一种复合菌剂发酵床的制备方法

摘要

本发明提供了一种复合菌剂发酵床的制备方法。首先制备热带假丝酵母，植物乳杆菌，嗜热链球菌，枯草芽孢杆菌AS1.108，枯草芽孢杆菌ACCC11062，5株菌生产发酵剂，各生产发酵剂活菌数≥109个/ml，然后对5株乳酸菌生产发酵剂进行冻干，按冻干菌粉末重量，取热带假丝酵母菌粉末2-3份，植物乳杆菌粉末2-5份，嗜热链球菌粉末2-4份，枯草芽孢杆菌AS1.108粉末1-3份，枯草芽孢杆菌ACCC11062菌粉末3-5份，充分混匀后真空包装即可得到复合菌剂。然后以葡萄糖1％，稻壳2％(不粉碎)，水15％，秸秆粉碎物82％，为发酵床培养基，将上述复合菌剂按每100公斤培养基添加10克的比例少许温水溶解后添加到培养基中充分混匀，并且将其平铺压实，厚度小于15cm，自然条件下5天后发酵成熟。使用本发明产品可以明显降低猪圈舍的臭味，减少蚊蝇滋生机会，使猪能够健康成长，保护环境的同时为人类提供绿色猪肉。

权利要求

1.一种复合菌剂发酵床的制备方法，其特征是按下述方法制备：

1).发酵菌株的选择及培养基的制备

A菌——热带假丝酵母ACCC2004，培养基为10°Bx或12°Bx新鲜麦芽汁1000mL，pH5.5-6.0；

B菌——植物乳杆菌AS1.557，培养基为葡萄糖20g，乙酸钠5g，蛋白胨10g，柠檬酸钠5g，牛肉膏10g，磷酸氢二钾2g，酵母粉5gMgSO4·7H2O 0.58g，Tween-80 1ml，MnSO4·4H2O0.25g，蒸馏水1000ml，调pH值至6.2；

C菌——嗜热链球菌IFFIO6038，培养基为多聚蛋白胨5g，植物蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母膏2.5g，磷酸甘油二钠19g，抗坏血酸0.5g，MgSO4·7H2O0.25g，乳糖5g，pH7.1，蒸馏水

1000mL；

D菌——枯草芽孢杆菌AS 1.108，培养基为蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCL5g，蒸馏水

1000ml，pH7.4；

E菌——枯草芽孢杆菌ACCC11062，培养基为蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCL5g，蒸馏水

1000ml，pH7.4；

2).冻干菌粉末的活化

分别量取0.9％的生理盐水10ml于5只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将

5株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下分别倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在

30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用；

3).母发酵剂的制备

分别量取5株菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至

30℃，按培养基体积的10％接种2)步骤中已经活化的菌种，在30℃摇床培养24小时，作为母发酵剂；

4).生产发酵剂的制备

首先配置10％的脱脂奶乳浊液，向脱脂乳中加入2％的液态甘油、2％低聚木糖、2％葡萄糖，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃摇床培养9

30-36小时，检测5株菌生产发酵剂活菌数，各生产发酵剂活菌数≥10 个/ml，视同为发酵

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成熟，如果活菌数＜10 个/ml，继续培养，直至达到10 个/ml；

5).粉末冻干菌种的制备

将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥；

6).发酵菌复配

按冻干菌粉末重量，取A菌粉末2-3份，B菌粉末2-5份，C菌粉末2-4份，D菌粉末1-3份，E菌粉末3-5份，充分混匀后真空包装即可得到复合菌剂；

7).接种

复合菌剂按一定比例接种于秸秆发酵床。

2.根据权利要求1所述一种复合菌剂发酵床的制备方法，其特征是：秸秆发酵床培养基配比为：葡萄糖1％，稻壳2％，水15％，秸秆粉碎物82％。

3.根据权利要求1所述一种复合菌剂发酵床的制备方法，其特征是：复合菌剂按每100公斤培养基添加10克的比例，少许温水溶解后添加到培养基中充分混匀，并且将其平铺压实，厚度小于15cm，自然条件下5天后发酵成熟。

说明书

一种复合菌剂发酵床的制备方法

(一)技术领域

[0001] 本发明涉及一种用于养猪的复合菌剂发酵床的制备方法，属于饲料添加剂领域。(二)背景技术

[0002] 我国养殖规模和产值每年的递增速度超过10％，但与此同时，由养殖业带来的环境污染越来越严重。国家环保总局在全国23个省市进行的调查发现，全国的90％规模化畜禽养殖场未经过环境影响评价，60％的养殖场缺乏必要的污染防治措施。未经处理的畜禽粪便任意堆积，污水粪便随意排放，从而带来一系列的环境问题如占用和污染农田、水体，产生恶臭和造成生物污染。因此，如何合理处置与利用畜禽粪便，是全社会必需面对的一个重大问题。

[0003] 对于规模化养殖场的畜禽粪便处理，经过各国众多学者与专家多年研究与探索，其技术已相对成熟，如粪便的堆肥化处理技术，污水的厌氧沼气池处理以及氧化塘、生态湿地等处理技术己???在我国部分养殖场或肥料厂应用推广，并获得了成功。

[0004] 但是，对于具体情况而言，现阶段农村、农业以存在着以家庭分散式为主的经济组织与经营方式，虽然规模化养殖是养殖业的发展方向，但在相当长时间内，家庭或小型分散式养殖的方式不会根本改变，同时，由于小型或分散养殖方式，其污染防治的管理面广量大，由此造成的粪便污染问题比规模养殖场更为严重与突出，因此，其粪便处理采用何种技术，仍将是环境保护与畜牧业发展中面临的问题。

[0005] 复合菌剂发酵床技术，是基于控制畜禽粪便排放与污染的一种新型养殖方式，其基本理念是实现畜禽废弃物“零排放”。是一项环保农业技术，是传统养猪模式的一场革命，在畜禽健康养殖和污染防治等方面具有重要意义。

[0006] 目前，我国秸秆的剩余量越来越大，由于这些废弃物都是密度小、体积膨松，大量堆积，销毁处理不但需要一定的人力、物力，且污染环境，因此需要探索解决这一问题的有效途径。秸秆恰好又是是发酵床制备的原料之一，因此，采用此技术不仅可以利用过剩的秸秆，而且可以得到生猪养殖零排放的目的。(三)发明内容

[0007] 本发明目的在于提供一种具有除臭和生产绿色肥料的复合菌剂发酵床的制备方法。

[0008] 本发明的目的是这样实现的：本发明中所涉及的百分比除另有注明之外为质量比，本发明的产品采用这样的方法来制备的：

[0009] 1.发酵菌株的选择及培养基的制备

[0010] A菌——热带假丝酵母(ACCC2004)，培养基为10°Bx或12°Bx新鲜麦芽汁1000mL，pH5.5-6.0。

[0011] B菌——植物乳杆菌(AS1.557)，培养基为葡萄糖20g，乙酸钠5g，蛋白胨10g，柠檬酸钠5g，牛肉膏10g，磷酸氢二钾2g，酵母粉5gMgSO4·7H2O 0.58g，Tween-801ml，MnSO4·4H2O0.25g，蒸馏水1000ml，调pH值至6.2。

[0012] C菌——嗜热链球菌(IFFI06038)，培养基为多聚蛋白胨5g，植物蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母膏2.5g，磷酸甘油二钠19g，抗坏血酸0.5g，MgSO4·7H2O0.25g，乳糖5g，pH7.1，蒸馏水1000mL。

[0013] D菌——枯草芽孢杆菌(AS1.108)，培养基为蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCL5g，蒸馏水1000ml，pH7.4。

[0014] E菌——枯草芽孢杆菌(ACCC11062)，培养基为培养基为蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCL5g，蒸馏水1000ml，pH7.4。

[0015] 2.复合菌剂的制备过程

[0016] 2.1冻干菌粉末的活化

[0017] 分别量取0.9％的生理盐水10ml于5只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将5株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下分别倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。

[0018] 2.2扩大培养

[0019] 2.2.1母发酵剂的制备

[0020] 分别量取5株菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2.1步骤中已经活化的菌种，在30℃摇床培养24小时，作为母发酵剂。

[0021] 2.2.2生产发酵剂的制备

[0022] 首先配置10％的脱脂奶乳浊液，向脱脂乳中加入2％的液态甘油、2％低聚木糖、2％葡萄糖，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃摇床培
9
养30——36小时，检测5株菌生产发酵剂活菌数，各生产发酵剂活菌数≥10 个/ml，视同
9 9
为发酵成熟，如果活菌数<10 个/ml，继续培养，直至达到10 个/ml。

[0023] 2.3粉末冻干菌种的制备

[0024] 将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥。

[0025] 2.4发酵菌复配

[0026] 按冻干菌粉末重量，取A菌粉末2-3份，B菌粉末2-5份，C菌粉末2-4份，D菌粉末1-3份，E菌粉末3-5份，充分混匀后真空包装即可得到复合菌剂。

[0027] 3.发酵床的制备

[0028] 以葡萄糖1％，稻壳2％(不粉碎)，水15％，秸秆粉碎物82％，为发酵床培养基，将上述复合菌剂按每100公斤培养基添加10克的比例少许温水溶解后，添加到培养基中充分混匀，并且将其平铺压实，厚度小于15cm，自然条件下5天后发酵成熟。

[0029] 4.应用效果

[0030] 下面通过具体实验来证明本发明专利的应用效果

[0031] 选择断乳的仔猪50头，分成5组，每组10头，分别饲养在不同的圈舍中。按上述复合菌发酵床的制备方法，制备成熟发酵床并且应用于一组，另外一组作为对照，同时保持两组圈舍的其它条件相同，两组猪出栏时各项指标如下表

[0032] 生长情况记录表

[0033]

[0034] 由上表可以看出，使用发酵床的4组实验，猪的生病率明显降低，并且圈舍干净整洁，毛色光亮，平均体重超过对照组约10斤。(四)具体实施方式

[0035] 下面结合具体实施例对本发明作更详细的描述：

[0036] 本发明采用的5株菌名称及菌种来源如下：

[0037] 热带假丝酵母(ACCC2004)，中国农业微生物菌种保藏中心；

[0038] 植物乳杆菌(AS1.557)，中国普通微生物菌种保藏中心；

[0039] 嗜热链球菌(IFFI06038)，中国工业微生物菌种保藏中心；

[0040] 枯草芽孢杆菌(AS1.108)，中国普通微生物菌种保藏中心；

[0041] 枯草芽孢杆菌(ACCC11062)，中国农业微生物菌种保藏中心。本发明中将上述菌株简称为A菌、B菌、C菌、D菌、E菌。

[0042] 实施例一：

[0043] 1.发酵菌株的选择及培养基的制备

[0044] A菌——热带假丝酵母(ACCC2004)，培养基为10°Bx或12°Bx新鲜麦芽汁1000mL，pH5.5-6.0。

[0045] B菌——植物乳杆菌(AS1.557)，培养基为葡萄糖20g，乙酸钠5g，蛋白胨10g，柠檬酸钠5g，牛肉膏10g，磷酸氢二钾2g，酵母粉5gMgSO4·7H2O0.58g，Tween-801ml，MnSO4·4H2O0.25g，蒸馏水1000ml，调pH值至6.2。

[0046] C菌——嗜热链球菌(IFFI06038)，培养基为多聚蛋白胨5g，植物蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母膏2.5g，磷酸甘油二钠19g，抗坏血酸0.5g，MgSO4·7H2O0.25g，乳糖5g，pH7.1，蒸馏水1000mL。

[0047] D菌——枯草芽孢杆菌(AS1.108)，培养基为蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCL5g，蒸馏水1000ml，pH7.4。

[0048] F菌——枯草芽孢杆菌(ACCC11062)，培养基为培养基为蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCL5g，蒸馏水1000ml，pH7.4。

[0049] 2.复合菌剂的制备过程

[0050] 2.1冻干菌粉末的活化

[0051] 分别量取0.9％的生理盐水10ml于5只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将5株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。

[0052] 2.2发酵菌扩大培养

[0053] 2.2.1母发酵剂的制备

[0054] 分别量取5株菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2.1步骤中已经活化的菌种，在30℃摇床培养24小时，作为母发酵剂。

[0055] 2.2.2生产发酵剂的制备

[0056] 首先配置10％的脱脂奶乳浊液，向脱脂乳中加入2％的液态甘油、2％低聚木糖、2％葡萄糖，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃摇床培
9
养30——36小时，检测5株菌生产发酵剂活菌数，各生产发酵剂活菌数≥10 个/ml，视同
9 9
为发酵成熟，如果活菌数<10 个/ml，继续培养，直至达到10 个/ml。

[0057] 2.3粉末冻干菌种的制备

[0058] 将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥。

[0059] 2.4发酵菌复配

[0060] 按冻干菌粉末重量，取A菌粉末20克，B菌粉末20克，C菌粉末20克，D菌粉末10克，E菌粉末30克，充分混匀后真空包装即可得到复合菌剂。

[0061] 3.发酵床的制备

[0062] 以葡萄糖1％，稻壳2％(不粉碎)，水15％，秸秆粉碎物82％，为发酵床培养基，将上述复合菌剂100克少许温水溶解后添加在1000公斤培养基中充分混匀，并且将其平铺压实，厚度小于15cm，自然条件下5天后发酵成熟。

[0063] 实施例二：

[0064] 1.发酵菌株的选择及培养基的制备

[0065] A菌——热带假丝酵母(ACCC2004)，培养基为10°Bx或12°Bx新鲜麦芽汁1000mL，pH5.5-6.0。

[0066] B菌——植物乳杆菌(AS1.557)，培养基为葡萄糖20g，乙酸钠5g，蛋白胨10g，柠檬酸钠5g，牛肉膏10g，磷酸氢二钾2g，酵母粉5gMgSO4·7H2O0.58g，Tween-801ml，MnSO4·4H2O0.25g，蒸馏水1000ml，调pH值至6.2。

[0067] C菌——嗜热链球菌(IFFI06038)，培养基为多聚蛋白胨5g，植物蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母膏2.5g，磷酸甘油二钠19g，抗坏血酸0.5g，MgSO4·7H2O0.25g，乳糖5g，pH7.1，蒸馏水1000mL。

[0068] D菌——枯草芽孢杆菌(AS1.108)，培养基为蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCL5g，蒸馏水1000ml，pH7.4。

[0069] E菌——枯草芽孢杆菌(ACCC11062)，培养基为培养基为蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCL5g，蒸馏水1000ml，pH7.4。

[0070] 2.复合菌剂的制备过程

[0071] 2.1冻干菌粉末的活化

[0072] 分别量取0.9％的生理盐水10ml于5只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将5株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，