五唇兰的无菌播种和组织培养方法

摘要

本发明涉及一种五唇兰的无菌播种和组织培养方法，其特征在于选用海南产的原生种为材料，开花时，选择健康母株进行人工授粉，授粉后100-120天将果实取下，用70％-80％酒精浸泡25-35秒后置于0.05％-0.15％的升汞溶液中消毒15-25分钟，无菌水冲洗4～5次后切开果实，用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基上培养25-30天直到出现原球茎和芽，培养温度为25-28℃，利用原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖25-35天，增殖温度为25-28℃，使原球茎和芽增加4-6倍，这类组织在壮苗培养基上培养25-35天后形成小苗，把小苗再转到新鲜壮苗培养基上培养，培养25-35天后瓶苗长至3-5厘米高时，把瓶苗移到自然光下炼苗10-20天，光照度为1500～2000LX，而后从瓶中取出，洗净根部的培养基，移入水苔基质或火山石中栽培。其优点为，五唇兰种子萌发率高，试管苗培育时间短、生长健壮，具有可操作性强，应用价值高。

权利要求

1.一种五唇兰的无菌播种和组织培养方法，其特征在于选用海南产的原生种为材料，开花时，选择健康母株进行人工授粉，授粉后100-120天将果实取下，用70％-80％酒精浸泡25-35秒后置于0.05％-0.15％的升汞溶液中消毒15-25分钟，无菌水冲洗4～5次后切开果实，用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基上培养25-30天直到出现原球茎和芽，培养温度为25-28℃，利用原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖25-35天，增殖温度为25-28℃，使原球茎和芽增加4-6倍，这类组织在壮苗培养基上培养25-35天后形成小苗，把小苗再转到新鲜壮苗培养基上培养，培养25-35天后瓶苗长至3-5厘米高时，把瓶苗移到自然光下炼苗10-20天，光照度为1500～2000LX，而后从瓶中取出，洗净根部的培养基，移入水苔基质或火山石中栽培；所述的种子萌发培养基包括VW培养基，并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升及10％的椰子汁；所述的继代培养基包括VW培养基，并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升及萘乙酸0.5毫克/升；所述的壮苗培养基包括VW培养基，并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及马铃薯提取液100毫升/升。

2.根据权利要求1中所述的五唇兰的无菌播种和组织培养方法，其特征在于在所述种子萌发和壮苗所用的培养基中蔗糖浓度为2％，继代培养基中蔗糖浓度为1.5％。

3.根据权利要求1中所述的五唇兰的无菌播种和组织培养方法，其特征在于所述的种子萌发培养基、继代培养基及壮苗培养基的PH值为5.5-6，在种子萌发培养基、继代培养基及壮苗培养基中含有0.7％的琼脂。

说明书

五唇兰的无菌播种和组织培养方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种五唇兰的无菌播种和组织培养方法。

背景技术

[0002] 五唇兰(Doritis pulcherrima Lindl.)又称朵丽兰，本属原种有两个种，我国只有一种，产于海南。附生或地生。目前有许多与蝴蝶兰杂交的品种(朵丽兰系列)，是非常优秀的系列品种，商品价值高，需求量大。五唇兰是极其重要的杂交亲本，由于其株型和花色都相当好，抗逆性又强，自身就具有很高的观赏价值。世界各国的兰花育种工作者都非常重视它，但自然界生存的不多，处于濒危状态。

[0003] 目前，五唇兰的繁殖主要采用分株繁殖，繁殖速度极慢，而其种子由于胚发育不完全，在自然状态下需与一些特殊的真菌共生才能萌发，实际上是极其困难，萌发率和成苗率都很低。

发明内容

[0004] 本发明是克服现有技术的不足而提供种子萌发率高，试管苗培育时间短，生长健壮，可操作性强，应用价值高的一种五唇兰的无菌播种和组织培养方法。

[0005] 为了达到上述目的，本发明是这样实现的，其是一种五唇兰的无菌播种和组织培养方法，其特征在于选用海南产的原生种为材料，开花时，选择健康母株进行人工授粉，授粉后100-120天将果实取下，用70％-80％酒精浸泡25-35秒后置于0.05％-0.15％的升汞溶液中消毒15-25分钟，无菌水冲洗4～5次后切开果实，用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基上培养25-30天直到出现原球茎和芽，培养温度为25-28℃，利用原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖25-35天，增殖温度为25-28℃，使原球茎和芽增加4-6倍，这类组织在壮苗培养基上培养25-35天后形成小苗，把小苗再转到新鲜壮苗培养基上培养，培养25-35天后瓶苗长至3-5厘米高时，把瓶苗移到自然光下炼苗10-20天，光照度为1500～2000LX，而后从瓶中取出，洗净根部的培养基，移入水苔基质或火山石中栽培。

[0006] 在所述种子萌发和壮苗所用的培养基中蔗糖浓度为2％，继代培养基中蔗糖浓度为1.5％。

[0007] 所述的种子萌发培养基、继代培养基及壮苗培养基的PH值为5.5-6，在种子萌发培养基、继代培养基及壮苗培养基中含有0.7％的琼脂。

[0008] 所述的种子萌发培养基包括VW培养基，并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升及10％的椰子汁。

[0009] 所述的壮苗培养基包括VW培养基，并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及马铃薯提取液100毫升/升。

[0010] 所述的继代培养基包括VW培养基，并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升及萘乙酸0.5毫克/升。

[0011] 本发明与现有技术相比的优点为，五唇兰种子萌发率高，试管苗培育时间短、生长健壮，具有可操作性强，应用价值高等优点。

具体实施方式

[0012] 下面将结合实施例对本发明做进一步的详述：

[0013] 实施例一

[0014] 包括下列主要步骤：

[0015] 1、材料：选择健康母株进行人工授粉，授粉后110天将果实取下作为外植体用于播种；

[0016] 2、无菌播种：果实用75％酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水冲洗4～5次后切开果实，用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基中培养25天左右直到出现原球茎和芽，其培植温度为27℃；种子萌发率在60-95％之间。该种子萌发培养基包括VW培养基，且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、10％的椰子汁。

[0017] 3、组织培养：为获得更多的种苗，将在原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖30天，增殖温度为27℃，使原球茎和芽增加4-6倍。该继代培养基包括VW培养基，且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升及萘乙酸0.2毫克/升。

[0018] 4、瓶苗移栽：将增殖后的原球茎和芽在壮苗培养基中培养30天后，瓶苗长至3-5厘米高时，把瓶苗移到自然光下炼苗15天，其光照度为1800LX而后从瓶中取出，洗净根部的培养基，移入水苔基质或火山石中培养，保持通风和适当的湿度，移栽的成活率达95％以上。该壮苗培养基包括VW培养基，且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及马铃薯提取液100毫升/升。

[0019] 其中种子萌发培养基和壮苗培养基的蔗糖浓度为2％，继代培养基的蔗糖浓度为1.5％。种子萌发培养基、壮苗培养基及继代培养基的PH为5.5-6，在它们中还含有琼脂
0.7％。

[0020] 实施例二

[0021] 包括下列主要步骤：

[0022] 1、材料：选择健康母株进行人工授粉，授粉后100天将果实取下作为外植体用于播种；

[0023] 2、无菌播种：果实用70％酒精浸泡25秒后置于0.05％的升汞溶液中消毒15分钟，无菌水冲洗4～5次后切开果实，用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基中培养25天左右直到出现原球茎和芽，其培植温度为25℃；种子萌发率在60-95％之间。该种子萌发培养基包括VW培养基，且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、10％的椰子汁。

[0024] 3、组织培养：为获得更多的种苗，将在原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖25天，增殖温度为25℃，使原球茎和芽增加4-6倍。该继代培养基包括VW培养基，且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升及萘乙酸0.2毫克/升。

[0025] 4、瓶苗移栽：将增殖后的原球茎和芽在壮苗培养基中培养25天后，瓶苗长至3-5厘米高时，把瓶苗移到自然光下炼苗10天，其光照度为1500LX而后从瓶中取出，洗净根部