一种2-酮基-L-古龙酸发酵菌种的制备工艺

摘要

本发明公开了一种2-酮基-L-古龙酸发酵菌种的制备工艺，该制备工艺采用大小菌进行混合培养，小菌为普通生酮基古龙酸菌，大菌为巨大芽孢杆菌，先将小菌单独接种到斜面培养基上培养16～48小时，然后再接种大菌，继续培养24～72小时，大小菌的数量比例控制为1∶20～40；采用浓度为5～30g/L的蔗糖或浓度为5～20g/L的果糖作为培养基中的主要碳源，将大小菌混合种子接入其中培养，控制接种种液菌数为108～1010个/ml。本发明改变小菌与大菌的比例，增加菌种密度，提高菌种活力，从而缩短发酵周期；本制备工艺菌种不变，操作简便，易广泛应用。

权利要求

1.一种2-酮基-L-古龙酸发酵菌种的制备工艺，其特征在于：采用大小菌进行混合培养，小菌为普通生酮基古龙酸菌，大菌为巨大芽孢杆菌，先将小菌单独接种到斜面培养基上培养20～32小时，然后再接种大菌，继续培养28～34小时，大小菌的数量比例控制为

1∶28～38；采用浓度为10～15g/L的蔗糖或浓度为15g/L的果糖作为培养基中的主要

8 10

碳源，将大小菌混合种子接入其中培养，控制接种种液菌数为5.5×10 ～0.83×10 个/ml。

说明书

一种2-酮基-L-古龙酸发酵菌种的制备工艺

技术领域

[0001] 本发明涉及维生素C的制备方法，具体地说是一种2-酮基-L-古龙酸发酵菌种的制备工艺。

背景技术

[0002] 目前，我国维生素C生产厂家均采用二步发酵生产技术。其主要特点是第二步发酵过程由两种菌混合培养完成的。其中普通生酮基古龙酸菌将山梨糖转化2-酮基-L-古龙酸，俗称小菌，另一种菌为巨大芽孢杆菌，作为小菌的伴生菌，促进小菌生长与产酸，俗称大菌。两种菌共同作用，将山梨糖转化为2-酮基-L-古龙酸。公知的2-酮基-L-古龙酸发酵菌种制作技术中：在斜面菌种制作时，大小菌同时搭配进行混合培养；液体种子培养基配方中，碳源主要采用山梨糖和葡萄糖，采用该方法制作的菌种，小菌比例偏小，菌种密度低，造成实际生产中发酵周期偏长，发酵转化率低，从而影响2-酮基-L-古龙酸的产量，增加能耗和成本。

发明内容

[0003] 本发明的目的是提供一种操作简便、能够缩短发酵周期的2-酮基-L-古龙酸发酵菌种的制备工艺。

[0004] 本发明的技术解决方案是该工艺采用大小菌进行混合培养，小菌为普通生酮基古龙酸菌，大菌为巨大芽孢杆菌，先将小菌单独接种到斜面培养基上培养16～48小时，然后再接种大菌，继续培养24～72小时，大小菌的数量比例控制为1∶20～40；采用浓度为5～30g/L的蔗糖或浓度为5～20g/L的果糖作为培养基中的主要碳源，将大小菌混合种子
8 10
接入其中培养，控制接种种液菌数为10 ～10 个/ml。

[0005] 本发明对菌种制作方法和种子液体培养基配方进行优化，改变小菌与大菌的比例，增加菌种密度，提高菌种活力，从而缩短发酵周期；本制备工艺不需要增添新设备，亦不需要改造原设备，菌种不变，操作简便，易广泛应用。

具体实施方式

[0006] 实施例1：

[0007] 先将小菌单独接种到斜面培养基上培养24小时，然后再接种大菌，继续培养28小时，大菌与小菌的数量比为1∶30，在液体种子培养基中用浓度为15g/L的果糖作为主要碳8 3
源，接种种液菌数为5.5×10 个/ml，通过扩大培养，接种到1m 发酵罐中，发酵46小时结束，发酵液终点2-酮基-L-古龙酸含量101.63mg/ml，发酵转化率为92.56％。

[0008] 实施例2：

[0009] 先将小菌单独接种到斜面培养基上培养20小时，然后再接种大菌，继续培养32小时，大菌与小菌的数量比为1∶28，在液体种子培养基中用浓度为10g/L的蔗糖作为主要碳9 3
源，接种种液菌数为1.9×10 个/ml，通过扩大培养，接种到50m 发酵罐中，发酵45小时结