一种用于测定活化部分凝血活酶时间APTT的体外诊断试剂盒

摘要

本发明涉及一种临床检验中测定活化部分凝血活酶时间(APTT)的体外诊断试剂盒。它是由部分凝血活酶试剂、氯化钙溶液组成，用于检测内源凝血途径诸因子缺陷和相关抑制物的筛选试验，也是当前用于凝血因子、肝素抗凝治疗以及狼疮抗凝物质检测的主要手段。其优点在于部分凝血活酶试剂复溶后稳定时间长、重复性好，同时对于光学法、磁珠法血凝仪测定结果一致性较好，因此对大中小型医院均适用，使不同医院之间的检验结果之间具有可比性，对于推行检验报告“一单通”具有重要意义，为临床疾病诊治提供可靠的实验数据，提高血栓与止血基础研究的效率和价值。

权利要求

1.一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒，其特征在于，它是由部分凝血活酶试剂、0.025mol/L氯化钙溶液组成；所述部分凝血活酶试剂由下述原料制成：

活化剂0.25％，氯化钠3％，甘氨酸1.5％，脑磷脂25～40％，石炭酸2％，NaN3 1‰，余量为水，所述活化剂为白陶土，所述脑磷脂来源为兔脑粉。

说明书

一种用于测定活化部分凝血活酶时间APTT的体外诊断试

剂盒

技术领域：

[0001] 本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种临床检验中用于测定活化部分凝血活酶时间(APTT)的体外诊断试剂盒。背景技术：

[0002] 凝血实验对于临床各科的疾病诊断具有很大的意义，除了对出血性疾病的筛选与诊断外，还用于对各种血栓性疾病与血栓前状态的检查和预测；对凝血因子VIII、IX、XI缺乏即血友病甲、乙、丙和血管性血友病的试验诊断以及对各种抗凝治疗患者的用药指导和预后估计等。血栓与止血不仅涉及基础医学，且与多个临床学科(包括血液科、呼吸消化科、心血管科、神经科、妇产科、普通外科等)的疾病密切相关：1)所有手术前检查：外科手术、骨科手术、妇科手术等；检查病人出凝血机能，以免术中发生危险。2)监测抗凝及溶栓治疗：如肝素治疗、口服抗凝剂、华法令、香豆素、放射剂治疗等，减少临床治疗出血发生率。3)系统性红斑狼疮及一些免疫性疾病治疗。4)纤维蛋白原缺乏所致的出血倾向。5)先天及后天性凝血因子缺乏。6)妊娠高血压综合症。7)中医活血化瘀的诊疗研究。8)血浆因子抑制物测定。9)肾病综合症等。总之，在血液病、糖尿病、高脂血症、心脑血管病、肺梗死、外科手术治疗等领域的研究、诊断与治疗方面，血栓与止血检验均有重要意义。

[0003] 传统的凝血时间测定多采用玻片法、毛细血管法，操作也较简单，但由于采血过程中易混入较多组织液，因而即使有内源性凝血因子缺乏，也仍发生外源性凝血，使本该异常的结果变为正常，重复性及敏感性较差，血友病漏检率高达90％，对临床难以提供可信的结果；而通常使用的试管法，包括普通试管法和硅管法，也只是检查内在凝血系统某些因子的过筛试验，敏感性、准确性均比较差，仅能作为凝血障碍性疾病初筛时参考。此法对抗凝物质的监测效果较好，但对凝血物质缺乏的测定比较差，复钙试验也一样。以前用于测定个别因子缺乏的一些纠正试验以及所谓的凝血活酶生成试验，因操作繁琐，敏感性也不高而趋于淘汰。而活化部分凝血活酶时间(APTT)测定方法是公认较好的检测内源性凝血因子缺陷(如因子XI、VIII、IX、XII、激肽释放酶原[PK]、高分子量激肽酶[HMWK]以及纤维蛋白原等)的过筛试验，是目前判断内源性凝血因子缺乏最可靠、最常用、最敏感的筛选试验，同时也是监测肝素用量的首选指标。

[0004] 活化部分凝血活酶时间(APTT)延长常见于凝血因子XI、VIII、IX缺乏，最常见的疾病是血友病，其中最著名的病例就是十九世纪发生在英国皇室成员身上的出血性疾病，其病因就是由于患者体内内源性凝血因子XI、VIII或IX缺乏或缺陷。实际上，在人群中血友病的患者并不少见，目前我国的发病率在2.5～2.9/10万人口，只是有时这类疾病可能很轻微，无明显的自发出血或轻微外伤后无过多的出血，不易引起重视，但这类病人多于手术后发生深部组织严重出血不止，而且压迫止血或用药物止血效果均不佳。轻者影响患者预后，重者则会造成病人生命危险。用APTT测定可以检出95％的血友病患者，且方法简单快速。APTT延长还见于严重的因子X、V、凝血酶原、纤维蛋白原缺乏症，纤溶活力增强，血循环中有抗凝物质存在时，APTT也延长。APTT缩短则主要见于因子VIII、V活性增高、DIC高凝期、血栓性疾病(如心肌梗塞、脑血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成等)、血小板增多症等。

[0005] 由于实验室使用APTT试剂质量上的不同，使得同一个患者在不同医院测定的结果相差悬殊，造成检测结果的不一致，影响对疾病的正确、及时诊断。因此，APTT试剂的质量成了获得准确结果及诊断的关键。同时，由于试剂的稳定性差，增加浪费，导致医疗单位成本增加，患者负担加重。所以研制一种安全、可靠、准确、稳定的APTT试剂，无疑将对临床诊断疾病有重要作用。发明内容：

[0006] 本发明的目的是为了提供一种检测内源性凝血因子缺陷、肝素抗凝治疗及狼疮抗凝物质的体外诊断试剂。

[0007] 为解决上述技术问题，本发明是这样实现的：

[0008] 一种临床检验中测定活化部分凝血活酶时间(APTT)的体外诊断试剂盒，其特征在于它是由部分凝血活酶试剂、0.025mol/L氯化钙溶液组成。

[0009] 部分凝血活酶试剂由下述原料制成：

[0010] 活化剂0.01～0.3％，氯化钠0.5～10％，甘氨酸1～3％，

[0011] 脑磷脂25～40％，石炭酸1.5～4％，NaN31‰，余量为水。

[0012] 该部分凝血活酶试剂中的活化剂可选自白陶土、鞣花酸、硅藻土中的任一种，优选为白陶土。

[0013] 该部分凝血活酶试剂中活化剂的最适含量应选为0.25％；

[0014] 该部分凝血活酶试剂中氯化钠的最适含量应选为3％；

[0015] 该部分凝血活酶试剂中甘氨酸的最适含量应选为1.5％；

[0016] 该部分凝血活酶试剂中石炭酸的最适含量应选为2％；

[0017] 该部分凝血活酶试剂中脑磷脂的来源是兔脑粉。

[0018] 本发明相比现有技术具有如下优点：

[0019] 1.本发明通过兔脑粉提取脑磷脂，并用独特的配制方法调节和稳定脑磷脂活性以及调节脑磷脂和活化剂的最适比例，使APTT试剂的稳定性较好，在部分凝血活酶试剂复溶后37℃条件下能够稳定十天，在产品的重复性、稳定性上优于一般的市售产品。因此，对于各级医院来说，使用方便、节省时间、减少浪费并降低医疗成本。

[0020] 2.适用面广，对于光学法、磁珠法原理的血凝仪测定结果一致性好，具有很好的兼容性，使不同医院的检验结果之间具有可比性，对于推行检验报告“一单通”具有重要意义。

[0021] 本发明的具体实施方式将在以下部分阐述。本发明的其他特点、目的和优势将通过以下阐述得以彰显。具体实施方式：

[0022] 本发明的设计是由部分凝血活酶试剂、0.025mol/L氯化钙溶液组成。本发明还将结合实例作进一步详述：

[0023] 实施例1本发明试剂盒的应用

[0024] 1.检测原理

[0025] 待测血浆加入部分凝血活酶溶液，在Ca2+参与下纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)。

[0026] 2.检测步骤

[0027] 部分凝血活酶试剂用一定体积的蒸馏水轻摇溶解成悬液，置37℃预温。以太平洋TS400C血凝仪为例，操作步骤如表1：

[0028] 表1

[0029]

[0030] 其它血凝仪测定时，按照相应的仪器说明书提供的参数操作。

[0031] 实施例2与市售APTT试剂重复性比较

[0032] 将1g用丙酮脱水的兔脑粉加入20ml提取液(氯仿)中，将混合液置于恒温搅拌器上搅拌3个小时，倒入沙芯漏斗中过滤，用循环水式真空泵将滤液中的氯仿全部抽取掉，以提取脑磷脂(部分凝血活酶)。将脑磷脂用蒸馏水溶解，与下述原料混合溶解：活化剂0.01～0.3％、氯化钠0.5～10％、甘氨酸1～3％、石炭酸1.5～4％、NaN31‰，搅拌均匀，分装后冷冻干燥。

[0033] 使用时，部分凝血活酶试剂冻干品用一定体积的蒸馏水复溶，同一正常质控血浆(APTT值：25～45秒)活化部分凝血活酶时间(APTT)在太平洋TS400C血凝仪上测得，见表2。

[0034] 表2表明，本发明所讲的APTT试剂与市售试剂相比，变异系数(CV)较小，重复性较好。

[0035] 表2

[0036]

[0037] 实施例3与市售APTT试剂稳定性比较

[0038] 部分凝血活酶试剂冻干品用一定体积的蒸馏水复溶，然后将复溶后试剂置于37℃保存。在太平洋TS400C血凝仪上测定同一正常质控血浆(APTT值：25～45秒)，市售试剂同步进行测定，见表3。

[0039] 表3表明，本发明的APTT试剂连续测定十天结果仍较稳定，而市售试剂在第三天时就开始变化，这一结果对临床检验科来说非常重要，因为它可以减少浪费，从而降低成本。

[0040] 表3

[0041]

[0042] 实施例4与市售APTT试剂在光学法

[0043] 和磁珠法血凝仪上测定结果的比较

[0044] 部分凝血活酶试剂冻干品用一定体积的蒸馏水复溶，分别在光学法和磁珠法血凝仪上测定同一正常质控血浆(APTT值：25～45秒)，重复测定10次，计算均值(X)，进行统计学分析，采用t检验比较两者的差异，见表4。

[0045] 经统计分析，本发明所讲的APTT试剂在光学法和磁珠法血凝仪上测定结果比较：P＞0.05，无显著性差异，结果基本一致，具有很好的兼容性，相比之下，市售试剂：P＜0.01，差异非常显著，兼容性欠佳。

[0046] 表4光学法与磁珠法血凝仪上测定结果比较