一种丹参丹酚酸A的制备方法

摘要

本发明公开了一种丹参丹酚酸A的制备方法，其特征在于采用一定的方法将丹参中总酚酸转化成丹酚酸A，大大提高了丹酚酸A的提取率，将丹参丹酚酸A制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂、滴丸剂、口服液，药理实验表明，具有很好的药理作用。

权利要求

1.一种丹参丹酚酸A的制备方法，其特征在于：

丹参丹酚酸A提取：

方法1：丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至3.5-6.0、110-130℃温度，加热1-6小时，溶液进行过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

方法2：丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至3.5-6.0、110-130℃温度，加热1-6小时，溶液进行过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，先用水、10-30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30-70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物。

2.根据权利要求1所述的一种丹参丹酚酸A的制备方法，其中所述大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。

说明书

一种丹参丹酚酸A的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及医药、保健食品技术领域，具体涉及一种丹参丹酚酸A的制备方法。

背景技术

[0002] 丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参的根。味苦、性微寒，丹参是最常用的药材之一，用于治疗心绞痛、高血压、冠心病和中风等心脑血管疾病，具有活血化瘀、养血安神、凉血排痈和排毒生肌的功效，是中药活血化瘀的常用药味。

[0003] 丹参的化学成分主要可分为水溶性成分和脂溶性成分，丹参水溶性成分多具有酚酸性结构，即丹酚酸A、B、C、D、E等有效成分，丹参总酚酸中以丹酚酸B含量最高，因此，人们开发的重点集中于丹酚酸B，而含量较低、活性较强的丹酚酸A(salvianolic acid A)因为无法进行工业化生产被人们忽略。查阅文献，我们可以得知丹参中丹酚酸A的含量在万分之五左右，因此，即使通过一系列的方法将其提取出来，只能得到微量的丹参丹酚酸A，将其应用于临床中，因为其价格太高而不能被患者接受；但丹参丹酚酸A具有很好的药理活性，可以应用于药品、保健食品中，因此，很多医药工作者希望将丹酚酸A进行工业化生产，开发为成药制剂。

[0004] 现有文献和专利中公开了丹参丹酚酸A提取纯化的工艺方法，虽然能够得到丹参丹酚酸A，但其重点都放在如何将丹参丹酚酸A与杂质的分离上，其提取率很低，无法在工业化生产中实现，也无法得到“成药”级的丹参丹酚酸A，这是摆在很多科研工作者面前的一道难关。

发明内容

[0005] 基于上述原因，我们通过长期的研究发现，将丹参总酚酸提取出来以后，在一定条件下，可以将丹参总酚酸转化成丹参丹酚酸A，从而大大提高了丹参丹酚酸A的提取率，其提取率可以达到1％-2％，在解决了提取率的基础上，对丹酚酸A的制剂制备也迎刃而解。

[0006] 本发明在于提供一种提高丹参丹酚酸A提取率的工艺方法；

[0007] 本发明还在于提供一种含有丹参丹酚酸A制剂的制备方法。

[0008] 本发明通过以下技术方案实现的。

[0009] 一.工艺方法

[0010] 丹参丹酚酸A提取：

[0011] 方法1：丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至3.5-6.0、110-130℃温度，加热1-6小时，溶液进行过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0012] 方法2：丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至3.5-6.0，放入微波提取器，频率为915MHz-2450MHz、功率为1000-15000瓦的微波提取0.5-2小时，提取液过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0013] 方法3：丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至3.5-6.0、110-130℃温度，加热1-6小时，溶液进行过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，先用水、10-30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30-70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0014] 方法4：丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至3.5-6.0，放入微波提取器，频率为915MHz-2450MHz、功率为1000-15000瓦的微波提取0.5-2小时，提取液过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，先用水、10-30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30-70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0015] 其中所述大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。

[0016] 含有丹参丹酚酸A提取物为活性成分的药物组合物。

[0017] 制剂制备：取上述丹参丹酚酸A，按照片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂、滴丸剂、口服液药剂学常规要求制备成制剂。

[0018] 本申请制备的固体制剂进行溶出度实验，在45分钟时溶出度达到80％以上。

[0019] 二.检测方法

[0020] 实验方法：

[0021] 色谱柱：C18反相色谱柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS；

[0022] 色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min；柱温35℃；检测波长286nm；理论板数按丹酚酸A计应不低于60000；以乙腈-0.2％醋酸水溶液为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱，运行90分钟；

[0023] 0-15分钟时，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分钟时，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％；55-65分钟时，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分钟时，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分钟时，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分钟时，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分钟时，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10∶90的比例进行洗脱；

[0024] 对照品溶液的配制：精密称取丹酚酸A对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；

[0025] 样品溶液的配制：取样品，加入甲醇溶解摇匀；或精密量取或称取制剂，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；

[0026] 测定法：精密吸取对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图；精密吸取样品溶液，注入液相色谱仪，计算峰面积比。

[0027] 三.提取率实验

[0028] 实验方法：取丹参药材，按照上述检测分析实验方法，测定丹参丹酚酸A含量，分成六等份，一份按照传统工艺方法(中国专利CN1397276A，方案1)得到丹参丹酚酸A提取物，一份按照工艺方法(中国专利CN1830947，方案2)，另外四份分别按照本申请工艺方法(依次为方案3-6)得到丹参丹酚酸A提取物，按照上述检测分析实验计算丹参丹酚酸A提取物中丹酚酸A重量，根据丹酚酸A重量计算不同工艺方法的提取率，实验结果见表1：

[0029] 表1不同工艺方法丹酚酸A的提取率

[0030]

[0031] 实验结论：通过上述实验表明，本申请工艺方法得到丹酚酸A的提取率比现有技术中丹酚酸A的提取率提高了100多倍，这只通过简单的提取纯化工艺是无法实现的，必须通过一定的转化将丹参总酚酸转化成丹酚酸A，才能从根本上提高丹酚酸A的提取率。

[0032] 四.药理实验

[0033] 实验1

[0034] 1.对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

[0035] 实验方法：

[0036] 取健康SD大鼠，体重240-260g，随机分组：空白对照组、复方丹参片组、本申请丹参丹酚酸A固体制剂组。置于相同环境预饲养2天，自由饮食。预饲养结束后，进行试验，动物称重，20％乌拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉满意后，仰卧固定于鼠板上，气管插管，接呼吸机，按10～12ml潮气量，70次/分的频率给予呼气，持续正压呼吸，吸∶呼比为1∶1。根据呼吸频率及深度调整呼吸参数。随后接心电图机，测正常心电图。剪去胸前手术区毛，碘酒消毒，剪开皮肤、皮下组织、胸前肌肉及筋膜3～4cm，用18#血管钳沿第三肋间钝性分离肋间肌3cm长，打开胸腔及心包膜，记录心电图，撑开3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右侧胸腔，助手用眼科镊将胸腺向上推，在左心耳与肺动脉圆锥之间找到结扎标志血管左冠状静脉，在左心耳下方2mm处用无创小圆针带6-0丝线穿线，进针深度为1～1.5mm，宽
2～3mm，穿线后记录心电图，经尾静脉给予相应药液，给药10min后记录心电图，并用一带凹槽的小塑料管垫在结扎部位，两端线头在其上结扎。结扎后即刻记录心电图，以左室前壁呈紫绀或II导联S-T段弓背向上抬高大于0.1mv并持续0.5h以上为结扎成功标志(S-T段无改变者淘汰)。结扎后10min再次记录心电图，结扎30min后剪开结扎线，实现再灌注，并记录再灌注即刻心电图，清除胸腔内积血后逐层缝合胸壁，撤呼吸机，动物恢复自主呼吸，气管切口不做处理。再灌即刻、10min、20min、40min、1h、2h、3h分别记录心电图。将心脏在冰箱中冷冻10min后，自心尖向心底平行房室沟方向将左室切成相等厚度的5片，放入1％TFC染液中，37℃染色10min，未坏死区为暗红色，坏死区呈灰白色。数码相机拍照。将坏死区和非坏死区分别称重，计算坏死区占左心室重量的百分比，即梗死范围。

[0037]

[0038] 注：与空白对照组比较，**P＜0.01；与阳性复方丹参片组比较#P＜0.05[0039] 实验2

[0040] 对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤保护作用的研究

[0041] 实验方法：

[0042] 动物随机分组：空白对照组、复方丹参片组、本申请丹参丹酚酸A制剂组。各剂量组连续灌胃给药3天，第4天药后20分钟用改良线栓法制成大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。大鼠麻醉后，将其仰卧固定。分离右侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA)，结扎ECA与CCA，用动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于ECA与ICA分叉处作一切口，插入一端加热成光滑球形并涂了0.1％多聚赖氨酸的尼龙线(直径为0.25mm，距球端18mm处作标记，插入前沾肝素溶液)，插入深度为18mm，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。结扎入口处，尼龙线外留约1cm，缝合皮肤。2小时后轻轻提拉所留线头至略有阻力，实现大脑中动脉再灌注，造模完成。在缺血2h和再灌注1h内用电热毯维持大鼠的体温，体温维持在肛温
36.5～37.5℃。动物入选标准，按Longa五级评分法，取神经功能行为评分为1、2、3、4分的动物，(0分：无神经缺损症状；1分：对侧前肢不能完全伸直；2分：向对侧旋转；3分：向对侧倾倒；4分：不能自己行走或昏迷)。脑梗塞范围测定，模型大鼠再灌注24h，行为学评分后，断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部分在-20℃冰箱冷冻10min，在冰盘上冠状切成6片，迅速将脑片置于TTC染液中，37℃避光温孵1h，取出后置于10％甲醛液中避光保存24h。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量百分比作为脑梗塞范围。

[0043] 脑含水量测定：TTC染色称重后，将大脑置于120℃真空干燥器内烘干12h称干重。脑含水量＝(脑湿重-脑干重)/脑湿重×100％。实验结果详见表5。表5对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤大鼠脑梗塞范围及脑水含量的影响(X±S)

[0044]

[0045] 注：与空白对照组比较，**P＜0.01；与阳性复方丹参片组比较P＜0.05[0046] 实验3

[0047] 对CCl4致大鼠肝纤维化的影响

[0048] 实验方法：选择雄性健康Wistar大鼠60只，体重180-200g，将大鼠均随机分正常组、秋水仙碱组(0.17mg/kg)、本申请丹参丹酚酸A制剂组，除正常对照组外，其余各组大鼠首次于皮下注射CCl45ml/kg，以后每周2次背部皮下注射40％CC14橄榄油3ml/kg，共6周。在实验期间除正常组外，第1～2周各组均给予20％猪油加0.5％胆固醇的玉米粉饲料，第
3～6周饲以普通饲料。各给药组在造模开始时即同时灌胃给予相应剂量的药液，给药体积1ml/100g，给药时间共12周。各组用药周期完成后，乙醚麻醉下剖腹，经下腔门静脉采血，分别检测血清ALT、AST、Alb，并取一部分肝组织制成肝匀浆，用于检测羟脯氨酸(Hyp)含量。另取肝组织作HE染色用于组织病理学观察。实验结果见表6：

[0049] 表6对肝纤维化模型大鼠肝组织中Hyp的影响(X±S)

[0050]

[0051] 注：与空白对照组比较，**P＜0.01；

[0052] 实验4

[0053] 对小鼠肺纤维化模型的影响

[0054] 实验方法：

[0055] 动物：8-1周龄、雄性、昆明种小鼠，体重18-22g。试剂：注射用博莱霉素A5，天津河北制药厂，醋酸泼尼松片：仙居制药有限公司生产，用时研成粉末，以蒸馏水溶解配成50％的混悬液。PBS液，自己配制。采用博莱霉素A5复制动物弥漫性肺间质纤维化模型。将小鼠用乙醚麻醉后仰卧于实验台上，固定头部及四肢，切开颈部皮肤，由气管一次性注入博莱霉素A5溶液0.05ml(含药0.1mg，5mg/kg)。注药完毕后缝合皮肤，将小鼠直立、旋转，尽量使药液在肺内均匀分布。手术过程严格无菌操作。空白对照组以同样方法注入等量生理盐水代替博莱霉素A5，动物清醒后随意进食。小鼠造模24小时后随机分为6组，分别为空白对照组、醋酸泼尼松组(6.5mg/kg)、本申请固体制剂组。空白对照组灌胃给予蒸馏水0.2ml/10g，每日三次；阳性对照组，造模后灌胃给予醋酸泼尼松，6.5mg/kg、0.2ml/10g，每日三次；给药组，造模后按0.2ml/10g灌胃给予各相应剂量的药液。以上各组，连续给药28天。结果详见表7。

[0056] 表7对肺纤维化模型小鼠肺系数的影响(X±S)

[0057]

[0058]

[0059] 注：与空白对照组比较，**P＜0.01

[0060] 实验5

[0061] MTT还原法检测制剂抗肿瘤活性试验

[0062] 实验材料：

[0063] MTT：用0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解MTT终浓度5mg/ml，过滤除菌，分装后4℃避光保存。

[0064] MTT裂解液的配制：80g十二烷基磺酸钠溶解在200ml的N-N-二甲基甲酞胺中，水浴加热助溶，加入200ml蒸馏水，用80％乙酸与1N盐酸(1∶1)混合调pH至4.7。

[0065] 细胞株选用：人正常细胞株，人肝癌细胞株和人大细胞肺癌细胞株。

[0066] 实验方法：单细胞悬液接种于96孔板(用RPM-1640基础培养基将细胞稀释至30000/ml，每孔加入200μl稀释好的细胞)，37℃、5％二氧化碳饱和湿度下培养24小时；
每组四个平行样；去除培养基，取新配制培养基按系列浓度制备抗癌药物(本申请制剂)溶液，每孔20μl，培养48小时；每孔加入2mg/ml的MTT20μl，孵育4小时；吸出孔内培养液(尽量完全)，加入DMSO液(150μl/孔)，振荡10分钟，使结晶物充分溶解；酶标仪检测各孔OD值，(检测波长560nm)；绘制细胞活力曲线图，求出IC50值。实验结果如表8所示：

[0067] 表8细胞毒性实验结果

[0068]

[0069] 小结：本申请固体制剂具有较强的细胞毒，其毒性对正常细胞和癌细胞具有一定的选择性，本申请固体制剂可用于制各抗肿瘤药物。

[0070] 实验6

[0071] 对大鼠肝肿瘤抑制的比较

[0072] 实验动物：大鼠，150g-180g，雌雄不分。

[0073] 实验药物：生理盐水；本发明各组制剂；市售斑蝥素钠片剂。

[0074] 实验方法：取大鼠分为生理盐水组、斑蝥素钠片剂组、本发明制剂组，作W256的肝内接种，接种7天后，用戊巴比妥钠按35mg/kg的剂量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，测2
量肝上肿瘤表面最大径(a)和最小径(b)，按(a*b)/2＝V(肿瘤体积)。分离胃、十二指肠动脉、肝总动脉和肝固有动脉，结扎胃、十二指肠动脉远端，以银夹阻断肝总动脉，于手术放大镜下在胃十二指肠动脉上切口并插入外径0.3mm导管后再送入肝固有动脉，然后按实验分组分别注入受试药物，术后拔管结扎胃十二指肠动脉，放开肝总动脉银夹，再缝合切口，将大鼠置于动物室待苏醒，继续饲养观察，手术后8天，按上法检测肿瘤体积，实验结果见表9：

[0075] 表9各组制剂对肿瘤的抑制比较

[0076]

[0077] 注：与生理盐水组比较**P＜0.01；

[0078] 实验7

[0079] 抗衰老实验

[0080] 实验方法：

[0081] 将老龄上海系小鼠随机分组，14只/组，雌雄各半，给药组每天灌胃本发明制剂15mg/kg，共给药3周。将小鼠断尾取血50μ1，按照邻苯三酚自氧化的方法测定SOD的活性。将小鼠断头处死，取出肝脏，用滤纸吸去残血，剪碎称重，加生理盐水，制备成1％匀浆，采用硫代巴比妥酸法测定肝组织中LPO的含量。实验结果见表10：

[0082] 表10固体制剂对SOD、LPO的影响

[0083]

[0084] 注：与对照组比较**P＜0.01，*P＜0.05；与阳性对照组比较#P＜0.05[0085] 五.制备实施例

[0086] 实施例1

[0087] 方法1：丹参用水提取得到水提取液，调PH值至3.5、110℃温度，加热1小时，溶液进行过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0088] 方法2：丹参用水提取得到水提取液，调PH值至3.5，放入微波提取器，频率为915MHz、功率为1000瓦的微波提取0.5小时，提取液过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0089] 方法3：丹参用水提取得到水提取液，调PH值至3.5、110℃温度，加热1小时，溶液进行过滤，滤液经HPD-100大孔树脂柱层析分离，先用水、10％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0090] 方法4：丹参用水提取得到水提取液，调PH值至3.5，放入微波提取器，频率为915MHz、功率为1000瓦的微波提取0.5小时，提取液过滤，滤液经HPD-100A大孔树脂柱层析分离，先用水、10％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0091] 制剂制备：取上述丹参丹酚酸A，按照片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂、滴丸剂、口服液药剂学常规要求制备成制剂。

[0092] 实施例2

[0093] 方法1：丹参用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.5、120℃温度，加热3小时，溶液进行过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0094] 方法2：丹参用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.5，放入微波提取器，频率为2450MHz、功率为10000瓦的微波提取1小时，提取液过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0095] 方法3：丹参用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.5、120℃温度，加热3小时，溶液进行过滤，滤液经HPD-300大孔树脂柱层析分离，先用水、
20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用50％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0096] 方法4：丹参用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.5，放入微波提取器，频率为2450MHz、功率为10000瓦的微波提取1小时，提取液过滤，滤液经HPD-400大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用50％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0097] 制剂制备：取上述丹参丹酚酸A，按照片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂、滴丸剂、口服液药剂学常规要求制备成制剂。

[0098] 实施例3

[0099] 方法1：丹参用80％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至6.0、130℃温度，加热6小时，溶液进行过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0100] 方法2：丹参用80％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至6.0，放入微波提取器，频率为2450MHz、功率为15000瓦的微波提取2小时，提取液过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0101] 方法3：丹参用80％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至6.0、130℃温度，加热6小时，溶液进行过滤，滤液经HPD-400A大孔树脂柱层析分离，先用水、30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0102] 方法4：丹参用80％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至6.0，放入微波提取器，频率为2450MHz、功率为15000瓦的微波提取2小时，提取液过滤，滤液经HPD-450大孔树脂柱层析分离，先用水、30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0103] 制剂制备：取上述丹参丹酚酸A，按照片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂、滴丸剂、口服液药剂学常规要求制备成制剂。

[0104] 实施例4

[0105] 方法1：丹参用水提取得到水提取液，调PH值至4.0、115℃温度，加热2小时，溶液进行过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0106] 方法2：丹参用20％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.0，放入微波提取器，频率为915MHz、功率为2000瓦的微波提取0.8小时，提取液过滤，滤液浓缩干燥，得到丹参丹酚酸A提取物；

[0107] 方法3：丹参用25乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.0、115℃温度，加热1.5小时，溶液进行过滤，滤液经D101大孔树脂柱层析分离，先用水、
15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用35％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，干燥，