一种治疗高血压的药物组合物及制备方法和检测方法

摘要

本发明公开了一种治疗高血压的药物组合物及制备方法和质量控制方法。本发明的药物组合物原料药组成为：罗布麻、夏枯草、钩藤、泽泻、珍珠母、牛膝、山楂、菊花。组成，制备方法为：取上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型，包括但不限于浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。本发明通过对夏枯草、罗布麻的鉴别对产品的质量进行控制。本发明药物组合物用于治疗高血压具备很好的疗效。

权利要求

1.一种药物组合物的检测方法，其特征在于方法包括如下步骤：

选取如下原料药物制成片剂：

罗布麻370g 夏枯草80g 钩藤80g 泽泻70g

珍珠母50g 牛膝50g 山楂50g 菊花50g；

珍珠母、泽泻、钩藤粉碎成细粉，过100目筛；其余罗布麻、夏枯草、菊花加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏；牛膝、山楂加水煎煮二次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成膏；将上述各膏加入珍珠母等细粉混匀，制粒；压制成1000片，包糖衣，即得；

鉴别：

a、取本品，除去糖衣，研细，称取1.5g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取罗布麻对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以

9∶2.5∶0.1∶0.2氯仿-甲醇-水-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，于100℃加热10分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b、取本品15片，除去糖衣，研细；加70％乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取夏枯草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8∶0.8∶0.21氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％磷钼酸乙醇溶液，60℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c、取本品粉末5g，加乙醇20ml，加热回流40分钟，静置，取上清液10ml，加盐酸1ml，加热回流1小时，浓缩至5ml，加水10ml，用60-90℃石油醚20ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以40∶1氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的蓝色斑点；

正丁醇浸出物测定：

称取本品，除去糖衣，研细，取粉未2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液25ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25ml，使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；本品按干燥品计算，含正丁醇浸出物不得少于4.0％。

说明书

一种治疗高血压的药物组合物及制备方法和检测方法

[0001] 发明领域

[0002] 本发明涉及一种药物组合物及制备方法和质量控制方法，特别涉及一种治疗高血压的药物组合物及制备方法和质量控制方法。

背景技术

[0003] 高血压病是以动脉血压升高为特征，伴有心脏、血管、脑和肾等器官功能性或器质性改变的全身性疾病。早期高血压病人可表现头痛、头晕、耳鸣、心悸、眼花、注意力不集中、记忆力减退、手脚麻木、疲乏无力、易烦躁等症状，后期血压持续在较高水平，常并发各种症状。在我国，高血压病的主要直接并发症是脑血管病，尤其是脑出血。血压越高，并发症的发生率也越高，高血压患脑血管病的相对危险性是正常血压者的32倍。高血压同时又是动脉硬化的重要危险因素之一。另外，高血压还可导致心、脑、肾和血管多种病变，发生左心室肥厚、充血性心力衰竭、主动脉夹层、慢性肾功能衰竭等严重威胁生命与健康的并发症。 [0004] 目前，高血压患者传统疗法是口服西药单一的控制血压上升，即维持控制的模式，但不能起真正意义上的治疗作用，长期服用还会导致药物的依赖性和毒副作用，加速血管细胞的老化，诱发各种并发症。基于西药降压的局限性逐渐暴露，以及药源性疾病带来的不良作用，祖国医学疗效确切、使用方便、无明显毒副作用等优势逐渐明显。

发明内容

[0005] 本发明目的在于提供一种药物组合物；本发明另一目的在于提供一种治疗高血压的药物组合物；本发明的第三个目的在于提供该药物组合物的制备方法；本发明的第四个目的在于提供该药物组合物的质量控制方法。

[0006] 本发明目的是通过如下技术方案实现：

[0007] 本发明药物组合物的原料药组成为：罗布麻320-420重量份、夏枯草40-120重量份、钩藤40-120重量份、泽泻40-120重量份、珍珠母20-100重量份、牛膝20-100重量份、山楂20-100重量份、菊花20-100重量份。

[0008] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：罗布麻321-360重量份、夏枯草90-119重量份、钩藤41-60重量份、泽泻80-119重量份、珍珠母21-40重量份、牛膝60-99重量份、山楂21-40重量份、菊花60-99重量份。

[0009] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：罗布麻340重量份、夏枯草105重量份、钩藤50重量份、泽泻100重量份、珍珠母30重量份、牛膝80重量份、山楂30重量份、菊花80重量份。

[0010] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：罗布麻355重量份、夏枯草95重量份、钩藤55重量份、泽泻85重量份、珍珠母35重量份、牛膝65重量份、山楂35重量份、菊花65重量份。

[0011] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：罗布麻380-419重量份、夏枯草41-70重量份、钩藤90-119重量份、泽泻41-60重量份、珍珠母60-99重量份、牛膝21-40重量份、山楂60-99重量份、菊花21-40重量份。

[0012] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：罗布麻400重量份、夏枯草55重量份、钩藤105重量份、泽泻50重量份、珍珠母80重量份、牛膝30重量份、山楂80重量份、菊花30重量份。

[0013] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：罗布麻385重量份、夏枯草65重量份、钩藤95重量份、泽泻55重量份、珍珠母65重量份、牛膝35重量份、山楂65重量份、菊花35重量份。

[0014] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：罗布麻365-375重量份、夏枯草75-85重量份、钩藤75-85重量份、泽泻65-75重量份、珍珠母45-55重量份、牛膝45-55重量份、山楂45-55重量份、菊花45-55重量份。

[0015] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：罗布麻370重量份、夏枯草80重量份、钩藤80重量份、泽泻70重量份、珍珠母50重量份、牛膝50重量份、山楂50重量份、菊花50重量份。

[0016] 取上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型，包括但不限于浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓 释剂、口服液体制剂。 [0017] 本发明药物组合物制备方法为：以上八味，珍珠母、泽泻、钩藤粉碎成细粉，过100目筛；其余罗布麻、夏枯草、菊花加6-12倍体积份的水煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏I；牛膝、山楂加6-12倍体积份的水煎煮1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，浓缩成膏II；将膏I与膏II加入珍珠母等细粉混匀，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的制剂。

[0018] 本发明药物组合物制备方法优选为：以上八味，珍珠母、泽泻、钩藤粉碎成细粉，过100目筛；其余罗布麻、夏枯草、菊花加8倍体积份的水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏I；牛膝、山楂加8倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成膏II；将膏I与膏II加入珍珠母等细粉混匀，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的口服固体制剂。

[0019] 本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或正丁醇浸出物测定中的一种或几种：

[0020] 鉴别方法：A、取本发明药物组合物制剂，除去糖衣，研细，称取1.5g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取罗布麻对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5-15:0.5-3.5:0.01-0.2:0.1-0.3比例的氯仿-甲醇-水-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，于100℃加热10分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0021] B、取相当于本发明药物组合物片剂15片的内容物，研细；加70％乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取夏枯草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6-10：0.6-1.0：0.1-0.3比例的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％磷钼酸乙醇溶液，60℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0022] C、取本发明药物组合物粉末5g，加乙醇20ml，加热回流40分钟，静置，取上清液10ml，加盐酸1ml，加热回流1小时，浓缩至5ml，加水10ml，用石油醚(60-90℃)20ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以20-60：0.5-1.5比例的氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的蓝色斑点；

[0023] 正丁醇浸出物测定：

[0024] 称本发明药物组合物片剂，研细，取粉未2g，精密称定，精密加入甲醇40-60ml，称定重量，置水浴上加热回流0.8-1.8小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液20-35ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25ml，使溶解，用水饱和的正丁醇提取
2-4次，每次20-30ml，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥2-4小时，移置干燥器中，放置20-40分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

[0025] 本发明药物组合物质量控制方法优选如下鉴别方法和/或正丁醇浸出物测定中的一种或几种：

[0026] 鉴别方法：A、取本发明药物组合物片剂，研细，称取1.5g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取罗布麻对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9:2.5:0.1:0.2比例的氯仿-甲醇-水-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
2％三氯化铝乙醇溶液，于100℃加热10分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0027] B、取相当于本发明药物组合物片剂15片的内容物，研细；加70％乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取夏枯草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8：0.8：0.21比例的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％磷钼酸乙醇 溶液，60℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0028] C、取本发明药物组合物粉末5g，加乙醇20ml，加热回流40分钟，静置，取上清液10ml，加盐酸1ml，加热回流1小时，浓缩至5ml，加水10ml，用60-90℃石油醚20ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每
1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以40：1比例的氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的蓝色斑点。

[0029] 正丁醇浸出物测定：

[0030] 称本发明药物组合物片剂，研细，取粉未2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液25ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25ml，使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；按本发明药物组合物片剂干燥品计算，含正丁醇浸出物不得少于4.0％。

[0031] 各药组合可以达到平肝潜阳，息风活血，通络止痛的作用。用于肝阳上亢、瘀血阻络，头晕，目眩，头痛，烦躁及高血压、高血脂，动脉硬化见上述证候者，具备很好的疗效。本发明药物组合物经实验研究证实：①能抗张血管，有明显持久而稳定的降压，尤其对肾性高血压的降压作用更为明显，②能降低血清总胆固醇和甘油三脂，对动脉粥样硬化有治疗作用，能降低血栓形成机会；可预防高胆固醇血症的发生；③可使毛细血管抵抗力增加，有抗炎镇痛作用；对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、霍乱弧菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、人型结核杆菌、鼻病毒及流感病毒有一定的抑制作用；能升高血清溶菌酶从而提高机体免疫力；④、可扩张冠脉血管床，改善冠脉微循环，可增加冠脉流量，从而增加心肌营养血流量，有一定的强心作用，可增强心肌收缩力，降低心肌耗氧量和心肌氧利用率，对急性心肌缺血有保护作用；对离体家兔心脏冠脉流量在用药后比原来冠脉流量增加83％； 可预防或减轻心肌缺血或坏死；可使由刺激中枢引起的缺血性心电图ST段压低的状况得到改善，提高人体对减压缺氧的耐受性；⑤、能改善肝功能；⑥、对中枢神经有镇静、催眠的作用，故可改善睡眠。

[0032] 本发明质量控制方法可以有效的对产品进行质量控制。本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。

[0033] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

[0034] 实验例1药理试验

[0035] 1实验动物

[0036] 降血压中实验动物均为SD雄性大鼠，体重200±30克，由浙江省医学科学院实验动物中心提供，在SPF级动物房饲养。

[0037] 2仪器和试剂

[0038] RBP—1型大鼠血压计由北京中日友好医院临床医学研究所研制。

[0039] 3模型制备

[0040] 降血压试验中采用两肾一夹型制备肾血管型高血压大鼠，选用内径0.2mm的不锈钢夹，夹于大鼠左肾动脉靠近主动脉处制备高血压动物模型，其余10只大鼠分离左肾动脉但未夹左肾动脉作为正常对照组，四周后选用血压高于160mmHg的40只大鼠作为高血压模型动物。

[0041] 4实验分组和方法

[0042] 降血压试验中按人体推荐剂量的5倍、10倍、30倍将造模成功的40只高血压大鼠分成高、中、低3个剂量组每日灌胃本发明药物片剂及模型阳性对照组，其中阳性对照组每日灌胃给予中等剂量组相当的降压平片，另设正常对照组每日灌胃给予蒸馏水，每组动物数10只，以尾脉博法测定血压，每周测血压和心率一次，连续四周。

[0043] 5结果

[0044] 1)本发明药物片剂对高血压大鼠生理状况、心率和体重的影响在整个喂养实验过程中，各组动物生长良好，活动正常。实验前后各剂量组动物心率！体重与正常对照组和阴性对照组相比差异无显著性，(P>0.05)″

[0045] 2)本发明药物片剂对高血压大鼠血压值的影响由下表1可见，给予受试物2周后中剂量与高剂量实验组大鼠血压值显著低于阳性对照组(P<0.05)；给予受试物3周后中、高剂量组高血压大鼠血压值仍显著低于阳性对照组(P<0.05)；给予受试物4周后低、中、高三组剂量组高血压大鼠血压均显著低于阴性对照组(P<0.05)。正常对照组大鼠实验期间血压无明显变化。

[0046] 表1本发明药物片剂对高血压大鼠血压的影响(M±SD)

[0047]

[0048] 实验例2药物对大鼠血压调节作用的影响

[0049] 药物组I(罗布麻340g、夏枯草105g、钩藤50g、泽泻100g、珍珠母30g、牛膝80g、山楂30g、菊花80g)

[0050] 药物组II(罗布麻355g、夏枯草95g、钩藤55g、泽泻85g、珍珠母35g、牛膝65g、山楂35g、菊花65g)

[0051] 药物组III(罗布麻400g、夏枯草55g、钩藤105g、泽泻50g、珍珠母80g、牛膝30g、山楂80g、菊花30g)

[0052] 药物组IV(罗布麻385g、夏枯草65g、钩藤95g、泽泻55g、珍珠母65g、牛膝35g、山楂65g、菊花35g)

[0053] 药物组V(罗布麻370g、夏枯草80g、钩藤80g、泽泻70g、珍珠母50g、牛膝50g、山楂50g、菊花50g)

[0054] 对照组：市售降压平片

[0055] 将造模成功的高血压大鼠随机分为五组，每组10只，按照以上各组分别给予相同剂量的药物，以尾脉博法测定血压，每周测血压和心率一次，连续四周。比较药物组I、药物组II、药物组III、药物组IV、药物组V与对照组对大鼠血 压调节作用的影响，及药物组I、药物组II、药物组III、药物组IV分别与药物组V对大鼠血压调节作用的影响，结果见下表。

[0056] 药物对大鼠血压调节作用的影响(x±SD)

[0057]

[0058] 注：**与对照组相比P<0.01；*与对照组相比P<0.05；△与药物组V相比P<0.05 [0059] 结果表明：药物组I、药物组II、药物组III、药物组IV、药物组V对大鼠血压的调节功能与对照组有着显著差异，降压效果分别优于对照组；药物组I、药物组II与药物组V有着显著差异(P<0.05)，药物组III、药物组IV、药物组V之间没有显著性差异。药物组I、药物组II对血压的调节功能优于药物组III、药物组IV、药物组V。

[0060] 实验例3鉴别方法筛选实验

[0061] 一、对药物制剂中罗布麻鉴别方法的选择：

[0062] ①供试品溶液制备中甲醇回流时间的优选：

[0063] 取本发明药物的片剂，除去包衣，研细，称取1.5g共，分别加甲醇20ml， 加热回流不同时间，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。同法制备罗布麻对照药材溶液，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水-甲酸(9:2.5:0.1:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，于100℃加热10分钟。比较各薄层板的显色效果，具体结果见下表：

[0064]提取时间(min) 10 20 30 40 50
薄层板的显色效果 供试品溶液和对照供试品溶液和对照供试品溶液和对供试品溶液和对供试品溶液和对品溶液，均未出现品溶液，斑点显色照品溶液，斑点显照品溶液，斑点显照品溶液，斑点显色斑点 不清晰 色清晰 色清晰 显色清晰

[0065] 由上表可以看出，回流提取30min就可以对制剂中的罗布麻进行有效鉴别，供试品溶液和对照品溶液对应的位置，斑点显色清晰。提取40、50min后的显色效果与30min没有显著差异，所以选择甲醇回流提取30min。

[0066] ②薄层鉴别展开剂用量配比的优选：

[0067] 吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水-甲酸的不同配比为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，于100℃加热10分钟，至显色清晰。观察各薄层板上供试品展开的效果，结果见下表：

[0068]展开剂配比 5:2.5:0.1:0.2 9:2.5:0.1:0.2 13:2.5:0.1:0.2 9:3.5:0.1:0.2 9:2.5:0.2:0.3展开效果 差 好 差 差 差

[0069] 从上表可以看出展开剂配比为9:2.5:0.1:0.2时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾、主斑点分离不好等现象。

[0070] ③样品溶液点样量的优选：

[0071] 取供试品溶液1μl、3μl、7μl、10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水-甲酸的不同配比为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，于100℃加热10分钟，至显色清晰，观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

[0072]点 1μl 3μl 7μl 10μl
样
量
效 供试品在相应对照品位供试品在相应对照品位置斑供试品在相应对照品位置斑供试品在相应对照品位置斑果 置无斑点 点颜色很浅 点显色较浅 点显色效果好

[0073] 从上表可以看出供试品点样量在10μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

[0074] ④阴性对照试验

[0075] 取缺罗布麻的阴性样品，照本发明鉴别方法(2)中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

[0076] 二、对药物制剂中夏枯草的薄层鉴别

[0077] ①供试品溶液制备方法的优选：

[0078] 1)取本发明药物的片剂15片，研细。加乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。吸取供试品溶液15μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(8：0.8：0.21)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10％磷钼酸乙醇溶液，60℃加热至斑点显色清晰。

[0079] 比较不同浓度乙醇提取后，供试品溶液在薄层板上的显色效果，结果见下表： [0080]乙醇浓度 50％ 60％ 70％ 80％
薄层显色效果 显色效果很差 显色效果差 显色效果好 杂质干扰大

[0081] 从上表可以看出，用70％乙醇提取1h，供试品溶液的显色效果好，与对照药材溶液对应的位置有相同的显色斑点，且无干扰。

[0082] 2)比较用70％乙醇，回流提取不同时间后，供试品溶液在薄层板上的显色效果，结果见下表：

[0083]提取时间(min) 10 30 60 90
薄层显色效果 无斑点 显色效果差 显色效果好 显色效果好

[0084] 从上表可以看出，回流提取1h，供试品溶液显色效果与提取1.5h显色效果相同，所以选择回流提取1h.

[0085] ②薄层鉴别展开剂用量配比的优选：

[0086] 按照上述供试品溶液的优选制备方法，制备供试品溶液，吸取供试品溶液15μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水不同的配比6：0.8：0.21、8：0.4：0.14、8：0.8：0.21、8：0.8：0.0.35、10：0.8：0.35为展开剂，展开，取出，晾干。
喷以10％磷钼酸乙醇溶液，60℃加热至斑点显色清晰。观察各薄层板上供试品展开的效果，结果见下表：

[0087]展开剂配比 6：0.8：0.21 8：0.4：0.14 8：0.8：0.21 8：0.8：0.0.35、 10：0.8：0.35展开效果 很差 很差 好 差 很差

[0088] 从上表可以看出展开剂配比为8：0.8：0.21时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾、主斑点分离不好等现象。

[0089] ③样品溶液点样量的优选：

[0090] 取供试品溶液1μl、5μl、10μl、15μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水-甲酸的不同配比为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，于100℃加热10分钟，至显色清晰，观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

[0091]点 1μl 5μl 10μl 15μl
样
量
效 供试品在相应对照品位供试品在相应对照品位置斑供试品在相应对照品位置供试品在相应对照品位置斑点果 置无斑点 点颜色很浅 斑点显色浅 显色效果好

[0092] 从上表可以看出供试品点样量在15μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

[0093] ④阴性对照试验

[0094] 取缺夏枯草的阴性样品，照本发明鉴别方法(3)中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

[0095] 三、对药物制剂中牛膝的薄层鉴别

[0096] ①展开剂配比的选择

[0097] 按照本发明鉴别方法(4)中的制备方法制备供试品溶液，吸取供试品溶 液和对照品溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇的不同配比20：1、30：1、40：1、60：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
观察各薄层板上供试品展开的效果，结果见下表：

[0098]展开剂配比 20：1 30：1 40：1 60：1
展开效果 很差 差 好 差

[0099] 从上表可以看出展开剂配比为40：1时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾、主斑点分离不好等现象。

[0100] ②样品溶液点样量的优选：

[0101] 取供试品溶液1μl、3μl、7μl、10μl，对照品溶液10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(40：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

[0102]点 1μl 3μl 7μl 10μl
样
量
效 供试品在相应对照品位供试品在相应对照品位置斑供试品在相应对照品位置供试品在相应对照品位置斑点果 置无斑点 点颜色很浅 斑点显色浅 显色效果好

[0103] 从上表可以看出供试品点样量在10μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

[0104] ③阴性对照试验

[0105] 取缺牛膝的阴性样品，照本发明鉴别方法(4)中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

[0106] 实验例4正丁醇浸出物的测定实验

[0107] 正丁醇浸出物的测定

[0108] ①甲醇提取时间的比较

[0109] 称取本发明药物片剂，研细，取粉未2g共三组，分别精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，置水浴上加热回流0.5、1、1.5小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液25ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25ml，使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置30分钟，迅速精密称定重量，计算正丁醇浸出物百分含量，即得。结果见下表：

[0110]甲醇回流时间(h) 0.51.01.5
正丁醇浸出物平均含量(％) 3.94.84.7

[0111] 从上表可以看出，甲醇加热回流1.0h时，正丁醇提取物含量最高，所以选择甲醇回流提取1h。

[0112] ②正丁醇提取次数的比较

[0113] 按照上述方法，用水饱和的正丁醇提取不同次数，比较正丁醇浸出物百分含量，结果见下表：

[0114]正丁醇提取次数 1 2 3 4
正丁醇浸出物平均含量(％) 3.74.34.94.9

[0115] 从上表可以看出，正丁醇提取3次时，已经可以完全将水溶液中的正丁醇浸出物提取出，所以选择提取3次。

[0116] 通过对本发明药物制剂的正丁醇浸出物测定，可以有效的控制药物质量，使药物疗效得到保证。

具体实施方式

[0117] 下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果

[0118] 实施例1

[0119] 罗布麻340g、夏枯草105g、钩藤50g、泽泻100g、珍珠母30g、牛膝80g、山楂30g、菊花80g

[0120] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成丸剂。

[0121] 实施例2

[0122] 罗布麻355g、夏枯草95g、钩藤55g、泽泻85g、珍珠母35g、牛膝65g、山楂35g、菊花65g

[0123] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成片剂。

[0124] 实施例3

[0125] 罗布麻400g、夏枯草55g、钩藤105g、泽泻50g、珍珠母80g、牛膝30g、山楂80g、菊花30g

[0126] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成颗粒剂。

[0127] 实施例4滴丸

[0128] 罗布麻385g、夏枯草65g、钩藤95g、泽泻55g、珍珠母65g、牛膝35g、山楂65g、菊花35g

[0129] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成。

[0130] 实施例5

[0131] 罗布麻370g、夏枯草80g、钩藤80g、泽泻70g、珍珠母50g、牛膝50g、山楂50g、菊花50g

[0132] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成口服液。

[0133] 实施例6

[0134] 罗布麻340g、夏枯草105g、钩藤50g、泽泻100g、珍珠母30g、牛膝80g、山楂30g、菊花80g

[0135] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成胶囊剂。

[0136] 实施例7

[0137] 罗布麻340g、夏枯草105g、钩藤50g、泽泻100g、珍珠母30g、牛膝80g、山楂30g、菊花80g

[0138] 以上八味，珍珠母、泽泻、钩藤粉碎成细粉，过100目筛；其余罗布麻、夏枯草、菊花加8倍体积份的水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏I；牛膝、山楂加8倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成膏II；将膏I与膏II加入珍珠母等细粉混匀，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的软胶囊。

[0139] 实施例8

[0140] 罗布麻355g、夏枯草95g、钩藤55g、泽泻85g、珍珠母35g、牛膝65g、山楂35g、菊花65g

[0141] 以上八味，珍珠母、泽泻、钩藤粉碎成细粉，过100目筛；其余罗布麻、 夏枯草、菊花加8倍体积份的水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏I；牛膝、山楂加8倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成膏II；将膏I与膏II加入珍珠母等细粉混匀，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的浓缩水丸。

[0142] 实施例9

[0143] 罗布麻400g、夏枯草55g、钩藤105g、泽泻50g、珍珠母80g、牛膝30g、山楂80g、菊花30g

[0144] 以上八味，珍珠母、泽泻、钩藤粉碎成细粉，过100目筛；其余罗布麻、夏枯草、菊花加8倍体积份的水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏I；牛膝、山楂加8倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成膏II；将膏I与膏II加入珍珠母等细粉混匀，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的片剂。

[0145] 实施例10

[0146] 罗布麻385g、夏枯草65g、钩藤95g、泽泻55g、珍珠母65g、牛膝35g、山楂65g、菊花35g

[0147] 以上八味，珍珠母、泽泻、钩藤粉碎成细粉，过100目筛；其余罗布麻、夏枯草、菊花加8倍体积份的水煎煮1次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏I；牛膝、山楂加8倍体积份的水煎煮1次，每次3小时，滤过，合并滤液，浓缩成膏II；将膏I与膏II加入珍珠母等细粉混匀，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的散剂。

[0148] 实施例11

[0149] 罗布麻370g、夏枯草80g、钩藤80g、泽泻70g、珍珠母50g、牛膝50g、山楂50g、菊花50g

[0150] 以上八味，珍珠母、泽泻、钩藤粉碎成细粉，过100目筛；其余罗布麻、夏枯草、菊花加8倍体积份的水煎煮3次，每次0.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏I；牛膝、山楂加8倍体积份的水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩成膏II；将膏I与膏II加入珍珠母等细粉混匀，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的颗粒剂。

[0151] 实施例12

[0152] 罗布麻370g、夏枯草80g、钩藤80g、泽泻70g、珍珠母50g、牛膝50g、山楂50g、菊花50g

[0153] 以上八味，珍珠母、泽泻、钩藤粉碎成细粉，过100目筛；其余罗布麻、夏枯草、菊花加8倍体积份的水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏I；牛膝、山楂加8倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成膏II；将膏I与膏II加入珍珠母等细粉混匀，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的胶囊剂。

[0154] 实施例13本发明制剂的质量控制方法

[0155] 取实施例2内容物进行鉴别：

[0156] A、取本发明药物组合物片剂，置显微镜下观察:薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群；草酸钙砂晶存在于薄壁细胞中，有时含晶细胞连接成行；不规则碎片无色或灰绿色，半透明，有光泽，有时可见细密波状纹理；

[0157] B、取本发明药物组合物片剂，除去糖衣，研细，称取1.5g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取罗布麻对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9:2.5:0.1:0.2比例的氯仿-甲醇-水-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
2％三氯化铝乙醇溶液，于100℃加热10分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0158] C、取本发明药物组合物片剂15片，除去糖衣，研细；加70％乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取夏枯草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8：0.8：0.21比例的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％磷钼酸乙醇溶液，60℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0159] D、取本发明药物组合物粉末5g，加乙醇20ml，加热回流40分钟，静置，取上清液10ml，加盐酸1ml，加热回流1小时，浓缩至5ml，加水10ml，用60-90℃石油醚20ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液； 另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每
1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以40：1比例的氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的蓝色斑点。

[0160] 实施例14本发明制剂的质量控制方法

[0161] 取实施例7内容物进行鉴别：

[0162] A、取本发明药物组合物软胶囊剂，置显微镜下观察:薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群；草酸钙砂晶存在于薄壁细胞中，有时含晶细胞连接成行；不规则碎片无色或灰绿色，半透明，有光泽，有时可见细密波状纹理；

[0163] B、取本发明药物组合物软胶囊剂，除去胶囊，研细，称取1.5g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取罗布麻对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6:3:0.03:0.25比例的氯仿-甲醇-水-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，于100℃加热10分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

[0164] 实施例15本发明制剂的质量控制方法

[0165] 取实施例9内容物进行鉴别：

[0166] A、取本发明药物组合物片剂15片，除去糖衣，研细；加70％乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取夏枯草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9：0.7：0.28比例的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％磷钼酸乙醇溶液，60℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0167] B、取本发明药物组合物粉末5g，加乙醇20ml，加热回流40分钟，静置，取上清液10ml，加盐酸1ml，加热回流1小时，浓缩至5ml，加水10ml，用60-90℃石油醚20ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液； 另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每
1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以25：1.2比例的氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的蓝色斑点。

[0168] 实施例16本发明制剂的质量控制方法

[0169] 取实施例9内容物进行鉴别：

[0170] A、取本发明药物组合物片剂素片，研细置显微镜下观察:薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群；草酸钙砂晶存在于薄壁细胞中，有时含晶细胞连接成行；不规则碎片无色或灰绿色，半透明，有光泽，有时可见细密波状纹理；

[0171] B、取本发明药物组合物片剂，除去糖衣，研细，称取1.5g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取罗布麻对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6:3:0.03:0.25比例的氯仿-甲醇-水-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
2％三氯化铝乙醇溶液，于100℃加热10分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0172] C、取本发明药物组合物片剂15片，除去糖衣，研细；加70％乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取夏枯草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9：0.7：0.28比例的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％磷钼酸乙醇溶液，60℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0173] D、取本发明药物组合物粉末5g，加乙醇20ml，加热回流40分钟，静置，取上清液10ml，加盐酸1ml，加热回流1小时，浓缩至5ml，加水10ml，用60-90℃石油醚20ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每
1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上， 以25：1.2比例的氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的蓝色斑点。

[0174] 实施例17本发明片剂的质量控制方法

[0175] 罗布麻370g 夏枯草80g 钩藤80g 泽泻70g

[0176] 珍珠母50g 牛膝50g 山楂50g 菊花50g

[0177] 制法：以上八味，珍珠母、泽泻、钩藤粉碎成细粉，过100目筛。其余罗布麻、夏枯草、菊花加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏。牛膝、山楂加水煎煮二次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成膏。将上述各膏加入珍珠母等细粉混匀，制粒。压制成1000片，包糖衣，即得。

[0178] 鉴别

[0179] (1)取本品，除去糖衣，研细，称取1.5g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤