用于医疗器械和治疗的聚合物NO供体前药纳米纤维涂层

摘要

本发明涉及纳米纤维，其在延迟的时间段之后产生治疗量的一氧化氮，这容许向患者安装或植入器械的时间。从而，一氧化氮的释放被限制在有机体的需要给予NO的区域。延迟的时间是通过将产生NO的纤维与倾向于隔开前者的产生NO的官能团的纤维共纺来实现。本发明的纤维可以并入到医疗器械，诸如支架或其它可植入的医疗器械，以防止在植入的区域形成粘连或创伤。

权利要求

1.一种医疗器械，其包括：

聚合物载体纤维成分，其中所述载体纤维能够可逆地与一氧化氮反应；

一氧化氮前药；和

第二纤维成分，其中所述第二纤维成分的功能是将所述前药与反应种类隔开。

2.权利要求1的医疗器械，其中所述医疗器械选自脉管移植物、支架、导管和伤口敷料。

3.权利要求1的医疗器械，其中所述聚合物载体纤维成分包括至少一个仲胺部分。

4.权利要求3的医疗器械，其中所述聚合物载体纤维成分选自聚乙烯亚胺、接枝于多糖骨架的聚乙烯亚胺、以及聚乙烯亚胺盐。

5.权利要求3的医疗器械，其中所述聚合物载体纤维成分包括聚乙烯亚胺纤维。

6.权利要求3的医疗器械，其中所述聚合物载体纤维成分包括电纺纳米纤维。

7.权利要求1的医疗器械，其中所述一氧化氮前药选自二醇二氮 烯、O-烷基化的二醇二氮 烯和O-衍生化的二醇二氮 烯。

8.权利要求1的医疗器械，其中所述一氧化氮前药包括二醇二氮 烯。

9.权利要求1的医疗器械，进一步包括活化剂。

10.权利要求9的医疗器械，其中所述活化剂是质子供体。

11.权利要求10的医疗器械，其中所述活化剂是选自磷酸盐、琥珀酸盐、碳酸盐、乙酸盐、甲酸盐、丙酸盐、丁酸盐、脂肪酸和氨基酸的缓冲液。

12.权利要求10的医疗器械，其中所述活化剂是水。

13.权利要求1的医疗器械，进一步包括流动相。

14.权利要求13的医疗器械，其中所述流动相能够运输活化剂，使其接触所述一氧化氮前药。

15.权利要求14的医疗器械，其中所述流动相选自水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、苯酚、萘酚、多元醇、乙酸、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺和四氢呋喃、六甲基磷酰胺。

16.权利要求1的医疗器械，其中所述第二纤维成分是疏水的。

17.权利要求1的医疗器械，其中所述第二纤维成分选自聚氨酯、聚酰胺、聚乙烯、聚丙烯、聚酯、聚四氟乙烯、全氟乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯和聚乙烯吡咯烷酮。

18.权利要求1的医疗器械，其中所述第二纤维成分赋予附加的强度。

19.权利要求18的医疗器械，其中所述第二纤维成分赋予足够的强度，以允许器械成为无需基底协助的自立式器械。

20.权利要求17的医疗器械，其中所述第二纤维成分是选自饱和聚酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯的聚酯。

说明书

用于医疗器械和治疗的聚合物NO供体前药纳米纤维涂层

[0001] 发明背景

[0002] 本发明涉及向需要给予NO的部位递送治疗量的一氧化氮(NO)的涂层和医疗器械。更具体而言，本发明涉及在延缓的活化之后放出一氧化氮的纤维材料。本发明的纳米纤维的功能是携带和隔离试剂，当水、血液或其它已知是活化剂的流体与纳米纤维接触时，所述试剂可以反应以释放出NO气体。隔离作用减缓了活化剂向NO前体的扩散并从而延缓该前体向NO的转变。

[0003] 已知NO抑制血小板的聚集和减少平滑肌增殖，已知这可以减少再狭窄(restenosis)。当直接向特定部位递送的时候，它显示出防止或减少如下部位的炎症：在该部位，医务人员已将外来物体或器械诸如支架或其它可植入器械引入患者中。

[0004] 研究者已找出多种方法来向损伤组织和向有损伤危险的组织和器官递送NO。NO可以全身性地递送，但这样的递送可能随之带来不希望的副作用，见美国专利号
5,814,656。理想的情况是，NO应当以受控制的方式特定地向那些已被损伤或有损伤危险的组织和器官递送。本发明通过提供延迟释放NO的涂层和医疗器械满足了这个需要，该延迟给予医师植入器械的时间。从而，在很大程度上，只有需要NO治疗的组织接受NO剂量。

[0005] 不溶性的聚合物NO-亲核复合体(NONOate)也已在Smith等，美国专利号5,519,020中被一般性地描述，用以向特定组织局部递送NO。然而，该专利并没有讨论阻止活化，以使器械最初施用的时间与NO的产生变得显著时的时间之间基本存在延迟。在可植入医疗器械上使用聚合物NO-亲核复合体作为涂层也在Stamler等，美国专利号5,770,654中被公开。该专利具有相似的缺点，在于它也未能讨论任何延缓一氧化氮产生的方式。‘645的器械从它最初被植入的那一刻起基本上就是活性的，因为它缺乏阻止活化剂的元件。与之相反，本发明恰恰加入了这样的元件，其特别针对减缓或延缓一氧化氮前药的活化。

[0006] 可能地，最接近的相关技术是发明者自己的美国专利号6,737,447，其公开了用于医疗器械的聚合物涂层，其以受控制的方式释放一氧化氮。然而，该发明与本发明的不同之处在于，‘447的控制释放的模式是它使用双环氧化物(bisepoxide)来交联涂层，从而压缩该材料的孔隙率，从而减缓活化剂向涂层的扩散以及减缓一氧化氮从涂层扩散出来。与其不同，本发明利用第二纤维，其具有更加疏水的特性或者具有缓冲效果，以阻止、减缓或延缓一氧化氮前体的活化。

[0007] 发明概述

[0008] 本发明涉及涂层和医疗器械，其向期望给予一氧化氮(NO)的区域递送治疗量的一氧化氮(NO)。更具体而言，本发明涉及在延缓的活化之后放出一氧化氮的纤维材料。本发明的纳米纤维的功能是携带和隔离，以及/或者缓冲围绕NO前体(在下文中称作前药)试剂的环境，当水、血液或其它已知是活化剂的流体与前体接触时，其释放NO。隔离作用减缓了活化剂向NO前体的扩散并从而延缓前体转变成NO，而这是由于第二纤维的疏水特性引起的。此外，缓冲作用形成了紧密围绕NO前体的更碱性的环境，这导致转变成一氧化氮的速率更慢。在任何给定的实施方案中，可以利用隔离效应或缓冲效应或二者阻止NO产生。在任何情况下，隔离效应和缓冲效应是由于掺入纤维而引起，在下文中将所述纤维称为“第二纤维”。

[0009] 本发明使用比现有技术更小量的NO前药来制造有效量的NO，这是因为其在空间上被限制在期望给予NO的位置，而一些现有技术允许NO在血流中循环。从而，以相对小的量，本发明可以放出治疗量的NO，并且可以用作支架涂层、用于打开支架的气囊、导管、用于诸如伤口敷料的产品以治疗真菌或寄生感染或治疗愈合不良的伤口。

[0010] 本发明的核心概念可以应用于其它领域，即CO或过氧化物生产、杀菌和化学治疗。特别地，使用第二纤维以隔离前体化合物从而阻止活化剂向其接近并从而延缓产物化合物的释放，这可以应用在其他领域，即CO或过氧化物生产、杀菌和化学治疗。

[0011] 本发明涉及一种医疗器械，其包括聚合物载体纤维成分、一氧化氮前药成分和用于将前药与活化种类隔离的第二纤维。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中所述医疗器械选自脉管移植物、支架、导管、伤口敷料和外科用线(surgical thread)。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中聚合物载体纤维成分包括至少一个仲胺部分。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中聚合物载体纤维成分选自聚乙烯亚胺、接枝于多糖骨架的聚乙烯亚胺和聚(乙烯亚胺)盐。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中聚合物载体纤维成分包括聚(乙烯亚胺)纤维。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中聚合物载体纤维成分包括电纺纳米纤维。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中一氧化氮前药成分选自二醇二氮鎓烯(diazeniumdiolate)、O-烷基化的二醇二氮鎓烯和O-衍生化的二醇二氮鎓烯。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中一氧化氮前药成分包括二醇二氮鎓烯。本发明进一步涉及医疗器械，其进一步包括活化剂(activator)。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中活化剂为质子供体。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中活化剂是选自磷酸盐、琥珀酸盐、碳酸盐、乙酸盐、甲酸盐、丙酸盐、丁酸盐、脂肪酸和氨基酸的缓冲液。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中活化剂为水。本发明进一步涉及一种医疗器械，其进一步包括流动相(mobile phase)。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中流动相能够运输活化剂，使得其与一氧化氮前药成分接触。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中流动相选自水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、苯酚、萘酚、多元醇、乙酸、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺和四氢呋喃、六甲基磷酰胺。本发明进一步涉及一种医疗器械，其进一步包括基本上疏水的第二纤维。本发明进一步涉及一种医疗器械，其中第二纤维选自聚氨酯、聚酰胺、聚乙烯、聚丙烯、聚酯、饱和聚酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚四氟乙烯、全氟乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯和聚乙烯吡咯烷酮。

[0012] 下面的术语被特别定义。前药(predrug)，如此处所用，是指将被修饰以形成药物种类的任何化合物，其中所述修饰可以发生在体内或体外，可以发生在前药到达身体中需要给予药物的区域之前或之后。聚合物载体纤维成分(polymeric carrier fiber component)包括至少一种任何如下所述的纤维：该纤维能够可逆地与一氧化氮反应以形成官能团，官能团位于纤维之上，相当于一氧化氮前药成分。第二纤维成分，如此处所用，指的是当器械被插入或植入患者，或以其它方式应用于患者时，将前药与活化剂隔开的一种或多种纤维，其中活化剂诸如血液或淋巴。术语活化剂(activator)包括激发一氧化氮前药成分产生一氧化氮的任何化合物。

[0013] 说明性实施方案的详细描述

[0014] 本发明涉及涂层和器械，其产生治疗量一氧化氮并将其递送到需要给予NO的有机体的部位。一般而言，本发明采取纤维混合物的形式。所述混合物的一些纤维是衍生化的，这使得它们在被激发以放出NO的时候可以放出NO。重要的是，其它“第二”纤维不是衍生化的，相反地，其目的是给纤维混合物提供结构，和/或用以将衍生化纤维的产生NO的部分与倾向于激发NO放出的种类隔离。可选地，它们的功能是缓冲NO前药的环境以便减缓它转变成NO。在这样进行时，第二纤维倾向于调节NO从本发明释放的速度，并阻止器械的组成部分——产生NO的部分的活化。

[0015] 本发明的一个说明性的实施方案包括用以打开血管的金属支架上的涂层。此类的器械必须通过血管将其送入而植入患者，从与支架将要最终被安放的区域有一些距离的部位开始。从而，位于插入位置的组织与需要给予一氧化氮的部位有一些距离。因此，位于插入部位的组织，以及插入位置和支架要被最终植入的部位之间的所有位置的组织都优选地不暴露于NO。本发明通过前述固定的NO产生延迟达到了这个目的。

[0016] 一般地说，本发明包含三个要素：(1)聚合物载体纤维成分，(2)一氧化氮前药，和(3)第二纤维成分。聚合物载体纤维成分包括任何如下所述的纤维或具有如下所述部位的纤维：该纤维或部位能够与一氧化氮可逆地反应以形成官能团，该官能团位于纤维之上，这相当于一氧化氮前药成分。可接受的纤维倾向于含有仲胺部分，因为已知仲胺与一氧化氮反应，形成二醇二氮鎓烯，其经历放出一氧化氮的一级反应。为了激发放出NO的反应，一氧化氮前药成分，即例如二醇二氮鎓烯，必须与质子源发生化学接触和反应，下文中将质子源称为活化剂。可以预期，许多类型的化合物都可以是活化剂，因为激发分解反应只需要非常小的Bronsted酸性。因此，水、醇、多元醇和类似物的酸性都足够使其作为活化剂。其它活化剂的种类包括体液，特别是血液、淋巴、胆汁和类似物。为了将NO暴露基本上限制在那些需要给予NO的部位，活化被阻止从而为器械向患者的植入或插入留出需要的时间。这种阻止作用是通过第二纤维的作用实现的，所述第二纤维或者将前药与倾向于激发前药到药的反应(predrug-to-drug reaction)的种类隔开，或者缓冲前药周围的环境，从而减缓它向药物形式转变的速率。优选地，本发明的三个要素可以包括单一的纤维，因为该纤维充当载体，包括前药，并且具有提供结构和/或隔离前药的“第二”纤维成分。但是，这些要素可以作为两个或三个独立的成分被提供。

[0017] 聚合物载体纤维成分

[0018] 聚合物载体纤维成分包括能够可逆地与一氧化氮反应以形成官能团的任何纤维，该官能团位于纤维上，相当于一氧化氮前药成分。可接受的纤维倾向于含有仲胺部分，因为已知仲胺与一氧化氮反应形成二醇二氮鎓烯，其经历放出一氧化氮的一级反应(I-II)。可接受的载体纤维成分包含聚合物，包括但不限于聚乙烯亚胺、聚丙烯亚胺、聚丁烯亚胺、聚氨酯和聚酰胺。进一步可接受的载体纤维成分包括接枝于惰性骨架的任何前述聚合物，如接枝于另外相对惰性骨架的聚乙烯亚胺，所述惰性骨架诸如多糖骨架，特别是纤维素骨架。更进一步可接受的载体纤维成分包括任何包含仲胺部分的可纤维化的材料。

[0019] (I)PEI结构

[0020]

[0021] 聚乙烯亚胺

[0022] (II)PEI NO-亲核复合体结构

[0023]

[0024] NO衍生化的聚乙烯亚胺

[0025] 用于形成依照本发明的载体纤维成分的优选材料是重均分子量大于约200,000的高密度线性聚乙烯亚胺(I-II)。线性PEI可溶于如水和乙醇的普通溶剂中。PEI纤维可以通过本领域已知的电纺工艺(electrospinning process)形成。本领域技术人员也应意识到，依照本发明，PEI纤维可通过电纺以外的方法形成。本领域已知的任何将有机聚合物制成纤维的方法都可以使用。例如，挤出法(extrusion method)，诸如湿纺(wet spinning)、干纺(dry spinning)、熔纺(melt spinning)和凝胶纺(gel spinning)，都是可接受的制成符合本发明的纤维的方法。一般而言，较细旦(denier)的纤维产生具有更大表面积、从而具有更多一氧化氮前药部分的纤维毡(fiber mat)，这一般带来更好的性能。因此，电纺是制造PEI纤维的优选方法。

[0026] 一般而言，本发明可以采取非织造纤维毡(nonwoven fiber mat)的形式，其中聚合物载体纤维和第二纤维被共纺(cospun)，使得它们或多或少地随机分布。本发明也可以采取分层的非织造纤维毡的形式，其中载体纤维被纺到基底上，随后通过纺织第二纤维基本上被覆盖和隔开。在每种情况下，非织造纤维毡可以采取医疗器械诸如支架上的涂层的形式。

[0027] 一氧化氮前药成分

[0028] 一般而言，本发明的一氧化氮前药成分包含任何如下述的任何化学实体：其在被本发明活化剂激发以放出一氧化氮的时候放出一氧化氮。在本领域中应该意识到，这些前药成分可以采取许多形式，包括但不限于二醇二氮鎓烯(有时称为NO-亲核复合体(NONOate))。本领域应进一步意识到，这些前药成分可以采取O-烷基化的二醇二氮鎓烯或任何O-衍生化的二醇二氮鎓烯的形式，其中O-衍生物可以转变回二醇二氮鎓烯。此类的O-衍生化的NO-亲核复合体一般比盐更稳定。特别地，分解反应的活化能一般基本上比非O-衍生化形式的高。因此，衍生物倾向于或者在缺乏酶活化剂的情况下不放出NO，或者显著地延长NO-亲核复合体的半衰期。非O-衍生化的二醇二氮鎓烯官能团，即盐，是本发明的优选的一氧化氮前药成分，并已知其通过一级机理在质子源，即活化剂存在的情况下分解。

[0029] PEI与NO反应通常导致二醇二氮鎓烯的形成，这引起PEI失去其在乙醇中的溶解性，以及在一些情况下变得不溶于水。当NO改性的PEI聚合物暴露于水时，它们以可预知的方式开始分解，导致NO的释放。典型的来自PEI纤维毡的NO释放过程(release profile)一般很短，有代表性的时间是1到2天。

[0030] 活化剂

[0031] 一般地，活化剂(activator)包括激发一氧化氮前药成分产生一氧化氮的任何化合物。当二醇二氮鎓烯是前药时，可接受的活化剂包括质子源，即Bronsted酸。符合本发明的代表性的活化剂包括但不限于：水，体液诸如血液、淋巴、胆汁和类似物；和甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、苯酚、萘酚、多元醇以及类似物。在本发明范围的进一步的活化剂包括通常的含水酸性缓冲液，包括但不限于磷酸盐、琥珀酸盐、碳酸盐、乙酸盐、甲酸盐、丙酸盐、丁酸盐、脂肪酸和氨基酸以及类似物。优选的活化剂包括但不限于：水、体液诸如血液或淋巴，醇，以及通常的含水酸性缓冲溶液。

[0032] 流动相

[0033] 本领域技术人员将会意识到，一氧化氮前药成分和活化剂可以以这样的方式在空间上隔开：该方式需要流动相将活化剂带到前药并从而引发反应。下文中此类流体被称为流动相。在许多情况中，在通常的操作条件下活化剂本身就是流体，所以不需要额外的载体流体。在这些情况中可以省略流动相。可接受的流动相包括任何能够将活化剂运输到前药成分的流体，其中运输的方式是将活化剂放置成与前药有物理化学接触，使得能够发生产生一氧化氮的反应。

[0034] 流动相是本发明的一种成分，其仅在活化剂在没有帮助的情况下不能达到一氧化氮前药成分的时候是需要的。一般而言，流动相将活化剂带到一氧化氮前药，使得二者发生物理化学接触，引起一氧化氮的放出。由此可见，流动相并不主要地以催化剂或反应剂的方式参与到分解中，相反，它们主要是运送活化剂的载体。然而，一种化合物能够引发前药放出NO的事实并不妨碍它也被归类为流动相。例如，水的酸性足够引起NO-亲核复合体放出NO，但它也可以溶解和向NO-亲核复合体前药运送诸如磷酸盐的活化剂，从而充当磷酸盐的运输载体。因此，水可以被双重归类为活化剂和流动相。

[0035] 可接受流动相包括流体，优选为液体，其能够将活性剂送到前药成分。更具体而言，本发明范围中的流动相是能够溶解活化剂的液体。更具体而言，当二醇二氮鎓烯是前药成分时，流动相优选为或多或少地极性的液体，特别是极性溶剂，诸如水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、苯酚、萘酚、多元醇、乙酸、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺和四氢呋喃、六甲基磷酰胺，以及类似物。

[0036] 第二纤维

[0037] 第二纤维的作用是将前药与活化剂隔开，缓冲NO前药周围的区域，或二者兼有，从而减缓前药转变为药物形式。因此，第二纤维可以具有基本上疏水的特性。由此，它们相当于活化剂与前药反应并释放NO所必须穿过的物理屏障。可选地，第二纤维可以具有碱性官能团，其使NO前药周围的环境碱性更强，从而减缓它转变成药物形式。因此，NO的产生基本被限制在患者的需要给予NO的区域。

[0038] 第二纤维在某种程度上也用于稀释释放NO的纤维，即聚合物载体纤维成分。释放NO的纤维的输出常常太快以至于不能形成单独包括它们的涂层或器械。合适地，将产生NO的纤维埋入或共纺进入另一种聚合物制成的纤维，即第二纤维的基体中常常是有意义的。合适的第二纤维的材料取决于应用，但一般而言，对它们的选择基于它们的将前药与活化剂隔开的能力，以及机械耐久性和生物降解性。

[0039] 此外，第二纤维可以是结构纤维，这是就它们可以增加材料的强度，允许其被制成多种产品，诸如自立式的贴、管或类似物而言。

[0040] 可以制成第二纤维的聚合物包括但不限于聚氨酯、聚酰胺、聚乙烯、聚丙烯，聚酯、饱和聚酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚四氟乙烯、全氟乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯和聚乙烯吡咯烷酮。优选地，第二纤维基本上是疏水的。

[0041] 考虑支架涂层，作为第二纤维的功能的说明。仅以NO改性PEI纤维涂覆的支架将会具有快速的NO输出。因此，该涂层将基本上会使没有损伤危险的并且不需要给予NO的组织暴露于NO。相反，如果聚氨酯诸如TECOPHILIC(Noveon IP Holdings Corp的商标，为用于制造疏水性塑料物品的热塑性聚氨酯化合物)与PEI电纺以形成支架涂层，则PEI的NO亲核复合体官能团不会马上与患者的血液接触，因为含水的体液穿过涂覆有聚氨酯的涂层需要时间。

[0042] 在优选的实施方案中，聚乙烯亚胺纳米纤维与聚氨酯第二纤维一起电纺于医疗器械或器械部件上。该纳米纤维随后暴露于NO气体，使得至少部分PEI的仲胺部分与NO反应形成二醇二氮鎓烯官能团。在另一个优选的实施方案中，PEI在电纺前暴露于NO，因此电纺PEI纤维已经含有二醇二氮鎓烯官能团。在每种情况下，PEI的NO亲核复合体官能团被聚氨酯纳米纤维隔离，从而隔开水分和其它活化剂，直到器械被植入。暴露于生物流体，诸如血液、淋巴或汗液之后；或者暴露于其它活化剂，诸如生理缓冲液、醇或多元醇之后，NO气体放出。

[0043] 在另一实施方案中，任何前述纤维可以被纺在包括但不限于支架、血管成形术气囊(angioplasty balloon)、导管以及类似物的任何医疗器械上。所述纤维也可以被纺入非织造纤维毡中，如在例如透皮贴剂、绷带和类似物中的情况。在另一实施方案中，产生一氧化氮的实体可以在聚合物载体纤维中被隔离，诸如以沉淀物(precipitate)的方式。在另一实施方案中，控制纤维的旦(denier)，以便调节NO的输出。例如，直径较小的纤维可以含有更多的一氧化氮前药成分，从而半径较小的纤维倾向于具有更高的NO输出。在另一实施方案中，第二纤维包括可生物降解或生物可吸收材料，使得以此类第二纤维制成的器械或其组成部分倾向于被对象有机体自身消耗。在另一实施方案中，本发明采取脉管移植物的形式。本发明的另一实施方案采取导管的形式。本发明的又一实施方案是伤口敷料，如以绷带的形式。

[0044] 为了示范本发明的实施，提供了下面的实施例。然而，实施方案不应该被看成对本发明的范围的限制。权利要求将用来限定本发明。

[0045] 线性聚乙烯亚胺(L-PEI)的合成是在底部具有排液阀门(drainstopcock)的2L三颈圆底瓶中进行的；其装配有温度计孔、回流冷凝器、添加漏斗、搅拌器和加热套。伴随快速搅拌300ml去离子水，聚(2-乙基-2-噁唑啉)或聚乙基噁唑啉500,000MW(49.6g，0.5mol碱)被缓慢加入其中，并且混合物在室温下被搅拌数小时，直到聚合物溶解。向搅拌的溶液中缓慢加入75g(0.75mol)硫酸；然后将混合物在100℃回流下搅拌。18小时后，增强搅动并另外加入200ml去离子水。蒸馏头被置于瓶上，约250ml馏出物(水和丙酸)被去除。

[0046] 回流时，加入250ml 50％的氢氧化钠，其伴随超过15分钟的搅拌。粘稠的黄色(轻质油脂色(浅奶油色)聚合物相粘附在搅拌器的轴上，加入200ml去离子水。苛性层