新型低分子透明质酸和/或其盐以及使用其的化妆品、医药组合物和食品组合物

摘要

低分子透明质酸和/或其盐，平均分子量为5000～20000，并且在分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例为40重量％以上且分子量5万以上的成分的比例为5重量％以下。

权利要求

1.一种低分子透明质酸和/或其盐，其平均分子量为5000～20000，并且在分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例为40重量％以上且分子量5万以上的成分的比例为

0.2重量％～5重量％。

2.根据权利要求1所述的低分子透明质酸和/或其盐，其中，在所述分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例为40重量％以上，并且分子量5万以上的成分的比例为0.2重量％～1重量％。

3.根据权利要求2所述的低分子透明质酸和/或其盐，其中，在所述分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例为50重量％以上。

4.根据权利要求1所述的低分子透明质酸和/或其盐，通过使透明质酸和/或其盐分散在酸性含水介质中而得到。

5.根据权利要求1所述的低分子透明质酸和/或其盐，通过在加热下使透明质酸和/或其盐分散在pH2以下的含水介质中后，对除去所述含水介质而得到的残留物进行加热干燥而得到。

6.根据权利要求1所述的低分子透明质酸和/或其盐，其中，1重量％水溶液的运动粘2

度为2mm/s以下。

7.一种低分子透明质酸和/或其盐，在权利要求1所述的低分子透明质酸和/或其盐的0.1g/mL水溶液10mL中添加0.5g/mL的十六烷基氯化吡啶水溶液0.05g而得到的液体的吸光度A660为0.4Abs以上。

8.根据权利要求1所述的低分子透明质酸和/或其盐，其中，氯化钠的含量为0.5％以下。

9.一种化妆品，含有权利要求1～8中任一项所述的低分子透明质酸和/或其盐。

10.一种医药组合物，含有权利要求1～8中任一项所述的低分子透明质酸和/或其盐。

11.一种食品组合物，含有权利要求1～8中任一项所述的低分子透明质酸和/或其盐。

说明书

新型低分子透明质酸和/或其盐以及使用其的化妆品、医

药组合物和食品组合物

技术领域

[0001] 本发明涉及向生物体内的吸收性优异的新型低分子透明质酸和/或其盐以及使用其的化妆品、医药组合物和食品组合物。

背景技术

[0002] 透明质酸(平均分子量：50万～200万)是大量存在于生物体内的众多组织(例如皮下组织、眼球、关节)的粘多糖类，由于其高保湿功能，作为例如化妆品的成分已广泛
利用(例如，特开2000-095660号公报)。此外，通过经口摄取透明质酸，发现了补偿生物体
本来具有的透明质酸含量的降低，改善皮肤的保湿、弹力性和柔软性的效果，因此透明质酸
及其盐已添加到各种食品中。

[0003] 但是，透明质酸为高分子的多糖类，因而一般难以吸收到生物体内。例如，通过将透明质酸涂布到皮肤上，能够防止水分从皮肤蒸发，但由于透明质酸是高分子，因此难以渗
透到皮肤组织，大部分只是停留在皮肤的表面。因此，如果通过洗脸或入浴等冲洗皮肤表面
的透明质酸，则皮肤的保湿效果难以持续。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供向生物体内的吸收性优异的新型低分子透明质酸和/或其盐以及使用其的化妆品、医药组合物和食品组合物。

[0005] 本发明第1方式的低分子透明质酸和/或其盐，平均分子量为5000～20000，并且在分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例为40重量％以上且分子量5万以上的成分
的比例为5重量％以下。

[0006] 在上述低分子透明质酸和/或其盐中，在上述分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例能够为40重量％以上且分子量5万以上的成分的比例能够为1重量％以下。在
这种情况下，在上述分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例能够为50重量％以上。

[0007] 上述低分子透明质酸和/或其盐，其能够通过使透明质酸和/或其盐分散在酸性含水介质中而得到。

[0008] 上述低分子透明质酸和/或其盐，其能够通过在加热下使透明质酸和/或其盐分散在pH2以下的含水介质中后，对除去上述含水介质而得到的残留物进行加热干燥而得
到。

[0009] 上述低分子透明质酸和/或其盐中，1重量％水溶液的运动粘度能够为2mm2/s以下。

[0010] 在上述低分子透明质酸和/或其盐的0.1g/mL水溶液(10mL)中添加0.5g/mL的十六烷基氯化吡啶水溶液(0.05g)而得到的液体的吸光度(A660)能够为0.4Abs以上。

[0011] 上述低分子透明质酸和/或其盐的氯化钠的含量能够为0.5％以下。

[0012] 本发明第2方式的化妆品，含有上述低分子透明质酸和/或其盐。

[0013] 本发明第3方式的医药组合物，含有上述低分子透明质酸和/或其盐。

[0014] 本发明第4方式的食品组合物，含有上述低分子透明质酸和/或其盐。

[0015] 在本发明中，所谓“透明质酸”，是指具有1个以上由葡糖醛酸和N-乙酰葡糖胺的二糖形成的重复结构单元的多糖类。此外，作为“透明质酸的盐”，并无特别限定，优选是药
学上可容许的盐，例如，可以列举钠盐、钾盐、钙盐、锌盐、镁盐、铵盐等。

[0016] 利用上述低分子透明质酸和/或其盐，向生物体内的吸收性(例如经皮吸收性)优异。因此，能够期待肌肤改善效果。由此，上述低分子透明质酸和/或其盐，可以用作例
如化妆品、医药组合物和食品组合物的成分。

附图说明

[0017] 图1表示实施例2中得到的低分子透明质酸的色谱。

[0018] 图2表示在含有实施例2中得到的低分子透明质酸(样品C)的液体中添加CPC溶液得到的液体的吸光度的测定结果。

[0019] 图3是表示在分别含有样品A～C的液体中添加CPC溶液得到的液体的外观的照片。

[0020] 图4表示在试验例1中将试料粘贴5小时的试验组1～3的分析样品的HPLC分析图。

[0021] 图5是表示在试验例1中试验组1的试料的贴附时间和试验组1的分析样品中每1g皮肤的透明质酸增加量的关系的图。

[0022] 图6是表示试验例1中作为确认试验进行的低分子色谱柱分析中试验组1～3的各分析样品以及实施例2中得到的低分子透明质酸的HPLC分析图。

具体实施方式

[0023] 以下对本发明的一实施方式所涉及的低分子透明质酸和/或其盐、以及使用其的化妆品、医药组合物和食品组合物进行详细说明。应予说明，本实施方式和后述的实施例
中，“％”意味着“质量％”。

[0024] 1、低分子透明质酸和/或其盐

[0025] 本发明的一实施方式涉及的低分子透明质酸和/或其盐，平均分子量为5000～20000，并且在分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例为40重量％以上且分子量5万
以上的成分的比例为5重量％以下。

[0026] 上述低分子透明质酸和/或其盐，向生物体内的吸收性优异。例如，上述低分子透明质酸和/或其盐的经皮吸收性优异，将上述低分子透明质酸和/或其盐涂布到皮肤上时，
上述低分子透明质酸和/或其盐不只停留在皮肤表面，而且渗透到皮肤组织内部。即，能够
保持皮肤的水分量，因而能够将皮肤保持在湿润的状态下。

[0027] 上述低分子透明质酸和/或其盐，可以经口摄取，可以经皮吸收到生物体内，或者可以通过注射等注入生物体内。

[0028] 上述低分子透明质酸和/或其盐的平均分子量，从向生物体内的吸收性高的方面出发，更优选为5000～15000，进一步优选为5000～12000。

[0029] 上述低分子透明质酸和/或其盐中，从向生物体内的吸收性方面出发，优选分子量1万以下的成分的比例为40重量％以上且平均分子量5万以上的成分的比例为1重量％
以下，更优选分子量1万以下的成分的比例为50重量％以上且分子量5万以上的成分的比
例为1重量％以下。

[0030] 以下，对本发明中规定的平均分子量和分子量分布的测定方法进行说明。

[0031] 1.1.平均分子量的测定方法

[0032] 本发明中规定的平均分子量是由试料的特性粘度算出的分子量。本发明中，采用由运动粘度求出特性粘度，将该特性粘度换算为分子量的方法，来求出低分子透明质酸和/
或其盐的平均分子量。更具体地说，在该方法中，使用后面说明的乌氏粘度计测定运动粘
度，由该运动粘度的值求出特性粘度，将该特性粘度换算为平均分子量。

[0033] 一般地，为了求出试料的特性粘度，首先，制备多个试料溶液，由乌氏粘度计的试料溶液的流下秒数和溶剂的流下秒数，基于下述式(1)和式(2)，算出比粘度和比浓粘度。

[0034] (式1)

[0035] .....(1)

[0036] (式2)

[0037] ...(2)

[0038] 其次，对于各试料溶液，以得到的比浓粘度为纵轴，以干燥物换算的试料浓度为横轴标绘制作校正曲线，通过将上述试料浓度外推到0，得到试料的特性粘度。试料为透明质
酸和/或其盐时，根据下述式(3)，能够由试料的特性粘度求出平均分子量M。

[0039] (式3)α

[0040] 特性粘度(dL/g)＝k’M (3)

[0041] (上述式(3)中，k’＝0.036，α＝0.78)。

[0042] 其次，对于成为求出上述低分子透明质酸和/或其盐的分子量时的指标的运动粘度的测定方法进行说明。

[0043] 上述低分子透明质酸和/或其盐的水溶液的运动粘度，能够使用乌氏粘度计(柴田科学器械工业株式会社制)进行测定。此时，选择流下秒数为200～1000秒的系数的乌
氏粘度计。此外，测定在30℃的恒温水槽中进行以使温度不变化。

[0044] 由采用乌氏粘度计测定的上述水溶液的流下秒数和乌氏粘度计的系数的乘积，能2
够求出运动粘度(单位：mm/s)。
2

[0045] 上述低分子透明质酸和/或其盐，优选1质量％水溶液的运动粘度为2mm/s以下，2 2
更优选为1.8mm/s以下，进一步优选为1.5mm/s以下。在上述低分子透明质酸和/或其盐
2
中，如果1质量％水溶液的运动粘度超过2mm/s，则上述低分子透明质酸和/或其盐的添加
量超过规定值时，粘度变得过高，难以制备，或者对得到的化妆品、医药组合物和食品组合
物的粘度产生影响，有时使用感降低，或阻碍食感。

[0046] 1.2.分子量分布

[0047] 分子量分布是规定本发明的低分子透明质酸和/或其盐的特性的值。

[0048] 本发明中规定的分子量分布，通过使用凝胶过滤柱对试料进行液相色谱分析而得到。上述低分子透明质酸和/或其盐是因重复结构单元(N-乙酰基-D-葡糖胺和D-葡糖醛
酸)的个数而具有不同分子量的多种成分的混合物。因此，通过使用凝胶过滤柱对试料进
行液相色谱分析，能够利用分子尺寸将构成上述低分子透明质酸和/或其盐的成分分离。

[0049] 对于上述低分子透明质酸和/或其盐，如果使用凝胶过滤柱进行液相色谱分析，则按保持时间长的顺序，得到N-乙酰葡糖胺、D-葡糖醛酸、透明质酸(二糖：重复结构单元
1个)、透明质酸(四糖：重复结构单元2个)、透明质酸(六糖：重复结构单元3个)、透明
质酸(八糖：重复结构单元4个)......的峰。根据该结果，求出透明质酸的保持时间对分
子量的校正曲线，由该校正曲线，算出对应于规定分子量的保持时间，通过用该保持时 间
分割峰，能够求出处于规定分子量范围中的成分的比例。

[0050] 例如，分子量1万以下的成分的比例，能够由上述校正曲线算出对应于分子量1万的保持时间，用该保持时间以下的成分的吸收面积除以总吸收面积而求出。同样地，分子量
5万以上的成分的比例，通过由上述校正曲线算出对应于分子量5万的保持时间，用该保持
时间以上的成分的吸收面积除以总吸收面积而求出。

[0051] 1.3.用CPC沉淀法求得的液体的吸光度的测定

[0052] CPC沉淀法是用作粘多糖类的确认试验的试验方法。以透明质酸为代表的粘多糖类，已知与CPC(十六烷基氯化吡啶)等季铵盐结合而产生沉淀。

[0053] 本发明中，能够将采用CPC沉淀法得到的液体的吸光度的值用作判定本发明的低分子透明质酸和/或其盐的存在用的指标之一。

[0054] 本实施方式涉及的低分子透明质酸和/或其盐，优选在上述低分子透明质酸和/或其盐的0.1g/mL水溶液(10mL)中添加0.5g/mL的十六烷基氯化吡啶水溶液(CPC水溶
液)(0.05g)而得到的液体的吸光度(A660)为0.4Abs以上。即，吸光度(A660)为对于波长
660nm的光的吸光度，广泛用作鉴定液体“浑浊”用的指标。

[0055] 在此，本实施方式涉及的低分子透明质酸和/或其盐，由于其分子量和分子量分布的特性，制备上述混合液时，具有难以形成沉淀、液体白浊的倾向。即，上述吸光度的值成
为表示本实施方式涉及的低分子透明质酸和/或其盐存在的指标。

[0056] 1.4.制造

[0057] 上述低分子透明质酸和/或其盐优选通过将透明质酸和/或其盐分散在酸性含水介质中而制造。采用该方法，与公知的方法(例如使用酶等将透明质酸低分子化的方法、在
碱条件下低分子化的方法)相比，得到的上述低分子透明质酸和/或其盐的分离精制容易，
因此能够以低成本、高收率制造上述低分子透明质酸和/或其盐。

[0058] 1.4.1.原料

[0059] 作为上述低分子透明质酸和/或其盐的原料的透明质酸及其盐(以下也称为“原料透明质酸及其盐”)，通常以对鸡冠、脐带、眼球、皮肤、软骨等生物组织或者链球菌属的微
生物等生产透明质酸的微生物进行培养而得到的培养液等作为原料，由这些原料提取(进
而根据需要进行精制)而得到。例如，由鸡冠提取的透明质酸和/或其盐的分子量通常为
200万～800万。

[0060] 作为原料透明质酸和其盐，可以使用该粗提取物和精制物的任一种，优选精制物，具体地说，优选透明质酸和/或其盐的纯度为90％(质量比)以上的精制物。使用纯度
90％以上的原料透明质酸及其盐作为原料时，保存中难以引起色调、风味的变化，因此得到
稳定的化妆品、医药组合物和食品组合物。

[0061] 再有，由低分子透明质酸转化为低分子透明质酸的盐的方法以及由低分子透明质酸的盐转化为低分子透明质酸的方法，并无特别限定，能够使用公知的方法进行。

[0062] 作为由低分子透明质酸转化为低分子透明质酸的盐的方法，可以列举例如使用碱水溶液(例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化铵等的水溶液)进行处理的
方法。此外，作为由低分子透明质酸的盐转化为低分子透明质酸的方法，可以列举例如使用
酸水溶液(例如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等的水溶液)进行处理的方法、使用酸性阳离子交换
树脂的方法。

[0063] 1.4.2.制造方法

[0064] 1.4.2-1.分散工序

[0065] 如上所述，上述低分子透明质酸和/或其盐，能够通过使透明质酸和/或其盐分散在酸性含水介质中而制造。

[0066] 在分散工序中，例如，能够通过将粉末状的原料透明质酸和/或其盐添加到酸性含水介质中进行搅拌而进行。在此，粉末状的透明质酸和/或其盐在几乎不溶解地分散在
含水介质中。因此，在这种情况下，通过停止搅拌，该粉末沉淀。

[0067] 在此，通过调节搅拌速度、搅拌时间，能够调节低分子化的程度。此外，使透明质酸和/或其盐分散在含水介质中的时间，可以根据含水介质的pH或温度进行适当确定。

[0068] 通过使原料透明质酸和/或其盐分散在含水介质中，能够在几乎无褐变的状态下得到上述透明质酸和/或其盐。由此，不需要用于脱色的新的精制工序，因此能够实现生产
工序的省力化。

[0069] 此外，能够在加热下进行上述的分散工序。更具体地说，能够将边搅拌边将粉末状的原料透明质酸和/或其盐添加到酸性含水介质中而得到的分散介质加热。或者可以预先
将酸性含水介质加热，向其添加原料透明质酸和/或其盐，保持温度。

[0070] 在此，酸性含水介质的加热温度优选为30～70℃。通过将酸性含水介质加热到该温度范围内，能够通过1小时以内的加热，稳定地低分子化到目标分子量。如果不在加热下
进行上述分散工序，而是在常温(小于30℃)下进行，也可以将原料透明质酸和/或其盐低
分子化。但是，在这种情况下，与在加热下进行时相比需要非常长的时间。另一方面，也可
以使上述分散工序中的加热温度高于70℃。但是，在这种情况下，如果长时间进行加热则低
分子化过度进行，有时难以稳定地调节到目标分子量。

[0071] 1.4.2-2.加热干燥工序

[0072] 在上述低分子透明质酸和/或其盐的制造方法中，在上述的使透明质酸和/或其盐分散在酸性含水介质中的工序后，能够包含将除去上述含水介质而得到的残留物加热干
燥的工序。

[0073] 在此，在加热干燥工序中，例如，将从通过上述分散工序低分子化的透明质酸和/或其盐中除去含水介质而得到的残留物加热干燥。含水介质的除去，可以列举例如用过滤
器的过滤或离心分离等物理手段、使用旋转式蒸发器等的蒸馏馏去。此外，在加热干燥工序
中，优选使用例如保温箱、热风干燥机等从得到的残留物中除去残留的含水介质和水分。

[0074] 加热干燥工序中的温度和时间并无特别限定，温度优选60～95℃，更优选70～90℃，进一步优选70～80℃。加热干燥工序中的温度小于60℃时，有时干燥效率降低，另
一方面，加热干燥工序中的温度超过95℃时， 有时产生褐变。此外，加热干燥工序中的时间
优选6～48小时，更优选12～36小时。如果加热干燥工序中的时间小于6小时，有时干
燥效率降低，另一方面，如果加热干燥工序中的时间超过48小时，有时产生褐变。

[0075] 通过加热干燥工序，能够进一步将通过上述分散工序低分子化的透明质酸和/或其盐低分子化，因此能够有助于低分子化工序的效率提高。此外，通过加热干燥工序，能够
容易地得到上述低分子透明质酸和/或其盐。

[0076] 1.4.2-3.含水介质

[0077] 在上述制造方法中，含水介质是指包含水的透明质酸和/或其盐的分散介质。含水介质中能够使用的介质，优选透明质酸和/或其盐的溶解性低。含水介质中能够使用的
介质并无特别限定，例如优选是液体、具有溶解于水的性质并且在化妆品或食品的制造工
序中能够使用的介质。作为含水介质中能够使用的介质，可以列举例如醇系介质(例如甲
醇、乙醇、正丙醇、2-丙醇等)、酮系介质(例如丙酮、甲乙酮等)、四氢呋喃、乙腈等，它们可
以单独使用或者组合使用。其中，从沸点低和价格方面出发，优选是选自乙醇、甲醇和丙酮
中的至少1种。

[0078] 含水介质中的含水量并无特别规定，含水量多则透明质酸和/或其盐不能维持分散状态，溶解于含水介质中，因此有可能导致收率降低。因此，相对于含水介质的总量的水
的比例优选40容量％以下，更优选30容量％以下。

[0079] 此外，上述制造方法中，作为用于使含水介质为酸性的物质，可以列举例如酸、酸性阳离子交换树脂。

[0080] 作为酸，并无特别限定，优选在化妆品、医药品或食品的制造中能够使用的酸。作为酸，可以列举例如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，柠檬酸、抗坏血酸、醋酸、冰醋酸等有
机酸。酸的添加量并无特别限定，酸的添加量少则透明质酸和/或其盐的低分子化不进行，
制造效率降低。另一方面，酸的添加量过多，则由于促进透明质酸和/或其盐的低分子化，
而难以稳定地调节到目标分子量。例如，使用盐酸作为酸时，优选为0.2容量％～4容量％，
使用硫酸作为酸时，优选为0.1容量％～3容量％。

[0081] 作为酸性阳离子交换树脂，并无特别限定，可以列举例如强酸性阳离 子交换树脂、弱酸性阳离子交换树脂等，优选强酸性阳离子交换树脂。

[0082] 上述制造方法中，含水介质的pH优选为2以下，更优选为1以下。含水介质的pH如果超过2，则使原料透明质酸和/或其盐低分子化需要长时间，因而效率降低。

[0083] 1.5.关于制造方法的不同和氯化钠含量的不同

[0084] 本发明中，能够使用透明质酸的氯化钠含量的值作为用于判定本发明的低分子透明质酸和/或其盐存在的指标之一。

[0085] 本实施方式所涉及的低分子透明质酸和/或其盐，优选氯化钠的含量为0.5％以下。更优选为0.3％以下。

[0086] 一般流通的透明质酸，因其工业制造方法而含有某种程度的氯化钠。其比例通常为1％以上。作为一般的透明质酸的工业制造方法，可以列举乙醇沉淀、采用季铵盐的精制
方法(FRAGRANCE JOURNAL临时增刊号No.151996再次印刷)。

[0087] 采用乙醇沉淀的精制方法通常按以下顺序进行。向透明质酸的提取液中加入氯化钠，添加提取液的2～3倍量的乙醇。如果添加乙醇，则透明质酸沉淀，杂质以溶解的状态
与透明质酸分离。反复该工序数次，提高透明质酸的纯度。最后用含水乙醇洗涤数次，进行
氯化钠的除去。

[0088] 另一方面，采用季铵盐的精制按以下的顺序进行。透明质酸具有与季铵盐形成复合体、沉淀的性质。因此，向透明质酸的提取液中添加季铵盐，生成沉淀。用含有氯化钠的
醇将得到的沉淀洗涤。反复数次以提高透明质酸的纯度后，为了进行氯化钠的除去，反复数
次用含水乙醇进行洗涤。

[0089] 在任一方法中，在精制的下游中使用大量的氯化钠，因此即使实施氯化钠的除去，某种程度的量的氯化钠残存。

[0090] 另一方面，将详细叙述本实施方式涉及的制造方法，在没有在含有盐酸的含水乙醇中溶解而以粉末的状态将透明质酸粉末加热处理，然后，用含水乙醇洗涤数次，将盐酸除
去。根据本实施方式涉及的制造方法，由于不需要粉末化，也不需要添加氯化钠，使用的盐
酸不用中和能够通过洗涤、干燥而被除去，因此可以将氯化钠、氯离子的含量控制在极低的
水平。由 此，得到的透明质酸和/或其盐的氯化钠含量能够达到0.5％以下，进而能够达到
0.3％以下。

[0091] 如后面实施例所示，根据本实施方式涉及的制造方法，能够将氯化钠含量的下限降低到0.05％左右，为了进一步降低，也可以引入脱盐或离子交换处理工序等。这样，本实
施方式涉及的透明质酸和/或其盐的氯化钠含量与一般的透明质酸的氯化钠含量相比，可
以降低到1/100以下。

[0092] 本实施方式涉及的低分子透明质酸和/或其盐，如后面试验例中所示，可用于化妆品，以及医药组合物、食品组合物。此时，以氯化钠为代表的盐类存在损害体系的稳定性
的可能性。特别在乳化体系中，能够成为解乳化的主要原因。此外，由于将它们直接涂布
到皮肤或毛发，或者将它们摄食，因此出于任一种理由，希望将氯化钠等的残留盐类极度降
低。

[0093] 2.化妆品

[0094] 本发明的一实施方式涉及的化妆品含有上述低分子透明质酸和/或其盐。上述化妆品的形态并无特别限定，可以列举例如用于皮肤的洗涤品、化妆水(例如美白化妆水)、
乳膏(例如雪花膏、冷霜)、乳液、美容液、面膜、粉底、口红、唇膏、唇彩、唇线、腮红、指甲油、睫毛膏、眼线、眼影、清洁剂、洗面奶、香波、冲洗液、头发护理剂、护发素、头发定型剂、护发
乳、头发滋养剂、生发剂、剃须剂、剃须后用护肤液、晒后用护肤液、祛臭液、身体护肤液(包
括护手液、护脚液)、护体油、持久液、着色液、皂、身体清洗剂、入浴剂等。

[0095] 利用本实施方式涉及的化妆品，通过含有上述低分子透明质酸和/或其盐，由于上述低分子透明质酸和/或其盐浸透到皮肤组织内部而发挥保水性，因此皮肤的水分量得
到保持，能够将皮肤保持湿润状态。

[0096] 3.医药组合物

[0097] 本发明的一实施方式涉及的医药组合物含有上述低分子透明质酸和/或其盐。上述医药组合物的形态并无特别限定，可以列举外用剂和内服剂。作为外用剂，可以列举例
如软膏剂、外用液剂(例如滴眼剂、含漱用液剂)、点鼻药、点耳剂、贴附剂(例如糊剂、石膏
剂)、坐剂、洗剂、擦剂、气雾剂等。此外，作为内服剂，可以列举例如锭剂、内服液剂、咀嚼 剂
等。

[0098] 根据本实施方式涉及的医药组合物，通过含有上述低分子透明质酸和/或其盐，向生物体内的吸收性优异。例如，上述医药组合物为外用剂的情况下，通过含有上述低分子
透明质酸和/或其盐，上述低分子透明质酸和/或其盐浸透到皮肤组织内部而发挥保水性，
因此皮肤的水分量得到保持，能够使皮肤保持在湿润的状态。此外，例如，上述医药组合物
为内服剂的情况下，通过含有上述低分子透明质酸和/或其盐，上述低分子透明质酸和/或
其盐浸透到口腔组织而发挥保水性，因此能够发挥口腔保湿效果。

[0099] 4.食品组合物

[0100] 本发明的一实施方式涉及的食品组合物含有上述低分子透明质酸和/或其盐。上述食品组合物的形态并无特别限定，例如口香糖、糖果、粘糖果、锭样食品、果冻饮料等能够
期待口腔保湿效果的食品组合物，此外，可以列举作为主食的米饭加工食品、制面包类等、
作为副食的蒸煮罐头、冷冻食品、干菜、干燥食品等、蛋黄酱等调味料、饮料、糕点、甜点类、
液体、凝胶状或软胶囊状等补充营养类等的全部一般食品、容许表现生理功能的全部特定
保健用食品。

[0101] 根据本实施方式涉及的食品组合物，通过含有上述低分子透明质酸和/或其盐，上述低分子透明质酸和/或其盐浸透到口腔组织而发挥保水性，因此能够发挥口腔保湿效
果。

[0102] 5.实施例

[0103] 以下根据以下的实施例、比较例和试验例，对本发明进一步详细说明。再有，本发明并不限于这些。再有，运动粘度的测定和特性粘度的计算采用上述的方法进行。

[0104] 5.1.评价方法

[0105] 对于后述的实施例1～3中得到的低分子透明质酸，采用以下的方法测定分子量分布和采用CPC沉淀法得到的液体的吸光度的测定。

[0106] 5.1.1.分子量分布

[0107] 本实施例中，低分子透明质酸的分子量分布通过将凝胶过滤柱(商品名“Diol-120”，株式会社YMC制)与HPLC分析装置(商品名“AlliancePDA System”，Nihon
Waters Co.，Ltd.)连接，以低分子透明质酸的0.1％(w/v)水溶液作为分析样品，对该分析
样品进行液相色谱分析而测定。作为一例，将实施例2中得到的低分子透明质酸的色谱示
于图1。

[0108] 此外，液相色谱分析的条件如下所述。

[0109] 柱温度：40℃

[0110] 流速：1mL/分

[0111] 低分子透明质酸的0.1％(w/v)水溶液的注入量：20μL

[0112] 移动相：0.003M磷酸缓冲液(含有0.15M NaCl，pH7.0)

[0113] 在使用了本实施例涉及的凝胶过滤柱的液相色谱中，保持时间越迟，则分子量越低。如图1所示，按从右侧起保持时间长的顺序，得到N-乙酰葡糖胺、D-葡糖醛酸、透明质
酸(二糖：重复结构单元1个)、透明质酸(四糖：重复结构单元2个)、透明质酸(六糖：
重复结构单元3个)、透明质酸(八糖：重复结构单元4个)......的峰。算出各峰的保持
时间和分子量，求出该保持时间对分子量的校正曲线(式5)。

[0114] 再有，在式5中，x表示保持时间，y表示分子量。其次，由式5所示的校正曲线，算出与规定的分子量(1万或5万)对应的保持时间，通过用这些保持时间分割峰，从而求出
处于规定的分子量范围中的成分的比例。此外，各峰表示的分子量通过与对于分子量已知
的透明质酸的最小结构单元(二糖)采用同样的方法进行液相色谱分析而得到的色谱中的
峰进行对照而鉴定。

[0115] 例如，分子量1万以下的成分的比例，由式5所示的校正曲线算出与分子量1万对应的保持时间，用该保持时间以下的成分的吸收面积除以总吸收面积而求得。同样地，分子
量5万以上的成分的比例，由式5所示的校正曲线算出与分子量5万对应的保持时间，用该
保持时间以上的成分的吸收面积除以总吸收面积而求得。

[0116] 作为一例，将由图1所示的色谱得到的各分子量成分的重复单元数和 保持时间的关系示于表1。

[0117] [表1]

[0118])a
D(
量子分 8454 7294 6035 5865 4606 3446 2286 1027 0857 9597 8338
)
分
(

间时持保 846.61 233.61 201.61 068.51 226.51 004.51 232.51 841.51 740.51 898.41 517.41 数
元
单

构
结
复重 21 31 41 51 61 71 81 91 02 12 22
)aD(

量
子分 973 857 7311 6151 5981 4722 3562 2303 1143 0973 9614

)
分
(

间
时持保 768.12 990.12 454.02 078.91 063.91 478.81 144.81 430.81 536.71 982.71 159.61 数
元
单
构
结
复重 1 2 3 4 5 6 7 8 9 01 11

[0119] *透明质酸的分子量以游离的酸计算。

[0120] (式5)3 2

[0121] y＝-21.4x+1296.2x-26747.1x+189427.1

[0122] 5.1.2.由CPC沉淀法得到的液体的吸光度的测定

[0123] 本实施例中，采用CPC沉淀法得到的液体的吸光度的测定由以下的方法进行。

[0124] 将本实施例涉及的低分子透明质酸0.01g溶解于蒸馏水10mL，制备0.1(g/mL)透明质酸水溶液。此外，使CPC 1g溶解于蒸馏水20mL，制备0.05(g/mL)CPC水溶液。将该
0.05(g/mL)CPC水溶液52μL(0.05g)加入到0.1(g/mL)透明质酸水溶液10mL中，充分搅拌
后，5分钟后测定660nm(浑浊)的吸光度。

[0125] 图2中，示出了对于实施例2中得到的低分子透明质酸(样品C)，通过采用上述方法的测定得到的吸光度的测定结果。在此，作为对照，使用分子量已知的透明质酸(样品
A、B)，进行同样的试验。

[0126] 再有，使用的样品A是商品名“透明质酸HA-L510”(Q.P.公司制)，样品B为商品名“透明质酸FCH FCH-A”(Kibun Food Chemifa Co.，Ltd. 制)。此外，图3是表示进行了
吸光度测定的样品A～C的外观的照片。

[0127] [表2]

[0128]样品 分子量 吸光度
A 80,000 0.16
B 30,000 0.22
C 6,000 0.58

[0129] 如图2所示，根据对于不同波长的光的吸光度测定的结果，样品A、B和样品C明显显示出不同的行为。此外，如图3所示，用目视对样品A、B和样品C进行比较，结果看到明
显的浑浊的差别。具体地说，使用了样品C(实施例2中得到的低分子透明质酸的水溶液)
时，由于其分子量和分子量分布的特性，即使添加CPC水溶液，液体也不形成沉淀，停留在
白浊。与此相对，使用样品A、B进行上述操作的结果，由于添加CPC水溶液而产生沉淀，因
此液体的透明度与使用了样品C时相比高。

[0130] 由这些结果，能够理解采用CPC沉淀法得到的液体的吸光度的测定是表示本发明的低分子透明质酸和更高分子的透明质酸的特性的不同的指标之一。

[0131] 再有，对于在后述实施例1、3中得到的低分子透明质酸，进行采用CPC沉淀法得到的液体的吸光度的测定。其结果记载于后述的各实施例中。

[0132] 5.1.3.氯化钠含量的测定

[0133] 本实施例中，如以下所述采用莫尔法测定低分子透明质酸的氯化钠含量。

[0134] (测定方法)

[0135] 将实施例1中得到的低分子透明质酸2.5g溶解于蒸馏水100mL中。此外，将10％铬酸钾溶液1mL加入低分子透明质酸水溶液中，充分搅拌后，用硝酸银溶液进行滴定直至
成为微褐色。然后，由以下的式(4)算出低分子透明质酸的食盐含量。

[0136] (式4)

[0137] 食盐(％)＝(X×滴定量(mL))/(样品量(g)×1000)×100…(4)

[0138] (式(4)中，X为硝酸银溶液的系数，本试验中X＝13.345)。

[0139] (测定结果)

[0140] 采用上述方法测定得到的实施例1中得到的低分子透明质酸(样品A)的氯化钠含量的测定结果示于表3。在此作为对照，使用采用乙醇沉淀等现有方法制造的透明质酸
(样品B、C)进行同样的试验，求出氯化钠含量。再有，使用的样品B，是商品名“透明质酸
HA-LF”(Q.P.公司制，平均分子量30万)，样品C是商品名“透明质酸FCH FCH-A”(Kibun
Food ChemifaCo.，Ltd.制，平均分子量3万)。

[0141] [表3]

[0142]样品 食盐含量
A 0.19％
B 1.26％
C 1.15％

[0143] 如表3所示，样品A和样品B、C的氯化钠含量明显不同得到确认。

[0144] 能够理解氯化钠含量的测定是表示本发明的低分子透明质酸和采用现有方法制造的透明质酸的特性不同的指标之一。

[0145] 再有，对于后述的实施例2、3中得到的低分子透明质酸，采用同样的方法进行氯化钠含量的测定。其结果记载于后述的各实施例中。

[0146] 5.2.实施例1

[0147] 在本实施例中，作为原料，准备由鸡冠提取、精制的透明质酸钠(以下也称为“HANa”)微粉末。该原料HANa的平均分子量约为210万，纯度为97％。

[0148] 首先，在装备有搅拌机和夹套的300L容罐中装满含有0.5％硫酸的80％含水丙酮(酸性含水介质)110L，边搅拌边加热以使液温达到60℃。该处理液的pH为1.08。在此，
80％含水丙酮是含有80(W/W)％丙酮，含有20(W/W)％水的物质，含有0.5％硫酸的80％含
水丙酮是含有0.5(W/W) ％硫酸，含有99.5(W/W)％的80％含水丙酮的物质。升温到60℃
后，边搅拌边将准备的原料HANa微粉末6kg投入罐中。边进行加热以使含有硫酸的含水丙
酮的温度维持在60℃，边进行搅拌以使原料HANa微粉末成为分散状态。

[0149] 其次，搅拌15分钟后静置后，采用倾析将上层澄清的含有硫酸的含水丙酮除去，从而得到沉淀物。在得到的沉淀物中加入预先加热到60℃的含有0.5％硫酸的80％含水丙
酮110L，同样边加热到60℃边进行搅拌15分钟，重复合计3次该操作。

[0150] 其次，在将含有硫酸的含水丙酮除去后得到的沉淀物中加入80％含水丙酮110L，为了除去硫酸进行15分钟搅拌。重复该操作直到硫酸的残留不存在。

[0151] 此外，采用倾析将含水丙酮除去而得到残留物。对于该残留物进行离心分离处理，从而进一步将含水丙酮除去后，使用真空干燥机在70℃下减压下加热干燥12小时。

[0152] 通过以上的工序，得到白色微粉末的低分子透明质酸5.3kg(收率约88％)。该低分子透明质酸，使用乌氏粘度计测定的1％水溶液的运动粘度为1.5mm2/s，由特性粘度换算
的平均分子量为9000，分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例为49重量％以上并且
分子量5万以上的成分的比例为0.5重量％。此外，得到的低分子透明质酸的0.1g/mL水
溶液(10mL)中，添加0.5g/mL的十六烷基氯化吡啶水溶液(0.05g)得到的液体的吸光度
(A660)为0.57Abs。

[0153] 5.3.实施例2

[0154] 本实施例中，作为原料准备实施例1中使用的HANa微粉末。

[0155] 首先，在装备有搅拌机和夹套的300L容罐中装满含有2％盐酸的73％含水乙醇(酸性含水介质)110L，边搅拌边加热以使液温达到50℃。该处理液的pH为0.70。在此，
73％含水乙醇是含有73(W/W)％乙醇，含有27(W/W)％水的物质，含有2％盐酸的73％含水
乙醇是含有2(W/W)％盐酸，含有98(W/W)％的73％含水乙醇的物质。升温到50℃后，边搅
拌边将准备的原料HANa微粉末6kg投入罐中。边进行加热以将含有盐酸的含水乙醇 的温
度维持在60℃，边进行搅拌以使原料HANa微粉末成为分散状态。

[0156] 其次，搅拌15分钟后静置后，采用倾析将上层澄清的含有盐酸的含水乙醇除去，从而得到沉淀物。在得到的沉淀物中加入预先加热到50℃的含有2％盐酸的73％含水乙醇
110L，同样边加热到50℃边进行搅拌15分钟，重复合计3次该操作。

[0157] 其次，在将含有盐酸的含水乙醇除去后得到的沉淀物中加入73％含水乙醇110L，为了除去盐酸进行15分钟搅拌。重复该操作直到盐酸的残留不存在。

[0158] 此外，采用倾析将含水乙醇除去而得到残留物。对于该残留物进行离心分离处理，从而进一步将含水乙醇除去后，使用真空干燥机在80℃下减压下加热干燥24小时。

[0159] 通过以上的工序，得到白色微粉末的低分子透明质酸5.5kg(收率约92％)。该低2
分子透明质酸，使用乌氏粘度计测定的1％水溶液的运动粘度为1.1mm/s，由特性粘度换算
的平均分子量为6000，分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例为58重量％以上并且
分子量5万以上的成分的比例为0.2重量％。此外，得到的低分子透明质酸的0.1g/mL水
溶液(10mL)中，添加0.5g/mL的十六烷基氯化吡啶水溶液(0.05g)得到的液体的吸光度
(A660)为1.16Abs。此外，得到的低分子透明质酸的氯化钠含量为0.10％。

[0160] 5.4.实施例3

[0161] 本实施例中，作为原料，准备由通过培养产生透明质酸的链球菌属的微生物得到的含有透明质酸的发酵物提取、精制的原料透明质酸(以下也称为“HA”)微粉末。该原料
HA的平均分子量为约160万，纯度为97％。

[0162] 首先，在装备有搅拌机的300L容罐中装满含有2％盐酸的80％含水乙醇(酸性含水介质)110L，边搅拌边加热以使液温达到70℃。该处理液的pH为0.76。在此，80％含水
乙醇是含有80(W/W)％乙醇，含有20(W/W)％水的物质，含有2％盐酸的80％含水乙醇是含
有2(W/W)％盐酸，含有98(W/W)％的80％含水乙醇的物质。升温到70℃后，边搅拌边将准
备的原料HA微粉末6kg投入罐中。边调节温度以将含有盐酸的含水乙醇的温度维持 在
70℃，边进行搅拌以使原料HA粉末成为分散状态。

[0163] 其次，搅拌60分钟后静置后，采用倾析将上层澄清的含有盐酸的含水乙醇除去，得到残留物。对得到的残留物进行离心分离，从而将含水乙醇进一步除去后，使用真空干燥
机在常温、硅胶存在下减压下干燥12小时。

[0164] 通过以上的工序，得到白色微粉末的低分子透明质酸5.5kg(收率约92％)。该低2
分子透明质酸，使用乌氏粘度计测定的1％水溶液的运动粘度为1.8mm/s，由特性粘度换算
的平均分子量为14000，分子量分布中，分子量1万以下的成分的比例为43重量％以上并
且分子量5万以上的成分的比例为2.1重量％。此外，得到的低分子透明质酸的0.1g/mL
水溶液(10mL)中，添加0.5g/mL的十六烷基氯化吡啶水溶液(0.05g)得到的液体的吸光度
(A660)为0.44Abs。此外，得到的低分子透明质酸的氯化钠含量为0.07％。

[0165] 5.5.试验例1

[0166] 本试验例中，将本发明的低分子透明质酸经皮给药于小鼠，进行经皮吸收性的评价。

[0167] 5.5.1.试验方法

[0168] 5.5.1-1.动物

[0169] 无毛小鼠(Hos：HR-1)雄6周龄(试验开始时)

[0170] (由日本SLC株式会社购入)

[0171] 再有，小鼠搬入后进行1周驯化后用于试验。

[0172] 5.5.1-2.试料

[0173] 试料1：上述实施例2中得到的低分子透明质酸

[0174] 试料2：透明质酸

[0175] (商品名“透明质酸HA-LQH”、Q.P.公司制、分子量180万)

[0176] 试料3(对照)：蒸馏水

[0177] 5.5.1-3.荧光化试料的制备

[0178] 为了区别涂布的试料和皮肤中的透明质酸，用荧光标记化物质(DMEQ-酰肼)将试料1、2的透明质酸荧光化，将得到的试料用于试验。具体地说，通过使透明质酸的羧酸基和
DMEQ-酰肼反应而进行荧光化。在此使用的透明质酸的荧光化方法记载于例如李梅花、上田
秀雄等的《超声波照射对角质保湿剂透明质酸钠的皮肤吸收产生的影响》(Drug Delivery
System，12，415-419(1997))。

[0179] 5.5.1-4.试料组

[0180] 试验组1：贴附荧光化的试料1的1％水溶液的组 15只

[0181] 试验组2：贴附荧光化的试料2的1％水溶液的组 15只

[0182] 试验组3(对照)：将蒸馏水贴附在皮肤上的组 15只

[0183] 5.5.1-5.试验方法

[0184] 首先，在小鼠腹部贴附每个浸染了100mg的荧光化后的试料或蒸馏水的1cm2的棉绒布，对于各试验组，每5只在1、3、5小时后剥离棉绒布，对皮肤表面残留的试料进行水洗。
2
水洗后充分干燥，将贴附有试料的皮肤部分切取约1cm 后，用剪刀剪开。此时，采取小鼠的
皮肤后，由于腹膜清晰地出现，因此确认采取到了真皮。

[0185] 其次，将切取的皮肤转移到离心沉淀管，加入2mL蒸馏水进行均化后，在4℃下以3000转进行10分钟离心分离，将上层澄清液作为分析样品。通过测定该分析样品中的荧光
物质的量，评价试料1或2是否浸透到了皮肤内部。

[0186] 再有，对于试验组3(对照组)和试验组1，以及试验组3和试验组2，分别进行Student的T检验，P＜0.05认为具有显著性差异。

[0187] 5.5.1-6.HPLC分析条件和分析结果

[0188] 在以下的条件下对上述试验方法得到的分析样品(上层澄清液)进行 HPLC分析。HPLC的分析条件如下所述。

[0189] 分析设备：Waters 2690+470

[0190] 柱：shodex suger KS807(凝胶过滤柱)

[0191] 柱温度：40℃

[0192] 流速：0.5mL/分

[0193] 注入量：20μL

[0194] 移动相：0.003mol/L磷酸缓冲液·含有0.15mol/L氯化钠

[0195] 荧光分析条件：激发波长365nm·荧光波长447nm

[0196] 图4表示将试料贴附了5小时的试验组1～3的分析样品的HPLC分析图。此外，表4中示出各试验组中贴附了规定时间的棉绒布时得到的分析样品的峰面积的平均值。

[0197] HPLC分析的结果，试验组1中得到的分析样品中，确认皮肤中的荧光强度显著地增加。与其相对，试验组2中没有确认到显著性差异。

[0198] [表4]

[0199]

[0200] 5.5.1-6.被皮肤吸收的低分子透明质酸的定量

[0201] 其次，在试验组1～3中，由表4所示的分析样品中的荧光峰面积，分别算出透明质酸的经皮吸收量。不过，由于由作为对照组的试验组3检测出了峰，因此为了排除其影
响，从分析样品的荧光峰面积中减去试验组3的峰面积的平均值。再有，由试验组3也检
测出了峰，推测生物体内原本就含有发荧光的物质(例如维生素类、芳香族氨基酸、胆甾醇
等)。此时，因各分析样品的不同，皮肤采取量不同，因此使用分别用皮肤样品的重量去除而
得到的值，由以下的计算式(式6)算出透明质酸的经皮吸收量。

[0202] (式6)

[0203]

[0204] .....(6)

[0205] 再有，对于STD(标准)溶液，将实际用于试验的试料1％水溶液稀释100倍，用HPLC进行分析，求出峰面积。

[0206] 图5中示出试验组1的试料的贴附时间和试验组1的分析样品的每1g皮肤的透明质酸增加量的关系。根据图5，试料的贴附时间在1～3小时中，透明质酸的经皮吸收量
经时增大，但试料的贴附时间为3～5小时中，认为透明质酸的经皮吸收基本上达到平衡。
即，试验组1(给予了低分子透明质酸的组)，在1小时、3小时、5小时的全部中，与对照组
(试验组3)相比，能够确认显著的荧光峰的增加。

[0207] 与其相对，试验组2中，与试验组3相比没有发现显著性差异，每1g皮肤的透明质酸增加量基本上为0。由该结果，确认试验组2的透明质酸基本上没有被经皮吸收。此外，
由试验组2中得到的皮肤均化液没有确认透明质酸的吸收，因此确认贴附结束后的皮肤洗
涤充分进行了。

[0208] 由以上推测，本发明的低分子透明质酸由皮肤表面被吸收到皮肤中，而试验组2中使用的透明质酸的分子量大到180万，因此没有被皮肤吸收，滞留在皮肤上。

[0209] 5.5.1-7.确认试验

[0210] 再有，对于上述试验方法中得到的分析样品(上层澄清液)，进行低分子柱色谱分析的结果，确认检测到的荧光峰是荧光化的透明质酸或来自皮肤的荧光物质，不是未反应
的荧光标记化用物质(DMEQ-酰肼)。图6中示出了低分子柱色谱分析中各分析样品的HPLC
分析图。此外，以下示出低分子柱色谱分析的条件。

[0211] 分析设备：HPLC(Waters 2690+470)

[0212] 柱：YMC-Pack Diol 120(凝胶过滤柱)

[0213] 柱温度：室温

[0214] 流速：1mL/分

[0215] 注入量：20μL

[0216] 移动相：0.003mol/L-磷酸缓冲液(含有0.15mol/L氯化钠)

[0217] 荧光分析条件：激发波长365nm·荧光波长447nm

[0218] 5.6.试验例2

[0219] 本试验例中，将本发明的低分子透明质酸经皮给药于人，进行经皮吸收性的评价。更具体地说，对将渗入了本发明的低分子透明质酸的纱布平均每1天8小时、共3天(8h/
d×3d)贴附到试验者的前腕部后的皮肤的水分量进行测定，与贴附了渗入了对照(蒸馏
水)的纱布时皮肤的水分量进行比较。

[0220] 5.6.1.使用样品

[0221] 样品I：实施例2中得到的低分子透明质酸的1％水溶液

[0222] 样品II：分子量140万的透明质酸(商品名“透明质酸HA-LQ”、Q.P.公司制)的1％水溶液

[0223] 样品III：蒸馏水

[0224] 5.6.2.测定设备

[0225] 水分量测定器：商品名“SKICON-200”，I.B.S.Co.，LTD制

[0226] 5.6.3.测定方法

[0227] 将分别渗入了1mL的样品I～III的纱布(面积3×3cm2)贴附到试验者(25～50岁的成人15名)的前腕部48小时后，剥离该纱布，用水分量测定器测定贴附部位的皮肤
的水分量。水分量的测定分别在贴附前即刻、贴附结束后即刻、贴附结束后经过1天时、贴
附结束后经过4天时进行。将其结果示于表5中。表5中所示的数值为试验者5名的平均
的数值。

[0228] [表5]

[0229]

[0230] 根据表5，贴附样品I时，与贴附了样品II、III时相比，确认皮肤的水分量多且能够持续地保持。特别是贴附了样品I时，与贴附了样品II、III时相比，确认剥离纱布后也
能够持续保持皮肤的水分量。

[0231] 5.7.试验例3

[0232] 本试验例中，作为化妆品，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的化妆水(装入内容量100mL/塑料制容器)。

[0233] 《配方》辛酸十六烷基酯 0.30％

[0234] 甲氧基月桂酸辛酯 0.15％

[0235] 生育酚醋酸酯 0.10％

[0236] EMALEX RWIS-158(异硬脂酸PEG-58氢化蓖麻油) 2.00％

[0237] Eldew PS-306(月桂酰基谷氨酸二(辛基十二烷基/植物甾醇基/二十二烷基)0.50％ [0238] 对羟基苯甲酸丁酯 0.10％

[0239] 对羟基苯甲酸甲酯 0.20％

[0240] 1，3-丁二醇 5.00％

[0241] 低分子透明质酸 0.02％

[0242] 水 91.63％

[0243] 合计 100.00％

[0244] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的化妆水。

[0245] 5.8.试验例4

[0246] 本试验例中，作为化妆品，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的化妆水(装入内容量100mL/塑料制容器)。

[0247] 《配方》二甲基硅氧烷 2.00％

[0248] 环甲基硅氧烷 21.00％

[0249] 荷荷芭油 0.10％

[0250] EMALEX SS-1906EX(PEG-10二甲基硅氧烷) 4.00％

[0251] 二甲基甲硅烷基化二氧化硅 0.20％

[0252] Pemulen TR-2((丙烯酸/丙烯酸烷基酯(C10-30))共聚

[0253] 物) 0.05％

[0254] 生育酚醋酸酯 0.10％

[0255] 对羟基苯甲酸丙酯 0.05％

[0256] 对羟基苯甲酸丁酯 0.05％

[0257] 对羟基苯甲酸甲酯 0.10％

[0258] 氧化铁 0.00％

[0259] 1，3-丁二醇 1.00％

[0260] 低分子透明质酸 0.05％

[0261] 甘油 25.00％

[0262] 硫酸镁 0.20％

[0263] 水 46.10％

[0264] 合计 100.00％

[0265] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的化妆水。

[0266] 5.9.试验例5

[0267] 本试验例中，作为化妆品，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的乳液(装入内容量100mL/塑料制容器)。

[0268] 《配方》丙二醇 7.92％

[0269] 海藻糖 0.03％

[0270] 低分子透明质酸 0.01％

[0271] 矿物油 3.00％

[0272] 三辛酸甘油酯 1.50％

[0273] 三十碳六烯 1.00％

[0274] 硬脂酸 0.50％

[0275] 棕榈醇 0.50％

[0276] 羊毛脂 0.30％

[0277] 石蜡 0.20％

[0278] 硬脂酸脱水山梨醇酯 1.40％

[0279] Tetra oleate Solbase-30 1.00％

[0280] 聚山梨醇酯 600.80％

[0281] 对羟基苯甲酸甲酯 0.20％

[0282] 对羟基苯甲酸丙酯 0.10％

[0283] 乙醇 0.01％

[0284] 苯氧基乙醇 适量

[0285] 卡波姆(Carbomer) 0.10％

[0286] 氢氧化钾 0.10％

[0287] BHT 0.02％

[0288] 生育酚 适量

[0289] EDTA-2钠 0.02％

[0290] 水 使总量为100％

[0291] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的乳液。

[0292] 5.10.试验例6

[0293] 本试验例中，作为化妆品，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的乳膏(装入内容量50g/带螺帽的塑料制容器)。

[0294] 《配方》三十碳六烯 11.00％

[0295] 二甲基硅氧烷 1.00％

[0296] 二十二烷醇 3.00％

[0297] 月桂酰基谷氨酸二辛基十二烷基酯 2.00％

[0298] EMALEX GMS-50(硬脂酸甘油酯(SE)) 8.00％

[0299] EMALEX 805(硬脂酸PEG-5) 2.00％

[0300] 对羟基苯甲酸丙酯 0.10％

[0301] 丙二醇 5.00％

[0302] 对羟基苯甲酸甲酯 0.20％

[0303] 尿素 5.00％

[0304] 低分子透明质酸 0.03％

[0305] 水 62.67％

[0306] 合计 100.00％

[0307] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的乳膏。

[0308] 5.11.试验例7

[0309] 本试验例中，作为化妆品，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的洁面乳(装入内容量50g/带螺帽的塑料制容器)。

[0310] 《配方》矿物油 30.00％

[0311] 石蜡 3.00％

[0312] 蜂蜡 2.00％

[0313] 辛酸十六烷基酯 25.00％

[0314] 二十二烷醇 5.00％

[0315] 硬脂酸甘油酯 1.00％

[0316] EMALEX 600di-ISEX(二异硬脂酸PEG-12) 3.00％

[0317] EMALEX 620(硬脂醇聚醚-20) 1.00％

[0318] 生育酚醋酸酯 0.10％

[0319] 对羟基苯甲酸丙酯 0.15％

[0320] 硬脂酰基谷氨酸Na 0.40％

[0321] 1，3-丁二醇 3.00％

[0322] 对羟基苯甲酸甲酯 0.15％

[0323] 黄原胶 10.00％

[0324] 低分子透明质酸 0.10％

[0325] 水 16.10％

[0326] 合计 100.00％

[0327] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的洁面乳。

[0328] 5.12.试验例8

[0329] 本试验例中，作为化妆品，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的化妆粉底(装入内容量30g/带盖的塑料制容器)。

[0330] 《配方》乙醇 10.00％

[0331] 薄荷醇 0.02％

[0332] 甘油 5.00％

[0333] BG 3.00％

[0334] 低分子透明质酸 0.01％

[0335] 二甲基硅氧烷 2.00％

[0336] 三辛酸甘油酯 2.00％

[0337] 辛基二甲基PABA 0.50％

[0338] 羟甲氧苯酮 0.05％

[0339] 卡波姆 0.30％

[0340] 二氧化硅 0.20％

[0341] AMP 0.20％

[0342] 对羟基苯甲酸甲酯 0.16％

[0343] 苯氧基乙醇 适量

[0344] 生育酚 0.02％

[0345] EDTA-2钠 0.01％

[0346] 水 使总量为100％

[0347] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的化妆粉底。

[0348] 5.13.试验例9

[0349] 本试验例中，作为化妆品，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的护发素(装入内容量500mL/塑料制容器)。

[0350] 《配方》二甲基硅氧烷 3.00％

[0351] 丙二醇 8.00％

[0352] 矿物油 2.00％

[0353] 甘油 3.00％

[0354] PPG-30 0.50％

[0355]

[0356] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的护发素。

[0357] 5.14.试验例10

[0358] 本试验例中，作为化妆品，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的晒后用护肤液(装入内容量100mL/塑料制容器)。

[0359] 《配方》乙醇 11.04％

[0360] BG 4.16％

[0361] 黄芩提取物 适量

[0362] 低分子透明质酸 0.50％

[0363] 硬脂醇 0.72％

[0364] 鳄梨油 0.72％

[0365] 硬脂酸 0.02％

[0366] 谷维素 适量

[0367] 聚山梨醇酯 0.23％

[0368] PPG-6-癸基十四醇聚醚-20 0.20％

[0369] 辛基酚聚醚-3 0.08％

[0370] 对羟基苯甲酸甲酯 0.14％

[0371] 对羟基苯甲酸丙酯 0.07％

[0372] 卡波姆 0.13％

[0373] PVP 适量

[0374] 氢氧化钾 0.04％

[0375] EDTA-2钠 0.01％

[0376] 生育酚 适量

[0377] 水 75.10％

[0378] 合计 100.00％

[0379] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的晒后用护肤液。

[0380] 5.15.试验例11

[0381] 本试验例中，作为化妆品，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的剃须后用护肤液(装入内容量100mL/塑料制容器)。

[0382] 《配方》乙醇 58.00％

[0383] 薄荷醇 0.10％

[0384] 丙二醇 2.00％

[0385] 甘草酸二钾 0.05％

[0386] 低分子透明质酸 2.00％

[0387] 香料 0.10％

[0388] 水 使总量为100％

[0389] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的剃须后用护肤液。

[0390] 5.16.试验例12

[0391] 本试验例中，作为化妆品，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的入浴剂(装入内容量200mL/塑料制容器)。

[0392] 《配方》辛酸十六烷基酯 43.80％

[0393] 辛基十二醇聚醚-10 8.00％

[0394] 对羟基苯甲酸丁酯 0.20％

[0395] 对羟基苯甲酸甲酯 0.10％

[0396] 甘油 2.00％

[0397] 低分子透明质酸 1.00％

[0398] 水 44.90％

[0399] 合计 100.00％

[0400] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的入浴剂。

[0401] 5.17.试验例13

[0402] 本试验例中，作为医药组合物，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的温感刺激糊剂。

[0403]

[0404] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的温感刺激糊剂。

[0405] 5.18.试验例14

[0406] 本试验例中，作为医药组合物，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的冷感经皮吸收型糊剂。

[0407]

[0408] L-薄荷醇 0.40g

[0409] 聚丙烯酸钠 6.50g

[0410] 羧甲基纤维素钠 1.00g

[0411] 明胶 3.00g

[0412] 甘油 29.70g

[0413] 甘氨酸铝 0.08g

[0414] 聚氧乙烯硬化蓖麻油 0.50g

[0415] 乳酸 1.00g

[0416] 水 55.02g

[0417] 合计 100.00g

[0418] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到能够良好地保持皮肤的水分量的冷感经皮吸收型糊剂。

[0419] 5.19.试验例15

[0420] 本试验例中，作为食品组合物，采用以下所示的配方，分别制备配合了实施例1～3中分别得到的低分子HA的装入喷口袋中的葡萄果冻饮料(装入内容量100g/透明喷口
袋)。

[0421] 《配方》低分子透明质酸 0.1g

[0422] 5倍浓缩葡萄水果果汁 2.0g

[0423] 鹿角菜(凝胶化剂) 1.0g

[0424] 黄原胶(增粘剂) 0.5g

[0425] 三氯蔗糖(甜味料) 0.1g

[0426] 柠檬酸 1.0g

[0427]

[0428] 根据本试验例，通过配合实施例1～3中得到的低分子HA，能够得到风味和食感优异的葡萄果冻饮料。

[0429] [0455]