缩宫素的制备方法

摘要

本发明公开了一种缩宫素的制备方法。该方法先分别合成中间体a和中间体b，然后以叠氮基磷酸二苯酯为缩合剂，在DMF、DPPA、二氧六环、哌啶、TFA及DCM存在的条件下，以中间体a和中间体b进行反应，控制反应温度-20～40℃，反应10～40小时，在通入空气氧化反应完成后，经真空干燥除去反应体系中的溶剂，得到缩宫素。本发明具有肽链接完全、纯化简单易行、收率高、目标产物缩宫素的光学活性及化学纯度高的优点。

权利要求

1.一种缩宫素的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：

A.分别制备中间体a和中间体b；

中间体a

中间体b

在中间体a的制备中，采用3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮作为缩合剂；

B.将中间体a及中间体b合并，加入300ml的DMF、120ml的DPPA、100ml的二氧六环，控制反应温度为10℃，反应时间为24小时；反应结束后，过滤并用适量二氧六环进行漂洗，然后将滤渣加入100ml的TFA、400ml的DCM，控制反应温度0℃，反应时间2小时；然后加入

500ml的哌啶以及500ml的DMF，通入足够的空气，控制反应温度不大于10℃，反应时间为3小时，在真空条件下去除溶剂，得到目标产物缩宫素。

2.根据权利要求1所述的缩宫素的制备方法，其特征在于，采用以下方法制备中间体a：在DMF及DEPBT的存在下，控制反应温度在0～40℃，反应0.5～3小时，反应完成后，用固体氢氧化钠或10～30％的氢氧化钠水溶液进行皂化反应，得到中间体a。

3.根据权利要求1所述的缩宫素的制备方法，其特征在于：采用以下方法制备中间体b：在茴香醚存在下，控制反应温度在0～40℃，反应0.5～3小时，反应完成后，得到中间体b。

说明书

缩宫素的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及药的制备方法，具体地说，本发明是一种缩宫素的制备方法。

背景技术

[0002] 缩宫素(OXYTOCIN)，又称为催产素，是一种由9个氨基酸残基组成的、具有生物活性的多肽氨基酸产品。缩宫素不仅可作为育龄妇女生育时催产使用，同时该产品在国际上也被广泛应用于动、植物养殖业方面，如用于动物，不仅可提高动物的受胎率及繁殖率，还可提高单位产奶量；用于果树，则不仅可加强果物的优异外观，还能起到催熟的作用。

[0003] 目前缩宫素的制备方法有液相合成法及固相合成法。

[0004] 液相合成法采用了苄氧羰酰(CBZ)路线，如文献J.Amer.Chem.Soc.，81(1959)，p.5688-5691，以 及：Coll.Czechoslow.Chem.Con.21(1956)，p.202-210，以 及：专 利GB1097434(1968)公开的方法。

[0005] 在所公布的液相法制备缩宫素的工艺中，采用了如下述式1的制备路线，即用BOC(叔丁氧羰基)保护的二肽，与已制备的七肽在酸性条件下进行缩合，再经脱保护基处理、氧化后得到目标产物缩宫素。

[0006] 在该工艺中，七肽的保护基主要为苯基，因此导致脱保护基的条件相对苛刻，并最终导致目标产物缩宫素产品的纯度须经多次处理才能达到期望的化学纯度；同时，因为脱保护基的条件控制严格，导致目标产物缩宫素的光学纯度(效价)难以保证。

[0007]

[0008] 式1[0009] 固相合成法采用了叔丁氧羰基(BOC)路线，如文献“生物化学与生物物理学报，1976年6月，第8卷，第2期，第121-128页”公开的方法；以及中国专利申请CN1990501A(申请号200510112356.5，申请日2005年12月29日，公开日2007年7月4日)所公开的方法。

[0010] 在所公布的固相法制备缩宫素的工艺中，采用了FMOC(芴甲氧羰基)保护的氨基酸单体，以树脂为载体进行逐个链接，大量采用了TBTU(O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯)，或HBTU/HOBt(苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯/1-羟基苯并三唑)作为缩合剂，最终目标产物的纯度通过C18柱或C8柱的分离而得以保证。该工艺虽然保证了目标产物的光学纯度，但处理过程繁琐，且总收率低。

发明内容

[0011] 本发明克服了上述缺点，提出了一种缩宫素的制备方法。

[0012] 本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：

[0013] 一种缩宫素的制备方法，由以下步骤组成：

[0014] A.分别制备中间体a和中间体b；

[0015]

[0016] 中间体a[0017]

[0018] 中间体b[0019] 在中间体a的制备中，采用3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮(简称为“DEPBT”)作为缩合剂；

[0020] B.以叠氮基磷酸二苯酯为缩合剂，在DMF、DPPA、二氧六环、哌啶、TFA及DCM存在的条件下，以中间体a和中间体b进行反应，控制反应温度-20～40℃，反应10～40小时，在通入空气氧化反应完成后，经真空干燥除去反应体系中的溶剂，得到缩宫素。如式2所示。

[0021]

[0022] 式2

[0023] 采用以下方法制备中间体a：在DMF及DEPBT的存在下，控制反应温度在0～40℃，反应0.5～3小时，反应完成后，用固体氢氧化钠或10～30％的氢氧化钠水溶液进行皂化反应，得到中间体a。如式3所示：

[0024]

[0025] 式3

[0026] 在式3中的原料a1为Boc及Fmoc保护的半胱氨酰酪氨酸(二肽)；a2为甲酯基保护的异亮氨酰谷氨酸(二肽)，可以直接从市场上采购，或按已知的方法自行制备。

[0027] 采用以下方法制备中间体b：在茴香醚存在下，控制反应温度在0～40℃，反应0.5～3小时，反应完成后，得到中间体b，如式4所示。

[0028]

[0029] 式4

[0030] 式4中的原料b1，为Fmoc保护的五肽树脂，可按常规的肽链接方法予以制备。

[0031] 在本发明所指明的流程中，所使用的保护基、缩合剂为：

[0032] Fmoc-芴甲氧羰基，作为氨基酸的保护基；

[0033] BOC-叔丁氧羰基，作为氨基酸的保护基；

[0034] Brz-溴代苯基，作为氨基酸的保护基；

[0035] Ome-甲酯基团，作为氨基酸的保护基；

[0036] MBHA-树脂—肽链接树脂，氨基酸保护；

[0037] DPPA-叠氮基磷酸二苯酯，作为新型的缩合剂；

[0038] DEPBT-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮，作为新型的缩合剂。

[0039] 在本发明中所指明的流程中，所使用的溶剂或试剂为：

[0040] DMF-二甲基甲酰胺；

[0041] 二氧六环；

[0042] TFA-三氟乙酸(浓度为0～50％)；

[0043] DCM-二氯甲烷；

[0044] 茴香醚；

[0045] 哌啶(20～60％的DMF溶液)；