一种荷电性的前列腺素E1脂微球注射液及其制备方法

摘要

本发明涉及一种荷电性的前列腺素E1脂微球注射液及其制备方法。处方中含有0.0001-0.1份重量的前列腺素E1作为药物，加入药用辅料制成前列地尔脂微球注射液，药用辅料包括5-20份重量的注射用油、0.2-5份重量的乳化剂、0-5份重量的助乳化剂、0.5-3份重量的等渗调节剂、适量的抗氧剂、适量的pH调节剂和适量的注射用水。本发明从宏观及微观上探讨了前列腺素E1在水包油型分散体系中形成的脂质微球，包含油、油/水界面膜、水三相，可以将85％以上的药物包裹于油相和油/水界面膜相中，提高了制剂的稳定性，极大减轻了静脉注射时的血管刺激性，使药物更多沉积于炎症血管壁中，提高疗效降低剂量，大大提高患者的顺应性。

权利要求

1.一种荷电性前列腺素E1脂微球注射液，其特征在于，治疗有效量的前列腺素E1加入辅料后，通过乳化剂或助乳化剂的作用，被包裹于非均相分散系体系，所述非均相分散系体系由油相、油/水界面膜相、水相组成，分散相中药物的包封率在90％以上，所述注射液中含有0.0001-0.1份重量的前列腺素E1、所述的辅料有5-20份重量的注射用油、0.2-5份重量的乳化剂、0.1-5份重量的助乳化剂、0.5-3份重量的等渗调节剂、适量的抗氧剂、pH调节剂和适量的注射用水，其中，所得脂微球的粒径范围为10-500nm，平均粒度为80-300nm，脂微球表面的荷电为负电荷或正电荷，Zeta电位范围分别为-10--60mv和+10-+50mv。

2.根据权利要求1所述的前列腺素E1脂微球注射液，所述非均相分散系体系中油相载药量按重量百分比为0～4％，水相中的载药量为3-15％，油/水界面膜相载药量为80％～

95％，药物的包封率为83-97％。

3.根据权利要求2所述的前列腺素E1脂微球注射液，其特征是：加入药理允许的配伍溶液，将注射剂中前列腺素E1的含量控制在0.001～0.2mg/mL，所述配伍溶液选自氯化钠注射液、葡萄糖注射液、脂肪乳注射液或其他可注射溶液中的一种或多种，配得的单位注射剂量体积为5mL～500mL。

4.根据权利要求1-3任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液，所述的注射用油为含

6～24个碳原子的脂肪酸甘油酯，选自精制大豆油、辛葵酸甘油脂、麻油、红花油、橄榄油、花生油、棉子油、维生素E、油酸乙酯、亚油酸甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、亚油酸乙酯、油酸山梨醇酯、油酸甘油酯、椰子油C8/C10甘油单酯或双酯、椰子油C8/C10丙二醇双酯、椰子油C8/C10甘油三酯、纯化乙酰化的单甘油酯、纯化向日葵油单甘油酯、鱼油中的一种或几种混合物。

5.根据权利要求1-3任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液，所述的乳化剂选自大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂，天然或人工合成的具有磷脂酰胆碱结构的衍生物、泊洛沙姆、聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯、α-生育酚琥珀酸酯-聚乙二醇酯、聚乙二醇琥珀酸酯、乙酸单甘油酯、聚甘油棕榈酸二醇酯中的一种或几种混合物。

6.根据权利要求1-3任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液，所述助乳化剂选自油酸或其盐、辛酸、葵酸、月桂酸、棕榈酸、亚油酸、亚麻油酸、硬脂酸、胆酸、去氧胆酸或其盐、二十二碳六烯酸、无水乙醇、正丁醇、正己醇、乙二醇或丙二醇、十八胺或油胺中的一种或几种混合物。

7.根据权利要求1-3任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液，所述的等渗调节剂选自甘油、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、山梨醇中的一种或几种混合物。

8.根据权利要求1-3任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液，所述的抗氧剂选自惰性气体、EDTA及其盐类、维生素E、α-生育酚、α-醋酸生育酚、α-硫辛酸、维生素C及其衍生物中的一种或几种混合物。

9.根据权利要求1-3任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液，所述的pH调节剂选自盐酸、氢氧化钠、醋酸、醋酸钠、磷酸、磷酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠中的一种或几种混合物。

10.一种权利要求1-9任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液的制备方法，其特征是：

初乳化工艺：

(1)油相的配制：a.在配制灌中加入注射用油、乳化剂、助乳化剂、抗氧剂混合，加热温度至30-90℃，搅拌溶解后，加入药物，搅拌分散至溶解；

b.在配制灌中加入注射用油、助乳化剂、抗氧剂，加热温度至30-90℃，搅拌混匀溶解后，加入药物，搅拌分散至溶解；

(2)水相的制备：将水、乳化剂、等渗调节剂、抗氧剂在30-90℃下，同油相温度搅拌使之完全分散均匀；

(3)在20-80℃时，将油相加入水相或水相加入油相，强烈搅拌或高速剪切分散混匀，形成初乳；

(4)用一定浓度的pH调节剂将pH值调节到3-8；

精乳化工艺：

(5)用高压匀质机或用微射流仪，将压力调至50-2000bar，将溶液反复匀化，制得均匀分散的前列腺素E1脂微球注射剂；

(6)将(5)步制得乳剂经0.22μm的微孔滤膜进行过滤除菌，滤液灌封后，即得前列腺素E1脂微球注射液，其中，步骤(1)-(6)均在在氮气流保护下操作。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征是：采用非终端灭菌注射剂的生产流程工艺规定，全过程可在无菌万级和局部百级生产条件下，制得的前列腺素E1脂微球注射液经0.22μm的微孔滤膜过滤除菌后，滤液直接灌封，即得。

12.根据权利要求10所述的制备方法，其特征是：采用终端灭菌的生产工艺流程的规定，全过程可在万级生产条件下，制得的前列腺素E1脂微球注射液经0.45或0.22μm的微孔滤膜精滤后，灌封，采用过度杀灭法或残存概率法等欧盟规定的灭菌树下的条件，即得。

13.权利要求1-9任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液用于制备治疗慢性动脉闭塞症引起的四肢溃疡及微小血管循环障碍引起的四肢静息疼痛，改善心脑血管微循环障碍的药物中的应用，所述的慢性动脉闭塞症选自血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化症。

14.权利要求1-9任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液用于制备脏器移植术后抗栓治疗的药物中的应用，所述药物用以抑制移植后血管内的血栓形成。

15.权利要求1-9任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液用于制备治疗动脉导管依赖性先天性心脏病的药物中的应用，所述药物用以缓解低氧血症，保持导管血流以等待时机手术。

16.权利要求1-9任一项所述的前列腺素E1脂微球注射液用于制备慢性肝炎的辅助治疗的药物中的应用。

说明书

一种荷电性的前列腺素E1脂微球注射液及其制备方法

技术领域：

[0001] 本发明涉及医药技术领域，确切的说，它是一种分布于内向(油相、油/水界面膜相)的一种的列腺素E1脂微球注射液及其制备方法，并适用于前列腺素类药物的脂微球制剂制备方法。背景技术：

[0002] 前列腺素(PNstaglandinum，PG)是一类具有20个碳原子的不饱和脂肪酸，含有不同的亚型，具有广泛的生物学效应。前列腺素E1(前列地尔，PGE1)是其中的一种活性极强的生理活性物质，具有抑制血小板聚集、血栓素A2生成、动脉粥样硬化、脂质斑块形成及免疫复合物的作用。前列地尔脂微球注射液主要成分为前列腺素E1，其化学名称为：(1R，2R，3R)-3-羟基-2[(E)-(3S)-3-羟基-1-辛烯基]-5-氧代环戊烷庚酸。分子式：C20H34O5，分子量：354.49，其化学结构图见附图1。PGE1临床主要作用为扩张外周血管和冠状血管，治疗慢性动脉闭塞症(血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化症)引起的四肢溃疡及微小血管循环障碍引起的四肢静息疼痛，改善心脑血管微循环障碍。降低外周阻力和血压，有保护缺血性心肌，缩小心肌梗死面积。脏器移植术后抗栓治疗，用以抑制移植后血管内的血栓形成。
动脉导管依赖性先天性心脏病，用以缓解低氧血症，保持导管血流以等待时机手术治疗。用于慢性肝炎的辅助治疗等作用，还有排钠、利尿及对肝、肾、肺、胃病变均有治疗、保护作用，尤其对老年心血管病的治疗有独特疗效，作用机制如附图20。

[0003] 现有注射剂存在的问题：目前国内前列地尔制剂已有多个剂型，如冻干粉针剂、环糊精包合的冻干粉针剂、脂肪乳剂注射液等。现在国内已有多家药厂生产PGE1冻干粉针，但对药品的疗效反映不一。报道的副作用主要为：静脉滴注多有不同程度的灼样胀痛，有的病人沿静脉皮肤出现“红线”，这是静脉及周围血管扩张所致，一般都能耐受；若滴注过快，疼痛严重，疼痛和“红线”停止注射后消失。1997年以来使用澳亚生物技术有限公司生产的前列腺素E-(PGE-)右旋糖酐无菌冻干剂，在静脉滴注中，对局部静脉管壁有一定的刺激，轻者病人输液部位胀痛，严重者出现红肿热痛，沿血管走行迅速蔓延，引起静脉炎症，甚至静脉成硬索状及全身发热等症状，而被迫终止治疗[吉雅玲·前列腺素E1致静脉损伤的护理·现代医药卫生，2003，19(4)：491-492.]。前列腺素E是广泛存在于体内的生理活性物质，具有显著的扩血管和抑制血小板凝集等作用。目前传统的PGE注射液或粉针剂以β-环糊精包合的方式制得的真空冷冻干燥制品，存在有效给药剂量大的缺点，每日剂量高达100～400μg，长时间持续静脉维持给药，由于给药剂量大，暴露的前列地尔导致静脉注射时，局部疼痛、肿胀感觉、发烧、瘙痒感强烈，穿刺部位疼痛、发红和沿静脉走向出现红线，经减慢输液速度后逐渐才能缓解；而且该制剂在体内代谢很快，每经一次肺循环约有70％～90％的前列地尔被灭活，故患者由此产生难以耐受的血管疼痛及全身不良反应发生率相当高，严重影响患者的顺应性和治疗的有效性。前列地尔注射液与输液混合后宜在2h内使用，否则制剂中脂微球里包裹的前列地尔会释放出来，从而产生与传统PGE粉针剂相同的不良反应。静脉应用时也可能有少量的PGE渗漏至脂微球载体外，局部刺激血管，引起轻微的外周静脉炎，静脉给药速度过快、剂量过大时也可出现胸闷、心悸、血压下降等[张世莲·33例注射用前列地尔不良反应报告分析·首都医药，2006，12：34-35.]。

[0004] 已上市的前列地尔注射液(凯时，北京泰德制药有限公司)的制定标准中降解产物前列腺素A1的含量限度高达3ug/ml，达到主药的60％，超过主成分前列地尔一半以上的量，不尽合理。本发明制剂的剂型特点：发明一种又能有效地抑制前列地尔的降解产物的新工艺和制备方法，改变药物在载体的载药方式，使降解产物前列腺素A1的含量限度为原来的二分之一，仅为1.5ug/ml，同时在剂型和新的释药体系上又极大优越于市售普通注射剂，为处方组成和制备工艺的研究提供充足的理论依据，达到DDS给药体系和药物本身存贮条件、杂质最低的优势完美结合；

[0005] 本发明涉及一种非均相(包含水相、油/水界面膜相、油相)分散系体系的前列腺素E1脂质微球注射液的制备方法，其脂微球表面可以是荷正电也可以是荷负电。前列腺素E1的化学结构是具有一个五碳环和两条侧链的二十碳脂肪酸的基本骨架，其中一条侧链具有亲水的羧酸基团，因而具有轻微的表面活性作用的特性。应用该特性，通过本发明所描述的处方和制备工艺技术，使得它在上述非均相的分散系体系“脂微球”溶液中，具有奇特的TM载药方式，所制得的脂微球注射液，与已经上市的前列地尔注射液(凯时 ，应用日本三菱TM
公司技术制得)具有本质的不同，其区别在于载体的载药方式完全不一致：凯时 中的药物被封入微球中的油性基质里(附图21)，本发明制得的脂微球注射液中药物则主要分布于油/水界面膜中(附图22)，通过细胞膜融合及胞饮作用，更加快速沉积血管炎症组织而快速发挥疗效。

[0006] 上述关于已经上市的前列地尔注射液(凯时TM，北京泰德制药有限公司出品)载药方式的描述(CN 101049313)及附图，均转载于北京泰德制药有限公司和日本株式会社LTTバイオフア一マ关于前列地尔脂微球注射液的有关产品信息和图片(附图21、23)。

[0007] 制成的前列地尔脂微球注射液，试验结果表明，可以最大限度的减少PGE1在液体制剂中的水解，使乳粒在液体制剂中的贮藏期间聚集或分层的现象尽可能减少，临床应用时只须用10-100mL的葡萄糖、氯化钠或无菌无热原质量可控的脂肪乳注射液与前列地尔注射液配伍使用，仍然保持脂微球注射液的特点，减少了注射液的血管刺激性并可大大提高产品的安全性，改善了以往临床使用时的诸多问题，可降低前列腺素E1普通注射液注射时的血管刺激性，并可大大提高产品的安全性，极大地方便了患者与医护人员的使用。同时由于滴注量的减少可避免大量输液输注时导致的不良反应增加。本研究的加速、长期稳定性试验研究结果表明，在2～5℃下有效期可长达18个月，优于凯时贮存期(12个月)。在制备工艺产业化生产上也可节省大量工业成本。因此前列地尔脂微球注射液是一种有广阔市场前景的脂微球新制剂。

[0008] 前列腺素E1剂型研究情况：目前，研究较多的前列腺素E1剂型有普通的注射液、载药脂肪乳注射液、冻干粉针、脂质体等。CN1872072公开了一种前列地尔纳米乳注射剂及其制备方法，与上市的凯时前列地尔注射液，可改变药物在体内的分布，工艺上仅能通过终端灭菌制得；CN1823786公开一种前列地尔脂肪乳剂灭菌工艺及测定的方法，采用了915MHz或2450MHz频率微波设备，使安瓿温度升高至65-140℃，并维持10秒-5分钟，进行灭菌，认为可完全杀灭制剂中微生物。该方法虽然认为可行，但迄今为止，我国及欧盟、美国等从未有关于此种灭菌方法的验证方案，是否能达到国际公认的无菌保证水平，不置可否。
CN156204公开了前列地尔冻干乳剂及其制备方法，重复其实施例中的方法，发现无法实现，其效果与其权利说明书相差甚远，值得商榷。CN1813764和CN1739525公开了一种制备前列地尔脂质体的方法，属于脂质体载药体系。CN1903177公开前列地尔纳米粒及其制备方法，其中载体选用了新辅料脂肪酸泊洛沙姆胆固醇酯(POGC)和脂肪酸PEG胆固醇酯(PEGC)，制备的纳米粒粒径≤1μm。CN1857272公开了前列地尔的一种小输液的制备方法，用药体积达到100ml，增加非均相注射液产业化成本，延长临床输注时的给药时间，无疑延长病患者忍受前列地尔固有的血管刺激性反应的痛楚时间。上述已公开的专利技术，不同程度的存在着药物渗漏及体内药物的突释行为，并且制剂过程中用到了非水溶剂，会导致溶剂残留。
尽管已公开的专利技术在某种程度上与本发明或多或少存在一定的交集，并不影响本发明权利特征，而且，尚无专利或文献揭示前列地尔的载药特性，及其在非均相体系，尤其是三相并存的分散系体系中，前列地尔在制剂形态中的分布特性。

[0009] 目前脂微球的形成理论尚未成熟，但乳化剂在乳剂形成过程中的作用已被逐渐认识，其中界面吸附膜学说认为，乳化剂在降低两相界面张力同时，乳化剂被吸附于液滴周围，有规律地排列在液滴界面形成吸附膜。界面吸附屏障阻碍液滴合并，使乳剂稳定。界面膜的强度与紧密度直接影响乳剂的稳定性，乳化剂种类不同，则界面吸附不同。前列地尔的化学结构为具有一个五碳环和两条侧链的二十碳脂肪酸的基本骨架，其中一条侧链具有亲水的羧酸基团，因而前列地尔具有轻微的表面活性的作用的特性。由于该特性的存在，使得前列地尔在上述非均相的分散系体系“脂微球”溶液中，具有奇特的载药方式。

[0010] 非均相体系存在的主要问题是分散相液滴有合并变大的趋势，因此进一步提高制剂的物理稳定性是解决该类制剂稳定性的先决条件。以上公开专利并没有阐明此剂型中药物在油相、水相和油/水界面膜相的分布特点和作用机理，本发明人通过长期对该剂型的深入研究，掌握了此剂型的微观结构特点并通过试验在宏观上阐明此剂型的特点。通过优化处方工艺使得此剂型很大程度上提高了油相和油/水界面膜相中的载药率及包封率，相当大的程度上提高了前列腺素在体外的物理稳定性及体内的化学稳定性，而且提高前列腺素在油相和油/水界面膜相的分布，可以减轻注射时的血管刺激性，能大大提高患者的顺应性，并可进一步形成产业化规模。另外，目前还没有专利对前列腺素E1在体内或外部刺激所表现的行为与反应进行广泛、深入地研究。由于前列地尔脂微球注射液在临床上通常用少数几种输液稀释后使用，因此阐明其在这些输液的分布行为十分重要。因为在输液中的水相里，它可以从脂质微球中被释放。Minakuchi等人报道了当PGE1用10倍量的盐水或缓冲盐(pH 5.6)稀释后，大部分的PGE1被直接释放至水溶液介质中，基于这个结果，他们认为PGE1乳剂并没有发挥出作为脂质微球在临床治疗应用上的优势。本研究的目的是为了从药剂学观点解释PGE1高效并确定考虑到PGE1在脂微球注射液的分布。

[0011] 此外，本发明还包含了不同荷电性的前列地尔脂微球注射液，是本发明的独到之处。

[0012] 关于本发明在技术方案和效果以及阐明药物在该剂型中分布特点方面明显优于上述专利申请，并适用于前列腺素类药物的制剂工艺。发明内容：

[0013] 本发明的目的就是提高前列地尔的水溶性和稳定性、降低刺激性，提供一种制备工艺简单，可供工业化高效率大生产的前列地尔脂微球注射液及其制备方法并阐明其制剂的药物分布特点。本发明通过从微观及宏观上阐明了前列地尔在此剂型上的分布特点，证明其能改善或提高药物在油相和油/水界面膜相中的包封率，具有控制药物释放，靶向定位释放，降低静脉给药的血管刺激性并进一步提高了制剂的物理稳定性等优点。本发明以中链油、大豆油、维生素E、油酸乙酯等含6-24个碳原子的脂肪酸甘油脂作为油相，采用适当的处方和工艺，制备出平均粒径小于200nm的一种前列地尔脂微球注射液制剂，从而大大提高药物的稳定性，增加患者的顺应性。前列地尔脂微球注射液是将有效剂量的前列腺素E1作为药物，并配以药用辅料，药用辅料包括注射用油、乳化剂、助乳化剂、pH调节剂、等渗调节剂、抗氧剂；药物：注射用油为1∶1～1∶500。

[0014] 一种荷电性的前列腺素E1脂微球注射液的处方如下：

[0015] 前列腺素E1 0.0001-0.1份重量

[0016] 注射用油 5-20份重量

[0017] 乳化剂 0.2-5份重量

[0018] 助乳化剂 0.1-5份重量

[0019] 等渗调节剂 0.5-3份重量

[0020] 抗氧剂 适量

[0021] pH调节剂 适量

[0022] 注射用水 适量

[0023] 所述的注射用油可以是精制大豆油、辛葵酸甘油脂、麻油、红花油、橄榄油、花生油、棉子油、维生素E、、油酸乙酯、亚油酸甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、亚油酸乙酯、油酸山梨醇酯、油酸甘油酯、椰子油C8/C10甘油单酯或双酯、椰子油C8/C10丙二醇双酯、椰子油C8/C10甘油三酯、纯化乙酰化的单甘油酯、纯化向日葵油单甘油酯、鱼油及其它动物油脂中的一种或几种混合物。

[0024] 所述的乳化剂可以是磷脂、泊洛沙姆、聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯(HS-15)、α-生育酚琥珀酸酯-聚乙二醇酯(TPGS)、聚乙二醇琥珀酸酯、乙酸单甘油酯、聚甘油棕榈酸二醇酯、中的一种或几种混合物；

[0025] 所述的助乳化剂可以是油酸或其盐、辛酸、葵酸、月桂酸、棕榈酸、亚油酸、亚麻油酸、硬脂酸、胆酸、去氧胆酸或其盐、二十二碳六烯酸(DHA)、无水乙醇、正丁醇、正己醇、乙二醇或丙二醇中的一种或几种混合物；

[0026] 所述的等渗调节剂可以是甘油、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、山梨醇中的一种或几种混合物；

[0027] 所述的抗氧剂可以是惰性气体、EDTA及其盐类、维生素E、α-生育酚、α-醋酸生育酚、α-硫辛酸、维生素C及其衍生物中的一种或几种混合物。

[0028] 所述的pH调节剂可以是盐酸、氢氧化钠、醋酸、醋酸钠、磷酸、磷酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠等中的一种或几种混合物。

[0029] 所述的一种荷电性的前列腺素E1脂微球注射液制剂的处方工艺如下：

[0030] 初乳化工艺：

[0031] (1)油相的配制：a.在配制灌中加入注射用油、乳化剂、助乳化剂、抗氧剂混合，加热温度至30～90℃，搅拌溶解后，加入药物，搅拌分散至溶解；

[0032] b.在配制灌中加入注射用油、助乳化剂、抗氧剂，加热温度至30～90℃，搅拌混匀溶解后，加入药物，搅拌分散至溶解；

[0033] (2)水相的制备：将水、乳化剂、等渗调节剂、抗氧剂在30～90℃下，同油相温度搅拌使之完全分散均匀；

[0034] (3)在20～80℃时，将油相加入水相或水相加入油相，强烈搅拌或高速剪切分散混匀，形成初乳；

[0035] (4)用一定浓度的pH调节剂将pH值调节到3～8；

[0036] 精乳化工艺：

[0037] (5)用高压匀质机或用微射流仪，将压力调至50～2000bar，将溶液反复匀化，制得均匀分散的前列地尔脂微球注射剂；

[0038] (6)将上述(5)制得乳剂经0.22μm的微孔滤膜进行过滤除菌，滤液灌封后，既得前列地尔脂微球注射液。

[0039] (7)上述(1)～(6)全过程，均在在氮气流保护下操作。

[0040] 无菌/灭菌工艺：

[0041] 依照欧盟灭菌工艺选择的决策树原则：

[0042] (1)采用非终端灭菌注射剂的生产流程工艺规定，全过程可在无菌万级和局部百级生产条件下，制得的前列地尔脂微球注射液经0.22μm的微孔滤膜过滤除菌后，滤液直接灌封，即得。成品符合GMP和无菌保证水平的规定，临床应用安全有效。

[0043] (2)采用终端灭菌的生产工艺流程的规定，全过程可在万级生产条件下，制得的前列地尔脂微球注射液经0.45或0.22μm的微孔滤膜精滤后，灌封，采用过度杀灭法或残存概率法等欧盟规定的灭菌树下的条件，即得。成品符合GMP和无菌保证水平的规定，保障临床应用的安全性。

[0044] 本发明所述的一种荷电性的前列腺素E1脂微球注射液，如说明书附图2所示，该乳剂由油相、水相、和油/水界面膜相组成，其中油相载药量按重量百分比为0～4％，水相中含量不到15％，油/水界面膜相载药量为80％～95％之间。

[0045] 所制成的前列地尔脂微球注射液粒径范围为10～500nm，平均粒度80～300nm。优选的粒径范围为50～500nm，平均粒度100～200nm。脂微球表面的荷电可以是负电荷，也可以是正电荷，Zeta电位范围分别为-10～-60mv和+10～+50mv之间。

[0046] 所制成的前列地尔脂微球注射液其药物90％以上被包裹于油相和油/水界面膜相中。所制成的前列地尔脂微球注射液加入药理允许的配伍溶液使制得的前列地尔脂微球注射液的含量在0.001～0.2mg/mL之间，其中的配伍溶液可以为氯化钠注射液、葡萄糖注射液、空白脂肪乳注射液或其他可注射溶液中的一种或多种，配得的单位注射剂量体积在5mL～500mL之间。

[0047] 所制成的前列地尔脂微球注射液降解产物前列腺素A1的含量限度小于15％，使DDS给药体系和药物本身稳定性、存贮条件、杂质最低的优势完美结合，得到更加稳定有效的前列地尔脂微球制剂。

[0048] 本发明研制的一种荷电性的前列腺素E1脂微球注射液具有以下优点：

[0049] 1.本发明的脂微球注射液生理相容性好，解决了前列地尔普通注射液剂量大的问题，降低了毒副作用，提高了机体耐受性；

[0050] 2.本发明的脂微球注射剂临床应用时可以与10-20mL的葡萄糖、氯化钠或无菌无热源质量可控的脂肪乳注射液配伍使用，配伍后各项指标均符合要求，无明显差异，仍然保持脂微球注射液的特点，并可大大提高产品的安全性，极大地方便了患者与医护人员的使用；

[0051] 3.本发明的脂微球注射液通过相分布试验结果表明该前列地尔脂微球注射液制剂提高了物理及化学稳定性，可以减小注射时引起的静脉刺激性并减小了用药剂量，给药剂量仅为传统注射液的十分之一，但有着与普通大剂量注射剂同样的临床疗效，同时由于滴注量的减少可避免大量滴注脂肪乳剂时导致的中枢神经损坏、脂肪超载综合征等不良反应；见附图13

[0052] 4.本发明的脂微球注射液具有靶向性，改善了药物的释放性质，提高了药物的生物利用度和患者的顺应性；

[0053] 5.本发明的脂微球注射液制备工艺简单，成熟，便于工业化生产。

附图说明

[0054] 图1前列地尔化学结构图

[0055] 图2前列地尔脂微球注射液相分布示意图，A前列地尔药物，B磷脂，C油(C6～C24脂肪酸甘油酯)，D水相，E油/水界面膜相，I油相载药(0～4％)，II水相载药(3～15％)，III油/水界面膜相载药(80～95％)

[0056] 图3～图12实施例1～实施例10前列地尔脂微球注射液中药物在各相的分布图[0057] 图13前列地尔脂微球注射液给予同等疗效下给药剂量示意图

[0058] 图14前列地尔脂微球注射液实施例6粒径图

[0059] 图15前列地尔脂微球注射液实施例6显微镜检图(油镜)

[0060] 图16前列地尔脂微球注射液实施例6电镜照片

[0061] 图17前列地尔脂微球注射液实施例6体外释放度曲线图

[0062] 图18前列地尔脂微球注射液血管刺激性试验比较图

[0063] 图19前列地尔脂微球注射液与传统制剂对抑制血栓形成效果的比较图[0064] 图20前列地尔脂微球注射液作用机制示意图

[0065] 图21凯时TM中的药物被封入微球中的油性基质里(OIL油，PC磷脂，PGE1前列地尔)示意图

[0066] 图22本发明制得的脂微球注射液中药物主要分布于油/水界面膜中(OIL油，PC磷脂，PGE1前列地尔)示意图

[0067] 图23凯时TM中的药物被封入微球中的油性基质里资料截图(日本株式会社LTTバイオフア一マ网页资料)

[0068] 图24荷负电的脂质微球示意图(实施例1～9：A油，B前列地尔，C表面活性物质，D负电荷物质)，Zeta电位：-10～-60mv

[0069] 图25荷正电的制脂微球示意图(实施例10：A油，B前列地尔，C表面活性物质，D正电荷物质)，Zeta电位：+10～+50mv具体实施方式：

[0070] 实施例1：

[0071] 处方：前列腺素0.5mg，蛋黄卵磷脂1.5g，注射用中链油8g，氢氧化钠适量，甘油2.5g，其余为注射用水，共100ml。

[0072] 工艺：

[0073] (1)油相的配制：在配制灌中加入注射用中链油，控制注射用中链油的温度在40℃，加入蛋黄卵磷脂，强烈搅拌至溶解，降温至30℃加入药物，搅拌混匀；

[0074] (2)水相的制备：将水和甘油在40℃下搅拌5min，使之完全混溶；

[0075] (3)在30℃时，将油相加入水相，强烈搅拌混匀，形成初乳；

[0076] (4)用氢氧化钠调节pH值到5；

[0077] (5)过匀质仪：第一步调节匀化压力至500bar，第二步再调至1000bar，将溶液反复匀化；

[0078] (6)上述制得乳剂在无菌条件下用0.22um的微孔滤膜进行过滤除菌，在氮气流保护下灌封后，即得。

[0079] 实施例2：

[0080] 处方：前列腺素0.5mg，大豆磷脂1.5g，注射用大豆油10g，葡萄糖5g，柠檬酸钠适量，其余为注射用水，共100ml。

[0081] 工艺：

[0082] (1)油相的配制：在配制灌中加入注射用大豆油，控制注射用大豆油的温度在60℃，加入大豆磷脂，强烈搅拌至溶解；

[0083] (2)水相的制备：将水和葡萄糖在55℃下搅拌5min，使之完全混溶；

[0084] (3)在60℃时，将油相加入水相，强烈搅拌混匀，形成初乳；

[0085] (4)用氢氧化钠调节pH值到5.8；

[0086] (5)过匀质仪：第一步调节匀化压力至600bar，第二步再调至1500bar，将溶液反复匀化；

[0087] (6)上述制得乳剂在无菌条件下用0.22um的微孔滤膜进行过滤除菌，在氮气流保护下灌封后，即得。

[0088] 实施例3：

[0089] 处方：前列腺素0.5mg，蛋黄卵磷脂1.2g，注射用大豆油6g，辛葵酸甘油酯4g，甘露醇5g，油酸0.01g，氢氧化钠适量，其余为注射用水，共100ml。(附图23)

[0090] 工艺：全程氮气保护下

[0091] (1)油相的配制：在配制灌中加入注射用大豆油、辛葵酸甘油酯和油酸，控制温度在60℃，加入蛋黄卵磷脂，强烈搅拌至溶解，降温至50℃加入药物，强烈搅拌混匀；

[0092] (2)水相的制备：将水、甘露醇在50℃下搅拌5min，使之完全混溶；

[0093] (3)在30℃时，将水相加入油相，强烈搅拌混匀，形成初乳；

[0094] (4)用氢氧化钠调节pH值到6；

[0095] (5)过匀质仪：第一步调节匀化压力至400bar，第二步再调至2000bar，将溶液反复匀化；

[0096] (6)上述制得乳剂在无菌条件下用0.22um的微孔滤膜进行过滤，在氮气流保护下灌封后，采用过度灭杀法灭菌后即得。

[0097] 实施例4：

[0098] 处方：前列腺素5.0mg，蛋黄磷脂0.8g，泊洛沙姆0.5g，油酸乙酯5g，甘油2.5g，维生素E0.01g，氢氧化钠适量，其余为注射用水，共100ml。

[0099] 工艺：全程氮气保护下

[0100] (1)油相的配制：在配制灌中加入油酸乙酯、维生素E，控制温度在70℃，加入蛋黄磷脂和泊洛沙姆，强烈搅拌至溶解，降温至40℃加入药物，搅拌混匀；

[0101] (2)水相的制备：将水、泊洛沙姆、甘油、在40℃下搅拌5min，使之完全混溶；

[0102] (3)在40℃时，将水相加入油相，强烈搅拌混匀，形成初乳；

[0103] (4)用氢氧化钠调节pH值到5.4；

[0104] (5)过匀质仪：第一步调节匀化压力至300bar，第二步再调至1000bar，将溶液反复匀化；

[0105] (6)上述制得乳剂在无菌条件下，用0.22um的微孔滤膜进行过滤除菌，在氮气流保护下灌封后，即得。

[0106] 实施例5：

[0107] 处方：前列腺素10.0mg，蛋黄磷脂1.5g，油酸0.3g，注射用大豆油10g，甘油2.5g，α-硫辛酸0.01g，氢氧化钠适量，其余为注射用水，共100ml。

[0108] 工艺：全程氮气保护下

[0109] (1)油相的配制：在配制灌中加入注射用大豆油，控制温度在70℃，加入蛋黄磷脂和油酸，强烈搅拌至溶解，降温至60℃加入药物，强烈搅拌混匀；

[0110] (2)水相的制备：将水、甘油和α-硫辛酸在60℃下搅拌5min，使之完全混溶；

[0111] (3)在60℃时，将油相加入水相，强烈搅拌混匀，形成初乳；

[0112] (4)用氢氧化钠调节pH值到5.5；

[0113] (5)过匀质仪：第一步调节匀化压力至500bar，第二步再调至1200bar，将溶液反复匀化；

[0114] (6)上述制得乳剂在无菌条件下用0.22um的微孔滤膜进行过滤，在氮气流保护下灌封后，采用残存概率法灭菌即得。

[0115] 实施例6：

[0116] 处方：前列腺素0.5mg，蛋黄磷脂1.2g，注射用大豆油6g，辛葵酸甘油脂6g，油酸2.1g，木糖醇5g，维生素E0.05g，泊洛沙姆0.15g，氢氧化钠适量，其余为注射用水，共100ml。

[0117] 工艺：

[0118] (1)油相的配制：在配制灌中加入注射用大豆油、维生素E和辛葵酸甘油脂，控制温度在60℃，加入蛋黄磷脂和油酸，强烈搅拌至溶解，降温至40℃加入药物，强烈搅拌混匀；

[0119] (2)水相的制备：将水、木糖醇、泊洛沙姆在40℃下搅拌5min，使之完全混溶；

[0120] (3)在40℃时，将水相加入油相，强烈搅拌混匀，形成初乳；

[0121] (4)用氢氧化钠调节pH值到5；

[0122] (5)过匀质仪：第一步调节匀化压力至600bar，第二步再调至2000bar，将溶液反复匀化；

[0123] (6)上述制得乳剂在无菌条件下用0.22um的微孔滤膜进行过滤除菌，在氮气流保护下灌封后，即得。

[0124] 实施例7：

[0125] 处方：前列腺素5.0mg，蛋黄磷脂2g，注射用大豆油3g，纯化向日葵油单甘油酯3g，亚油酸2.1g，甘油2.5g，维生素E0.05g，氢氧化钠适量，其余为注射用水，共100ml。

[0126] 工艺：

[0127] (1)油相的配制：在配制灌中加入注射用大豆油、维生素E和纯化向日葵油单甘油酯，控制温度在80℃，加入蛋黄磷脂和亚油酸，强烈搅拌至溶解，降温至50℃加入药物，强烈搅拌混匀；

[0128] (2)水相的制备：将水、甘油在40℃下搅拌5min，使之完全混溶；

[0129] (3)在40℃时，将油相加入水相，强烈搅拌混匀，形成初乳；

[0130] (4)用氢氧化钠调节pH值到5；

[0131] (5)过匀质仪：第一步调节匀化压力至700bar，第二步再调至1900bar，将溶液反复匀化；

[0132] (6)上述制得乳剂在无菌条件下用0.22um的微孔滤膜进行过滤除菌，在氮气流保护下灌封后，流通蒸汽灭菌30分钟即得。

[0133] 实施例8：

[0134] 处方：前列腺素1.5mg，大豆磷脂0.8g，纯化向日葵油单甘油酯6g，辛葵酸甘油脂8g，油酸2.1g，山梨醇5g，维生素E0.05g，氢氧化钠适量，其余为注射用水，共100ml。

[0135] 工艺：全程氮气保护下

[0136] (1)油相的配制：在配制灌中加入辛葵酸甘油脂、维生素E和纯化向日葵油单甘油酯，控制温度在70℃，加入大豆磷脂和油酸，强烈搅拌至溶解，降温至50℃加入药物，强烈搅拌混匀；

[0137] (2)水相的制备：将水、山梨醇在50℃下搅拌5min，使之完全混溶；

[0138] (3)在50℃时，将水相加入油相，强烈搅拌混匀，形成初乳；

[0139] (4)用氢氧化钠调节pH值到6；

[0140] (5)过匀质仪：第一步调节匀化压力至600bar，第二步再调至1800bar，将溶液反复匀化；

[0141] (6)上述制得乳剂在无菌条件下用0.22um的微孔滤膜进行过滤除菌，在氮气流保护下灌封后，即得。

[0142] 实施例9：

[0143] 处方：前列腺素1.2mg，蛋黄磷脂1.2g，泊洛沙姆2.2g，注射用中链油10g，甘油2.5g，，α-硫辛酸0.01g，氢氧化钠适量，其余为注射用水，共100ml。

[0144] 工艺：全程氮气保护下

[0145] (1)油相的配制：在配制灌中加入注射用大豆油，控制温度在80℃，加入蛋黄磷脂和泊洛沙姆，强烈搅拌至溶解，降温至30℃加入药物，搅拌混匀；

[0146] (2)水相的制备：将水、α-硫辛酸、甘油在30℃下搅拌5min，使之完全混溶；

[0147] (3)在30℃时，将油相加入水相，强烈搅拌混匀，形成初乳；

[0148] (4)用氢氧化钠调节pH值到5；

[0149] (5)过匀质仪：第一步调节匀化压力至500bar，第二步再调至1100bar，将溶液反复匀化；

[0150] (6)上述制得乳剂在无菌条件下，用0.22um的微孔滤膜进行过滤除菌，在氮气流保护下灌后，即得。

[0151] 实施例10：

[0152] 处方：前列腺素1.5mg，聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯(HS-15)5g，聚乙二醇月桂酸甘油酯2.5g，油酸甘油酯3g，月桂酸1.8g，山梨醇6g，维生素E0.05g，油胺0.24g，氢氧化钠适量，其余为注射用水，共100ml，制得荷正电的脂微球注射液。(附图25)

[0153] 工艺：全程氮气保护下

[0154] (1)油相的配制：在配制灌中加入聚乙二醇月桂酸甘油酯和油酸甘油酯，控制温度在70℃，加入聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯(HS-15)、维生素E和月桂酸，强烈搅拌至溶解，降温至40℃加入药物，强烈搅拌混匀；

[0155] (2)水相的制备：将水、山梨醇在40℃下搅拌5min，使之完全混溶；

[0156] (3)在40℃时，将水相加入油相，强烈搅拌混匀，形成初乳；

[0157] (4)用氢氧化钠调节pH值到6；

[0158] (5)过匀质仪：第一步调节匀化压力至600bar，第二步再调至1800bar，将溶液反复匀化；

[0159] (6)上述制得乳剂在无菌条件下用0.22um的微孔滤膜进行过滤除菌，在氮气流保护下灌封后，即得。

[0160] 实施例11：

[0161] 本发明制剂的相分布测定试验：

[0162] 试验条件：24℃，相对湿度：58％。

[0163] 试验样品：由实施例1、2、3、4、5、6、7、8、9、10所得制剂。

[0164] 试验方法与结果：

[0165] 由于本品实际为脂微球制剂，药物在各相分布的试验结果是重要的质量指标之一。脂微球制剂具有油相、水相和油/水界面膜相。测定药物相分布的关键是将这三相从乳剂中分离出来，以考察脂微球中药物在各相的分布。采用破乳和离心的方法使微观的乳滴发生聚集形成宏观的分层现象，并分离出油相、水相、油/水界面膜相。用高效液相色谱法对其进行含量测定，色谱条件为：以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18色谱柱(粒径5μm，柱长4.6×25cm)，以0.0067mol/L磷酸盐缓冲液(pH为6.3)-乙腈(3∶1)为流动相；柱后衍生反应液为1mol/L的氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管(ф0.5mm×10m)；柱温60℃；检测波长为278nm，进样量20μL；流速1mL/min。系统适用性试验结果表明理论塔板数为符合要求；检测限为0.9ng，定量限为2.7ng；通过酸、碱、氧化和热破坏试验结果表明其分离度符合要求；按内标法分别计算前列腺素E1与内标峰面积的比值，以前列腺素E1浓度为横坐标，峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线，其线性方程为A＝0.1579C+0.0452(r＝0.9994)。结果表明，在0.45～18.0μg/mL浓度范围内线性关系良好；精密度试验结果RSD％为0.86％；日内稳定性试验结果RSD％为1.48％，回收率试验结果表明其平均回收率为102.25％，RSD％为1.29％，均符合要求。

[0166] 精密吸取上述油相适量加甲醇、内标溶液定容至刻度，作为油相含量测定溶液，取水相适量加入内标溶液作为水相含量测定溶液，分别吸取水相及油相含量测定溶液20μL注入液相色谱仪，照含量测定项下的方法，以内标法分别计算药品总量、油相和水相中药物的含量，油/水界面膜相中的量以公式为：药物在油/水界面膜相中的量＝总药量-(水相中的药物+油相中的药物)计算即可得到。具体的测定结果见表1和图2～12。

[0167] 表1前列腺素E1脂微球制剂相分布试验结果

[0168]

[0169] 结果表明，药物几乎全部分布在油相和油/水界面膜相中，进一步证明了本发明可将前列腺素E1包裹于油相和油/水界面膜相中，经计算在90％左右，这样就减少了主药游离于水溶液中的几率，不仅可以提高前列腺素E1的物理及化学稳定性，而且可以减轻注射时引起的刺激性，达到剂型设计的目的和意义。计算公式如下：

[0170]

[0171] 我们将前列地尔脂微球的分布采用三相模型进行分析。也就是PGE1分布在水合相、油相和油/水膜界面。这种假设的分配示意图通过定义C1、C2、C3分别为水合相、磷脂相(油/水界面膜)和油相的平衡浓度。磷脂/水相和油/磷脂相的浓度比率分别定义为P(L/W)和P(O/L)。当药物的浓度低于各相的溶解度时，P(L/W)和P(O/L)的值接近常数。因此C2、C3可以写成如下公式：

[0172] C2＝C1·PL/W

[0173] (10)、(11)

[0174] C3＝C1·PO/L＝C1·PL/W·PO/L

[0175] 微粒相由大豆油和磷脂组成。因此，通过测定微粒相和水相之间的浓度比率，以及油水分配系数，药物在三相的浓度比率就可以被计算出。

[0176] 从表上述的数据上可以计算出PGE1在三相(水、磷脂膜、油)的油水分配系数。此外，还可以从而获得不同温度下PGE1在脂微球的分布比率。大多数的PGE1在脂微球的分布于磷脂层中，其比率不受温度影响。由于圆形部分(脂微球)的PGE1被发现在油/水界面面膜里，因其具有一个五碳环和两条侧链的二十碳脂肪酸的基本骨架，其中一条侧链具有亲水的羧酸基团，因而具有轻微的表面活性作用的特性，而被转运到与其有更高亲和力的磷脂中。这些结果考虑了相似于分布在脂质体类脂材料里。这种分布的变化受溶液中离子的影响。

[0177] 实施例14：

[0178] 本发明制剂的粒度测定试验：

[0179] 试验样品：由实施例1、2、3、4、5、6、7、8、9、10所得制剂。

[0180] 试验方法与结果：

[0181] 取本品，用纯化水(通过0.22μm膜滤过)分别稀释至5000倍，混匀，作为供试液，用动态激光散射粒径议测定法测定。见表2，测定实施例6粒径并用显微镜和透射电镜观察其微观形态，结果表明粒径无明显变化，见图14至图16。

[0182] 表2前列腺素E1脂微球注射液粒度测定试验结果

[0183]

[0184] 结果表明，本发明所制成的前列地尔脂微球注射液粒径范围为50～500nm，平均粒度100～200nm。

[0185] 实施例15：

[0186] 本发明制剂实施例6的体外释放度试验：

[0187] 试验样品：实施例6

[0188] 试验方法与结果：

[0189] 采用反相透析法测定前列地尔脂微球注射液的体外释放度。取本品，用pH7.4的磷酸盐缓冲液溶解并稀释，制成浓度为1μg/mL的药液，取预处理好的透析袋6个，里面分别装有pH7.4的磷酸盐缓冲液作为释放介质，在37℃下搅拌，于0.5、1、2、6、12、24小时取样测定，并同时补充等量的pH7.4的磷酸盐缓冲液。同法进行六份样品的释放度试验，释放度测定方法同实施例13，计算累积释放度，结果见表3，图17。

[0190] 表3前列地尔脂微球注射液体外释放度试验结果

[0191]

[0192] 前列地尔脂微球注射液的体外释放度试验结果表明，本发明所制得的制剂在2小时内可释放50％以上的药物，可以迅速地达到一定的给药剂量，使药效得到迅速的发挥，在两次给药间隔时间内可完全释放药物，并维持了近18h的80％以上的释放度，达到了释药平衡，使药物缓慢释放并维持一定的平衡。体外释放度试验可以为体内释放度试验的预测提供依据。

[0193] 实施例16：

[0194] 本发明制剂实施例5与输液配伍后包封率试验：

[0195] 试验样品：实施例6

[0196] 试验方法与结果：

[0197] 取本品分别与适量的0.9％氯化钠、5％葡萄糖、空白脂肪乳输液配伍后，于0.5、1、2、4、6、8、12小时后取样；精密吸取前列地尔脂微球注射液，加入以注射用水洗去甘油的MilliporeYM-10超滤离心管中(截留分子量8000-10000)，离心30min。取滤出液加内标液-1
(5.0mg·mL β-萘酚溶液)，摇匀，精密吸取20μL溶液，进样，测定峰面积，照相分布试验测定方法，用内标法前列地尔的含量，记为M1；另吸取前列地尔脂微球注射液，按含量测定方法处理进样，测得含量计为M0；按下式计算包封率：

[0198]

[0199] M1为脂微球注射液中游离的前列地尔的量；M0为脂微球注射液中前列地尔的总量，结果见表4。

[0200] 表4前列地尔脂微球注射液配伍后包封率试验结果

[0201]

[0202] 前列地尔脂微球注射液的配伍试验结果表明，本发明所制得的制剂在12小时内包封率无明显变化，与脂肪乳注射液配伍使用可抑制药物从脂微球中游离出来，提高了药物配伍后的包封率，有利于降低临床使用时产生的血管刺激性，从而缓解静脉注射时的疼痛。

[0203] 实施例17：

[0204] 本发明制剂的安全性试验。具体包括：血管刺激性试验；溶血与凝聚试验资料；肌肉刺激性试验；全身主动过敏试验资料。

[0205] 试验方法与结果如下：

[0206] 取前列腺素E1脂微球注射液1支稀释在10ml的5％葡萄糖注射液中，制成供试品溶液。

[0207] 1.血管刺激性试验

[0208] 本品1μg/mL家兔耳静脉注射给药，2ml/kg，每日一次，连续给药3天。结果：家兔耳静脉给药部位肉眼观察无明显变化；组织病理切片显微镜检显示距注射部位1cm处血管、5cm处血管内皮连续、完整，未见增生、肿胀；血管周围组织未见炎性细胞浸润及坏死；管腔内无血栓形成。前列腺素E1脂微球注射液对家兔耳静脉血管未见明显刺激作用。并与上市制剂做比较，结果见图18。

[0209] 2.溶血与凝聚试验

[0210] 采用常规体外试管法(肉眼观察法)，将1μg/mL本品与2％红细胞混悬液混合，3小时内未见溶血与凝聚现象。

[0211] 4.肌肉刺激性试验

[0212] 本品1μg/mL家兔股四头肌注射给药，1mL/每侧。48小时是取给药部位肉眼观察并作病理组织学检查。结果表明，本品对家兔股四头肌无刺激性。

[0213] 5.全身主动过敏试验

[0214] 本品高剂量2μg/mL、低剂量1μg/mL分别隔日给豚鼠腹腔注射该溶液致敏隔日1次，连续3次，并于末次致敏后第13天，各组分别静脉注射相应浓度的本品，结果表明，本品的高、低剂量组均未见过敏反应。

[0215] 实施例18：

[0216] 本发明制剂对大鼠体内血栓形成的影响的试验。

[0217] 试验方法与结果如下：

[0218] 体外旁路循环法试验

[0219] Wistar大鼠60只，体重280±15g，雄性，按照体重随机分为PGE1粉针剂空白及脂肪乳空白组、PGE1粉针剂5、10μg/kg及PGE1脂微球注射液5、10μg/kg共6个组，每组10只。按照自身对照方法进行大鼠体内血栓形成试验。用戊巴比妥钠30mg/kg ip麻醉，分离右颈总动脉及左颈外静脉，从颈总动脉至颈外动脉插入一个带有丝线并且充满肝素-生理盐水的聚乙烯套管，连接形成体外旁路循环。首先从舌下静脉注射生理盐水2ml/kg，5min后开放血流，血液从右颈动脉流向左颈外静脉，15min后中断血流，迅速取出中间套管中丝线，放于滤纸上，然后称重，总重剪去丝线重计为给药前血栓湿重(mg)。然后各组舌下静脉注射药物，更换带有丝线充满肝素-生理盐水的聚乙烯套管，每组动物分别在给药后60min开放血流，其他方法同上，所得血栓为给药后血栓湿重。依下列公式计算血栓形成率，比较PGE1粉针剂及脂肪乳剂抑制大鼠体内血栓形成的作用强度及持续时间。

[0220]

[0221] 结果表明，本发明所制得的前列地尔脂微球注射液较市售的环糊精包合物冻干粉针剂在抑制大鼠体内血栓形成的作用强度及持续时间上显现了较大的优势，见附图19。

[0222] 实施例19

[0223] 前列地尔注射液治疗下肢慢性动脉闭塞症、慢性肝炎有效性及安全性的随机双盲、阳性药平行对照、多中心临床观察(临床研究批件号：2005L01810)：

[0224] 1、有效性结果：

[0225] 本研究结果发现，ITT人群：考虑中心效应的CMH-χ2检验，两组间总体疗效的差别无统计学意义。两组总体疗效临床有效率分别为57.55％和60.95％，经CMH-χ2检验差别亦无统计学意义，P＝0.663。PP人群结果和ITT人群结果相近。

[0226] 2、安全性结果：本次临床研究未发生严重不良事件

[0227] 两组患者研究结束时患者不良事件发生率分别为11.11％和7.34％。与药物相关的(研究者判断为肯定有关、可能有关或无法判定)不良事件发生率分别为5.56％和5.50％。导致脱落的不良事件发生率分别为0和1.83％。

[0228] 结论：通过治疗下肢慢性动脉闭塞症14天的观察，由本溪雷龙药业有限公司(本发明委托生产单位)的前列地尔注射液与北京泰德制药有限公司生产的前列地尔注射液，都是一样的有效和安全的药物。