3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸的稳定盐

摘要

提供3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(3’-phosphoadenosine-5’-phosphosulfate：PAPS)的稳定盐及其制造方法。涉及由PAPS和胺化合物得到的PAPS的稳定盐(胺盐)。还涉及PAPS稳定盐的制造方法，该方法是向PAPS水溶液中添加等摩尔以上的胺化合物，并将所得溶液冷冻干燥。根据本发明，首次可以利用极其简便的方法得到稳定性显著提高的固态PAPS，所得PAPS的胺盐非常稳定，因此不必那么担心其在常温下分解，可以保管和使用。

权利要求

1.3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(3’-phosphoadenosine-5’-phosphosulfate：PAPS)的稳定盐，该稳定盐是由PAPS和胺化合物得到的。

2.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物为具有一个或多个氨基或亚氨基的化合物。

3.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物为仲胺。

4.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物是具有碳原子数为1～10的烃链的仲胺。

5.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物为二乙胺或哌啶。

6.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物为叔胺。

7.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物是具有碳原子数为1～7的烃链的叔胺。

8.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物为三甲胺、三乙胺或三乙醇胺。

9.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物为多元胺。

10.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物为腐胺或聚乙烯亚胺。

11.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物为氨基酸。

12.权利要求1的稳定盐，其中胺化合物为L-组氨酸。

13.PAPS稳定盐的制备方法，该方法是：向PAPS水溶液中添加胺化合物，其中，上述胺化合物的添加量相对于PAPS为等摩尔以上；并将所得溶液冷冻干燥。

14.权利要求13的PAPS稳定盐的制备方法，其中添加胺化合物或其水溶液直至达到pH5以上。

15.权利要求13的PAPS稳定盐的制备方法，其中添加胺化合物或其水溶液直至达到pH5～10。

说明书

3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸的稳定盐

技术领域

[0001] 本发明涉及固态时非常不稳定的3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(3’-phosphoadenosine-5’-phosphosulfate：PAPS)的稳定盐。

背景技术

[0002] PAPS是在从微生物到植物、高等动物的广泛生物体内被利用的硫酸供给体。另外，有人报道了蛋白多糖疾病所代表的若干种疾病与PAPS有关，今后很可能将PAPS作为药品或健康食品开发利用。

[0003] 以往，作为PAPS的合成方法，有人报道了化学合成法或酶合成法等多种方法，得到的是粉末状的PAPS的锂盐或钠盐(参照非专利文献1、专利文献1等)。

[0004] 非专利文献1：メルクカルビオケム商业目录(2005/06)，32页

[0005] 专利文献1：日本特开平5-137588号公报

发明内容

[0006] 发明所要解决的问题

[0007] 但是，从上述商业目录中的“Note：unstable at room temperature(注意：室温下不稳定)”的记载和后述参考例可知：固态的PAPS金属盐(锂盐或钠盐)其本身非常不稳定，常温下容易分解，因此高纯度的PAPS的分离及其稳定性的维持和保管是非常困难的，这成为PAPS的产业应用的一大障碍。

[0008] 因此，为了实现PAPS的产业应用，必须要克服固态PAPS的不稳定性，本发明提供PAPS的稳定盐。

[0009] 解决问题的方法

[0010] 为了克服固态PAPS的不稳定性，本发明人等进行了深入研究，结果发现：由PAPS和胺化合物得到的盐具有优异的稳定性，从而完成了本发明。因此，本发明如下。

[0011] (1)PAPS的稳定盐，该稳定盐是由PAPS和胺化合物得到的。

[0012] (2)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物为具有一个或多个氨基或亚氨基的化合物。

[0013] (3)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物为仲胺。

[0014] (4)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物是具有碳原子数为1～10的烃链的仲胺。

[0015] (5)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物为二乙胺或哌啶。

[0016] (6)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物为叔胺。

[0017] (7)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物是具有碳原子数为1～7的烃链的叔胺。

[0018] (8)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物为三甲胺、三乙胺或三乙醇胺。

[0019] (9)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物为多元胺。

[0020] (10)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物为腐胺或聚乙烯亚胺。

[0021] (11)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物为氨基酸。

[0022] (12)上述(1)的稳定盐，其中胺化合物为L-组氨酸。

[0023] (13)PAPS稳定盐的制备方法，该方法是向PAPS水溶液中添加等摩尔以上的胺化合物，并将所得溶液冷冻干燥。

[0024] (14)上述(13)的PAPS稳定盐的制备方法，其中添加胺化合物或其水溶液直至达到pH5以上。

[0025] (15)上述(13)的PAPS稳定盐的制备方法，其中添加胺化合物或其水溶液直至达到pH5～10。

[0026] 发明效果

[0027] 根据本发明，首次可以利用极其简便的方法得到稳定性显著提高的固态PAPS的盐，所得PAPS的胺化合物盐非常稳定，因此不必那么担心其在常温下分解，可以保管和使用。

[0028] 实施发明的最佳方式

[0029] 本说明书中的“稳定盐”，意思是指称量10mg PAPS的盐，常温(23±2℃)下在干燥箱中(相对湿度20％以下)静置，静置7天后利用HPLC定量PAPS含量时，残留率显示为80％以上、优选90％以上的盐，残留量不足80％的盐不包含在本发明的稳定盐范围内。HPLC的测定条件如下。

[0030]

[0031] ·分离柱：YMC公司制的ODS-A312柱

[0032] ·洗脱液：50mM磷酸二氢钾水溶液

[0033] ·流速：0.6mL/分钟

[0034] ·检测：吸光度(A)270nm

[0035] ·温度：20℃

[0036] 如上所述，本发明涉及由PAPS和胺化合物得到的PAPS的稳定盐(胺盐)。

[0037] 用于制备PAPS稳定盐的胺化合物为具有一个或多个氨基或亚氨基的化合物，只要所得盐包含在上述稳定盐范畴内即可，可以是任一种化合物。

[0038] 这样的胺化合物可以例示：仲胺、叔胺、多元胺或氨基酸。

[0039] 作为仲胺，优选具有碳原子数为1～10的烃链的仲胺，更具体而言，其例子有：二甲胺、二乙胺、二丙胺、二异丙胺、二丁胺、二戊胺、二烯丙胺、二苯胺、哌啶等，特别可以优选列举：二乙胺、哌啶。

[0040] 作为叔胺，优选具有碳原子数为1～7的烃链的叔胺，更具体而言，其例子有：三甲胺、三乙胺、三丙胺、三丁胺、三戊胺、三烯丙胺、三苯胺、三乙醇胺等，特别可以优选列举：三乙胺、三乙醇胺。

[0041] 作为多元胺，可以列举出：二胺、三胺、四胺等生物体多元胺或者侧链或主链上具有氨基或亚氨基的高分子化合物。具体而言，生物体多元胺的例子有：腐胺、精胺、精脒等；高分子化合物的例子有：聚乙烯亚胺、聚烯丙胺、聚乙烯胺等，特别可以优选列举：聚乙烯亚胺。

[0042] 作为氨基酸，其例子有：碱性氨基酸，特别可以优选列举：L-组氨酸。

[0043] 上述PAPS的稳定盐可以通过向PAPS水溶液中添加等摩尔以上的胺化合物，并将所得溶液冷冻干燥来进行制备。

[0044] 即，将利用公知的化学合成法、酶合成法制备的PAPS水溶液直接使用或根据需要进行纯化后，向其中添加等摩尔以上的胺化合物或其水溶液直至达到pH5以上、优选pH5～10，之后利用常规方法进行冷冻干燥，从而可以得到固态(例如白色粉末等)的PAPS的稳定盐。

[0045] 所得PAPS的稳定盐与现有的PAPS金属盐相比稳定性格外优异，但为了慎重，优选将其装入容器后在4℃以下的低温下保管。

[0046] 实施例

[0047] 以下给出参考例和实施例，来详细且具体地说明本发明，但本发明并不受以下例子的限定。应说明的是，PAPS的定量按照上述HPLC法进行。

[0048] 参考例PAPS·锂盐在水溶液中和粉末状态下的常温稳定性

[0049] 如下所述，研究カルビオケム公司制PAPS·锂盐在水溶液中和粉末状态下的常温稳定性。即，制备浓度为10mg/mL的PAPS·锂盐水溶液，在4℃或常温(23℃)下静置。同时称量10mg PAPS·锂盐，直接以粉末状态在4℃或常温(23℃)下静置。静置开始7天后的PAPS残留率如表1所示。应说明的是，这里所说的残留率是指残留量相对于初始量的比例。由该结果可知：市售的PAPS·锂盐在水溶液中比较稳定，但粉末状态下非常不稳定，常温下静置7天有35％分解。

[0050] [表1]

[0051]

[0052] 实施例1

[0053] (1)各种PAPS盐(粉末)的制备

[0054] 通过使PAPS·锂盐(カルビオケム公司制)通过填充有阳离子交换树脂ダイヤイオンPK-216(三菱化学公司)的柱，得到PAPS游离酸的水溶液。该水溶液立即用氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、L-赖氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸、哌啶、乙胺、乙醇胺、二乙胺、三甲胺、三乙胺、三乙醇胺、腐胺、聚乙烯亚胺的各自的水溶液中和至pH7.0，制备PAPS的锂盐、钠盐、钾盐、铵盐、L-赖氨酸盐、L-精氨酸盐、L-组氨酸盐、哌啶盐、乙胺盐、乙醇胺盐、二乙胺盐、三甲胺盐、三乙胺盐、三乙醇胺盐、腐胺盐、聚乙烯亚胺盐等各种盐，将各自的溶液冷冻干燥，得到各种PAPS盐的粉末。

[0055] (2)各种PAPS盐粉末的常温稳定性

[0056] 分别称量10mg实施例1得到的各种PAPS盐的粉末，常温(23±2℃)下在干燥箱中(相对湿度10％)静置。利用HPLC法测定静置7天后的PAPS残留率，结果如表2所示。

[0057] 由表2可知：当为钠盐、锂盐和钾盐等金属盐时，PAPS的稳定性低，常温静置7天后PAPS残留率为65％以下。铵盐、伯胺的乙胺盐或乙醇胺盐和L-赖氨酸盐或L-精氨酸盐的稳定性也较金属盐差。

[0058] 相对于此，仲胺的二乙胺盐和哌啶盐、叔胺的三甲胺盐、三乙胺盐和三乙醇胺盐、多元胺的腐胺盐和聚乙烯亚胺盐、氨基酸的L-组氨酸盐非常稳定，常温静置7天后PAPS残留率均为80％以上。其中特别是显示90％以上的残留率的二乙胺盐、哌啶盐、三乙胺盐、三乙醇胺盐、聚乙烯亚胺盐和L-组氨酸盐是优选的盐的形态。