明的处方组成和各种剂型的简单制备方法，本发明就是在公开号为1572315申请的基础上，对其工艺条件进行了细化，并将其质量控制方法公开，使该发明得以完善。
[0004] 发明内容
[0005] 本发明的目的在于：提供一种治疗脾胃虚寒型胃脘痛的中药胶囊剂及制法和质量控制方法。
[0006] 本发明是这样实现的：
[0007] 一、处方：
[0008] 党参150g、干姜75g、白术(麸炒)150g、肉桂75g、白芍150g、厚朴(姜制)127.5g、吴茱萸75g、草豆蔻75g、荜澄茄75g、莪术127.5g、枳壳(麸炒)75g、乌梅97.5g、黄连75g、甘草75g。
[0009] 二、制法：
[0010] 以上十四味，取白芍、黄连、吴茱萸三味粉碎成细粉，过筛，备用；干姜、白术、肉桂、厚朴、草豆蔻、荜澄茄、莪术、枳壳八味加水蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液和药渣分别另器收集；药渣与其余党参等三味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，煎煮液与蒸馏后的水溶液合并，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.15(70℃)的清膏，喷雾干燥，加入上述细粉，混匀，以70％乙醇制粒，低温干燥(≤60℃)，喷入挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
[0011] 三、性状：
[0012] 本品为胶囊剂，内容物为棕色至棕褐色的颗粒或粉末；气芳香，味微甘、苦。 [0013] 四、鉴别：
[0014] (1)取本品内容物3g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加水饱和的正丁醇提取二次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，置已处理好的中性氧化铝柱(200～300目，3g，内径0.9cm)上，以醋酸乙酯-甲醇(1∶1)50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取吴茱萸对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理5分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2000年版-部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(7∶1∶2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同黄色的荧光斑点。 [0015] (2)取【鉴别】(1)项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。
[0016] (3)取本品内容物10g，加乙醚30ml，振摇放置1小时，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取荜澄茄对照药材0.5g，加乙醚30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(27∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0017] (4)取本品内容物10g，加乙醚30ml，超声处理3分钟，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液。另取白术对照药材1g，加乙醚10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)一醋酸乙酯(50∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0018] (5)取【鉴别】(4)项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每lml含1μl的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(85∶15)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 [0019] 五、检查：
[0020] 应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录I L)。 [0021] 六、含量测定：照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI D)测定。 [0022] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(25∶75)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。 [0023] 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 [0024] 供试品溶液的制备取[装量差异]检查项下的内容物，混匀，约取0.6g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，残渣及容器用少量甲醇分数次洗涤，洗涤液滤入同-量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取25ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，置于已处理好的中性氧化铝柱(200～300目，3g，内径约0.9cm)上，用25％甲醇50ml分次洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并分次转至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0025] 测定法分别精密吸取对照品溶液4μl、8μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0026] 本品每粒含芍药以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.90mg。
[0027] 七、功能与主治：
[0028] 健脾益气，温中和胃，行气止痛。用于慢性浅表性胃炎(胃脘痛脾胃虚寒型)，症见：胃脘隐痛，喜暖喜按，遇寒加重，食纳不佳，胸腹胀闷，嗳气吞酸，神疲懒言，大便溏薄，舌质淡，苔薄白，脉沉细或弦等。
[0029] 八、用法用量：
[0030] 口服，每粒0.4g，一次4粒，一日3次。
[0031] 主要药效学试验结果：为了进一步说明本发明的优越性，将本发明产品进行了一系列的药效学试验，将试验结果总结如下：
[0032] 1.本发明胶囊对大鼠牛磺胆酸胃炎模型的促愈合作用
[0033] 本实验全部大鼠禁食48小时，给予每只动物灌胃80mM牛磺胆酸钠1ml，随机分为五组，即本发明高、中、低剂量组、阳性对照组(三九胃泰)、空白对照组，大鼠雌雄各半，次日始灌胃给药。十天后，将动物处死剖检，取胃液测定胃蛋白酶活性，计算每只大鼠胃粘膜的损伤指数，各组间加以比较。损伤指数计算是参考Fringes B等人的标准，依粘膜损伤点的长度计算，其中：≤0.5mm为1分，≤1mm为2分，以此类推，损伤点宽度＞2mm或损伤深度达粘膜下层(溃疡)，指数加倍。实验结果显示，本发明胶囊可以明显降低胃粘膜的损伤指数，并可以降低胃蛋白酶的活性，说明本发明胶囊也可以通过抑制胃蛋白酶促进胃炎的愈合。
[0034] 2.本发明胶囊对胃粘膜的保护作用(对大鼠幽门结扎实验模型的影响) [0035] 本实验给予各组大鼠灌胃药物或水，10天后禁食48小时，在麻醉、无菌条件下操作，结扎大鼠幽门、关闭腹腔，术后禁食禁水18小时，麻醉处死、剖检，并测量每只大鼠之胃液量、胃蛋白酶活性、胃粘膜损伤指数，并分析比较(注：损伤指数计算同上实验1)。实验结果显示，本发明胶囊可以促进胃液分泌增加、降低胃蛋白酶活性、减少胃粘膜损伤，说明本发明胶囊具有保护胃粘膜的作用。
[0036] 3.本发明胶囊对大鼠实验性胃溃疡的促愈合作用
[0037] 本实验在大鼠造成胃溃疡术后第二天，开始喂药或水。全部大鼠每日给药一次，给药的容积为1ml/100克体重，给药方式为灌胃口服，给药时间为5～20天。检查药物促溃疡愈合作用方法：采用随机抽样杀检动物观察溃疡面积变化，各组动物分别于给药后的第5、l0、15、20天，切开胃壁检测溃疡面积、检测胃溃疡的愈合速度及溃疡面积愈合率。实验结果显示，各组动物的溃疡面积变化、各组溃疡愈合速度、溃疡愈合率，均以本发明胶囊的各剂量组为最佳，给水对照组则最差，说明本发明胶囊对大鼠实验性胃溃疡具有较好的促愈合作用。
[0038] 4.幽门螺旋菌对本发明胶囊的敏感实验
[0039] 4.1分离培养H.P：应用纤维镜取H.P阳性的胃粘膜标本，采用Skirrow选择性培养基，以布氏肉汤为基础，加6％脱纤维羊血，按下述浓度加入适量抗菌素：万古霉素2mg/L、多粘菌素B 2500lu/L、两性霉素2mg/L等抗菌素，在5％O2，、10％CO2和85％N2混合气体培养下，保持37℃，3～4天后培养出菌落。应用氧化酶试验、马尿酸水解试验、过氧化酶试验、尿素酶试验、1％甘氨酸生长试验、H2S产生试验(醋酸铅滤纸条法三糖铁培基)等 试验对H.P进行鉴定。
[0040] 4.2抗菌素和中药敏感性测定：(1)应用纸片法，以新霉素、利福平、先锋霉素、庆大霉素等20种抗菌素作对照，观察本发明胶囊对H.P的抑菌作用；(2)应用直接滴药法，观察本发明胶囊的抑菌作用。实验结果显示，本发明胶囊对幽门螺旋菌有一定的抑制作用，属于中度敏感，作用与痢特灵、呋喃坦丁、先锋霉素等抗菌素相似。
[0041] 5.本发明胶囊对离体免肠管的解痉镇痛试验
[0042] 本实验用木棒猛击家兔头部，将其击昏，立即开腹，取4～5cm肠一段，悬吊于麦氏浴槽中，与电动记纹鼓相连，麦氏浴槽置37℃之恒温水浴箱内，槽中充满37℃之Tyrode’s液，并有氧气通入约5％，分别于浴槽中加入不同药物，观测记纹鼓描记之不同波形，并加以分析。实验结果显示，(1)本发明胶囊对离体兔肠管因乙酰胆碱之致痉状态有缓解作用，说明其解痉镇痛之机理在于通过神经介质使平滑肌解痉，作用与阿托品相似；(2)本发明胶囊对离体兔肠管因氯化钡之致痉状态也有缓解作用，可以认为，本发明胶囊通过影响平滑肌本身的收缩机理，使其松弛，达到临床止痛作用，本发明胶囊的这一特点，是阿托品所不具备的。因此说明本发明胶囊的解痉止痛作用机理是通过神经介质和直接作用于平滑肌。 [0043] 6.本发明胶囊镇痛作用研究(对小鼠醋酸扭体试验)
[0044] 本实验将所试验动物随机分为本发明高剂量组、本发明低剂量组、阿托品阳性对照组和生理盐水空白对照组。分、下午两次灌胃给药，中间间隔6小时，末次给药后2小时，腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml，观察记录30分钟内各组动物扭体的次数，观察药物的止痛作用。实验结果显示，本发明胶囊具有止痛作用，与阿托品的止痛作用无明显差异，表现为小鼠醋酸扭体反应次数减少，其中以本发明胶囊高剂量表现明显。
[0045] 7.本发明胶囊对小鼠胃肠推进运动的影响
[0046] 本实验动物禁食20小时后，随机分为中药高剂量组、中药低剂量组、阿托品组和生理盐水空白对照组。分上、下午两次给药，中间间隔6小时，每次服药量为0.5ml，第二次给药后40分钟，经口给予炭末溶液0.2ml，给炭末后45分钟，用脱椎法处死小鼠，分离从贲门到直肠的全部胃肠道，分别测量胃肠道全长和贲门到炭末头端的长度，计算炭末在胃肠道排空推进的相对长度。实验结果显示，本发明胶囊有类似阿托品延缓胃肠道排空的作用，高剂量较低剂量作用则更为明显。
[0047] 8.本发明胶囊抗炎作用(对甲醛致大鼠足跖肿胀的影响)
[0048] 本实验将动物随机分为阳性对照组(阿司匹林)、本发明高剂量组、本发明低剂量组、 空白对照组(10只)。连续灌胃给药，每日2次共7天，第8天，先在容量测量器内测定每只大鼠两后足跖的体积做为基础，然后两足跖内都注射2.5％甲醛溶液0.1ml，分别在注射后1、3、5、7、24小时测定足跖的体积，并分别计算肿胀度和对肿胀的抑制率。实验结果显示，大鼠足跖在2.5％甲醛致炎后发生肿胀，在3小时达到肿胀高峰后逐渐降到致炎前的水平。本发明胶囊有抑制甲醛引起的大鼠跖肿胀的作用与阿司匹林作用相似，并以高剂量组作用强，低剂量组作用更为明显。
[0049] 9.本发明胶囊抗炎作用(对大鼠棉球肉芽肿的影响)
[0050] 本实验将试验动物随机分为阳性对照(阿司匹林组)、本发明胶囊高剂量组、本发明胶囊低剂量组和水对照组。戊巴比妥钠腹腔麻醉后，在无菌条件下，于左右两侧腋窝皮下各植入棉球一个，缝合切口，术后第二天，分别灌胃给药或水，每次2ml，分上、下午各喂药一次，第5天，杀死动物，剥出周围已包裹肉芽组织的棉球，分别称湿重，将棉球再放于60℃烘箱中放置12小时后，称干重，减去原棉球重即为肉芽肿净重，分别统计棉球湿重干重和肉芽肿净重，进行组间对照。
[0051] 实验结果显示，本发明胶囊有抑制大鼠棉球肉芽肿形成的作用，与阿司匹林作用相似，对棉球湿重、干重和肉芽肿净重都有不同程度的抑制作用。
[0052] 10.本发明胶囊抗炎作用(对小鼠耳二甲苯致炎作用的影响)
[0053] 本实验将试验动物随机分为阿司匹林组(阳性对照组)、本发明胶囊高剂量组、本发明胶囊低剂量组和水对照组。戊巴比妥钠腹腔麻醉后，在无菌条件下，于左右两侧腋窝皮下各植入棉球一个，缝合切口，术后第二天，分别灌胃给药或水，每次2ml，分上、下午各喂药一次，第5天，杀死动物，剥出周围已包裹肉芽组织的棉球，分别称湿重，将棉球再放于60℃烘箱中放置12小时后，称干重，减去原棉球重即为肉芽肿净重，分别统计棉球湿重干重和肉芽肿净重，进行组间对照。实验结果显示，本发明胶囊有抑制大鼠棉球肉芽肿形成的作用，与阿司匹林作用相似，对棉球湿重、干重和肉芽肿净重都有不同程度的抑制作用。 [0054] 11.本发明胶囊抗炎作用(对小鼠耳二甲苯致炎作用的影响)
[0055] 本实验将试验动物随机分为五组：本发明大剂量组、中剂量组、小剂量组、阿司匹林组(阳性对照组)、生理盐水组。分别给予各组动物灌胃药或生理盐水，每日一次，每次0.5ml，共三天，第四天上午给予喂药或水一次后半小时，给予每只小鼠左耳滴上100％二甲苯一滴(相当0.02ml)，15分钟时，将小鼠颈部椎脱臼致死，沿耳廓基线剪下两耳，用9mm直径打孔器分别在同一部位，打下园耳片，分析天平称重，每鼠左耳片重量减去右耳 重量，即为肿胀度，将对照组与给药组的肿胀度进行统计学处理。实验结果显示，本发明胶囊大、中、小三个剂量组对于二甲苯所致之小鼠耳炎症反应，均有显著消炎作用。
[0056] 12.本发明胶囊对动物免疫功能影响(对小鼠碳粒廓清的影响)
[0057] 本实验将试验小鼠随机分成五组：本发明胶囊大剂量组、中剂量组、中药小剂量组、水空白对照组、阳性对照组(三九胃泰)。分别给予药物和生理盐水，每日灌胃一次，每次1ml，给药后第5天，按0.2μl量从小鼠静脉注射稀释之印度墨汁，1分钟和10分钟分别从眼眶静脉取血20μl，加至4ml蒸馏水中摇匀(双管法)，用UV-120紫外可见光分光光度计在波长680nm下比色，测定光密度，按下式计算廓清指数k值。
[0058]
[0059] 进行组间对照t检验。碳粒廓清法可以反映单核巨噬细胞系统的吞噬功能，一个反映非特异性免疫功能的指标。从本试验结果可以看出，本发明胶囊有使k值增加，即促进单核巨噬细胞系统的吞噬功能的作用，并以大、中剂量明显，三九胃泰有增强功能之趋势但统计学差异不甚明显(p＜0.1)。
[0060] 13.本发明胶囊对动物免疫功能影响(对小鼠血清凝集素的影响)
