细胞吸附柱

摘要

本发明的课题在于：鉴于相关以往技术的问题，提供一种与细胞接触导致的细胞的变性和分化诱导等顾虑少的、具有吸附体表面积且吸附体填充容积小、具有操作性或用于降低患者负担的紧密性的细胞吸附柱。即，本发明是一种细胞吸附柱，该细胞吸附柱含有纤维直径在0.5μm以上10μm以下的纤维，并且填充有表面积在0.5m2以上小于10m2的吸附体，其中，吸附体填充容积在100ml以下。

权利要求

1.细胞吸附柱，该细胞吸附柱填充有包含纤维直径在0.5μm以上10μm以下的纤维、

2 2

表面积在0.5m 以上小于10m、包含纤维直径在0.5μm以上10μm以下的纤维的部分的体

3 3

积密度在0.01g/cm 以上0.15g/cm 以下的吸附体，其中，吸附体填充容积在100ml以下。

2.权利要求1所述的细胞吸附柱，其特征在于，所述纤维直径在3μm以上10μm以下。

3.权利要求1所述的细胞吸附柱，其中，所述吸附体上结合有胺残基。

4.权利要求1所述的细胞吸附柱，其特征在于，吸附细胞因子。

5.权利要求4所述的细胞吸附柱，其特征在于，所述细胞因子是选自白介素-1即IL-1、白介素-6即IL-6、白介素-8即IL-8、白介素-10即IL-10、肿瘤坏死因子-α即TNF-α、转化生长因子-β即TGF-β、血管内皮生长因子即VEGF和免疫抑制酸性蛋白即IAP中的至少一种。

6.权利要求1所述的细胞吸附柱，其特征在于，用于使血液循环的用途。

7.权利要求6所述的细胞吸附柱，其特征在于，使健康人的血液以30ml/分的血流速度通过柱内1小时时，满足下述式(1)和式(2)：

2c＜a (1)

6

b＞10 (2)

其中，

a：每单位重量吸附体的粒细胞吸附数(个/g)b：每单位重量吸附体的单核细胞吸附数(个/g)c：每单位重量吸附体的淋巴细胞吸附数(个/g)。

8.权利要求1所述的细胞吸附柱，其特征在于，在使用健康犬的体外循环试验中，将使用生理盐水调节血细胞比容值为40％的血液以30ml/min的速度通过柱内时，血液处理量

1500ml时的柱前后的压力损失在150mmHg以下。

9.细胞的吸附方法，其特征在于，使用权利要求1所述的细胞吸附柱吸附试样中的细胞。

10.权利要求9所述的细胞吸附方法，其中，所述试样是血液。

11.权利要求9所述的细胞吸附方法，其中，所述细胞是白细胞。

12.白细胞除去方法，其特征在于，使用权利要求1所述的细胞吸附柱。

说明书

细胞吸附柱

技术领域

[0001] 本发明涉及新型吸附柱，特别是适于循环血液使用的血液处理柱的吸附柱。涉及将特定量的吸附体装入柱中、可除去足够量白细胞的、紧密性优异的细胞吸附柱。 背景技术

[0002] 近年来，研究了各种各样的血液处理柱，例如，分别开发了：以白细胞的除去或粒细胞的除去为目的的柱(特开昭60-193468号公报、特开平5-168706号公报(专利文献1、2)、以细胞因子的吸附为目的的柱(特开平10-225515号公报、特开平12-237585号公报、特开平10-147518号公报(专利文献3、4、7))、以同时吸附白细胞和毒素为目的的柱(特开2002-113097号公报(专利文献5))等。这些柱通常在柱内部具有用于除去、吸附上述各目的物质的过滤材料或吸附载体。这些过滤材料或吸附载体可使用各种物质、形状，但各有长短。例如，在含聚酯无纺布的白细胞除去载体(特开昭60-193468号公报(专利文献
1)中，制作了混合含多种纤维直径的纤维得到的无纺布，为消除血细胞堵塞进行了改良，但无纺布自身的体积密度高，无法控制血细胞除去性，依然存在血液循环中压损恐会升高的问题。

[0003] 此外，在含直径2mm左右的醋酸纤维素珠的吸附载体(专利文献2)中，虽然不太担心压力损失，但不能增大吸附表面积，作为吸附载体是非高效的。而减小粒径会导致压力损失增加，所以难以采用。

[0004] 已经公开了：吸附载体的体积密度过大时容易堵塞，相反如果过小，则形态保持性3 3
变差，因而在0.05～0.15g/cm 的范围是很重要的，优选使用是0.10～0.15g/cm 的吸附
3
载体(特开2002-172163号公报(专利文献6))，但当在0.05～0.10g/cm 的范围时，特别
3
是形体稳定性差，在0.10～0.15g/cm 的范围时还是不实用。

[0005] 另外，以往的细胞吸附柱中细胞除去选择性高的仅有吸附体填充容积超过150ml的大吸附柱(例如，市售的アダ柱(登录商标))。没有细胞除去选择性的主要利用过滤功能的细胞吸附柱虽然存在吸附体填充容积小的吸附柱(例如，市售的セパセル(登录商标))，2
但被填充的吸附体的表面积超过10m，担心会有由其表面和细胞接触导致的变性或分化诱导等影响。

[0006] 【专利文献1】特开昭60-193468号公报

[0007] 【专利文献2】特开平5-168706号公报

[0008] 【专利文献3】特开平10-225515号公报

[0009] 【专利文献4】特开平12-237585号公报

[0010] 【专利文献5】特开2002-113097号公报

[0011] 【专利文献6】特开2002-172163号公报

[0012] 【专利文献7】特开平10-147518号公报

[0013] 发明内容

[0014] 发明要解决的课题

[0015] 本发明的课题在于：鉴于相关以往技术中的问题，提供一种与细胞接触导致的细胞的变性和分化诱导等顾虑少的、具有吸附体表面积且吸附体填充容积小、具有操作性或用于降低患者负担的紧密性的细胞吸附柱。

[0016] 此外，其课题还在于：提供一种不仅可除去血液中存在的细胞、特别是粒细胞和单核细胞等活化白细胞、癌细胞等，还可除去过量存在的细胞因子的、压力损失少的细胞吸附柱。应予说明，这里所说的血液是指含有细胞或血液成分的液体。

[0017] 解决课题的手段

[0018] [1]细胞吸附柱，该细胞吸附柱填充有包含纤维直径在0.5μm以上10μm以下的2 2
纤维、并且表面积在0.5m 以上小于10m 的吸附体，其中，吸附体填充容积在100ml以下。 [0019] [2][1]所述的细胞吸附柱，其特征在于，所述吸附体中包含纤维直径在0.5μm以
3 3
上10μm以下的纤维的部分的体积密度在0.01g/cm 以上0.15g/cm 以下。

[0020] [3]上述[1]或[2]所述的细胞吸附柱，其特征在于，所述纤维直径在3μm以上10μm以下。

[0021] [4]上述[1]～[3]任一项所述的细胞吸附柱，其中，所述吸附体上结合有胺残基。 [0022] 上述[1]～[4]任一项所述的细胞吸附柱，其特征在于，吸附细胞因子。 [0023] 上述[5]所述的细胞吸附柱，其特征在于，所述细胞因子是选自白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)和免疫抑制酸性蛋白(IAP)中的至少一种。

[0024] [1]～[6]任一项所述的细胞吸附柱，其特征在于，用于使血液循环的用途。 [0025] [7]所述的细胞吸附柱，其特征在于，使健康人的血液以30ml/分的血流速度通过柱内1小时时，满足下述式(1)和式(2)：

[0026] 2c＜a (1)

[0027] b＞106 (2)

[0028] 其中，

[0029] a：每单位重量吸附体的粒细胞吸附数(个/g)

[0030] b：每单位重量吸附体的单核细胞吸附数(个/g)

[0031] c：每单位重量吸附体的淋巴细胞吸附数(个/g)。

[0032] [1]～[8]任一项所述的细胞吸附柱，其特征在于，在使用健康犬的体外循环试验中，将使用生理盐水调节血细胞比容值为40％的血液以30ml/min的速度通过柱内时，血液处理量1500ml时的柱前后的压力损失在150mmHg以下。

[0033] 细胞的吸附方法，其特征在于，使用[1]～[9]任一项所述的细胞吸附柱吸附试样中的细胞。

[0034] [10]所述的细胞吸附方法，其中，所述试样是血液。

[0035] [10]或[11]所述的细胞吸附方法，其中，所述细胞是白细胞。

[0036] 白细胞除去疗法，其特征在于，使用[1]～[9]任一项所述的细胞吸附柱。 [0037] 溃疡性结肠炎、克罗恩病或慢性风湿性关节炎的治疗法，其特征在于，使用[1]～[9]任一项所述的细胞吸附柱。

[0038] 发明的效果

[0039] 根据本发明，可提供一种与细胞接触导致的细胞的变性和分化诱导等顾虑少的、具有吸附体表面积且吸附体填充容积小、具有操作性或用于降低患者负担的紧密性的细胞吸附柱。此外，还可提供一种不仅可除去血液中存在的细胞、特别是粒细胞和单核细胞等活化白细胞、癌细胞等，还可除去过量存在的细胞因子的压力损失少的细胞吸附柱。 附图说明

[0040] 图1是例示本发明细胞吸附柱的纵剖面图。

[0041] 符号说明

[0042] 1 容器本体

[0043] 2 流入口

[0044] 3 流出口

[0045] 4 过滤器

[0046] 5 隔板

[0047] 5a 隔板的开口

[0048] 6 过滤器

[0049] 7 隔板

[0050] 7a 隔板的支持突起

[0051] 7b 隔板的透孔

[0052] 8 导管

[0053] 9 流路

[0054] 10 贯通孔

[0055] 11 吸附体

[0056] Q 血流

具体实施方式

[0057] 本发明中的所谓细胞吸附柱的细胞吸附是指流入到柱中的血液等中的细胞(粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、其它血液细胞、癌细胞等)不从柱中流出来的情况，在本发明中，也包含过滤效果引起的现象。即，所谓细胞吸附用途是指从血液等体液中吸附细胞，进行人体的治疗、预 防等的用途。

[0058] 本发明中的细胞吸附柱优选在使健康人血液在1个小时通过柱内时，从血液中吸附白细胞的个数满足以下的式(1)和(2)：

[0059] 2c＜a (1)

[0060] b＞106 (2)

[0061] 上述式(1)和(2)中，a：每单位重量吸附体的粒细胞吸附数(个/g)，b：每单位重量吸附体的单核细胞吸附数(个/g)，c：每单位重量吸附体的淋巴细胞吸附数(个/g)。测定上述血细胞吸附数时的血细胞数的定量、血细胞比容值的测定可采用希森美康公司XT-1800iV进行。此处，粒细胞数根据中性白细胞数进行计算。以根据上述式(1)和(2)的评价为目的，使用本发明的细胞吸附柱时，血流速度为30ml/分钟。

[0062] 如下列举根据上述式(1)和(2)的评价的一个实例。从被检体(例如，健康人)直接采取血液进行实验时，在循环开始到5分钟、15分钟、30分钟、60分钟的4个时间点，在通过柱的前后采血(各1ml)，测定各自的血细胞数。设样品采取时间t(分钟)时的血液1ml中，每单位重量吸附体的细胞吸附数为Dt，根据下式求出。

[0063] Dt(个/g)＝[(柱循环前血液1ml中的血细胞数)-(柱循环后血液1ml中的血细胞数)]

[0064] 每单位重量吸附体的血细胞吸附数D根据下式求出。

[0065] D(个/g)＝30×(5×D5+10×D15+15×D30+30×D60)/吸附体重量(g)

[0066] 此外，在测定血细胞的吸附数时，由于使用人血液以本目的细胞吸附柱(实柱)尺寸进行的实验也有在逻辑上存在困难的时候，所以有时优选采用小型柱法按比例降低来实施。此时，适当的是变更血液流速，使相对于小型柱的吸附体填充容积，每单位时间的血液和吸附体的接触 时间，与相对于本发明的细胞吸附柱(实柱)情况的容积时的接触时间相等。如下举出采用小型柱法进行根据上述式(1)和(2)的评价情况的一个实例。将实柱(内直径36mm，吸附体填充容积70ml左右，且为径流式的柱)按比例降低求出血细胞的吸附数。将吸附体切为直径1cm的圆板状，层压填充到填充容积2ml的圆筒状柱内(内径1cm)。使用该柱，作为血液，使肝素采血(肝素浓度：10U/ml)得到的健康人的血液25ml通过，进行按比例降低评价。使相对于该圆筒状柱的吸附体填充容积的每单位时间的血液和吸附体的接触时间与实柱相等，选定血流速度，为0.86ml/分钟。

[0067] 将吸附体切为直径1cm的圆板状，层压填充到填充容积2ml的圆筒状柱(内径1cm)内。使用该柱，将肝素采血(肝素浓度：10U/ml)得到的人血液25ml以0.86ml/分钟的速度在37℃循环1小时，然后，在循环开始时(0分钟)和循环结束时(1小时)各采取1ml的血液，根据血细胞的组成测定血细胞数。设样品采取时间t(分钟)时的血液1ml中每单位重量吸附体的细胞吸附数为Dt，根据下式求出每单位重量吸附体的血细胞吸附数D’。 [0068] D’(个/g)＝25×(D0-D60)/吸附体重量(g)

[0069] 在本发明中，采用上述2方法可求出a、b、c。对于式(1)，也可以换句话称之为a/2c超过1(a/2c＞1)，a/2c是对小数点以后第2位进行四舍五入求得的。此外，在上述任一个按比例的实验中，b满足式(2)即可。

[0070] 在本发明的细胞吸附柱中，优选式(2)的单核细胞吸附数b超过106个的理由如下。即，是因为我们知道特别是在炎症性疾病中增加的单核细胞对免疫活性细胞的活化有6
密切影响，因而优选将该单核细胞从血液中除去。每单位重量吸附体仅能除去少于10 个的情况下，残存的单核细胞多，充分抑制炎症等的作用下降，所以不优选。 [0071] 此外，优选淋巴细胞吸附数少于粒细胞吸附数。这是因为淋巴细胞对于抗体产生、信息记忆和信息传输持有重要作用。在健康人中，血液中粒细胞和淋巴细胞的数目比从大致相等到粒细胞多数倍，存在个人差异，使用本发明的细胞吸附柱时的每单位重量吸附体的粒细胞吸附数和 淋巴细胞吸附数优选满足上述式(1)的关系，更优选代替式(1)满足4c＜a。本发明所说的淋巴细胞是所谓淋巴细胞的总称。即，以使用希森美康公司制XT-1800iV进行的细胞分类为基准，未区别B细胞和T细胞等。

[0072] 在细胞吸附柱中，增大吸附体的填充容积时，由于适度操作的血液量增加所以操作性变差，而且由于血液在柱内的滞留时间增加，所以产生由于和吸附体接触导致的对血液的变性或分化诱导等顾虑。本发明的细胞吸附柱特征在于：吸附体填充容积在100ml以下；柱中填充的吸附体含纤维直径在0.5μm以上10μm以下的纤维；以及吸附体的表面积2 2
在0.5m 以上但小于10m，所以由此能消除上述问题。

[0073] 对于吸附体填充容积的下限，其尽管还取决于吸附体的填充量，但优选在2ml以上，从防止血液通过时的堵塞的观点考虑，优选在5ml以上。此外，为了安全，优选在10ml以上。

[0074] 此外，本发明的细胞吸附柱的尺寸无特殊限制。但即使是紧密的细胞吸附柱，也存在在处理单位血液量之际的使用根数增加时效率不高的情况。即，在工业上、产业上利用本发明的细胞吸附柱时，可通过柱的血液量为一定量以上是有利的。具体的，将能够进行细胞除去处理而不会因实质上的压力损失下的柱压的上升引起溶血等坏影响的血液的总量表示为血液处理量的情况下，优选本发明的细胞吸附柱的血液处理量在1500ml以下。此外，为了提高效率，更优选在1800ml以上，而为了安全，更加优选在2000ml以上。血液处理量的判定可根据指定的血液量完全通过柱之际的柱前后(柱的入口和出口)的压力损失。例如，在使用健康犬的体外循环试验中，使用生理盐水调节血细胞比容值为40％的血液以30ml/min的速度通过1500ml血液处理量时的压力损失优选在150mmHg以下。所谓健康犬是指健康状态的犬，健康可根据事前饲育1周的时间之后，无体重减少来确认。此外，犬可使用实施例中使用的体重9～12kg的雄性犬，犬种也无特殊限制，但可使用比格犬等。 [0075] 对上述更详细的进行叙述。单核细胞由于异物认识能力强，所以为了除去它，柱内吸附体的表面积大时有利地发挥作用，所以增大表面积的方法对于单核细胞除去而言乍一看似乎是有效的。但是，如果仅是增加吸附体的填充量，则血液循环时柱中堵塞的危险增大。此外，为防止这一点，过于增大柱的填充容积的方法由于产生因吸附体和细胞的接触 导致的细胞的变性和分化诱导等顾虑，所以难以采用。对此，在本发明的细胞吸附柱中，由于吸附体所含纤维的纤维直径控制在0.5μm以上10μm以下，所以能有效利用单核细胞持有的异物认识能力，还能有效利用粒细胞的吞噬作用。因此，构成单核细胞吸附数和淋巴细胞吸附数之差大的柱，结果在制成吸附体填充容积在100ml以下的紧密柱的情况下，也可实现具有必要的异物认识能力的细胞吸附柱。此外，单核细胞的异物认识能力和吞噬能力对生物体中0.5μm以上10μm以下大小的物质能更强地发挥作用，由此来看也优选使用模拟了异物大小的具有该范围纤维直径的纤维作为构成本发明细胞吸附柱的吸附体的纤维。但是，纤维直径过细时，由于纤维自身的弹性不够，所以纤维自身的分散变差，恐怕不能作为单核细胞或粒细胞能认识的物质而有效地发挥作用。因此，为了稳定吸附性能，更优选吸附体的纤维的纤维直径在3μm以上10μm以下。这为进一步增大与淋巴细胞吸附数之差也是优选的。

[0076] 此处，所谓本发明的纤维直径是指纤维截面的直径。纤维直径是通过从吸附体随机地采取小片样品10个，用扫描电子显微镜(日本电子株式会社制，JSM-5400LV等)拍摄1000～3000倍的照片，测定从各样品各取10根、共100根纤维的直径，对它们的平均值的小数点以后第一位进行四舍五入而算出的。

[0077] 对于具有所述纤维直径的纤维，将包含该纤维的物质作为吸附体填充到柱容器时2
的表面积优选小于10m。这是因为如前所述，产生因吸附体和细胞接触导致的细胞的变性
2
和分化诱导等顾虑。并且，为了安全，表面积优选小于8m。此外，填充的吸附体的表面积必
2 6
需在0.5m 以上。小于此值时，不能使单核细胞的吸附数达到10 个以上。为了更稳定地吸
6 2
附10 个以上的单核细胞，优选在1.0m 以上。

[0078] 这里所说的表面积的评价方法采用压汞法，很简单。在本发明中，对压力0.4～3000psia的范围进行测定。此外，也可使用BET法测定。

[0079] 此外，本发明中所说的吸附体填充容积是指细胞吸附柱中填充吸附体的总空间的容积。换言之，是指血液流入、流出口关闭状态下的总内容积，可根据在除去吸附体和过滤器等填充物的状态下细胞吸附柱内(主要是柱容器内)可填充的比重已知的水等的量求出。此外，也可以在不除去填充物的情况下，详细测定柱容器的内腔的形状，计算求出。 [0080] 本发明的细胞吸附柱可通过将上述吸附体填充到柱容器中来制造。 柱容器可适当选择使用使公知的血液处理等中使用的柱的容器与吸附体填充容积等相符的容器。柱的构成优选(1)重复填充使吸附体形成为平板状的物体得到的柱；(2)吸附体卷成圆筒形状而形成的圆筒形状过滤器被放进两端部具有血液入口和血液出口的圆筒状容器中的柱；此外，(3)吸附体卷成中空圆筒形状而形成的中空圆筒状过滤器以其两端部被密封的状态被放进具有血液入口和血液出口的圆筒状容器中、且容器的血液出口设在与上述中空圆筒状过滤器的外周部分连通的部位、容器的血液出口设在与上述中空圆筒状过滤器的内周部分连通的部位的柱。它们当中，最优选(3)使用圆筒中空状过滤器的柱，是因为血液中的大部分细胞根据圆筒形状过滤器外周部分大面积的无纺布迅速被除去，未被除去而残留的微量的细胞也根据中空圆筒状过滤器内周部分小面积的无纺布而充分被除去，有效的细胞吸附是可能的。

[0081] 本发明的细胞吸附柱为了高效吸附除去粒细胞、单核细胞等细胞，优选构成吸附体的聚合物为水不溶性载体。此时，吸附体中所含的纤维或中空丝纤维的纤维直径如上所述也优选在0.5μm以上。直径如果小于该数值，则纤维的硬度消失，不能稳定地确保纤维彼此形成的空隙，结果，由于淋巴细胞的吸附除去增多，所以导致记忆细胞的除去，不优选。但为控制淋巴细胞的吸附除去率，比纤维直径的范围更优选的范围是3μm以上，更加优选的范围是4μm以上。此外，从进一步控制淋巴细胞的除去率，且不导致粒细胞和单核细胞的除去率下降的观点考虑，有时也更优选使纤维直径在5μm以上。但是，纤维直径超过8μm时，粒细胞、单核细胞的除去率显示下降趋势，纤维直径超过10μm时，粒细胞和单核细胞的除去率下降，因而引起性能下降。从实用上的观点考虑，优选纤维直径在20μm以下。

[0082] 水不溶性载体优选的原材料是疏水性纤维、即，聚乙烯、聚丙烯等聚烯烃、聚对苯二甲酸乙二酯、聚对苯二甲酸丁二酯等聚酯、以聚四氟乙烯为首的氟代聚合物。此外，如后所述，也可使用通过表面改性加成各种烷基或芳环等设置疏水性部位的材料。作为固定有胺残基的聚合物优选的具体实例，可简单地使用聚(对亚苯基醚砜)：-{(对C6H4)-SO2-(对C6H4)-O-}n-或Udel聚砜：-{(对C6H4)-SO2-(对C6H4)-O-(对C6H4)-C(CH3)2-(对C6H4)-O}n-、除此之外，-{(对C6H4)-SO2-(对C6H4)-O-(对C6H4)-O}n-、-{(对C6H4)-SO2-(对C6H4)-SO2- (对C6H4)-O}n-、-{(对C6H4)-SO2-(对C6H4)-O-(对C6H4)-C(CF3) 2-(对C6H4)-O}n-等代表的聚砜类聚合物、聚醚酰亚胺、聚酰亚胺、聚酰胺、聚醚、聚亚苯基硫化物、聚苯乙烯、丙烯酸聚合物等，且具有可通过共价键固定后述胺残基的反应性官能团的材料。它们当中，聚苯乙烯和聚砜类聚合物由于稳定性高，且形状保持性好，所以优选使用。

[0083] 作为具体的例子，可使用前述结合有反应性官能团的氯乙酰胺甲基化聚苯乙烯、氯乙酰胺甲基化的Udel聚砜、氯乙酰胺甲基化的聚醚酰亚胺等。此外，从可采用涂布工序等容易成型方面考虑，特别优选使用这些聚合物中可溶于有机溶剂的聚合物。 [0084] 本发明中使用的吸附体优选在构成吸附体的聚合物(例如，上述水不溶性载体)中结合作为官能团的胺残基而形成的吸附体。其中，优选固定有季铵基或者直链氨基或这两种基团(以下称为季铵基等)的吸附体。这些官能团优选结合到构成吸附体的水不溶性载体上。用于将季铵基等固定到水不溶性载体上的反应性官能团可举出：卤代甲基、卤代乙酰基、卤代乙酰胺甲基、卤代烷基等活泼卤素基、环氧化物基、羧基、异氰酸基、硫代异氰酸基、酸酐基等，但特别优选活泼卤素基。其中，卤代乙酰基由于制造容易，而且反应性高得恰当，季铵基等的固定发应可在温和条件下进行，同时此时产生的共价键在化学上稳定，所以优选。

[0085] 所谓季铵基等是指季铵和/或伯～叔氨基。伯～叔氨基以碳原子数而言，相对于每1个氮原子碳原子数为18以下的基团由于反应率提高，所以优选。而且，从细胞因子吸附性的观点考虑，在伯～叔氨基中，将相对于每1个氮原子具有3以上18以下个碳原子、特别是4以上14以下个碳原子烷基的叔氨基结合(固定)到聚合物上形成的吸附体是优异的。这样的叔氨基的具体例子可举出：三甲胺、三乙胺、N，N-二甲基己胺、N，N-二甲基辛胺、N，N-二甲基月桂基胺、N-甲基-N-乙基己胺等。此外，具有直链氨基的化合物的例子可举出：
四亚乙基五胺等。这些氨基也包括具有部分支链的结构的基团。

[0086] 本发明中的季铵基等向吸附材料结合的密度因构成水不溶性载体等吸附材料的聚合物的化学结构和用途而不同，但如果过少，则存在其功能不表达的趋势。而如果过多，则存在固定后的载体的物理强度变差，作为吸附体的功能也下降的趋势。因而，该密度优选为单位水不溶性载体的重复单元为0.01～2.0摩尔，更优选0.1～1.0摩尔。此外，季铵基 等的固定(季铵化)方法经常采用以碘化钾为催化剂的反应，但不限于此，可采用公知的方法。

[0087] 在本发明中，如上所述的季铵基等胺残基结合到水不溶性载体上的方法不特别限于上述反应。例如，可通过将含有季铵基等胺残基的聚合物溶解于溶剂、例如二氯甲烷、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺等中，在该溶液中浸入包含水不溶性载体的无纺布，然后使该溶剂蒸发来简单地制造。

[0088] 另一方面，本发明的吸附体也可以对构成水不溶性载体等吸附材料的聚合物如上所述固定官能团，同时或者代替其赋予疏水性部位。疏水性部位例如是包含烷基(乙基、辛基、己基、月桂基等)、芳环的基团等，可通过有机反应赋予导入到聚合物中。 [0089] 本发明的细胞吸附柱可吸附细胞因子。所谓细胞因子是选自白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)和免疫抑制酸性蛋白(IAP)中的至少一种细胞因子，也可以是2种以上的组合。它们均是被认为适用于白细胞除去疗法的、并被指出与溃疡性结肠炎、克罗恩病、慢性风湿性关节炎等病态有关的细胞因子。 [0090] 在本发明的细胞吸附柱中，根据这些之中要吸附的细胞因子的种类，适当选择吸附体上固定的季铵基等胺残基即可。例如，以白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)、免疫抑制酸性蛋白(IAP)等为目标时，将N，N-二甲基己胺、N，N-二甲基辛胺、N，N-二甲基月桂基胺等固定到吸附体上，可赋予得到的细胞吸附柱以吸附性。此外，以白介素-8(IL-8)、白介素-10(IL-10)、活性型转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等为目标时，通过将四亚乙基五胺作为胺成分固定到吸附体上，可可赋予得到的细胞吸附柱以吸附性。此外，也可组合固定多种官能团，例如，也可使用季铵盐和直链氨基两者。通过组合使用多种官能团，可使所吸附的细胞因子的种类有较宽的范围，因而优选，有提高所需细胞因子吸附特性等优点。 [0091] 如前所述，在本发明中，吸附体的形状无特殊限制，但以柱的形式使用时，优选纤维、膜、中空丝，此外，形态优选将纤维编织得到的针 织物、织物或无纺布等纤维结构物。吸附体如果仅以其自身即可保持形态，则也可单独使用，如果形态保持性低，则采用涂布等方法固定到适当的基材上，或者也可以和其它吸附体混合制成一个柱使用。固定或者混合等操作也可在加工成上述形状之前进行。

[0092] 在本发明中，无纺布也可以由单纤维制造，但特别优选由海岛型复合纤维制造。即，使用所述复合纤维根据公知的方法制成无纺布之后，为提高形态保持性以及为提高体积密度，通过将该无纺布针刺后，溶解海成分，可容易地制造。

[0093] 对本发明的吸附体的制造方法，吸附体的形态取无纺布为例模拟说明。以纤维直径不同的多种纤维作为材料使用时，按照目的混合比例进行计量，在混合状态下通过梳理机使之相互充分地分散，制成棉状。

[0094] 将该无纺布按照目标单位面积重量称量后，通向交叉铺网机进行针刺制成无纺布。此外，为了稳定形态，也可采用热粘合法、轧光法、针刺法等公知的网粘接方法将该无纺布和另行制作的网制成层压结构。此外，用于制成层压结构的更优选的方法是预先制作实施了预针刺的棉状物，将网夹在期间，针刺，制作具有无纺布-网-无纺布的层结构的吸附体的方法，由于简便，所以适于连续生产。此外，也可以在将预针刺的棉状物的单面与一片网结合的2层结构物层压制造多层结构的吸附体。通过与网制成2层以上的结构，形态保持性的提高得到改善。也可以使用无纺布和网的2层结构，更优选选取在无纺布之间夹入网的形状，即，无纺布-网-无纺布的夹层结构。当然，考虑到吸附体的体积密度，也可以在对被处理介质通过时的吸附体前后的压力损失没有影响的范围内进一步制成多层结构。 [0095] 本发明中的网的材料可使用聚酰胺、聚酯、聚丙烯腈类聚合物、聚乙烯、聚丙烯(PP)等公知的聚合物。如后所述，与无纺布形成一体后供于用于导入官能团的有机合成反应时，根据所用溶剂的种类、反应温度适当选择材料即可。特别是从生物体适应性方面或者耐蒸汽灭菌性方面考虑，特别优选PP。在进行射线灭菌的情况，优选聚酯或聚乙烯。 [0096] 采用多根纤维并丝得到的丝或纺织丝形成网结构时，存在血液等被处理介质通过并丝的丝状之间所导致的压力损失上升的顾虑，所以网优选由单丝形成。此外，如果是单丝，也容易保持每根的机械强度。

[0097] 单丝的直径优选在50μm以上1mm以下，同样，网的厚度优选在 50μm以上1.2mm以下。也可以是比这更大的范围，但这会减少每单位体积的吸附体自身的份量，不优选。 [0098] 网的构成无特殊限制，可使用结节网、无结节网、拉舍尔网等。网的网眼形状(空隙形状)也无特殊限制，可使用长方形、菱形、龟甲形等。此外，例如网的空隙形状是四边形时，优选通过使网的构成材料相对于无纺布的位置关系是从网和无纺布的主面看为相对于无纺布的长轴或短轴方向形成90度±10度角的方向，将网层压到无纺布上。由此层压无纺布时的强度和操作性能进一步提高，制造时的收率(成品率)也提高。

[0099] 通过使用网，可借助无纺布赋予形态保持性，即使体积密度小也能制成形态稳定的吸附体。此外，网自身对被处理介质的压力损失有影响，所以优选使网的开口部尽量的2 2
大。为此，优选任意的100mm 中有10mm 以上的空隙，特别优选具有3mm见方左右的开孔部，这样也可使形态保持性良好，很好地进行使用。

[0100] 此外，吸附材料的形态特别优选无纺布的形态，但此时，无纺布的体积密度如果3
过大则容易堵塞，相反如果过小则形态保持性变差，因而优选0.02～0.15g/cm，更优选
3
0.05～0.15g/cm。吸附体中纤维直径在0.5μm以上10μm以下的纤维部分的体积密度
3 3 3
优选在0.01g/cm 以上，更有选在0.03g/cm 以上。此外，为防止堵塞，优选在0.15g/cm 以
3
下，更优选在0.13g/cm 以下。这里所说的体积密度是指对加工成毡状的片材实施所要的官能团导入反应等得到的片状物等在最终阶段的吸附体的体积密度。如果增大体积密度，则过滤白细胞或细胞等大物质的能力提高，但过大则会导致血液循环时容易堵塞，所以上述的范围不优选。

[0101] 体积密度的测定可像例如以下那样进行。将吸附体切成3cm见方的正方形小片后，从上面放上5cm见方的1mm厚的聚丙烯(PP)制板，使之在厚度方向上层叠，在该状态下，测定吸附体的厚度，移除板再次放置之后，测定吸附体的厚度。上述操作重复5次，取其平均值作为厚度。该小片的重量除以根据上述厚度算出的体积，从而求出体积密度。对5个样品实施上述体积密度测定，取其平均值作为体积密度。具有网时，用上述方法测定具有网的小片的厚度，由算出的体积和用小片的重量减去纤维直径在0.5μm以上10μm以下的纤维的重量和网重量得到的重量，同样地计算求出体积密度。此外，向柱容器中填充吸附体时，必 需以体积密度不变化的状态进行填充。

[0102] 通过柱的血液量达到1500ml以上时不发生堵塞可通过控制上述体积实现。 [0103] 此外，举一实例说明本发明的细胞吸附柱的利用。本发明的柱包括具有流入口和流出口的容器，该容器内填充有细胞吸附用吸附体，具有将与该细胞吸附用吸附体接触前或接触后的血液导流的流路。流路与流入口和流出口的任一个相通，从流入口流入的液体经流路与其前后任一方的细胞吸附用吸附体接触，从流出口流出。

[0104] 该流入口和流出口是使体液流入、流出体外循环使用的细胞吸附柱的手段，在用于体外循环的治疗时，其成为被连接到循环系统的回路的部位。形状无特殊限制，但优选是可连接到形成体外循环用回路的管的形态。更优选具有连接器形状、且与回路管的拆装容易。

[0105] 上述流路具有将血液导入柱内部，或者将供给给柱的血液导出到柱外部的作用，根据其导流作用可使血液均匀向细胞吸附用吸附体供给并与之接触。不具有该导流用流路的柱的情况，有时会根据细胞吸附用吸附体的填充状态而发生偏流。偏流一旦发生，将导致不能使净化用填充材料与体液均匀接触，成为使净化能力下降的原因所在。 [0106] 流路的形状只要是具有体液导流作用即可，无特殊限制。例如，可举出：具有截面形状为圆形、四角形、三角形、其它多角形的截面的导管或者组合其形状的导管、将细棒扎成井形堆积形成的形状体、将中空丝捆扎形成的集束体、在管的周围涂布凝固形成流路后，抽出该管后的空间等。为了不产生液体的滞留等，流路长轴方向的形状优选直线状笔直的形状。此外，还优选沿流动方向缓慢地形成锥度的形状。

[0107] 根据图1说明本发明的细胞吸附柱的内部结构的一个实例。图1中，1为容器本体，在其长轴方向的前端和后端设有流入口2和流出口3。在流入口2的内侧设有过滤器4和圆板状的隔板5，此外，在流出口3的内侧设有过滤器6和圆板状的隔板7。 [0108] 2张隔板5、7中，在前侧(流入口侧)的隔板5的中心部分上设有开口5a，而在后侧的隔板7的中心部分上设有支持突起7a。此外，在隔板7的外周上沿周向间隔设有多个透孔7b。此外，在隔板5的开口5a和隔板7的支持突起7a之间挂上一根导管8搭接。 [0109] 上述导管8在内侧形成有导流血液的流路9，并在周壁上设有多个 贯通孔10。此外，导管8前端与隔板5的开口5a连通，同时，后端由隔板7的支持突起7a闭止。在该导管8的外周，吸附体11被卷成几层或多层。

[0110] 在循环法中使用该细胞吸附柱时，在流入口2和流出口3上连接在和血液池之间形成回路的管，将从血液池取出的血液供给到流入口2，于内部吸附体11除去有害物质，从流出口3流出，再次返回到血液池，如此进行循环。

[0111] 在柱内，从流入口2经过过滤器4进入流路9的血液一边在流路9中移动，一边从贯通孔10顺次浸入吸附体11，向半径方向的任一方向移动并吸附细胞等。已除去细胞等的血液从隔板7外周的多个透孔7b流出，经过滤器6从流出口3流出。

[0112] 在上述例子中，血液一边从开口5a流动通过导管8内的流路9一边从贯通孔10流出，但本发明的细胞吸附柱中的血液移动方向也可以和上述相反，从流出口3供给血液，从流出口2流出。

[0113] 实施例

[0114] 下面，通过实施例更具体地说明本发明，但发明的内容不被实施例限定。 [0115] 先说明以下的实施例中的评价项目和测定及算出条件。

[0116] (血细胞数的测定)

[0117] 血液中的血细胞数的定量、血细胞比容值的测定使用希森美康公司XT-1800iV进行。此处，粒细胞数根据中性白细胞数进行计算。

[0118] (细胞因子吸附评价)

[0119] 在细胞因子吸附评价中，向胎牛血清中添加人天然型IL-1、IL-6，分别配制成500pg/ml。向该血清中添加吸附体，在37℃下振荡2小时，采集上清，制成样品。按照吸附体∶血清量＝30mg∶1ml的固液比统一，根据下式求出振荡前后的细胞因子量，测定细胞因子吸附率(除去率)。定量是采用EIA法，使用市售的试剂盒(IL-1：R&D System公司制人IL-1βELISA试剂盒、IL-6：镰仓テクノサイエンス制)进行。

[0120] 细胞因子吸附率(％)＝[(振荡前血清中的细胞因子浓度)-(振荡后血清中的细胞因子浓度)]/(振荡前血清中的细胞因子浓度)×100

[0121] (纤维直径的测定)

[0122] 从无纺布上随机地采取小片样品10个，用扫描电子显微镜(日本电子株式会社制、JSM-5400LV)拍摄1000～3000倍的照片。从各样品各选出10根、共100根的纤维，基于照片测定各纤维的直径，算出它们的平均值，对小数点后第一位进行四舍五入得纤维直径。

[0123] (表面积的测定)

[0124] 柱容器中填充的吸附体的表面积的评价方法采用压汞法。使压力范围为0.4～3000psia进行测定。称量干燥的吸附体，装置采用マイクロメリテツクス公司制ポアサイザ-9320。

[0125] (体积密度的测定)

[0126] 将制作例中制作的吸附体切成任意的3cm见方的正方形小片后，从上面放上5cm见方的1mm厚的聚丙烯(PP)制板，使之在厚度方向上层叠，在该状态下，测定吸附体的厚度，移除板再次放上之后，测定吸附体的厚度。这样测定5次，取其平均值得厚度。该小片的重量除以根据上述厚度算出的体积，从而求出体积密度。对各吸附体取5个样品实施上述体积密度测定，取其平均值得体积密度。具有网时，用上述方法测定具有网的小片的厚度，由算出的体积和用小片的重量减去网重量得到的重量，同样地计算求出体积密度。 [0127] (吸附体填充容积的测定)

[0128] 所谓吸附体填充容积(表中简写为“填充容积”)是指细胞吸附柱中填充吸附体的总空间的容积。换言之，是指血液流入、流出口关闭状态下的总内容积，可根据在除去吸附体和过滤器等填充物的状态下可填充的比重已知的水的量求出。

[0129] (每单位重量吸附体的血细胞吸附数的测定-循环法)

[0130] 使用细胞吸附柱，对体重为约10kg(9～12kg)的健康犬(犬种：比格犬，性别：雄性，年龄：半年～2岁。此外，还确认了在买来后饲育一周，体重未减少。)，输液生理盐水，使血液的血细胞比容值为40％，以30ml/分钟的血流速度进行体外循环试验。在循环开始到5分钟、15分钟、30分钟、60分钟的4个时间点于柱前后采血(各1ml)，按照(血细胞数的测定)中记载的方法测定血细胞数。设样品采取时间t(分钟)时的血液1ml中每单位重量吸附体的细胞吸附数为Dt，根据下式求出。

[0131] Dt(个/g)＝[(柱循环前血液1ml中的血细胞数)-(柱循环后血液1ml中的血细胞数)]

[0132] 每单位重量吸附体的血细胞吸附数D根据下式求出。

[0133] D(个/g)＝30×(5×D5+10×D15+15×D30+30×D60)/吸附体重量(g)

[0134] 此外，在后述实施例中，在血液处理量1500ml、1750ml时测定柱前后的压力损失。 [0135] (每单位重量吸附体的血细胞吸附数的测定-小型柱法)

[0136] 采用小型柱法按比例降低来实施。按照柱尺寸，将血流速度设定成相当于使用实柱(相当于吸附体填充容积100ml)时的30ml/分钟的0.65ml/分钟。

[0137] 将分别为指定量的吸附体切为直径1cm的圆板状，层压填充到内容积2ml的圆筒状柱内(内径1cm)，将肝素采血(肝素浓度：10U/ml)得到的健康志愿者的血液25ml以0.65ml/分钟的血流速度在37℃循环1小时，然后，在循环开始时(0分钟)和循环结束时(1小时)各采取1ml的血液，采用(血细胞数的测定)中的方法测定血细胞的组成。设样品采取时间t(分钟)时的血液1ml中每单位重量吸附体的细胞吸附数为Dt，根据下式求出，每单位重量吸附体的血细胞吸附数D’根据下式求出。

[0138] D’(个/g)＝25×(D0-D60)/吸附体重量(g)

[0139] 本实验法为循环法的按比例降低实验，是使填充容积100ml时的吸附体表面积为本试验使用的吸附体表面积的50倍来进行操作的。

[0140] 用上述两方法中的任一方法求出上述式(1)和式(2)中的a、b、c。式(1)的a/2c是将小数点以后第2位四舍五入求出的。

[0141] [制作例1：吸附体1～4的制作]

[0142] (无纺布1、2)

[0143] 是36岛且岛进一步形成芯鞘复合结构的海岛复合纤维，其是采用 下述成分在纺丝速度850m/分钟、拉伸倍率为3倍的制丝条件下得到的。

[0144] 岛的芯成分：聚丙烯

[0145] 岛的鞘成分：90重量％聚苯乙烯、10重量％聚丙烯

[0146] 海成分：共聚聚酯(PETIFA)，该共聚聚酯含有对苯二甲酸乙二醇酯单元作为主要的重复单元，3重量％的5-磺基间苯二甲酸钠作为共聚成分。

[0147] 复合比例(重量比)：芯∶鞘∶海＝41∶41∶18

[0148] 制备含有30重量％该纤维(直径30μm)和70重量％直径22μm的聚丙烯的片状物后，通过针刺得到无纺布(无纺布1)。同样，制备含有68重量％该纤维(直径30μm)和32重量％直径22μm的聚丙烯的片状物后，通过针刺得到无纺布(无纺布2)。 [0149] (脱海无纺布1、2)

[0150] 接着将该无纺布1、2分别用90℃氢氧化钠水溶液(3重量％)处理，使作为海成分的PETIFA溶解于该水溶液中。由此由无纺布1制得芯鞘纤维的直径为4μm、体积密度为3 2
0.05g/cm(总单位面积重量250g/m)的脱海无纺布1，由无纺布2制得芯鞘纤维的直径为
3 2
4μm、体积密度为0.05g/cm(总单位面积重量250g/m)的脱海无纺布2。

[0151] (中间体1、2)

[0152] 接着，在20℃在1200ml硝基苯和780ml硫酸的混合液中溶解6g低聚甲醛，然后冷却至0℃，加入151.8g的N-羟甲基-α-氯乙酰胺，于5℃下溶解。将20g上述脱海无纺布1、2浸入其中，于室温下静止2小时。然后，取出纤维，加入到大量过量的冷甲醇中，洗涤。
将洗涤后的纤维用甲醇充分洗涤后，水洗，干燥。这样，由脱海无纺布1制得24g的α-氯乙酰胺甲基化聚苯乙烯纤维(中间体1)，由脱海无纺布2制得26.8g的α-氯乙酰胺甲基化聚苯乙烯纤维(中间体2)。

[0153] (吸附体1、2)

[0154] 将100g的N，N-二甲基辛基胺和16g碘化钾溶解到720ml的N，N-二甲基甲酰胺(以下简称为DMF)中，在得到的溶液中分别浸入10g的中间体1、2，于85℃的浴中加热3小时。将加热后的纤维用甲醇洗涤，浸渍到1mol/L浓度的食盐水中，然后水洗、真空干燥。这样，由中间体1得到13.4g的二甲基辛基铵化纤维(吸附体1)，由中间体2得到15.8g的二甲基辛基铵化纤维(吸附体2)。

[0155] (吸附体3、4)

[0156] 此外，在6.3g四亚乙基五胺、7.2g正丁基胺溶解到500mlDMF中得到溶液中，分别浸入10g的中间体1、2，在30℃反应3小时，用DMF洗涤后，水洗、真空干燥，由此由中间体1得到13.9g的四亚乙基五胺化纤维(吸附体3)，由中间体2得到16.6g的四亚乙基五胺化纤维(吸附体4)。

[0157] [制作例2：吸附体5、6的制作]

[0158] (无纺布3、4)

[0159] 是36岛且岛进一步形成芯鞘复合结构的海岛复合纤维，其是采用下述成分在纺丝速度850m/分钟、拉伸倍率为2倍的制丝条件下得到的。

[0160] 岛的芯成分：聚丙烯

[0161] 岛的鞘成分：90重量％聚苯乙烯、10重量％聚丙烯

[0162] 海成分：PETIFA

[0163] 复合比例(重量比)：芯∶鞘∶海＝41∶41∶18

[0164] 制备含有30重量％该纤维(直径40μm)和70重量％直径22μm的聚丙烯的片状物后，通过针刺得到无纺布(无纺布3)。同样，制备含有68重量％该纤维(直径40μm)和32重量％直径22μm的聚丙烯的片状物后，通过针刺得到无纺布(无纺布4)。 [0165] (脱海无纺布3、4)

[0166] 接着将该无纺布3、4分别用90℃氢氧化钠水溶液(3重量％)处理，使作为海成分的PETIFA溶解于该水溶液中。由此由无纺布3制得芯鞘纤维的直径为8μm、体积密度为3 2
0.13g/cm(总单位面积重量250g/m)的脱海无纺布3，由无纺布4制得芯鞘纤维的直径为
3 2
8μm、体积密度为0.13g/cm(总单位面积重量250g/m)的脱海无纺布4。

[0167] (中间体3、4)

[0168] 接着，在20℃在1200ml硝基苯和780ml硫酸的混合液中溶解6g低聚甲醛，然后冷却至0℃，加入151.8g的N-羟甲基-α-氯乙酰胺，于5℃下溶解。将20g上述脱海无纺布3、4浸入其中，于室温下静止2小时。然后，取出纤维，加入到大量过量的冷甲醇中，洗涤。
将洗涤后的纤维用甲醇充分洗涤后，水洗，干燥。这样，由脱海无纺布3制得23.7g的α-氯乙酰胺甲基化聚苯乙烯纤维(中间体3)，由脱海无纺布4制得27.1g的α-氯乙酰胺甲基化聚苯乙烯纤维(中间体4)。

[0169] (吸附体5、6)

[0170] 将100g的N，N-二甲基己基胺和16g碘化钾溶解到720ml的DMF中，在得到的溶液中分别浸入10g的中间体3、4，于85℃的浴中加热3小时。将加热后的纤维用甲醇洗涤，浸渍到1mol/L浓度的食盐水中，然后水洗、真空干燥。这样，由中间体3得到12.8g的二甲基己基铵化纤维(吸附体5)，由中间体4得到14.3g的二甲基己基铵化纤维(吸附体6)。 [0171] [制作例3：吸附体7、8的制作]

[0172] (无纺布5、6)

[0173] 是36岛且岛进一步形成芯鞘复合结构的海岛复合纤维，其是采用下述成分在纺丝速度880m/分钟、拉伸倍率为3倍的制丝条件下得到的。

[0174] 岛的芯成分：聚丙烯

[0175] 岛的鞘成分：90重量％聚苯乙烯、10重量％聚丙烯

[0176] 海成分：PETIFA

[0177] 复合比例(重量比)：芯∶鞘∶海＝41∶41∶18

[0178] 使用棉丛混棉机(TUFT BLENDER)使30重量％的该海岛复合纤维(直径30μm)和70重量％的直径22μm的聚丙烯充分混合分散，通过梳理机制成片状物。然后，将开口2
部为2mm见方的聚酯制网(厚度：0.4mm、单纤维直径0.3mm、单位面积重量75g/m)按照片状物的两端轴与网的纤维方向为5度那样夹入到片状物之间，通向交叉铺网机，像成为目标单位面积重量那样称量后，针刺。这样，制得包含3层结构的无纺布(无纺布5)。同样，由68重量％的该海岛复合纤维(直径30μm)和32重量％的直径22μm的聚丙烯得到包含3层结构的无纺布(无纺布6)。

[0179] (脱海无纺布5、6)

[0180] 接着将该无纺布5、6分别用90℃氢氧化钠水溶液(3重量％)处理，使作为海成分的PETIFA溶解于该水溶液中。由此由无纺布5制得芯鞘纤维的直径为4μm、体积密度3 2
为0.01g/cm(总单位面积重量80g/m)的脱海无纺布5，由无纺布6制得芯鞘纤维的直径
3 2
为4μm、体积密度为0.05g/cm(总单位面积重量80g/m)的脱海无纺布6。

[0181] (中间体5、6)

[0182] 接着，在20℃在1200ml硝基苯和780ml硫酸的混合液中溶解6g 低聚甲醛，然后冷却至0℃，加入151.8g的N-羟甲基-α-氯乙酰胺，于5℃下溶解。将20g上述脱海无纺布5、6浸入其中，于室温下静止2小时。然后，取出纤维，加入到大量过量的冷甲醇中，洗涤。将洗涤后的纤维用甲醇充分洗涤后，水洗，干燥。这样，由脱海无纺布5制得24g的α-氯乙酰胺甲基化聚苯乙烯纤维(中间体5)，由脱海无纺布6制得26.8g的α-氯乙酰胺甲基化聚苯乙烯纤维(中间体6)。

[0183] (吸附体7、8)

[0184] 分别在100gN，N-二甲基辛基胺和16g碘化钾溶解到720mlDMF中得到的溶液中，浸入10g的中间体5，在100gN，N-二甲基己基胺和16g碘化钾溶解到720mlDMF中得到的溶液中，浸入10g的中间体6，于85℃的浴中加热3小时。将加热后的纤维用甲醇洗涤，浸渍到1mol/L浓度的食盐水中，然后水洗、真空干燥。这样，由中间体5得到13.4g的二甲基辛基铵化纤维(吸附体7)，由中间体6得到15.8g的二甲基己基铵化纤维(吸附体8)。 [0185] [制作例4：吸附体9、10的制作]

[0186] 在制作例2中，增加纤维量，使单位面积重量为330g/m2，使针刺次数加倍，和制作例2同样制成无纺布7、8，脱海无纺布7、8，中间体7、8，吸附体9、10。 [0187] [制作例5：柱1～12的制作]

[0188] 将上述得到的吸附体1～10切成宽47mm、长377mm后，缠到外直径8mm的圆筒状且开口率40％的具有4mm直径的孔的聚丙烯制芯材上约6周，形成卷状，导入到和图1所示同样形状的柱容器中，制成内直径为36mm、填充容积为70ml的柱1～10(分别对应吸附体1～10)。

[0189] 此外，将上述得到的吸附体1和2切成宽47mm、长528mm后，缠到外直径8mm的圆筒状且开口率40％的具有4mm直径的孔的聚丙烯制芯材上约6周，形成卷状，导入到和图1所示同样形状的柱容器中，制成填充容积为95ml的柱11～12。

[0190] [实施例1～10]

[0191] 使用得到的柱1～8和11、12共10根，进行使用犬(体重：9～12kg，犬种：比格犬，性别：雄性，年龄：半年～2岁。此外，还确认了在买来后饲育一周，体重未减少。)的体外循环试验。血流统一为从柱的外侧流向柱的内侧的方向。通过约25mg/kg戊巴比妥钠(pentobarbital sodium)(ネンブタ一ル：大日本制药(株))的腹腔内投药将动物麻醉，确认已镇静后，背位固定到手术台上。

[0192] 在持续的血液透析装置(TR-520：Toray Medical(株))上安装持续过滤用血液回路(U-525MCB：(株)ウベ循研)。将包含肝素注入线的回路的动脉侧用生理盐水(大琢生食注：(株)大琢制药工场)充满至没有气泡残留后，不使柱中进入气泡连接到柱入口侧，并在柱的出口侧连接静脉侧回路。使柱入口侧向下，使用血液泵使2L生理盐水流入(流量：100mL/分钟)。然后，将柱上下倒转，使柱的入口侧向上，使向500mL生理盐水中添加5000U的肝素(肝素钠注“シミズ”：清水制药(株))配制而成的肝素加生理盐水溶液流入(流量：50mL/分钟)。此外，在动脉侧回路的肝素注入线上设置加入有约30mL浓度为200U/mL的肝素加生理盐水溶液的50mL容量注射筒。

[0193] 处置前使用从前腕静脉采取的血液测定血细胞比容值(i-STAT：扶桑药品工业(株))，算出使循环开始前的血细胞比容值位40％的输液量，自桡侧皮静脉注入生理盐水。此外，作为循环中的输液将40mL的生理盐水在1小时内自桡侧皮静脉注入。 [0194] 确认动物的麻醉状态稳定后，对体重10kg左右的犬，切开左大腿部分，使大腿动静脉露出，使用针头(surflow留置针14G×2”或16G×2”：テルモ(株))连接大腿动静脉和持续过滤用血液回路。

[0195] 启动血液循环泵和肝素注射泵，开始血液循环。设定初始值为20mLl/分钟、5分钟后为30mL/分钟，进行60分钟血液循环。从血液回路的柱入口之前的抗凝固剂注入线前部位单次给药1500U/body的肝素，然后，从肝素注入线持续给药140U/kg/hr的肝素。在血液循环开始时和结束时(开始1小时后)从柱之前和之后的血液回路上的采血按钮各采血1ml，作为血液样品。以上操作结束后，自血管除去针头，然后结扎这些血管，向切开部位喷雾戊巴比妥钠(注射用Viccillirt明治制果(株))生理盐水(在注射用Viccillin 1药瓶(效价500mg)中加生理盐水20mL，使之溶解)，并涂敷硫酸庆大霉素(ゲンタシン软膏1mg效价：シエリング·プラウ(株))，然后外科缝合皮肤。实验中，为防止体温下降使用加热器((株)夏目制作所)对动物保温。确认动物从麻醉苏醒后，返回原笼。根据上述(每单位重量吸附体的血细胞吸附数的测定-循环法)，使用采取的血液样品评价血液吸附数，结果如表1所示。此外， 表1中还同时给出了各实施例使用的柱内吸附体的表面积、填充容积、纤维直径、吸附官能团、吸附体重量、吸附体序号、压力损失和体积密度。 [0196] [比较例1、2]

[0197] 使用得到的柱9、10共2根，和实施例1～10同样进行使用犬的体外循环试验。结果如表1所示。此外，表1中还同时给出了比较例1、2中使用的柱内吸附体的表面积、填充容积、纤维直径、吸附官能团、吸附体重量、吸附体序号、压力损失和体积密度。 [0198]

[0199] [实施例11-18]

[0200] 肝素采血(肝素浓度：10U/ml)健康志愿者的血液50ml，向其中溶解人天然型IL-1、IL-6使成为500pg/ml，使用吸附体1～8，进行细胞因子吸附评价的研究。结果如表2所示。

[0201] [表2]

[0202]

[0203] [实施例19～26]

[0204] 分别将指定量的吸附体1、2、5、6、7、8填充至内容积2ml的圆筒状柱中。使肝素采血(肝素浓度：10U/ml)得到的健康志愿者的血液25ml以0.65ml/分钟的血流速度在37℃在各柱中循环1小时。根据上述(每单位重量吸附体的血细胞吸附数的测定-小型柱法)评价细胞吸附柱的血液吸附数。结果如表3所示。此外，在表3中还给出了各实施例中使用的柱内吸附体的表面积、填充容积、纤维直径、吸附官能团、吸附体重量和吸附体序号。 [0205]

[0206] [比较例3、4]

[0207] 分别将指定量的吸附体2、5填充至内容积2ml的圆筒状柱中。使肝素采血(肝素浓度：10U/ml)得到的健康志愿者的血液25ml以0.65ml/分钟的血流速度在37℃在各柱中循环1小时。根据上述(每单位重量吸附体的血细胞吸附数的测定-小型柱法)评价细胞吸附柱的血液吸附数。将结果以及与实施例1～10同样的评价结果均示于表4中。此外，在表4中还给出了比较例3、4中使用的柱内吸附体的表面积、填充容积、纤维直径、吸附官能团、吸附体重量和吸附体序号。

[0208]