一种制备高纯度别隐品碱的提取方法转让专利
申请号 : CN200810031701.6
文献号 : CN101362766B
文献日 : 2011-01-05
发明人 : 曾建国 , 钟明 , 姚利
申请人 : 湖南省中药提取工程研究中心有限公司
摘要 :
一种制备高纯度别隐品碱的提取方法，用乙醇从天然罂粟科植物中回流提取、蒸干得到初始提取物，初始提取物再在酸性醇中沉淀出大部分生物碱，用稀碱液调整滤液的pH值至7.5-8.5，过滤后再调pH至9.5-10.5，重新过滤，过滤后的滤渣即粗提物；将粗提物再先后用醋酸乙脂、甲醇回流处理，过滤，滤液减压蒸干后的残渣在甲醇或者氯仿-甲醇或无水乙醇中重结晶即可得到高含量别隐品碱单体。本发明扩大了提取别隐品碱的原料取材范围，为制备高纯度的别隐品碱单体提供了一种经济、可行的新方法。本发明方法取材方便，分离与纯化工艺简单易行、成本较低，适合于大批量生产。
权利要求 :
1.一种制备高纯度别隐品碱的提取方法，其特征在于，用乙醇从天然罂粟科植物中回流提取、蒸干得到初始提取物，初始提取物再在酸性醇中沉淀出大部分生物碱，用稀碱液调整滤液的pH值至7.5-8.5，过滤后再调pH至9.5-10.5，重新过滤，过滤后的滤渣即粗提物；
将粗提物再先后用醋酸乙酯、甲醇回流处理，过滤，滤液减压蒸干后的残渣在甲醇或者氯仿-甲醇或无水乙醇中重结晶即可得到高纯度别隐品碱单体。
2.根据权利要求1所述的一种制备高纯度别隐品碱的提取方法，其特征在于，用
70％-85％的乙醇从天然罂粟科植物中回流提取2-3次后，用氨水碱化，减压蒸干，得到初始提取物。
3.根据权利要求2所述的一种制备高纯度别隐品碱的提取方法，其特征在于，所述的初始提取物在酸性醇中沉淀是指将初始提取物在90％-98％的乙醇溶解后，加入浓硫酸后进行沉淀。
4.根据权利要求2所述的一种制备高纯度别隐品碱的提取方法，其特征在于，所述的天然罂粟科植物为博落回或血水草。
5.根据权利要求1或2或3所述的一种制备高纯度别隐品碱的提取方法，其特征在于，用5％-15％的NaOH液调整滤液的pH值至7.5-8.5。
6.根据权利要求5所述的一种制备高纯度别隐品碱的提取方法，其特征在于，pH值为
7.5-8.5的滤液过滤后，再用10％-25％NaOH调pH值至9.5-10.5。
7.根据权利要求1或2或3所述的一种制备高纯度别隐品碱的提取方法，其特征在于，粗提物用醋酸乙酯回流2-3次，残渣再用甲醇回流2-3次。
8.根据权利要求1所述的一种制备高纯度别隐品碱的提取方法，其特征在于，包括以下步骤(1)别隐品碱的粗提物制备：取博落回果荚，博落回根或博落回茎，初步粉碎；用
80％乙醇回流提取2次，氨水碱化，减压蒸干，残渣用95％乙醇重新溶解后，加入浓硫酸，过滤后，滤液用4倍水稀释，再用10％NaOH调pH至8左右，过滤后滤液再用20％NaOH调pH至10，过滤后的滤渣即为别隐品碱的粗提物；
(2)别隐品碱的粗提物的纯化：将上述含量的别隐品碱粗提物用醋酸乙酯回流2次，残渣再用甲醇回流2次，滤液减压蒸干，再在无水乙醇中溶解后保温结晶，其晶体再在无水乙醇中重结晶一次，可得含量大于85％的别隐品碱的晶体；继续重结晶，干燥后即可得到高纯度别隐品碱单体。
说明书 :
一种制备高纯度别隐品碱的提取方法
技术领域
[0001] 本发明属于天然产物的有效成分提取方法，主要涉及从天然植物中提取分离活性单体生物碱的方法，特别是涉及一种从中药博落回中分离制备高纯度别隐品碱的方法。
背景技术
[0002] 别隐品碱(Allocryptopine)是主要从罂粟科等植物(如博落回、血水草、白屈菜等)中提取分离得到，或者化学合成得到。其药理作用主要为抗心律失常作用，对乌头碱引起的动物心律失常其抑制功效大于烟胺；能阻止乌头碱引起的动物心肌缺钾；静脉注射10mg/kg时，能阻止电刺激引起的动物心房纤维颤动。对葡萄球菌有强的抗菌活性纯度达到
98％以上。
98％以上。
[0003] 别隐品碱熔点160～161°。溶于乙醇、氯仿、乙醚、醋酸乙酯及稀酸。棱柱状结晶(醋酸乙酯)其分子式C21H23NO5，分子量369.40，结构式：
[0004]
[0005] 博落回(Macleaya cordata(Willd.)R.Br.)，是罂粟科博落回属多年生高大草本植物，最早记载博落回的本草文献为《本草拾遗》。博落回又名号筒草、号筒杆、泡桐杆、勃勒回、山大筒、黄薄荷、黄婆娘、三钱三、野麻子、吹火筒，现统一命名为博落回，广泛用于医药、生物农药、兽医兽药、精细化工产品原料。博落回果荚及其全草中富含多种生物碱，其提取物(总生物碱)中主要含有血根碱(Sanguinarine)、白屈菜红碱(Chelerythrine)、原阿片碱(Protopine)和别隐品碱(Allocryptopine)等生物碱。现代药理研究表明别隐品碱具有抗心律失常作用，对乌头碱引起的动物心律失常其抑制功效大于烟胺，并能阻止乌头碱引起的动物心肌缺钾；对葡萄球菌有强的抗菌活性；同时还有保肝、护肝等重要的药理活性。
[0006] 目前国内外有关博落回生物碱的应用文献与专利却大多研究血根碱、白屈菜红碱和原阿片碱及其总碱的提取与应用，而有关别隐品碱的研究资料却较少。这主要因为别隐品碱含量较低且提取困难，所以对别隐品碱的药理、药效应用研究带来了很大的局限，因此工业化分离与制备别隐品碱的研究就成为一个亟待解决的问题。
[0007] 国内专利CN 1532197A在研究大孔树脂分离的血根碱和白屈菜红碱同时也涉及了原阿片碱和别隐品碱的分离，但本法只能富集原阿片碱和别隐品碱的混合物，达不到分离纯化别隐品碱单体的目的。文献《博落回果实中有效成分的研究》(胡之壁等，《药学学报》1979，14(9)，535-539)通过硅胶柱分离血根碱和白屈菜红碱同时也得到了别隐品碱的单体，但是成本高，产率低，只适应少量生产，不适合工业化生产。经检索，在国内外尚无制备别隐品碱单体的工业生产方法的专利文献报道。
发明内容
[0008] 本发明的目的在于提供一种可从天然植物(如博落回、血水草等罂粟科植物)中提取分离高含量别隐品碱单体的方法，该方法工艺简单，易于纯化，提取率高，设备要求低，是一种适合工业化生产的高纯度别隐品碱提取制备方法。
[0009] 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案包含以下步骤：
[0010] 用乙醇从天然罂粟科植物中回流提取、蒸干得到初始提取物，初始提取物再在酸性醇中沉淀出大部分生物碱(极性较大的水溶性生物碱除外)，用稀碱液调整滤液的PH值至7.5-8.5，过滤后再调PH至9.5-10.5，重新过滤，过滤后的滤渣即粗提物；将粗提物再先后用醋酸乙脂、甲醇回流处理，过滤，滤液减压蒸干后的残渣在甲醇或者氯仿-甲醇或无水乙醇中重结晶即可得到高含量别隐品碱单体。
[0011] 本发明优选用70％-85％的乙醇从天然罂粟科植物中回流提取2-3次(最优选为2次)后，用氨水碱化，减压蒸干，得到初始提取物。
[0012] 所述的初始提取物在酸性醇中沉淀是指将初始提取物在90-98％的乙醇溶解后，加入浓硫酸后进行沉淀。
[0013] 所述的天然罂粟科植物优选为博落回、血水草。
[0014] 用5％-15％的NaOH液调整滤液的PH值；PH值最优选为8。过滤后再用10％-25％NaOH；调PH值；最优选的PH为10。
[0015] 粗提物用醋酸乙脂回流2-3次(最优选为2次)，残渣再用甲醇回流2-3次(最优选为2次)。
[0016] 本发明具体的制备过程为：
[0017] (1)别隐品碱的粗提物制备
[0018] 取博落回果荚(根或茎亦可)，初步粉碎。用80％乙醇回流提取2次，氨水碱化，减压蒸干，残渣用95％乙醇重新溶解后，加入浓硫酸，过滤后，滤液用4倍水稀释，再用10％NaOH调PH至8左右，过滤后滤液再用20％NaOH调PH至10，过滤后的滤渣即为别隐品碱的粗提物(含量为25％-35％)。
[0019] (2)别隐品碱的粗提物的纯化
[0020] 将上述含量的别隐品碱粗提物用醋酸乙脂回流2次，残渣再用甲醇回流2次，滤液减压蒸干，再在无水乙醇中溶解后保温结晶，其晶体再在无水乙醇中重结晶一次，可得含量大于85％以上的别隐品碱的晶体。继续重结晶，干燥后即可得到高纯度别隐品碱单体。
[0021] 本发明的优点：
[0022] ①成本较低，易于纯化。本发明以博落回果荚(根或茎)的粉末为原料，以醇提、酸沉、再碱化的方式除去了大部分的非生物碱和部分低级性生物碱，再通过醋酸乙脂的回流除掉了大部分易与别隐品碱形成共沉淀的原阿片碱，通过甲醇的回流进一步提高了别隐品碱的含量。本发明使用的溶剂均为低毒、低价的有机溶剂，均可回收循环利用，对环境影响小，对设备要求低，可无需柱分离过程，直接结晶即可得到高纯度别隐品碱。本法应用前景良好，符合循环经济要求。
[0023] ②工艺简单，环境友好。本发明不需要用到复杂的分离纯化设备，工艺流程简单可靠，操作方便，能耗较低。本法分离纯化的别隐品碱原是博落回总碱生产过程中的废弃物，由于其具有抑菌作用，故不易降解，直接排出后污染环境；而本法的实施不仅达到了变废为宝，增加产值的目的，而且进一步提高了博落回资源的利用率，减少了博落回产品开发对环境的不良影响。
[0024] 综上所述，本发明有效地扩大了提取别隐品碱的原料取材范围，为制备高纯度的别隐品碱单体提供了一种经济、可行的新方法。本发明方法取材方便，分离与纯化工艺简单易行、成本较低，适合于大批量生产。
附图说明
[0025] 图1别隐品碱(纯度＞88％)的HPLC-ESI-MS的高效液相色谱图。图2为ESI-MS图.
具体实施方式
[0026] 本发明对以下实施例中分离得到的别隐品碱(纯度＞88％)进行了HPLC-ESI-MSTM测定，分析条件为：液相色谱：WATERS UPLC 质谱：WATERSPremier XE
[0027] 分析条件：
[0028] 流动相：有机相为乙腈，水相为30mmol/L醋酸胺加0.1％甲酸。
[0029] 色谱柱：大连伊利特Kromasil C-18，(5μm，4.6mm i.d.，250mm)
[0030] 工作站；MassLynx V4.1
[0031] 质谱条件(正离子模式)：
[0032] capillary voltage，3.0kV；cone voltage，25V；extractor，4V，Desolvation gasflow 15L/min；source temperature，120℃；desolvation gas temperature，350℃.[0033] 别隐品碱的鉴定：
[0034] 别隐品碱分子式为C21H23NO5，的无色晶体(乙酸乙酯中结晶)，熔点162～165℃，改良碘化铋钾显棕红色斑点。别隐品碱有α和β两种晶型，属物理异构体，熔点略有差异，但药理活性并无差别，故本发明对此未加区别。
[0035] 熔点测定仪：XT4显微熔点仪(未校正)；核磁共振仪：INOVA-400，TMS为内标。
[0036] 1HNMR(CDCl3400MHz)δ：6.957(1H，s，H-8)，6.926(1H，d，J ＝ 8.4Hz，H-14)，6.906(1H，d，J ＝ 8.1Hz，H-13)，6.638(1H，s，H-5)，5.947(2H，s，-OCH2O-)，3.858(3H，s，15-OCH3)，3.781(3H，s，16-OCH3)，3.609(2H，s，H-18)，3.322-3.460(2H，m，H-2)，
3.452-2.783(2H，m，H-3)，1.912(2H，s，H-11)，1.872(3H，s，N-CH3)；
3.452-2.783(2H，m，H-3)，1.912(2H，s，H-11)，1.872(3H，s，N-CH3)；
[0037] 13CNMR(CDCl3100MHz)δ：57.7(C-2)，32.272(C-3)，135.872(C-4)，109.217(C-5)，148.017(C-6)，146.033(C-7)，110.590(C-8)，132.744(C-9)，192.812(C-10)，
46.157(C-11)，129.456(C-12)，127.663(C-13)，110.590(C-14)，147.323(C-15)，
151.549(C-16)，128.456(C-17)，50.208(C-18)，41.213(N-CH3)，101.168(-OCH2O-)，
60.751(-OCH3)，55.619(-OCH3)。光谱数据经与文献对照，确定其为别隐品碱。
46.157(C-11)，129.456(C-12)，127.663(C-13)，110.590(C-14)，147.323(C-15)，
151.549(C-16)，128.456(C-17)，50.208(C-18)，41.213(N-CH3)，101.168(-OCH2O-)，
60.751(-OCH3)，55.619(-OCH3)。光谱数据经与文献对照，确定其为别隐品碱。
[0038] 本发明结合具体制备实施例作进一步说明
[0039] 实施例1
[0040] 博落回果荚500g，在55℃下烘干，粉碎至50目，用8倍量60％工业乙醇回流提取2次，每次1小时，氨水碱化，减压蒸干，残渣用85％工业乙醇重新溶解后，加入浓硫酸，酸沉液过滤后，滤液减压蒸干后用8倍水稀释，再用10％NaOH调PH至8左右，过滤后滤液再用
20％NaOH调PH至10，过滤后的滤渣用醋酸乙脂回流2次，每次1小时，残渣再用甲醇回流
2次，每次2小时。滤液减压蒸干，再在无水乙醇中溶解后保温结晶4小时，其晶体再在无水乙醇中重结晶12小时，得近无色棱柱状晶体，常温干燥后可得到纯度为88％的别隐品碱单体，收率0.53％。
20％NaOH调PH至10，过滤后的滤渣用醋酸乙脂回流2次，每次1小时，残渣再用甲醇回流
2次，每次2小时。滤液减压蒸干，再在无水乙醇中溶解后保温结晶4小时，其晶体再在无水乙醇中重结晶12小时，得近无色棱柱状晶体，常温干燥后可得到纯度为88％的别隐品碱单体，收率0.53％。
[0041] 实施例2
[0042] 博落回根2kg，在60℃下烘干，粉碎至10目，用10倍量50％工业甲醇回流提取2次，每次1.5小时氨水碱化，减压蒸干，残渣用75％工业乙醇重新溶解后，加入浓硫酸，酸沉液过滤后，滤液减压蒸干后用6倍水稀释，再用10％NaOH调PH至8左右，过滤后滤液再用20％NaOH调PH至10，过滤后的滤渣用醋酸乙脂回流2次，每次1小时，残渣再用甲醇回流
2次，每次2小时。滤液减压蒸干，再在无水乙醇中溶解后保温结晶6小时，其晶体再在氯仿-甲醇中重结晶10小时，得近无色棱柱状晶体，常温干燥后可得到纯度为84％的别隐品碱单体，收率0.68％。
2次，每次2小时。滤液减压蒸干，再在无水乙醇中溶解后保温结晶6小时，其晶体再在氯仿-甲醇中重结晶10小时，得近无色棱柱状晶体，常温干燥后可得到纯度为84％的别隐品碱单体，收率0.68％。
[0043] 实施例3
[0044] 博落回茎2kg，在55℃下烘干，粉碎至30目，用6倍量75％工业甲醇回流提取2次，每次1小时，氨水碱化，减压蒸干，残渣用80％工业乙醇重新溶解后，加入浓硫酸，酸沉液过滤后，滤液减压蒸干后用8倍水稀释，再用10％NaOH调PH至8左右，过滤后滤液再用20％NaOH调PH至10，过滤后的滤渣用醋酸乙脂回流2次，每次1小时，残渣再用甲醇回流
2次，每次1小时。滤液减压蒸干，再在甲醇中溶解后保温结晶4小时，其晶体再在甲醇中重结晶12小时，得近无色棱柱状晶体，常温干燥后可得到纯度为80％的别隐品碱单体，收率
0.45％。
2次，每次1小时。滤液减压蒸干，再在甲醇中溶解后保温结晶4小时，其晶体再在甲醇中重结晶12小时，得近无色棱柱状晶体，常温干燥后可得到纯度为80％的别隐品碱单体，收率
0.45％。
[0045] 实施例4
[0046] 博落回果荚1kg，在60℃下烘干，粉碎至50目，用15倍量80％工业乙醇(含0.5％硫酸)冷浸2次，每次48小时，氨水碱化到PH值为8，减压蒸干。残渣用95％工业乙醇重新溶解后，加入浓硫酸，酸沉液过滤后，滤液减压蒸干后再用6倍水稀释，氨水调PH至8左右，过滤后，滤液再用20％NaOH调PH至10，再次过滤，滤后的滤渣用醋酸乙脂回流2次，每次1小时，过滤后，残渣再用甲醇回流2次，每次1小时。过滤后的滤液减压蒸干，残渣再在甲醇中溶解，保温结晶6小时，其晶体再在氯仿-甲醇中重结晶10小时，得近无色棱柱状晶体，常温干燥后可得到纯度为82％的别隐品碱单体，收率0.72％。
[0047] 实施例5
[0048] 血水草全草5kg，在60℃下烘干，粉碎至50目，用15倍量80％工业乙醇(含0.5％硫酸)冷浸2次，每次48小时，氨水碱化到PH值为8，减压蒸干。残渣用95％工业乙醇重新溶解后，加入浓硫酸，酸沉液过滤后，滤液减压蒸干后再用6倍水稀释，氨水调PH至8左右，过滤后，滤液再用20％NaOH调PH至10，再次过滤，滤后的滤渣用醋酸乙脂回流2次，每次1小时，过滤后，残渣再用甲醇回流2次，每次1小时。过滤后的滤液减压蒸干，残渣再在甲醇中溶解，保温结晶6小时，其晶体再在氯仿-甲醇中重结晶10小时，得近无色棱柱状晶体，常温干燥后可得到纯度为85％的别隐品碱单体，收率0.25％。
[0049] 实施例5
[0050] 白屈菜全草5kg，在60℃下烘干，粉碎至50目，用15倍量80％工业乙醇(含0.5％硫酸)冷浸2次，每次48小时，氨水碱化到PH值为8，减压蒸干。残渣用95％工业乙醇重新溶解后，加入浓硫酸，酸沉液过滤后，滤液减压蒸干后再用6倍水稀释，氨水调PH至8左右，过滤后，滤液再用20％NaOH调PH至10，再次过滤，滤后的滤渣用醋酸乙脂回流2次，每次1小时，过滤后，残渣再用甲醇回流2次，每次1小时。过滤后的滤液减压蒸干，残渣再在甲醇中溶解，保温结晶6小时，其晶体再在氯仿-甲醇中重结晶10小时，得近无色棱柱状晶体，常温干燥后可得到纯度为83％的别隐品碱单体，收率0.30％。
[0051] 实施例6
[0052] 延胡索块茎5kg，在60℃下烘干，粉碎至50目，用15倍量80％工业乙醇(含0.5％硫酸)冷浸2次，每次48小时，氨水碱化到PH值为8，减压蒸干。残渣用95％工业乙醇重新溶解后，加入浓硫酸，酸沉液过滤后，滤液减压蒸干后再用6倍水稀释，氨水调PH至8左右，过滤后，滤液再用20％NaOH调PH至10，再次过滤，滤后的滤渣用醋酸乙脂回流2次，每次1小时，过滤后，残渣再用甲醇回流2次，每次1小时。过滤后的滤液减压蒸干，残渣再在甲醇中溶解，保温结晶6小时，其晶体再在氯仿-甲醇中重结晶10小时，得近无色棱柱状晶体，常温干燥后可得到纯度为84％的别隐品碱单体，收率0.56％。
[0053] 无需进一步的详述，相信采用前面所公开的内容，本领域的专业人员可最大限度地应用本发明。因此，前面的实施例应理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的应用范围。