复方沙棘籽油在制药中的新用途

摘要

本发明公开了复方沙棘籽油在制药中的新用途，即复方沙棘籽油在制备用于宫颈糜烂物理治疗后创伤面的修复及宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生的药物中的用途。经药效学试验研究表明：复方沙棘籽油栓对化学灼伤和生物因子感染致动物阴道及宫颈炎模型有一定的治疗作用，对宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生病有治疗作用，可提示复方沙棘籽油栓对于宫颈糜烂治疗的临床前有效性以及用于宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生的临床前有效性。

权利要求

1.复方沙棘籽油在制备用于宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生的药物中的用途。

2.按照权利要求1所述复方沙棘籽油的用途，其特征在于：所述的复方沙棘籽油是由沙棘籽油400-600g、蛇床子130-180g、苦参60-100g、炉甘石140-160g、乳香35-60g、没药

35-60g和冰片15-25g制成的药剂。

3.按照权利要求1或2所述复方沙棘籽油的用途，其特征在于：所述的复方沙棘籽油是由沙棘籽油500g、蛇床子150g、苦参80g、炉甘石150g、乳香50g、没药50g和冰片20g制成的栓剂。

4.按照权利要求3所述复方沙棘籽油的用途，其特征在于：所述的复方沙棘籽油栓剂经以下步骤制备而成：取蛇床子、苦参、炉甘石、乳香、没药五味粉碎成细粉；取冰片研细，与上述粉末配研，混匀；另取甘油明胶基质1550g，置75℃水浴中加热熔融，加入相同温度的沙棘籽油和水150ml，迅速乳化至呈粘稠胶状，加入上述粉末，混匀，待气泡消失即浇注栓模中，冷却，制粒，即得。

说明书

复方沙棘籽油在制药中的新用途

[0001] 技术领域：本发明涉及复方沙棘籽油在制药中的新用途，特别是复方沙棘籽油在制备用于宫颈糜烂物理治疗后创伤面的修复及宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生的药物中的用途，属于中药技术领域。

[0002] 背景技术：宫颈糜烂是慢性宫颈炎最常见的一种病理改变，是由于炎症刺激，宫颈表面的被覆上皮细胞脱落，而下方的柱状上皮细胞向外突出，代替了脱落的被覆上皮；因柱状上皮的毛细血管显露，使炎症区呈鲜红色，故称为宫颈糜烂。糜烂面为完整的宫颈管单层柱状上皮所覆盖，因柱状上皮菲薄，其下间质透出呈红色，并非真性糜烂，真性糜烂病理学指上皮脱落溃疡。

[0003] 宫颈糜烂物理治疗后的创伤面是指宫颈糜烂经手术或物理治疗后留下的创伤，服用一定的药物后可提高创伤面恢复和愈合的速度，国内目前还没有具有这种作用的药品。

[0004] 宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生与宫颈糜烂不同，宫颈上皮内瘤样病变也称宫颈不典型增生，是指宫颈上皮细胞部分或大部分发生异形和不典型的分化。宫颈不典型增生可以发生于宫颈外口或移行带或宫颈内膜表面。宫颈原位癌是指宫颈不典型增生累及鳞型上皮全层，但未突破基底膜，未侵犯间质，病变局限在鳞型上皮层内。宫颈上皮内瘤样病变(CIN)患者一般不表现明显症状，或仅有一般宫颈炎的症状，如白带增多，也有主诉白带带血或性接触后少量阴道流血等。妇科检查可见宫颈光滑，无明显炎症，或有宫颈充血或糜烂，糜烂程度不等，范围也不同，触之有时易出血，与一般慢性宫颈炎无明显区别。宫颈上皮内瘤样病变(CIN)的具体分型为：1.宫颈不典型增生-宫颈上皮细胞部分或大部分被不同的异型细胞所替代。根据细胞异型程度及上皮累及范围，分为轻、中、重三度。(1)轻度不典型增生(CIN I级)-细胞异型性轻，异型细胞仅占上皮层的下1/3；(2)中度不典型增生(CIN II级)-细胞异型性明显，异型细胞限于上皮层的下2/3；(3)重度不典型增生(CIN III级)-细胞异型性显著，异型细胞几乎累及或全部累及上皮层。其中I级、II级一般可以通过药物治疗，而III级需要手术治疗。

[0005] 复方沙棘籽油制剂是以沙棘籽油、蛇床子、苦参、没药等组方，具有清热燥湿、杀虫止痒、消肿止痛、活血生肌的功效。其中复方沙棘籽油栓(专利号为02114512.1的专利)属于国家中药三类新药，主要用于治疗妇女湿热下注所致的宫颈糜烂、阴道炎。申请人经过进一步的试验研究和探索，发现复方沙棘籽油制剂不仅能用于治疗妇女湿热下注所致的宫颈糜烂、阴道炎，还有新的药物用途，即用于宫颈糜烂物理治疗后创伤面的修复及宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生的治疗，而目前为止还没有与此相关的报道。发明内容：

[0006] 本发明的目的在于提供复方沙棘籽油在制药中的新用途，即复方沙棘籽油在制备用于宫颈糜烂物理治疗后创伤面的修复及宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生的药物中的用途。

[0007] 本发明的技术方案：复方沙棘籽油在制备用于宫颈糜烂物理治疗后创伤面的修复及宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生的药物中的用途。

[0008] 所述的复方沙棘籽油是由沙棘籽油400-600g、蛇床子130-180g、苦参60-100g、炉甘石140-160g、乳香35-60g、没药35-60g和冰片15-25g制成的药剂。

[0009] 优选的复方沙棘籽油是由沙棘籽油500g、蛇床子150g、苦参80g、炉甘石150g、乳香50g、没药50g和冰片20g制成的栓剂。

[0010] 所述的复方沙棘籽油栓剂经以下步骤制备而成：取蛇床子、苦参、炉甘石、乳香、没药五味粉碎成细粉；取冰片研细，与上述粉末配研，混匀；另取甘油明胶基质1550g，置75℃水浴中加热熔融，加入相同温度的沙棘籽油和水150ml，迅速乳化至呈粘稠胶状，加入上述粉末，混匀，待气泡消失即浇注栓模中，冷却，制粒，即得。具体实施方式：

[0011] 下面将通过复方沙棘籽油栓剂的制备和对其进行的临床前药效学试验来进一步阐述本发明。

[0012] 一、复方沙棘籽油栓的制备

[0013] 取蛇床子150g、苦参80g、炉甘石150g、乳香50g和没药50g粉碎成细粉；另取冰片20g研细，与上述粉末配研，混匀；另取甘油明胶基质1550g，置75℃水浴中加热熔融，加入相同温度的沙棘籽油500g和水150ml，迅速乳化至呈粘稠胶状，加入上述粉末，混匀，待气泡消失即浇注栓模中，冷却，制粒，即得复方沙棘籽油栓。

[0014] 用法用量：阴道用药。宫颈糜烂，宫颈上皮内瘤样病变在月经干净后开始用药；宫颈糜烂物理治疗后3天用药。洗净外阴部，将栓剂塞入阴道深处。每晚1粒，每日或隔日一次，6次为一疗程。

[0015] 二、复方沙棘籽油栓用于宫颈糜烂物理治疗后创伤面的修复及宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生的药效学研究

[0016] 1、对于宫颈糜烂物理治疗后创伤面的修复的临床前主要药效学试验[0017] 1.1对苯酚胶浆致大鼠阴道及宫颈炎模型动物的治疗作用

[0018] 实验材料

[0019] 动物：SD雌性大鼠，体重170-200g，合格证陕医动字第08-25号，由陕西中医药研究院实验动物中心提供。

[0020] 试剂：25％苯酚胶浆：液化苯酚5ml，西黄嗜胶1g，甘油4ml，加蒸馏水至20ml即成。

[0021] 实验药物：复方沙棘籽油栓由陕西海天制药有限公司提供，国药准字Z19991076，批号20060612。规格：每粒重2.7g。用法用量：阴道给药，每晚1粒，6次为一疗程。

[0022] 阳性药：宫颈炎康栓由广西康化药业有限公司提供，国药准字Z20010065，批号20060509。规格：每粒重1.2g。用法用量：阴道给药，每晚1粒，10次为一疗程。

[0023] 实验方法及结果

[0024] 取SD雌性大鼠48只，随机分为空白组(等容量赋型剂，用棉球适当堵塞)、模型组、阳性药宫颈炎康栓组(0.4g/kg，临床的20倍)、复方沙棘籽油栓0.225、0.45、0.9g/kg组(相当于临床用量的5、10、20倍)，每组8只。每鼠阴道内注入0.1ml/100g体重苯酚胶浆，每天1次，连续3次成模，正常组注射等体积蒸馏水，肉眼可见用苯酚胶浆后大鼠阴道口红肿、有的有脓性物流出，然后各组动物从阴道给药(用棉球适当固定)分别给予相应的药物，连续7天。末次药后1小时，常规麻醉，取阴道及宫颈称重，计算脏器指数，见表1。再取一块组织备检，用10％福尔马林固定，进行病理组织学检测。

[0025] 病理组织评分标准：

[0026] 1)粘膜：0分：未见明显变性坏死、脱落及溃疡；1分：可见轻度变性坏死、脱落及糜烂；2分：可见明显变性坏死、脱落及溃疡；3分：可见大量变性坏死、脱落及糜烂。

[0027] 2)粘膜下层血管扩张充血：0分：粘膜下层未见明显扩张血管；1分：粘膜下层可见轻度扩张血管；2分：粘膜下层可见明显扩张血管；3分：粘膜下层较多增生的血管扩张。

[0028] 3)粘膜下层炎细胞浸润：0分：未见明显炎细胞浸润：1分：可见轻度炎细胞浸润；2分：可见明显炎细胞浸润；3分：可见大量的炎细胞浸润。

[0029] 4)脓肿存在状态：0分：有脓肿存在；1分：无脓肿形成。

[0030] 结果见表2。

[0031] 表1对阴道及宫颈炎模型大鼠体重、阴道及宫颈动物重量的影响(X±SD)[0032]

[0033] 表2对苯酚胶浆致大鼠阴道及宫颈炎模型的治疗作用(X±SD)

[0034]

[0035] 注：表1、2与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

[0036] 表1可见，试验前后大鼠体重无明显差异，阳性组及复方沙棘籽油栓三个剂量组的阴道及宫颈脏器指数明显低于模型组；表2可见，粘膜上皮层病变：阳性，空白对照，复方沙棘籽油栓大、中剂量给药组与模型组均存在明显差异；粘膜固有层充血水肿：阳性，空白对照，复方沙棘籽油栓大、中剂量给药组与模型组均未见明显差异；粘膜固有层炎细胞浸润程度：阳性，空白对照，复方沙棘籽油栓大、中剂量给药组与模型组均存在明显差异；粘膜下存在脓肿改变：阳性，空白对照，复方沙棘籽油栓大、中剂量给药组与模型组存在明显差异。

[0037] 小结

[0038] 结果表明，复方沙棘籽油栓各剂量组阴道和宫颈的重量指数降低，病理损伤好转，与模型组比较P＜0.05～0.01。提示复方沙棘籽油栓对苯酚胶浆致大鼠阴道及宫颈炎模型有一定的治疗作用。

[0039] 1.2对金黄色葡萄球菌致阴道及宫颈炎模型动物的治疗作用

[0040] 实验材料

[0041] 动物：SD雌性大鼠，体重170-200g，合格证陕医动字第08-25号，由陕西中医药研究院实验动物中心提供。

[0042] 金黄色葡萄球菌：每毫升10亿个。

[0043] 实验药物：复方沙棘籽油栓由陕西海天制药有限公司提供，国药准字Z19991076，批号20060612。规格：每粒重2.7g。用法用量：阴道给药，每晚1粒，6次为一疗程。

[0044] 阳性药：宫颈炎康栓由广西康化药业有限公司提供，国药准字Z20010065，批号20060509。规格：每粒重1.2g。用法用量：阴道给药，每晚1粒，10次为一疗程。

[0045] 实验方法及结果

[0046] 取SD雌性大鼠48只，随机分为空白组(等容量赋型剂，用棉球适当堵塞)、模型组、阳性药宫颈炎康栓组(0.4g/kg，临床的20倍)、复方沙棘籽油栓0.225、0.45、0.9g/kg组(相当于临床用量的5、10、20倍)，每组8只。每鼠阴道内黏膜下注射2个点，每点0.2ml，每天1次，连续3次成模，空白组注射等体积生理盐水。肉眼可见用金黄色葡萄球菌的大鼠阴道口红肿、有的有脓性物流出，然后各组动物从阴道给药(用棉球适当固定)分别给予相应的药物，连续7天。末次药后1小时，麻醉，颈静脉取血测血常规，观察白细胞及分类，结果见表3；处死动物，取阴道及宫颈称重计算重量指数，结果见表4；再取一块组织备检，用10％福尔马林固定，进行病理组织学检测，评分标准同试验1.1，结果见表5。

[0047] 表3对白细胞、淋巴及中性细胞的影响(X±SD)

[0048]

[0049] 表4对阴道及宫颈炎模型大鼠体重、阴道及宫颈动物重量的影响(X±SD)[0050]

[0051] 表5对金黄色葡萄球菌致大鼠阴道及宫颈炎模型的治疗作用(X±SD)[0052]

[0053] 注：表3、4、5与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

[0054] 表3可见，赋性剂组、阳性组及复方沙棘籽油栓三个剂量组的白细胞总数明显低于模型组；表4可见，试验前后大鼠体重无明显差异，阳性组及复方沙棘籽油栓三个剂量组的阴道及宫颈脏器指数明显低于模型组；表5可见，粘膜上皮层病变：阳性，空白对照，复方沙棘籽油栓大、中、小剂量给药组与模型组均存在明显差异；粘膜固有层充血水肿：空白对照组与模型组存在明显差异；粘膜固有层炎细胞浸润程度：阳性，空白对照，复方沙棘籽油栓大、中、小剂量给药组与模型组均存在明显差异；粘膜下存在脓肿改变：阳性，空白对照，复方沙棘籽油栓大、中剂量给药组与模型组均存在明显差异。

[0055] 小结

[0056] 结果表明，复方沙棘籽油栓各剂量组白细胞总数、阴道和宫颈重量指数降低，病理损伤好转，与模型组比较P＜0.05～0.01。提示复方沙棘籽油栓对金黄色葡萄球菌致大鼠阴道及宫颈炎有一定的治疗作用。

[0057] 综上药效学试验，采用两种阴道及宫颈炎模型观察了复方沙棘籽油栓对阴道内注射金黄色葡萄球菌致大鼠阴道及宫颈炎模型的治疗作用以及对阴道内注射苯酚胶浆致大鼠阴道及宫颈炎模型的治疗作用，观察了复方沙棘籽油栓对脏器指数、病理组织学、白细胞及分类的影响，结果表明，复方沙棘籽油栓对化学灼伤和生物因子感染致动物阴道及宫颈炎模型有一定的治疗作用。提示复方沙棘籽油栓对于宫颈糜烂治疗的临床前有效性。

[0058] 2、对于宫颈上皮内瘤样病变轻、中度不典型增生的临床前主要药效学试验[0059] 宫颈上皮内瘤样病变(CIN)包括宫颈不典型增生与宫颈原位癌，病变的形成受多种因素影响，个体差异也很大，目前尚未报道在动物上造成CIN模型。考虑本发明所述的复方沙棘籽油栓主要治轻中度CIN，而轻中度CIN与炎性增生难以区别，临床上一般只须对症治疗不用作处理。另外，C1N宫颈上皮有丝分裂增加。所以，申请人进行两项实验：(1)对小鼠阴道粘膜基底细胞有丝分裂的影响试验；(2)对大鼠增生性炎症的影响试验。虽然不能造成CIN动物模型直接观察复方沙棘籽油栓对CIN的治疗作用，但以上两项试验可对临床验证复方沙棘籽油栓的有效性有提示作用。

[0060] 2.1对小鼠阴道粘膜基底细胞有丝分裂的影响

[0061] 实验材料

[0062] 动物：ICR雌性小鼠，体重18-22g，合格证陕医动字第08-24号，由陕西中医药研究院实验动物中心提供。

[0063] 试剂：乙烯雌酚注射液，上海通用药业股份有限公司生产，批号050101。

[0064] 实验药物：复方沙棘籽油栓由陕西海天制药有限公司提供，国药准字Z19991076，批号20060612。规格：每粒重2.7g。用法用量：阴道给药，每晚1粒，6次为一疗程。

[0065] 阳性药：郁金银屑片由西安正大制药有限公司生产，国药准字Z61021428，批号20050813。规格：片重0.24g。用法用量：口服，1次3-6片，1日2-3次，人用量0.072g/kg，文献报道郁金银屑片可抑制小鼠阴道粘膜基底细胞有丝分裂。

[0066] 选健康ICR小鼠60只，雌性，体重18-22g，随机分为6组，每组10只。第一组正常对照组，灌胃去离子水10ml/kg，第二六组均腹腔注射乙烯雌酚0.2mg/只，每天1次，连续3天。并且第二组灌胃去离子10ml/kg，为模型对照组，第三组灌胃郁金片1.296g/kg，为阳性对照组，第四六组分别从阴道给复方沙棘籽油栓(用棉球适当固定)1.35、0.675、0.3375g/kg(相当于临床用量的30、15、7.5倍)。连续7天。第7日给药后4小时，脱颈处死小鼠，取小鼠阴道组织，经10％福尔马林固定，取材，常规石蜡包埋，连续切片，厚度5μm，HE染色，用LEICA生物显微镜进行观察，光镜计数300个小鼠阴道基底细胞中所出现的有丝分裂数，换算成每100个基底细胞的有丝分裂数，见表6。

[0067] 表6对小鼠动物模型阴道上皮细胞有丝分裂数影响(X±SD)

[0068] 药物 例数 有丝分裂数

[0069] 空白对照组 10 0.96±1.09**

[0070] 模型对照组 10 6.74±2.57

[0071] 郁金银屑片阳性对照组 10 2.15±1.95**

[0072] 复方沙棘籽油栓大剂量组 10 2.22±2.22**

[0073] 复方沙棘籽油栓中剂量组 10 2.19±2.33**

[0074] 复方沙棘籽油栓小剂量组 10 4.59±2.56

[0075] 注：与模型对照组比较，*代表P＜0.05，**代表P＜0.01。

[0076] 表6可见，小鼠动物模型阴道上皮细胞有丝分裂数，空白对照组、郁金银屑片阳性对照组、复方沙棘籽油栓大、中剂量组与小剂量组均明显小于模型对照组。

[0077] 小结

[0078] 结果表明，复方沙棘籽油栓大中剂量可抑制小鼠阴道粘膜基底细胞有丝分裂，提示复方沙棘籽油栓有一定的抑制阴道粘膜基底细胞有丝分裂的作用。

[0079] 2.2对大鼠棉球肉芽肿增生的影响

[0080] 动物：SD雌性大鼠，体重170-200g，合格证陕医动字第08-25号，由陕西中医药研究院实验动物中心提供。

[0081] 试剂：25％苯酚胶浆：液化苯酚5ml，西黄嗜胶1g，甘油4ml，加蒸馏水至20ml即成。

[0082] 实验药物：复方沙棘籽油栓由陕西海天制药有限公司提供，国药准字Z19991076，批号20060612。规格：每粒重2.7g。用法用量：阴道给药，每晚1粒，6次为一疗程。

[0083] 阳性药：宫颈炎康栓由广西康化药业有限公司提供，国药准字Z20010065，批号20060509。规格：每粒重1.2g。用法用量：阴道给药，每晚1粒，10次为一疗程。

[0084] 取SD大鼠50只，分为5组，每组10只。空白组(等容量赋型剂，用棉球适当堵塞)、阳性药宫颈炎康栓组(0.4g/kg，临床的20倍)、复方沙棘籽油栓0.225、0.45、0.9g/kg组(相当于临床用量的5、10、20倍)。各组大鼠均用乙醚麻醉，剪去大鼠腹股沟处毛，用碘酒及酒精消毒后，作一横切口，直径约为10mm，用血管钳将皮肤组织分离至肌筋膜，然后用镊子轻轻拉开切口，将20mg消毒的棉球埋入切口，最后用0号线缝合二针，以防脱落，手术当日肌肉注射青霉素钠4000单位，连续4天，以防感染，手术第二日开始给药，共7天，第8天，将大鼠剪头放血处死，用手术剪刀和镊子把肉芽组织剥离，细心地将附在肉芽上的血痂和肌筋膜分离干净，用电子天平称重，所得重量减去原棉球重量20mg，即得肉芽肿湿重，结果见表7，组间比较，t检验。

[0085] 表7对大鼠棉球肉芽肿形成的影响(X±SD)

[0086] 组别 剂量g/kg 动物数 肉芽湿重(mg) P值

[0087] 对照组 - 10 414.0±67.19

[0088] 阳性对照组 0.4 10 374.0+49.26 ＜0.05