一种植物耐旱性相关蛋白及其编码基因与应用

摘要

本发明公开了一种与植物耐旱性相关蛋白及其编码基因与应用。该蛋白是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质：1)序列表中的SEQ ID No.2的氨基酸残基序列；2)将序列表中的SEQ ID No.2氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有植物耐旱性相关功能的由SEQ ID No：2衍生的蛋白质。该基因具有下述核苷酸序列之一：1)序列表中SEQ ID No：1的核苷酸序列；2)编码序列表中SEQ ID No：2蛋白质序列的多核苷酸；3)在高严谨条件下可与1)或2)所述的DNA序列杂交的核苷酸序列。本发明的蛋白及其编码基因可用于培育耐旱性提高的植物新品种。

权利要求

1.序列表中的SEQ ID №.2的氨基酸残基序列组成的蛋白或序列表中SEQ ID №：1的核苷酸序列所示的基因在培育耐旱性提高的植物中的应用，所述植物为拟南芥。

说明书

一种植物耐旱性相关蛋白及其编码基因与应用

技术领域

[0001] 本发明涉及植物生物工程领域中一种与植物耐旱性相关的基因及其编码蛋白与应用，特别涉及拟南芥的一种与植物耐旱性相关的基因及其编码蛋白与应用。

背景技术

[0002] 植物在生长发育过程中，常遭受许多非生物逆境如干旱、盐渍、低温等的影响。干旱胁迫是各种环境胁迫中最普遍的逆境因子之一，干旱严重影响植物的生长发育，造成农作物减产，并且使生态环境日益恶化。世界干旱、半干旱区占地球陆地面积的三分之一，中国干旱、半干旱地区约占土地面积的二分之一。干旱严重影响农业生产，常造成农作物的大面积减产，提高作物的抗旱能力对农业生产及生态环境保护具有重要的意义。

[0003] 在长期的进化过程中，高等植物逐渐演变产生了一套感受和传导干旱信号的系统，并形成一系列生理或发育的机制来响应环境中的这种胁迫，最大限度地减轻干旱胁迫造成的伤害。利用现代分子生物学、植物生理学等技术手段研究植物抗旱的分子机理，发现和挖掘抗旱基因，使通过基因工程技术改造植物，提高植物自身的抗旱能力成为可能。植物抗旱的分子机理研究及抗旱品种的培育已成为当前研究的热点。

[0004] 拟南芥(Arabidopsis thaliana)是一种典型的双子叶模式植物，具有个体小、生长周期短、遗传背景简单清楚、易被诱变等特点，已成为植物科学研究的模式材料。广泛应用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究，拟南芥的大多数基因在其他植物中都能找到，在拟南芥研究中发现对植物生长发育具有重要作用的基因可应用到其它植物研究中。

[0005] 拟南芥基因组大小为125Mbp，约2.7万个基因，目前仍然还有许多基因的功能不十分清楚，利用拟南芥T-DNA插入突变体进行性状筛选已成为研究基因功能的一种有效手段。对拟南芥中参与植物抗旱反应的基因的功能研究，对于进一步阐明植物抗旱的分子机理并通过基因工程的技术和手段培育优质、抗逆的作物新品种具有重要的理论意义和现实意义。

[0006] 发明创造内容

[0007] 本发明的目的是提供一种植物耐旱性相关蛋白及其编码基因与应用。

[0008] 本发明所提供的植物耐旱性相关蛋白，名称为AtDT-1(Arabidopsis thalianaDrought Tolerance)，来源于拟南芥属拟南芥(Arabidopsis thaliana)，是如下(a)或(b)的蛋白质：

[0009] (a)由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质；

[0010] (b)将序列表中序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有植物耐旱性功能的由(a)衍生的蛋白质。

[0011] 其中，序列表中的序列2所示的蛋白序列由533个氨基酸残基组成。

[0012] 为了使(a)中的AtDT-1分泌到细胞周质或培养基中或使其功能稳定，可在由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质的N端连接上信号肽序列，为了(a)中的AtDT-1便于纯化，可在由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质的N端或C端连接上如表1所示的标签。

[0013] 表1.标签的序列

[0014]标签 残基 序列
Poly-Arg 5-6(通常为5个) RRRRR
Poly-His 2-10(通常为6 HHHHHH
个)
FLAG 8 DYKDDDDK
Strep-tagII 8 WSHPQFEK
c-myc 11 EQKLISEEDL

[0015] 上述(b)中的AtDT-1可人工合成，也可先合成其编码基因，再按照下述方法进行生物表达得到。上述(b)中的AtDT-1的编码基因可通过将序列表中序列1的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端连上信号肽的编码序列，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

[0016] 上述植物耐旱性相关蛋白的编码基因(AtDT-1)也属于本发明的保护范围。

[0017] 上述植物耐旱性相关蛋白的cDNA基因，可具有下述核苷酸序列之一：

[0018] 1)序列表中SEQ ID №：1的核苷酸序列；

[0019] 2)编码序列表中SEQ ID №：2蛋白质序列的多核苷酸；

[0020] 3)在高严谨条件下可与1)或2)所述的DNA序列杂交的核苷酸序列。

[0021] 其中，序列表中序列1是由1911个脱氧核苷酸组成，自序列表中序列1的5′端第64-1665位核苷酸序列为编码序列(ORF)，编码具有序列表中序列2的氨基酸残基序列的蛋白质。

[0022] 上述高严谨条件可为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃下杂交并洗膜。

[0023] 含有上述植物耐旱性相关蛋白的编码基因的表达载体、转基因细胞系及宿主菌均属于本发明的保护范围。

[0024] 利用可以引导外源基因在植物中表达的载体，将本发明所提供的AtDT-1基因导入植物细胞，或将AtDT-1基因过表达，提高了转基因植株对干旱的耐受能力。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所使用的载体进行加工，如加入植物可选择性标记或具有抗性的抗生素标记物。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物。本发明的耐旱基因对于植物耐干旱分子机制的研究，植物抗逆性品种的选育具有重要的理论及实际意义。

[0025] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

附图说明

[0026] 图1为拟南芥突变体(salk_036581)的插入突变基因的表达状况鉴定结果；

[0027] 图2为干旱条件下拟南芥突变体(salk_036581)的表型分析结果；

[0028] 图3为AtDT-1受干旱诱导表达分析结果；

[0029] 图4为正常条件下转super::AtDT-1拟南芥株系和转super::AtDT-1拟南芥突变体株系中AtDT-1定量表达检测结果；

[0030] 图5为野生型、突变体salk_036581、转super::AtDT-1拟南芥株系和转super::AtDT-1拟南芥突变体株系的抗旱性能检测结果；

[0031] 图6为野生型、突变体salk_036581、转super::AtDT-1拟南芥株系和转super::AtDT-1拟南芥突变体株系干旱处理时土壤相对含水量变化结果；

[0032] 图7为野生型、突变体salk_036581、转super::AtDT-1拟南芥株系和转super::AtDT-1拟南芥突变体株系干旱处理时离体叶片失水速率结果。

具体实施方式

[0033] 实施例1、植物耐旱性相关的基因及其编码蛋白的获得

[0034] 一、拟南芥突变体(salk_036581)的表型观察及表达分析

[0035] 1、拟南芥突变体(salk_036581)的插入突变表达鉴定

[0036] 根据TAIR网站(http://www.arabidopsis.org)的信息检索，在ABRC(http://www.arabidopsis.org/abrc/)的拟南芥T-DNA插入突变体库中搜索到编号为salk_036581的T-DNA插入突变体，为Columbia型背景，其T-DNA插入到一个预测基因的外显子中。从ABRC购买该编号为salk_036581的T-DNA插入突变体的T3代种子，将该T3代植株继续进行繁殖种子，获得T4代种子，经DNA水平上鉴定表明，获得T4代T-DNA插入纯合突变体。

[0037] 将拟南芥野生型(Columbia型)的种子和上述获得的salk_036581突变体T4代种子播种于MS固体培养基上生长15天，各取100-200mg整株幼苗为材料，用TRizol(Invitrogen)提取其总RNA，经甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检查RNA的完整性。ss cDNA的合成按照SupercriptII(Invitrogen)的使用说明，合成单链sscDNA。

[0038] 设计检测上述预测的被插入突变的基因的表达情况的引物，其序列为Primer1：5’-tatgatctggggcgtgaggt-3’ 和 Primer2：5’-tatccaagaatgttcgagtacttgt-3’； 以Primer1和Primer2为引物，将合成的单链cDNA稀释10倍，作为PCR反应的模板，进行PCR扩增。扩增体系为：20μL体系，内含10×PCR缓冲液2μL，2.5mM dNTP mix 0.4μL，10μM Primer1和Primer2各0.4μL，Taq DNA聚合酶(15U/μL)0.2μL。在PE 9700上扩增，扩增程序为：95℃预变性5min，95℃30s，56℃30s，72℃1min，共计35个循环；72℃延伸10min，将获得的PCR产物(777bp)，用0.8％琼脂糖凝胶电泳进行检测。

[0039] 以EF 基 因 为 看 家 基 因，作 为 对 照。 其 扩 增 引 物 为 Primer3：5’-atgccccaggacatcgtgatttcat-3’和Primer4：5’-ttggcggcacccttagctggatca-3’。将合成的单链cDNA稀释10倍，作为以下PCR反应的模板：20μL体系，内含10×PCR缓冲液
2μL，2.5mM dNTP mix 0.4μL，10μM Primer3和Primer4各0.4μL，Taq DNA聚合酶(15U/μL)0.2μL。在PE9700上扩增：95℃预变性5min，95℃30s，56℃30s，72℃1min，共计20个循环；72℃延伸10min，将获得的PCR产物(685bp)，用0.8％琼脂糖凝胶电泳进行检测。

[0040] 结果如图1所示，结果表明上述预测基因在野生型植株中正常表达，扩增片段大小为685bp，而在突变体salk_036581中，该预测基因完全被敲除，不表达。

[0041] 2、突变体salk_036581的表型观察检测

[0042] 拟南芥野生型(Columbia型)和突变体salk_036581 T4代种子在MS固体培养基上生长7天后，移入土壤中，在温室继续生长。温室培养条件为：温度22℃、光照强度为-2 -1100μmol·m ·s ，光周期为16h(光)/8h(暗)，相对湿度60％-70％，每3天浇水一次。
在土壤中继续生长两周后，分别分成两组，一组停止浇水进行干旱处理(其他条件相同继续培养)，干旱处理21天(干旱处理)，另一组继续按照正常浇水培养方法培养21天(阳性对照)。以观察植株表型。

[0043] 结果如图2所示，插入突变体salk_036581叶片萎蔫严重，野生型轻度萎蔫，突变体salk_036581具有较野生型植株干旱敏感的症状。说明上述插入突变基因的功能可能与植物的抗旱性有关。图2中1为正常浇水培养的拟南芥野生型(Columbia型)，2为正常浇水培养的突变体salk_036581，3为干旱处理的拟南芥野生型(Columbia型)，4为干旱处理的突变体salk_036581。

[0044] 二、本发明抗旱相关基因(AtDT-1)及其编码蛋白的获得

[0045] 1、本发明抗旱相关基因(AtDT-1)的cDNA的获得

[0046] 按照步骤一的步骤1的方法提取拟南芥(Columbia型)幼苗总RNA、反转录为cDNA。以此cDNA为模板、利用分别设有KpnI和SacI酶切位点的一对引物进行PCR扩增，得到抗旱相关基因的cDNA全长。引物序列如下：

[0047] Primer7：5′-ttggtaccatgggaaattgttgtgcgag-3′(KpnI)；

[0048] Primer8：5′-ttgagctcttaattttcgccttctaattgc-3′(SacI)；下划线部分为引入的酶切位点。

[0049] 采用Takara公司的高保真的Pyrobest DNA聚合酶进行扩增，扩增体系为50μL，含10×Pyrobest PCR缓冲液5.0μL，10mM dNTP mix 1.0μL，引物各1.0μL，Pyrobest酶0.5μL，模板3.0μL，补充灭菌超纯水至50μL，反应体系在冰上进行操作。在PE9700仪器上进行扩增，预变性5min，95℃变性30s，56℃30s，72℃90s，循环数30个，72℃延伸10min。将扩增片段用1％的琼脂糖凝胶进行电泳，回收扩增片段，连接到pMD18-T载体，酶切、扩增、测序鉴定，测序结果表明，上述PCR扩增得到的片段具有序列表中序列1的核苷酸序列，为本发明的抗旱相关基因cDNA基因命名为AtDT-1，序列表中序列1的核苷酸序列由1911个碱基组成，其编码序列为自序列表中序列1的第64-1665位核苷酸，编码具有序列表中序列2的氨基酸残基序列。将上述获得的正确的含有AtDT-1的重组载体命名为pMD18-AtDT-1。

[0050] 实施例2、本发明的植物耐旱性相关的基因及其编码蛋白的功能验证[0051] 1、植物耐旱性相关的基因AtDT-1在干旱条件下的表达量变化检测[0052] 在培养皿生长一周，温室生长四周的Columbia野生型植株离体叶片进行干旱处理，将未抽苔植株的地上部用剪刀剪下，放在温室进行自然失水。将干旱处理0h、3h和6h后的叶片提取RNA并进行反转录，利用Primer1和Primer2引物按照实施例中步骤一的步骤1的方法进行RT-PCR实验，与实施例中步骤一的步骤1的方法相同也以EF基因为看家基因，检测AtDT-1基因的表达量情况，扩增EF的循环数为20，扩增AtDT-1循环数为30。

[0053] 结果如图3所示，结果表明，干旱处理0h(即未进行干旱处理)的叶片AtDT-1基因的表达量较低，干旱处理后3小时、6小时，AtDT-1表达量增强，表明AtDT-1受干旱诱导后表达增强。

[0054] 2、AtDT-1基因转基因功能验证

[0055] 1)AtDT-1基因过量表达植株(转super::AtDT-1植株)及突变体salk_036581恢复AtDT-1表达的植株(转super::AtDT-1突变体)的获得

[0056] 将pMD18-AtDT-1质粒，用KpnI和SacI进行酶切，回收得到1602bp的AtDT-1片段，将该片段插入到过量表达载体pBIB-Super载体(pBIB-Super载体的构建方法：利用引物aagcttGTGGGCCTGTGGTCTCAAGAT和tctagaCTAGAGTCGATTTGGT从质粒pMSP-1(Ni M，Cui D，Einstein J，Narasimhulu S，Vergara C，Gelvin SB.Strenghtand tissue specificity of chimaeric promoters derived from the octopine andmannopine systhase genes.19957：661-676.)中扩增出长1.1kb的super启动子序列；将扩增得到的super启动子用HindIII和XbaI双酶切，回收super启动子片段，插入到质粒pBIB(Becher D.Binary vectors whi ch allow the exchangeof plant selectable markers and reporter genes.Nucleic Acids Res.199018：203.)的HindIII和XbaI酶切位点之间中，得到pBIB-Super质粒)的KpnI和SacI酶切位点之间得到重组载体，将该重组载体进行PCR、酶切鉴定，将鉴定表明正确的重组载体命名为super::AtDT-1。

[0057] 用super::AtDT-1转化根癌农杆菌GV3101感受态细胞，得到工程菌，用PCR方法鉴定，将鉴定表明得到含有super::AtDT-1质粒的GV3101根癌农杆菌。采用花芽浸沾法(Clough和Bent，1998，Floral dip：a simplified method forAgrobacterium-mediated transformation of Aarabidopsis thaliana.Plant J.16：735-743) 将 含 有super::AtDT-1质粒的GV3101根癌农杆菌分别转化拟南芥野生型(Columbia型)和突变体salk_036581获得转super::AtDT-1T0代植株和转super::AtDT-1突变体T0代植株，收获它们的种子，即得到转super::AtDT-1T1代种子和转super::AtDT-1突变体T1代种子。将转super::AtDT-1T1代种子和转super::AtDT-1突变体T1代种子分别在含有50mg/L潮霉素的MS培养基上进行筛选，得到根和叶均能生长的阳性转化植株，继续栽培，单株种植单株收T2代种子。在潮霉素培养基上统计T2代幼苗的分离比(抗潮霉素：不抗潮霉素)，统计数分离2
比符合3∶1x 检验的T2代幼苗继续繁种至T3代即获得9个纯合的质粒单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥株系和3个纯合的质粒单拷贝插入转super::AtDT-1拟南芥突变体株系。

[0058] 2)转super::AtDT-1拟南芥株系和转super::AtDT-1拟南芥突变体株系中AtDT-1定量表达检测

[0059] 对步骤1)获得的纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥株系和转super::AtDT-1突变体株系的种子分别按照步骤1进行萌发后，MS培养基上生长两周取整株材料进行RNA提取和反转录，然后进行半定量RT-PCR检测AtDT-1表达量。以野生型拟南芥(Columbia型)和突变体salk_036581进行同样的处理作为对照。

[0060] 结果如图4所示：在转super::AtDT-1拟南芥株系和salk_036581恢复突变植株(转super::AtDT-1拟南芥突变体株系)中，在super超强启动子作用下，AtDT-1基因的表达量都明显高于野生型中的AtDT-1基因的表达量。图4中，1为野生型拟南芥(Columbia型)，2为突变体salk_036581，3、4、5为部分转super::AtDT-1拟南芥株系，6为转super::AtDT-1拟南芥突变体株系。

[0061] 3)转super::AtDT-1拟南芥株系和转super::AtDT-1拟南芥突变体株系抗旱性能检测

[0062] 对步骤1)获得的纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥株系种子和步骤1)获得的纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥突变体株系的种子、拟南芥野生型(Columbia型)种子和突变体salk_036581T4代种子，在MS固体培养基上生长7天后，移入-2 -1
土壤中，在温室继续生长。温室培养条件为：温度22℃、光照强度为100μmol·m ·s ，光周期为16h(光)/8h(暗)，相对湿度60％-70％，每3天浇水一次。在土壤中继续生长两周后，停止浇水，停止浇水进行干旱处理(其他条件相同继续培养)，干旱处理21天，然后恢复浇水，继续培养1天。观察整个过程中各植株的表型。

[0063] 结果如图5所示，结果表明，以开始干旱处理为0天计算，土壤干旱处理约19天时，突变体salk_036581(图5中B)表现明显的干旱萎蔫症状，野生型表现轻微萎蔫，转super::AtDT-1拟南芥突变体株系(图5中D)和野生型(图5中A)类似，转super::AtDT-1拟南芥株系植株(图5中C)基本不表现干旱胁迫症状，其长势明显优于其它三种植株材料。恢复浇水后，转super::AtDT-1拟南芥株系植株(图5中C)继续正常生长，并且生长状态明显优于其他三种材料，突变体salk_036581不能生长全部死亡，野生型(图5中A)和转super::AtDT-1拟南芥突变体株系(图5中D)继续生长，但长势差于转super::AtDT-1拟南芥株系植株(图5中C)。结果表明，植物中的AtDT-1过量表达后能增强植物的耐受干旱能力，而AtDT-1被敲除后会导致植物对干旱敏感。图5中A为野生型拟南芥，B为突变体salk_036581，C为转super::AtDT-1拟南芥株系，D为转super::AtDT-1拟南芥突变体株系。

[0064] 4)野生型、突变体salk_036581、AtDT-1过量表达及salk_036581恢复突变四种材料土壤相对含水量变化检测

[0065] 对步骤1)获得的纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥株系种子和步骤1)获得的纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥突变体株系的种子、拟南芥野生型(Columbia型)种子和突变体salk_036581T4代种子，按照步骤3)的方法进行干旱处理。在进行干旱处理之日记录种植植物材料的小盆重量(包括小盆、土壤和植物材料的重量)，此重量设定为100％(此时土壤最初含水量设定为100％)，每隔三天称量种植植物材料的小盆重量，计算土壤相对含水量(称重时小盆的重量/最初小盆的重量)。

[0066] 结果如图6所示，结果表明，在土壤干旱处理相同时间下，种植突变体salk_036581材料的土壤水分损失最多，种植AtDT-1过量表达材料(纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥株系种子)的土壤水分损失最少，种植野生型和salk_036581恢复突变株系(纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥突变体株系)的土壤含水量基本一致，水分损失量介于突变体salk_036581和AtDT-1过量表达材料(转super::AtDT-1拟南芥株系)之间。图6中，1为拟南芥野生型(Columbia型)，2为突变体salk_036581T4代，3为纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥株系，4为纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥突变体株系。

[0067] 5)野生型拟南芥、拟南芥突变体salk_036581、AtDT-1过量表达拟南芥及salk_036581突变恢复四种材料失水率检测

[0068] 将步骤1)获得的纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥株系种子和步骤1)获得的纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥突变体株系的种子、拟南芥野生型(Columbia型)种子和突变体salk_036581T4代种子在MS培养基上培养7天后移栽到土-2 -1
壤中，在温室继续生长。温室培养条件为：温度22℃、光照强度为100μmol·m ·s ，光周期为16h(光)/8h(暗)，相对湿度60％-70％，每3天浇水一次。生长四周后，剪下四种植物材料的地上部，立即称重。剪下的植物材料的地上部分放在湿度40％、温度23-25℃条件下进行失水实验。每间隔一定时间进行称重，每个株系重复4次，统计单位时间的失水速率(单位时间样品鲜重/样品最初鲜重)。

[0069] 结果如图7所示，结果表明，四种植物材料中，突变体salk_036581的失水速率最快，AtDT-1过量表达材料(转super::AtDT-1拟南芥株系)失水速率最慢，野生型和salk_036581恢复突变材料(转super::AtDT-1拟南芥突变体株系)的失水速率基本一致，失水速率介于突变体ckp8和AtDT-1过量表达材料之间。图7中，1为拟南芥野生型(Columbia型)，2为突变体salk_036581T4代，3为纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥株系，4为纯合的单拷贝插入的转super::AtDT-1拟南芥突变体株系。

[0070] 综上所述，在土壤干旱胁迫条件下，salk_036581突变体表现的敏感症状是由AtDT-1基因的缺失引起的，AtDT-1作为干旱逆境的正调节因子参与植物干旱胁迫反应，过量表达AtDT-1基因能够明显增强植物对干旱的耐受能力。

[0071] 序列表

[0072] <160>2

[0073] <210>1

[0074] <211>1911

[0075] <212>DNA

[0076] <213>拟南芥属拟南芥(Arabidopsis thaliana)

[0077] <400>1

[0078] ttgcgtttgt gagtgattta gttgtttgat gaaatctcag gacttctcag attcgaatta 60[0079] taaatgggaa attgttgtgc gagcccgggt tcggagactg ggagtaagaa ggggaaacca 120[0080] aagatcaaaa gtaacccgtt ttatagtgaa gcatacacta cgaatggatc tggaactggg 180[0081] ttcaagctct ctgttttgaa agatccaaca ggacatgata tatctcttat gtatgatctg 240[0082] gggcgtgagg ttggtcgcgg agagtttggt attacttact tgtgcactga tatcaaaacg 300[0083] ggcgagaagt atgcgtgcaa gtctatatca aagaagaagc ttagaacagc tgtggatata 360[0084] gaggatgtta ggagggaagt tgagataatg aaacatatgc ctagacaccc aaatatcgtg 420[0085] tcgctgaagg atgcctttga ggatgatgat gcagtgcata tagttatgga gttgtgtgaa 480[0086] ggaggtgagc tgtttgatcg gattgttgct agaggtcatt atactgagcg agctgctgct 540[0087] gcagtgatga agactattct tgaagttgtt cagatatgcc ataagcatgg agtgatgcat 600[0088] cgggatctaa agcctgagaa ctttctcttt gcaaataaaa aagagacatc agcccttaaa 660[0089] gccatagatt ttggattatc agtcttcttc aagcctggtg agggattcaa cgagattgtt 720[0090] ggaagtcctt attacatggc accagaggta cttaggcgaa attacggacc tgaggttgat 780[0091] atctggagtg ctggagttat cctttatatc ctgctctgtg gtgtcccacc attttgggcc 840[0092] gagactgagc aaggggtggc tcaggcgatc attaggtcag ttatcgactt taagagggat 900[0093] ccatggccga gagtttctga gactgccaaa gaccttgtga ggaagatgct cgaacctgac 960[0094] cccaaaaaac ggctttctgc tgcacaagta ctcgaacatt cttggataca aaatgcgaag 1020[0095] aaggctccaa atgtttcact cggcgagacg gtgaaagcaa gactcaaaca gttttctgtt 1080[0096] atgaacaagc tcaagaaaag agcgctacgg gtgatagccg aacacttatc agtggaggaa 1140[0097] gtagctggca tcaaggaagc atttgagatg atggacagta aaaagacggg aaagataaac 1200[0098] ctcgaggagc ttaaatttgg acttcataaa ctcggacagc agcagatacc tgatactgat 1260[0099] ctacagattc tgatggaagc tgctgatgtt gatggggatg ggactttaaa ttatggggag 1320[0100] tttgtggctg tctctgtgca tcttaagaaa atggcgaacg acgaacactt gcataaggct 1380[0101] tttagctttt ttgaccagaa tcagagcgat tacatagaga ttgaggagct gcgtgaggct 1440[0102] ttaaatgatg aggtggatac taacagtgaa gaagttgttg cagctattat gcaagatgtt 1500[0103] gacacagaca aggacggacg aataagctat gaagagtttg cggcgatgat gaaagctgga 1560[0104] acagattgga ggaaagcgtc gaggcagtat tcccgggaaa gattcaacag tttgagcctc 1620[0105] aagttaatga gagaaggttc attgcaatta gaaggcgaaa attaagaaag gttctttgtt 1680[0106] tctgtatctc ttaaagaagt aaaaagaaaa aggaaaaaac agtattcttt gaaaattgtt 1740[0107] tatctttttt tttcctcaat aattgtagat cagggtttca aatgttttag ttacttgaat 1800[0108] agccagccat gtacgatatg aagcagatgt tcttaaattt tctgactctt tattttcatg 1860[0109] ttgtctggat ccttaatact atttgttggc aaacaatagt gtaaaagtcc c 1911[0110] <210>2

[0111] <211>533

[0112] <212>PRT

[0113] <213>拟南芥属拟南芥(Arabidopsis thaliana)

[0114] <400>2

[0115] Met Gly Asn Cys Cys Ala Ser Pro Gly Ser Glu Thr Gly Ser Lys Lys[0116] 1 5 10 15[0117] Gly Lys Pro Lys Ile Lys Ser Asn Pro Phe Tyr Ser Glu Ala Tyr Thr[0118] 20 25 30

[0119] Thr Asn Gly Ser Gly Thr Gly Phe Lys Leu Ser Val Leu Lys Asp Pro[0120] 35 40 45

[0121] Thr Gly His Asp Ile Ser Leu Met Tyr Asp Leu Gly Arg Glu Val Gly[0122] 50 55 60

[0123] Arg Gly Glu Phe Gly Ile Thr Tyr Leu Cys Thr Asp Ile Lys Thr Gly[0124] 65 70 75 80[0125] Glu Lys Tyr Ala Cys Lys Ser Ile Ser Lys Lys Lys Leu Arg Thr Ala[0126] 85 90 95[0127] Val Asp Ile Glu Asp Val Arg Arg Glu Val Glu Ile Met Lys His Met[0128] 100 105 110[0129] Pro Arg His Pro Asn Ile Val Ser Leu Lys Asp Ala Phe Glu Asp Asp[0130] 115 120 125

[0131] Asp Ala Val His Ile Val Met Glu Leu Cys Glu Gly Gly Glu Leu Phe[0132] 130 135 140

[0133] Asp Arg Ile Val Ala Arg Gly His Tyr Thr Glu Arg Ala Ala Ala Ala[0134] 145 150 155 160[0135] Val Met Lys Thr Ile Leu Glu Val Val Gln Ile Cys His Lys His Gly[0136] 165 170 175[0137] Val Met His Arg Asp Leu Lys Pro Glu Asn Phe Leu Phe Ala Asn Lys[0138] 180 185 190[0139] Lys Glu Thr Ser Ala Leu Lys Ala Ile Asp Phe Gly Leu Ser Val Phe[0140] 195 200 205

[0141] Phe Lys Pro Gly Glu Gly Phe Asn Glu Ile Val Gly Ser Pro Tyr Tyr[0142] 210 215 220

[0143] Met Ala Pro Glu Val Leu Arg Arg Asn Tyr Gly Pro Glu Val Asp Ile[0144] 225 230 235 240[0145] Trp Ser Ala Gly Val Ile Leu Tyr Ile Leu Leu Cys Gly Val Pro Pro[0146] 245 250 255[0147] Phe Trp Ala Glu Thr Glu Gln Gly Val Ala Gln Ala Ile Ile Arg Ser[0148] 260 265 270[0149] Val Ile Asp Phe Lys Arg Asp Pro Trp Pro Arg Val Ser Glu Thr Ala[0150] 275 280 285

[0151] Lys Asp Leu Val Arg Lys Met Leu Glu Pro Asp Pro Lys Lys Arg Leu[0152] 290 295 300

[0153] Ser Ala Ala Gln Val Leu Glu His Ser Trp Ile Gln Asn Ala Lys Lys[0154] 305 310 315 320[0155] Ala Pro Asn Val Ser Leu Gly Glu Thr Val Lys Ala Arg Leu Lys Gln[0156] 325 330 335[0157] Phe Ser Val Met Asn Lys Leu Lys Lys Arg Ala Leu Arg Val Ile Ala[0158] 340 345 350[0159] Glu His Leu Ser Val Glu Glu Val Ala Gly Ile Lys Glu Ala Phe Glu[0160] 355 360 365

[0161] Met Met Asp Ser Lys Lys Thr Gly Lys Ile Asn Leu Glu Glu Leu Lys[0162] 370 375 380

[0163] Phe Gly Leu His Lys Leu Gly Gln Gln Gln Ile Pro Asp Thr Asp Leu[0164] 385 390 395 400[0165] Gln Ile Leu Met Glu Ala Ala Asp Val Asp Gly Asp Gly Thr Leu Asn[0166] 405 410 415[0167] Tyr Gly Glu Phe Val Ala Val Ser Val His Leu Lys Lys Met Ala Asn[0168] 420 425 430

[0169] Asp Glu His Leu His Lys Ala Phe Ser Phe Phe Asp Gln Asn Gln Ser[0170] 435 440 445

[0171] Asp Tyr Ile Glu Ile Glu Glu Leu Arg Glu Ala Leu Asn Asp Glu Val[0172] 450 455 460

[0173] Asp Thr Asn Ser Glu Glu Val Val Ala Ala Ile Met Gln Asp Val Asp[0174] 465 470 475 480[0175] Thr Asp Lys Asp Gly Arg Ile Ser Tyr Glu Glu Phe Ala Ala Met Met[0176] 485 490 495[0177] Lys Ala Gly Thr Asp Trp Arg Lys Ala Ser Arg Gln Tyr Ser Arg Glu[0178] 500 505 510[0179] Arg Phe Asn Ser Leu Ser Leu Lys Leu Met Arg Glu Gly Ser Leu Gln[0180] 515 520 525

[0181] Leu Glu Gly Glu Asn

[0182] 530