基于4-苯基-6-(2,2,2-三氟-1-苯基乙氧基)嘧啶的化合物及其应用方法

摘要

本发明公开了式I化合物，以及包含它们的组合物，以及它们用于治疗、预防和/或管理疾病或紊乱的方法：

权利要求

1.化合物，其是(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸乙酯：或其药用盐。

2.组合物，包含权利要求1的化合物和可药用赋形剂或稀释剂。

3.单一单位剂型，包含权利要求2的组合物。

4.权利要求1的化合物在制备药物中的应用，其中所述药物用于治疗类癌危象，类癌综合征，克罗恩氏病，心血管或肺部疾病或紊乱，易激性肠综合征，硬皮病，5-羟色胺综合征，或溃疡性结肠炎。

说明书

基于4-苯基-6-(2,2,2-三氟-1-苯基乙氧基)嘧啶的化

合物及其应用方法

[0001] 发明领域

[0002] 本发明涉及基于4-基-6-(2，2，2-三氟-1-苯基乙氧基)嘧啶的化合物，含有所述化合物的组合物，及其在治疗、预防和管理疾病和病症中的应用。

背景技术

[0003] 神经递质5-羟色胺[5-羟基色胺(5-HT)]参与情绪控制的多个中枢神经系统方面，并参与调节睡眠、焦虑、酗酒、药物滥用、食物摄取、和性行为。在外周组织中，5-羟色
胺据报道牵涉调节血管张力，肠道运动性，一期止血，和细胞-介导的免疫反应。Walther，
D.J.等，Science 299：76(2003)。

[0004] 酶色氨酸羟化酶(TPH)催化5-羟色胺生物合成的限速步骤。TPH的两种同工型已被报道：TPH1，其在外周组织中、主要在胃肠(GI)道中表达；以及TPH2，其在5-羟色胺能神
经元中表达。参见同上。同工型TPH1由tph1基因编码；TPH2由tph2基因编码。参见同
上。

[0005] 已报道了tph1基因遗传缺失的小鼠(“基因敲除小鼠”)。在一种情形下，小鼠据报道在经典的5-羟色胺能脑区表达正常量的5-羟色胺，但在外周大量缺乏5-羟色胺。参
见同上。在另一情形下，基因敲除小鼠显示出异常的心脏活动，这归因于外周5-羟色胺缺
乏。 ，F.等， PNAS 100(23)：13525-13530(2003)。

[0006] 由于5-羟色胺参与如此多的生化过程，影响5-羟色胺受体的药物通常伴有副作用。因此，需要新的途径来治疗受5-羟色胺影响、介导、或与之相关的疾病和紊乱。

[0007] 发明概述

[0008] 本发明部分涉及式I化合物：

[0009]

[0010] 及其可药用盐和溶剂化物，其中：A1是任选取代的杂环；各R1独立地是卤素，氢，C(O)RA，ORA，NRBRC，S(O2)RA，或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；R2独立地是卤
素，氢，C(O)RA，ORA，NRBRC，S(O2)RA，或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；R3是氢，
C(O)RA，C(O)ORA，或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；R4是氢或任选
取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；各RA独立地是氢或任选取代的烷基、
烷基-芳基或烷基-杂环；各RB独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；
各RC独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；以及m是1-4。

[0011] 具体化合物抑制TPH(例如，TPH1)活性。

[0012] 本发明还涉及药物组合物，以及涉及治疗、预防和管理多种疾病和病症的方法。

附图说明

[0013] 图1显示(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-1-(4-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸乙酯在小鼠空肠中对5-HT
水平的剂量依赖性影响。该化合物在15％Captisol 的溶液中以15，50，150和300mpk口
服给药。

[0014] 图2显示(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-1-(4-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸乙酯口服给药对大鼠胃
肠(GI)运动性的影响。星号标识了利用t检验或单因素ANOVA检验与介质对照比较时，p
＜0.01的数据。

[0015] 图3显示(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-1-(4-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸乙酯口服给药对大鼠胃
排空的影响。星号标识了利用t检验或单因素ANOVA检验与介质对照比较时p＜0.01的
数据。

[0016] 图4显示(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-1-(4-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸乙酯口服给药对大鼠5-HT
的血液和近端结肠水平的影响，其数据呈现在图1和图2中。在两种情形下，利用单因素
ANOVA皆为p＜0.0001。

发明内容

[0017] 本发明部分基于下列发现：敲除小鼠的tph1基因显著降低GI 5-羟色胺的水平，然而对中枢神经系统(CNS)的可测量的影响如果有的话也很小。

[0018] 本发明还基于对抑制TPH(例如，TPH1)的化合物的发现。当给药至哺乳动物时，本发明优选的化合物降低5-羟色胺水平，具有的药代动力学和药效动力学性质使得它们
可实际用于治疗、预防和管理疾病和病症，并且在药理作用和毒性或不利的副反应之间具
有广阔的安全限。

[0019] 定义

[0020] 除非另有说明，术语“烯基”表示带有2-20个(例如，2-10或2-6个)碳原子并包括至少一个C-C双键的直链、支链和/或环状烃。代表性烯基部分包括乙烯基，烯丙基，
1-丁烯基，2-丁烯基，异丁烯基，1-戊烯基，2-戊烯基，3-甲基-1-丁烯基，2-甲基-2-丁
烯基，2，3-二甲基-2-丁烯基，1-己烯基，2-己烯基，3-己烯基，1-庚烯基，2-庚烯基，3-庚
烯基，1-辛烯基，2-辛烯基，3-辛烯基，1-壬烯基，2-壬烯基，3-壬烯基，1-癸烯基，2-癸烯
基和3-癸烯基。

[0021] 除非另有说明，术语“烷基”表示带有1-20个(例如，1-10或1-4个)碳原子的直链、支链和/或环状(“环烷基”)烃。带有1-4个碳的烷基部分称作“低级烷基”。烷基的
例子包括甲基，乙基，丙基，异丙基，正-丁基，叔-丁基，异丁基，戊基，己基，异己基，庚基，
4，4-二甲基戊基，辛基，2，2，4-三甲基戊基，壬基，癸基，十一烷基和十二烷基。环烷基部分
可以是单环或多环，其例子包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，和金刚烷基。烷基部分的
其他例子具有直链、支链和/或环状部分(例如，1-乙基-4-甲基-环己基)。术语“烷基”
包括饱和烃，以及烯基和炔基部分。

[0022] 除非另有说明，术语“烷氧基”表示-O-烷基。烷氧基的例子包括-OCH3，-OCH2CH3，-O(CH2)2CH3，-O(CH2)3CH3，-O(CH2)4CH3，和-O(CH2)5CH3。

[0023] 除非另有说明，术语“烷芳基”或“烷基-芳基”表示与芳基部分结合的烷基部分。

[0024] 除非另有说明，术语“烷基杂芳基”或“烷基-杂芳基”表示与杂芳基部分结合的烷基部分。

[0025] 除非另有说明，术语“烷基杂环”或“烷基-杂环”表示与杂环部分结合的烷基部分。

[0026] 除非另有说明，术语“炔基”表示带有2-20个(例如，2-20或2-6个)碳原子并包括至少一个C-C三键的直链、支链和/或环烃。代表性炔基部分包括乙炔基，丙炔基，1-丁
炔基，2-丁炔基，1-戊炔基，2-戊炔基，3-甲基-1-丁炔基，4-戊炔基，1-己炔基，2-己炔
基，5-己炔基，1-庚 炔基，2-庚炔基，6-庚炔基，1-辛炔基，2-辛炔基，7-辛炔基，1-壬炔
基，2-壬炔基，8-壬炔基，1-癸炔基，2-癸炔基和9-癸炔基。

[0027] 除非另有说明，术语“芳基”表示芳香环或由碳和氢原子组成的芳族或部分芳族环系统。芳基部分可包含多个结合或稠合在一起的环。芳基部分的例子包括蒽基，薁基
(azulenyl)，联苯基，芴基，茚满基，茚基，萘基，菲基，苯基，1，2，3，4-四氢-萘，和甲苯基。 [0028] 除非另有说明，术语“芳烷基”或“芳基-烷基”表示与烷基部分结合的芳基部分。

[0029] 除非另有说明，术语“可生物水解的酰胺”，“可生物水解的酯”“可生物水解的氨基甲酸酯”，“可生物水解的碳酸酯”，“可生物水解的脲基”和“可生物水解的磷酸酯”分别表示
化合物的酰胺、酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、脲基、或磷酸酯，其或者：1)不干扰所述化合物的
生物活性，但可赋予该化合物有利的体内特性，诸如摄取，作用持续时间，或作用发作；或者
2)是生物无活性的，但在体内转化成生物活性化合物。可生物水解的酯的例子包括低级烷
基酯，烷氧基酰基氧基酯，烷基酰基氨基烷基酯，以及胆碱酯。可生物水解的酰胺的例子包
括低级烷基酰胺，α-氨基酸酰胺，烷氧基酰基酰胺，和烷基氨基烷基-羰基酰胺。可生物
水解的氨基甲酸酯包括低级烷基胺，取代的乙二胺，氨基酸，羟基烷基胺，杂环胺和杂芳胺，
和聚醚胺。

[0030] 除非另有说明，短语“受外周5-羟色胺介导的疾病或病症”和“受外周5-羟色胺介导的疾病和病症”表示具有一种或多种症状的疾病和/或病症，其严重性受外周5-羟色
胺水平的影响。

[0031] 除非另有说明，术语“卤素”和“卤代”包括氟，氯，溴，和碘。

[0032] 除非另有说明，术语“杂烷基”是指烷基部分(例如，直链，支链 或环状)，其中至少一个碳原子已被杂原子替代(例如，N，O或S)。

[0033] 除非另有说明，术语“杂芳基”表示其中至少一个碳原子已被杂原子(例如，N，O或S)替换的芳基部分。例子包括吖啶基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并异噻唑基，苯并异噁唑
基，苯并喹唑啉基，苯并噻唑基，苯并噁唑基，呋喃基，咪唑基，吲哚基，异噻唑基，异噁唑基，
噁二唑基，噁唑基，酞嗪基，吡嗪基，吡唑基，哒嗪基，吡啶基，嘧啶基(pyrimidinyl)，嘧啶基
(pyrimidyl)，吡咯基，喹唑啉基，喹啉基，四唑基，噻唑基，和三嗪基。

[0034] 除非另有说明，术语“杂芳烷基”或“杂芳基-烷基”表示与烷基部分结合的杂芳基。

[0035] 除非另有说明，术语“杂环”是指含有碳、氢和至少一个杂原子(例如，N，O或S)的芳族、部分芳族或非芳族的单环或多环或环系统。杂环可包括稠合或结合在一起的多(即，
两个或更多个)环。杂环包括杂芳基。例子包括苯并[1，3]间二氧杂环戊烯基，2，3-二
氢-苯并[1，4]二噁烯基，噌啉基，呋喃基，乙内酰脲基，吗啉基，氧杂环丁烷基，环氧乙烷
基，哌嗪基，哌啶基，吡咯烷酮基，吡咯烷基，四氢呋喃基，四氢吡喃基，四氢吡啶基，四氢嘧
啶基，四氢噻吩基，四氢硫代吡喃基，和戊内酰胺基。

[0036] 除非另有说明，术语“杂环烷基”或“杂环-烷基”是指与烷基部分结合的杂环部分。

[0037] 除非另有说明，术语“杂环烷基”是指非芳族杂环。

[0038] 除非另有说明，术语“杂环烷基烷基”或“杂环烷基-烷基”是指与烷基部分结合的杂环烷基部分。

[0039] 除非另有说明，术语“管理”包括在已患有指定疾病或紊乱的患者中预防所述疾病或紊乱、或其一种或多种症状的复发，和/或延长已患有所述疾病或紊乱的患者维持好转
的时间。所述术语包括调节所述疾病或紊乱的开始、发展和/或持续时间，或改变患者对所
述疾病或紊乱的反应方式。

[0040] 除非另有说明，术语“可药用盐”是指从可药用的无毒酸或碱制备的盐，包括无机酸和碱以及有机酸和碱。合适的可药用碱加成盐包括从铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制成的
金属盐，或从赖氨酸、N，N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、甲葡胺
(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制成的有机盐。合适的无毒酸包括无机和有机酸，诸如乙酸，
褐藻酸，邻氨基苯甲酸，苯磺酸，苯甲酸，樟脑磺酸，柠檬酸，乙烯磺酸(ethenesulfonic)，
甲酸，富马酸，糠酸，半乳糖醛酸，葡糖酸，葡糖醛酸，谷氨酸，乙醇酸，氢溴酸，盐酸，羟乙
磺酸，乳酸，马来酸，苹果酸，扁桃酸，甲磺酸，粘酸，硝酸，扑酸(pamoic)，泛酸，苯基乙酸，
磷酸，丙酸，水杨酸，硬脂酸，琥珀酸，磺胺酸，硫酸，酒石酸，和对甲苯磺酸。具体的无毒
酸包括盐酸，氢溴酸，磷酸，硫酸，和甲磺酸。进而具体盐的例子包括盐酸盐和甲磺酸盐
(mesylatesalts)。其他在本领域是众所周知的。参见，例如，Remington′sPharmaceutical
th
Sciences，18 ed.(雷氏药物科学，第18版)(MackPublishing，Easton PA：1990)和
th
Remington：The Science and Practice ofPharmacy，19 ed.(雷氏药剂科学和实践，第19
版)(Mack Publishing，Easton PA：1995)。

[0041] 除非另有说明，术语“有效TPH1抑制剂”是指TPH1_IC50小于约10μM的化合物。

[0042] 除非另有说明，术语“防止”旨在患者开始患有指定疾病或病症之前发生的作用，其抑制或降低所述疾病或紊乱、或其一种或多种症状的严重性。该术语包括预防。

[0043] 除非另有说明，术语“前药”包括在此公开的化合物的可药用酯，碳酸酯，硫代碳酸酯，N-酰基衍生物，N-酰基氧基烷基衍生物，叔胺的季铵衍生物，N-曼尼希碱，席夫碱，氨基
酸共轭物，磷酸酯，金属盐和磺酸酯。前药的例子包括含可生物水解部分的化合物(例如，
可生物水解的酰胺，可生物水解的氨基甲酸酯，可生物水解的碳酸酯，可生物水解的酯，可
生物水解的磷酸酯，或可生物水解的酰脲类似物)。在此公开的化合物的前药容易被本领域
普通技术人员所想到和制备。参见，例如，Design of Prodrugs(前药设计)，Bundgaard，
A.Ed.，Elseview，1985；Bundgaard，H.，“Design and Application of Prodrugs(前药设
计和应用)”，A Textbook ofDrug Design and Development(药物设计和开发教科书)，
Krosgaard-Larsen和H.Bundgaard编著，1991，第5章，113-191页；和Bundgaard，H.，
Advanced Drug Delivery Review(先进的药物投送综述)，1992，8，1-38。

[0044] 除非另有说明，化合物的“预防有效量”是足以预防疾病或病症、或一种或多种与该疾病或病症有关的症状、或预防其复发的量。化合物的预防有效量是治疗剂单独或与其
他药剂组合的量，该量在疾病预防中提供预防益处。术语“预防有效量”可包括提高整体预
防或增强另一预防剂的预防功效的量。

[0045] 除非另有说明，术语“保护基”或“保护性基团”，当用于指进行化学反应的分子部分时，表示在该化学反应的条件下不发生反应的化学部分，并且可被去除以提供在那些
条件下反应的部分。保护基在本领域是众所周知的。参见，例如，Greene，T.W.和Wuts，
P.G.M.， Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)(第三版.，
John Wiley&Sons：1999)；Larock，R.C.，Comprehensive OrganicTransformations(综合有
机转化)(第二版，John Wiley&Sons：1999)。一些例子包括苄基，二苯基甲基，三苯甲基，
Cbz，Boc，Fmoc，甲氧基羰基，乙氧基羰基，和苯二甲酰亚氨基。

[0046] 除非另有说明，术语“拟卤素”是指多原子阴离子，在其酸-碱、取代、和氧还化学中类似卤化物离子，通常具有低的碱性度，并在原子转移自由基聚合条件下形成自由基。拟
卤素的例子包括叠氮化物离子，氰化物，氰酸盐，硫代氰酸盐，硫代硫酸盐，磺酸盐，和磺酰
卤。

[0047] 除非另有说明，术语“选择性TPH1抑制剂”是其TPH2_IC50比其TPH1_IC50大至少约10倍的化合物。

[0048] 除非另有说明，术语化合物的“立体异构富集的组合物”是指命名化合物及其立体异构体的混合物，其含有的命名化合物比其立体异构体更多。例如，(S)-丁-2-醇的
立体异构富集的组合物包括比率为，例如，约60/40，70/30，80/20，90/10，95/5，和98/2的
(S)-丁-2-醇和(R)-丁-2-醇的混合物。

[0049] 除非另有说明，术语“立体异构混合物”包括外消旋混合物以及立体异构富集的混合物(例如，R/S＝30/70，35/65，40/60，45/55，55/45，60/40，65/35和70/30)。

[0050] 除非另有说明，术语“立体异构纯”表示组合物含有化合物的一种立体异构体，并基本上不含该化合物的其他立体异构体。例如，具有一个立体中心的化合物的立体异构纯
组合物基本上不含该化合物的相对立体异构体。具有两个立体中心的化合物的立体异构
纯组合物基本上不含该化合物的其他非对映异构体。具有多个立体中心的化合物的立体
异构体纯组合物，但其绘制或命名的方式定义了少于所有立体中心的立体化学，其基本上
不含该化合物的异构体，这些异构体在立体化学定义的立体中心具有不同的立体化学。例
如，“立体异构纯((1R)-1，2-二氯丙基)苯”是指基本上不含((1S)-1，2-二氯丙基)苯的
((1R)-1，2-二氯丙基)苯。

[0051] 典型的立体异构纯化合物包含大于约80重量％的该化合物的一种立体异构体和小于约20重量％的该化合物的其他立体异构体，大于约90重量％的该化合物的一种立体
异构体和小于约10重量％的该化合物的其他立体异构体，大于约95重量％的该化合物的
一种立体异构体和小于约5重量％的该化合物的其他立体异构体，大于约97重量％的该化
合物的一种立体异构体和小于约3重量％的该化合物的其他立体异构体，或大于约99重
量％的该化合物的一种立体异构体和小于约1重量％的该化合物的其他立体异构体。

[0052] 除非另有说明，术语“取代的”，当用于描述化学结构或部分时，是指该结构或部分的衍生物，其中一个或多个氢原子被原子、化学部分或官能团取代，诸如，但不限于，醇，醛，
烷氧基，烷酰氧基，烷氧基羰基，烯基，烷基(例如，甲基，乙基，丙基，叔-丁基)，炔基，烷基
羰基氧基(-OC(O)烷基)，酰胺(-C(O)NH-烷基-或-烷基NHC(O)烷基)，脒基(-C(NH)
NH-烷基或-C(NR)NH2)，胺(伯，仲和叔胺，诸如烷基氨基，芳基氨基，芳烷基氨基)，芳酰
基，芳基，芳基氧基，偶氮基，氨基甲酰基(-NHC(O)O-烷基-或-OC(O)NH-烷基)，氨基甲
酰(例如，CONH2，以及CONH-烷基，CONH-芳基，以及CONH-芳烷基)，羰基，羧基，羧酸，羧
酸酐，羧酰氯，氰基，酯，环氧化物，醚(例如，甲氧基，乙氧基)，胍基，卤代，卤代烷基(例
如，-CCl3，-CF3，-C(CF3)3)，杂烷基，半缩醛，亚胺(伯和仲亚胺)，异氰酸酯，异硫氰酸酯，酮，腈，硝基，氧(即，提供氧基)，磷酸二酯，硫化物，磺酰胺(例如，SO2NH2)，砜，磺酰(包括烷基
磺酰，芳基磺酰和芳烷基磺酰)，亚砜，硫醇(例如，巯基，硫醚)和脲(-NHCONH-烷基-)。

[0053] 除非另有说明，化合物的“治疗有效量”为足以在治疗或管理疾病或病症中提供治疗益处、或延迟或最小化一种或多种与所述疾病或病症相关的症状的量。化合物的治疗有
效量是治疗剂单独或与其他疗法组合的量，其在治疗或管理疾病或病症中提供治疗益处。
术语“治疗有效量”可包括改善整体治疗、减少或避免疾病或病症的症状或病因、 或增强另
一治疗剂的治疗功效的量。

[0054] 除非另有说明，术语“TPH1_IC50”是化合物对TPH1的IC50，利用下文实施例所述的体外抑制分析确定。

[0055] 除非另有说明，术语“TPH2_IC50”是化合物对TPH2的IC50，利用下文实施例所述的体外抑制分析确定。

[0056] 除非另有说明，术语“治疗”旨在患者正患有指定疾病或紊乱时发生的作用，其降低所述疾病或紊乱、或其一种或多种症状的严重性，或阻碍或减缓所述疾病或紊乱的进展。

[0057] 除非另有说明，术语“包括”与“包括，但不限于”具有相同的意思。同样，术语“诸如”与“诸如，但不限于”具有相同的意思。

[0058] 除非另有说明，紧接一系列名词前的一个或多个形容词解释成适用于各名词。例如，短语“任选取代的烷基、芳基、或杂芳基”与“任选取代的烷基，任选取代的芳基，或任选
取代的杂芳基”具有相同的意思。

[0059] 应注意的是，形成较大化合物的部分的化学部分，可以利用其以单个分子存在时通常给予它的名称或通常给予它的基团的名称在此描述。例如，术语“吡啶”和“吡啶基”，
当用于描述与其他化学部分连接的部分时，给予相同的意思。因此，两个短语“XOH，其中X
是吡啶基”和“XOH，其中X是吡啶”给予相同的意思，并包括化合物吡啶-2-醇，吡啶-3-醇
和吡啶-4-醇。

[0060] 还应注意，如果结构或结构的部分的立体化学未以例如粗线或虚线标明，则该结构或该结构的部分被解释成包括其所有立体异构体。同样，具有一个或多个手性中心但并
未指定所述中心的立体化学的化 合物名称包括纯立体异构体及其混合物。而且，图中所示
的带有未满足的化合价的任何原子被假定连接至足够的氢原子以满足化合价。此外，以一
个实线与一个平行的虚线来描述的化学键包括单和双(例如，芳族)键，如果化合价允许的
话。

[0061] 化合物

[0062] 本发明尤其包括式I化合物：

[0063]

[0064] 及其可药用盐和溶剂化物，其中：A1是任选取代的杂环；各R1独立地是卤素，氢，C(O)RA，ORA，NRBRC，S(O2)RA，或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；R2独立地是卤
素，氢，C(O)RA，ORA，NRBRC，S(O2)RA，或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；R3是氢，
C(O)RA，C(O)ORA，或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；R4是氢或任选
取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；各RA独立地是氢或任选取代的烷基、
烷基-芳基或烷基-杂环；各RB独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；
各RC独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；以及m是1-4。

[0065] 在一个实施方案中，所述化合物的式为：

[0066]

[0067] 在另一实施方案中，其式为：

[0068]

[0069] 其中：各R5独立地是卤素，氢，C(O)RA，ORA，NRBRC，S(O2)RA，或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；以及n是1-3。

[0070] 在另一实施方案中，其式为：

[0071]

[0072] 或

[0073]

[0074] 其中：各R5独立地是卤素，氢，C(O)RA，ORA，NRBRC，S(O2)RA，或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；以及p是1-4。

[0075] 在另一实施方案中，其式为：

[0076]

[0077] 其中：各R5独立地是卤素，氢，C(O)RA，ORA，NRBRC，S(O2)RA，或任选取代的烷基、烷基-芳基或烷基-杂环；以及q是1-2。

[0078] 在另一实施方案中，其式为：

[0079]

[0080]

[0081] 其中：各R5独立地是卤素，氢，C(O)RA，ORA，NRBRC，S(O2)RA，或任选取代的烷基，烷基-芳基或烷基-杂环；以及q是1-2。

[0082] 关于在此公开的多种式，尤其是本发明化合物而言，A1是芳香族的。在其他中，A1不是芳香族的。在有些中，A1任选以一个或多个氢或低级烷基取代。

[0083] 在有些中，R1是氢或卤素。

[0084] 在有些中，m是1。

[0085] 在有些中，R2是氢或氨基。

[0086] 在有些中，R3是氢或低级烷基。在其他中，R3是C(O)ORA和RA 是烷基。

[0087] 在有些中，R4是氢或低级烷基。

[0088] 在有些中，R5是氢或低级烷基(例如，甲基)。

[0089] 在有些中，n是1。

[0090] 在有些中，p是1。

[0091] 在有些中，q是1。

[0092] 本发明涵盖立体异构纯的化合物及其立体异构富集的组合物。立体异构体可利用标准技术，诸如手性柱，手性解析剂，或酶解析而被不对称合成或解析。参见，例
如，Jacques，J.等，Enantiomers，Racematesand Resolutions(对映体，外消旋体和解
析)(Wiley Interscience，NewYork，1981)；Wilen，S.H.等，Tetrahedron(四面体)33：
2725(1977)；Eliel，E.L，Stereochemistry of Carbon Compounds(碳化合物的立体化学)
(McGraw Hill，NY，1962)；以及Wilen，S.H.，Tables ofResolvingAgents and Optical
Resolutions(解析剂和光解析表)，p.268(E.L.Eliel编，Univ.ofNotre Dame Press，Notre
Dame，IN，1972)。

[0093] 本发明具体化合物是有效的TPH1抑制剂。具体化合物的TPH1_IC50小于约10，5，2.5，1，0.75，0.5，0.4，0.3，0.2，0.1，或0.05μM。

[0094] 具体化合物是选择性TPH1抑制剂。具体化合物的TPH1_IC50比其TPH2_IC50要小约10，25，50，100，250，500，或1000倍。

[0095] 具体化合物不显著抑制人酪氨酸羟化酶(TH)。例如，具体化合物对TH的IC50大于约100，250，500或1000μM。

[0096] 具体化合物不显著抑制人苯丙氨酸羟化酶(PAH)。例如，具体化合物对PAH的IC50大于约100，250，500或1000μM。

[0097] 本发明的具体化合物不显著结合(例如，以大于约10，25，50，100，250，500，750，或1000μM的IC50抑制)至下列一种或多种：血管紧张素转换酶，促红细胞生成素(EPO)受
体，因子IX，因子XI，整联蛋白(例如，α4)，异噁唑啉或异噁唑纤维蛋白原受体，金属蛋白
酶，中性肽链内切酶(NEP)，磷酸酶(例如，酪氨酸磷酸酶)，磷酸二酯酶(例如，PDE-4)，聚
合酶，PPARγ，TNF-α，血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)，或玻连蛋白受体。化合物与这些靶
中的任一种结合(例如，抑制)的能力利用如上文引用的参考文献中所述的本领域公知方
法，可容易地确定。本发明的具体化合物不抑制细胞粘附。

[0098] 当向哺乳动物(例如，小鼠，大鼠，狗，猴或人)给药时，本发明的某些化合物不易越过血/脑屏障(例如，血液中小于约5，2.5，2，1.5，1，0.5，或0.01％的化合物进入大
脑)。化合物能或不能越过血/脑屏障可通过本领域公知的方法确定。参见，例如，Riant，
P. 等，Journal ofNeurochemistry 51：421-425(1988)；Kastin，A.J.，Akerstrom，V.，
J.Pharmacol.Exp.Therapeutics 294：633-636(2000)；W.A.Banks，W.A.等，J.Pharmacol.
Exp.Therapeutics302：1062-1069(2002)。

[0099] 化合物的合成

[0100] 本发明化合物可通过本领域公知的方法和在此所述的方法制备。

[0101] 例如，式I化合物可以如合成路线I所示制备：

[0102]

[0103] 合成路线1

[0104] 其中P1是R1或保护基；P2是保护基；P3是OR2或保护基；Y1和Y3是卤素(例如，Br，Cl)或合适的拟卤化物(例如，三氟甲磺酸盐(triflate))；以及每个基团A1，R1，R2，和
R3在本文他处定义。

[0105] 本发明化合物还可由以下合成路线2所示的途径制备：

[0106]

[0107] 合成路线2

[0108] 上述合成路线中所示的单个反应可利用本领域公知的条件进行。

[0109] 例如，适于硼和含卤素部分的Suzuki偶联的钯催化剂和条件是众所周知的，且例子在下文提供。此外，保护基的类型和合适用途是众所周知的，如其被例如但不限于氢的部
分去除和取代的方法(例如，在酸性或碱性条件下水解)一样。

[0110] 本发明化合物的酯衍生物利用诸如以下合成路线3所示的方法可容易地制备：

[0111]

[0112] 合成路线3

[0113] 利用本领域公知的方法，对上述合成途径容易地进行修改，以获得宽范围的化合物。例如，本领域公知的手性色谱和其他技术可用于分离终产物的立体异构体。参见，例
如，Jacques，J.等，Enantiomers，Racemates and Resolutions (对映体，外消旋体和解
析)(WileyInterscience，New York，1981)；Wilen，S.H.等，Tetrahedron(四面体)33：
2725(1977)；Eliel，E.L.，Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw Hill，NY，
1962)；以及Wilen，S.H.，Tables ofResolving Agentsand Optical Resolutions(解析剂
和光学解析表)，p.268(E.L.Eliel编，Univ.ofNotre Dame Press，Notre Dame，IN，1972)。
此外，如上文有些合成路线所示，合成可利用手性原料，生成立体异构富集的或纯的 产物。

[0114] 应用方法

[0115] 本发明包含抑制TPH的方法，该方法包括将TPH与本发明化合物(即，在此公开的化合物)接触。在具体方法中，TPH是TPH1。在另一方法中，TPH是TPH2。在一个具体方法
中，抑制是体外抑制。在另一个中，抑制是体内抑制。

[0116] 一种实施方案包含抑制哺乳动物(例如，人)TPH1的方法，该方法包括给哺乳动物施用本发明化合物。在具体方法中，TPH2未被显著抑制。在一个方法中，所述化合物不容
易越过血/脑屏障。在另一方法中，所述化合物是TPH1的选择性抑制剂。

[0117] 本发明包含治疗、预防和管理受外周5-羟色胺介导的多种疾病和紊乱的方法，该方法包括抑制需要这种治疗、预防或管理的患者的TPH1活性。在具体实施方案中，抑制通
过给患者施用治疗或预防有效量的有效TPH1抑制剂而实现。有效TPH1抑制剂的例子在此
公开。

[0118] 具体疾病和紊乱包括类癌综合征及胃肠疾病和紊乱。具体疾病和紊乱的例子包括腹部疼痛(例如，与甲状腺髓质瘤有关)，焦虑，类癌综合征，腹腔病，便秘(例如，因医生
的治疗而引起的便秘，和特发性便秘)，克罗恩氏病，忧郁症，糖尿病，腹泻(例如，胆汁酸腹
泻，肠毒素-诱导的分泌性腹泻，因医生的治疗而引起的腹泻，特发性腹泻(例如，特发分泌
性腹泻)，以及旅行者腹泻)，呕吐，功能性腹部疼痛，肛肠功能紊乱，功能性气胀，功能性消
化不良，胆囊功能紊乱，易激性肠综合征(IBS；包括IBS-d，IBS-c和IBS-a)，乳糖不耐受，
MEN I和II型，恶心，奥吉尔维氏综合征(Ogilvie’s syndrome)，胰性霍乱综合征，胰功能
不全，嗜铬细胞瘤，硬皮病，躯体化障碍，Oddi括约肌功能障碍，溃疡性结肠炎，和佐-埃综
合征(Zollinger-Ellison Syndrome)。

[0119] 其他疾病和紊乱包括心血管和肺部疾病和紊乱，诸如急性和慢性高血压，慢性阻塞性肺病(COPD)，肺栓塞(例如，肺栓塞之后的支气管收缩和肺高血压)，肺高血压(例如，
与门静脉高血压有关的肺高血压)，以及放射性肺炎(包括生成或有助于肺高血压的放射
性肺炎)。其他包括腹性偏头痛(abdominal migraine)，成人呼吸窘迫综合症(ARDS)，类癌
危象，CREST综合征(钙质沉着，雷诺现象(Raynaud’s phenomenon)，食道功能紊乱，指端
硬化，毛细管扩张)，5-羟色胺综合征，和蛛网膜下出血。

[0120] 一个实施方案包括减慢患者胃肠传输的方法，该方法包括给患者施用足量的有效TPH1抑制剂。

[0121] 另一实施方案包括减慢患者胃排空的方法，该方法包括给患者施用足量的有效TPH1抑制剂。

[0122] 在本发明的具体方法中，实现治疗、管理和/或预防疾病或紊乱，同时避免与中枢神经系统(CNS)的5-羟色胺水平改变相关的副作用。这种副作用的例子包括亢奋，焦虑障
碍，忧郁，和睡眠紊乱(例如，失眠和睡眠障碍)。在本发明的具体方法中，实现治疗、管理
和/或预防疾病或紊乱，同时避免与中枢神经系统(CNS)的5-羟色胺水平改变相关的副作
用。这种副作用的例子包括亢奋，焦虑障碍，忧郁，和睡眠紊乱(例如，失眠和睡眠障碍)。

[0123] 药物组合物

[0124] 本发明包括含一种或多种本发明化合物的药物组合物。某些药物组合物是单一单位剂型，适于口服、粘膜(例如，鼻，舌下，阴道，颊，或直肠)、肠胃外(例如，皮下，静脉内，
推注，肌内，或动脉内)、或经皮给药至患者。剂型的例子包括，但不限于：片剂；囊片；胶囊，
诸如软弹性明胶胶囊；袋剂；锭剂(troches)；菱型剂(lozenges)；分散剂；栓剂；油膏；巴
布剂(膏状药)；糊剂；粉剂；敷剂；霜剂；膏 药；溶液；贴剂；气溶胶(例如，鼻喷剂或吸入
剂)；凝胶；适于口服或粘膜给药至患者的液体剂型，包括悬液剂(例如，水性或非水液体
悬液剂，水包油乳剂，或油包水流体乳剂)、溶液、和酏剂；适于肠胃外给药至患者的液体剂
型；以及无菌固体(例如，晶体或非晶型固体)，该固体可被复溶以提供适于肠胃外给药至
患者的液体剂型。

[0125] 制剂应匹配给药方式。例如，利用肠衣可实现易在胃中降解的化合物的口服给药。类似地，制剂可含有促进活性成分递送至作用位点的成分。例如，化合物可以以脂质体制剂
给药，以保护它们免遭降解酶，促进在循环系统中的运输，以及实现跨细胞膜的递送。

[0126] 同样，溶解性差的化合物可在增溶剂、乳化剂和表面活性剂的帮助下掺入液体剂型(和适于复溶的剂型)中，所述增溶剂、乳化剂和表面活性剂诸如，但不限于，环糊精(例
TM
如，α-环糊精，β-环糊精， 和Encapsin (参见，例如，Davis和Brewster，
Nat.Rev.Drug Disc. 3：1023-1034(2004))， cremafor，
以及非水溶剂，诸如，但不限于，乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苄醇，苯甲酸苄酯，丙二
醇，1，3-丁二醇，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜(DMSO)，生物相容性油(例如，棉籽油，花生油，
玉米油，胚芽油，橄榄油，蓖麻油，和芝麻油)，甘油，四氢糠醇，聚乙二醇，山梨聚糖的脂肪酸
酯，及其混合物(例如，DMSO：玉米油)。

[0127] 利用本领域公知的其他技术，也可将溶解性差的化合物掺入悬浮液中。例如，化合物的纳米颗粒可悬浮于液体，以提供纳米悬浮液(参见，例如，Rabinow，Nature Rev.Drug
Disc.3：785-796(2004))。在此描述的纳米颗粒形式的化合物可通过下列中记载的方法
来制备：美国专利公布No.2004-0164194，2004-0195413，2004-0251332，2005-0042177A1，
2005-0031691A1，和 美 国 专 利 No.5,145,684，5,510,118，5,518,187，5,534,270，
5,543,133，5,662,883，5,665,331，5,718,388，5,718,919，5,834,025，5,862,999，
6,431,478，6,742,734，6,745,962，各自在此全 文引入作为参考。在一个实施方案中，纳米
颗粒形式包括平均粒度小于约2000nm，小于约1000nm，或小于约500nm的颗粒。

[0128] 剂型的组成、形状和类型通常根据用途而变化。例如，疾病的急性治疗所用的剂型比同样疾病的慢性治疗所用的剂型可含有更大量的一种或多种活性成分。同样，
肠胃外剂型比用于治疗同样疾病的口服剂型可含有更少量的一种或多种活性成分。如
何说明这种差异对本领域技术人员而言是显而易见的。参见，例如，Remington′s
th
PharmaceuticalSciences，18 ed.(雷 氏 药 物 科 学，第18版 )，Mack Publishing，
EastonPA(1990)。

[0129] 口服剂型

[0130] 适于口服给药的本发明药物组合物可以呈现为分离的剂型，例如，但不限于，片剂(例如，可咀爵片剂)，囊片，胶囊，和液体(例如，调味糖浆)。这样的剂型含有
预定量的活性成分，并可通过对本领域技术人员而言众所周知的制药方法制备。一般
th
参见，Remington′sPharmaceutical Sciences，18 ed.(雷氏药物科学，第18版)，
MackPublishing，Easton PA(1990)。

[0131] 典型的口服剂型的制备是根据常规的药物混合技术，在均质混合物中将活性成分与至少一种赋形剂组合。根据给药所需的制剂形式，赋形剂可采用多种多样的形式。

[0132] 由于易于给药，片剂和胶囊代表最有利的口服剂量单位形式。如果需要，通过标准含水或非水技术，片剂可被包衣。这样的剂型可采用常规制药方法制备。一般而言，药物组
合物和剂型的制备是将活性成分与液体载体、细碎的固体载体、或两者均匀地和紧密地混
合，然后视需要，将产物成型为所需形式。为利于快速溶出，崩解剂可掺入固体剂型。为方
便剂型(例如，片剂)的制备，也可掺入润滑剂。

[0133] 肠胃外剂型

[0134] 可通过多种途径给患者施用肠胃外剂型，这些途径包括皮下，静脉内(包括推注)，肌内，和动脉内。因为其给药通常绕过患者对污染物的天然防卫，肠胃外剂型在给药至
患者之前尤其是无菌的或能够被杀菌。肠胃外剂型的例子包括准备注射用的溶液，准备溶
解或悬浮在可药用注射介质中的干产品，准备注射用的悬浮液，和乳液。

[0135] 可用于提供本发明肠胃外剂型的合适介质对本领域技术人员是众所周知的。例子包括：注射用水USP；含水介质，诸如氯化钠注射液，林格氏注射液，右旋糖注射液，右旋
糖和氯化钠注射液，和乳酸林格氏注射液；水可溶混的介质，诸如乙醇，聚乙二醇，和聚丙二
醇；以及非水介质，诸如玉米油，棉籽油，花生油，芝麻油，油酸乙酯，肉豆蔻酸异丙酯，和苯
甲酸苄酯。

[0136] 实施例

[0137] 1.制备tph1基因断裂小鼠

[0138] 基本上如Wattler等，Biotechniques26(6)：1150-6(1999)所述，通过基因打靶将鼠TPH1基因的外显子3去除。所得的基因敲除动物在脑中显示正常的TPH活性，但内脏中
的TPH表达急剧降低。

[0139] 2.tph1基因断裂的生理效果

[0140] tph1断裂的纯合小鼠(-/-)结合该基因断裂的杂合小鼠(+/-)，与野生型(+/+)同窝出生者一起研究。在此分析期间，利用为评价哺乳动物对象中主要器官系统的功能而
设计的整套医学诊断程序，对小鼠进行医学检查。通过研究记载数量的纯合(-/-)基因敲
除小鼠结合杂合(+/-)和野生型(+/+)同窝出生者，获得了更可靠和可重复的数据。

[0141] tph1基因的断裂主要影响TPH的胃肠道同工型(TPH1)，并对TPH的脑同工型(TPH2)少有或没有影响。该基因的断裂对中枢神经系统不会招致可测量的副作用。这通过
5-羟色胺免疫化学得以确认，其显示 5-羟色胺在胃、十二指肠、空肠，回肠、盲肠和结肠中
大大降低或缺乏，而5-羟色胺水平在缝神经元中未受影响。

[0142] 一些tph1基因断裂的纯合小鼠(-/-)显示出血栓症减少，而没有显著增加出血或其他不利指征。

[0143] 3.HPLC表征

[0144] 在下列有些合成例子中，提供了高效液相色谱(HPLC)保留时间。用于获得这些保留时间的各种条件描述如下：

[0145] 方法A：YMC-PACK ODS-A 3.0×50mm；溶剂A＝H2O，0.1％TFA；溶剂B＝MeOH，0.1％TFA；B％用4分钟从10％到90％；流速＝2ml/分钟；观测波长＝220和254nm。

[0146] 方法B：YMC-PACK ODS-A 3.0×50mm；溶剂A＝90％水，10％MeOH带有0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH，10％水带有0.1％TFA；B％用4分钟从0％到100％；流速＝2ml/分
钟；观测波长＝220和254nm 。

[0147] 方法C：ShimPack VP ODS 4.6×50mm；溶剂A＝90％H2O，10％MeOH，1％TFA；溶剂B＝10％H2O，90％MeOH，1％TFA；B％用2分钟从0％到100％；流速＝3.5ml/分钟；观
测波长＝220和254nm。

[0148] 方法D：Shim VP ODS 4.6×50mm；溶剂A＝H2O带有0.1％TFA；溶剂B＝MeOH带有0.1％TFA；B％用4分钟从0％到100％；流速＝3ml/分钟；观测波长＝254nm。

[0149] 方法E：YMC Pack ODS-A 4.6×33mm；溶剂A＝H2O，0.1％TFA；溶剂B＝MeOH带有0.1％TFA；B％用3分钟从10％到90％；流速2ml/分钟；观测波长220和254nm。

[0150] 方法F：YMC-Pack ODS-A 3.0×50mm；溶剂A＝90％H2O，10％MeOH，1％TFA；溶剂B＝10％H2O，90％MeOH，1％TFA；B％用4分钟从10％到90％；流速＝2ml/分钟。观测波
长＝220和254nm。

[0151] 4.合成(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0152]

[0153] 将四丁基氟化铵(0.027ml；1.0M的四氢呋喃溶液)0℃下添加至4-吡啶-4-基-苯甲醛(500mg，2.73mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(TMSCF3)(485μl，3.28mmol)
的5ml THF溶液中。所得混合物温热直至室温，并在室温下搅拌4小时。然后，反应混合物
以5ml1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。溶剂蒸发至干，加入9ml1M碳酸钠水溶液，水相
以氯仿抽提(3×10ml)，合并的氯仿层以水洗涤，对MgSO4干燥。真空去除有机溶剂，给出
360mg 2，2，2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)乙醇，收率：51％。

[0154] 在50ml密封管中，将2，2，2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)乙醇(100mg，0.40mmol)、2-氨基-4，6-二氯嘧啶(60mg，0.38mmol)、和碳酸铯(468mg，1.44mmol)的混合
物溶于2ml1，4-二噁烷。混合物110℃下加热过夜，然后冷却至室温；加入10ml乙酸乙酯，
接着通过C盐过滤。滤液浓缩，给出120mg 4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯
基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺，收率：80％。

[0155] 在微波小瓶中，将4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺(30mg，0.080mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(21 mg，0.098mmol)和1ml乙腈，
与0.7ml水混合在一起。然后，向混合物中添加0.3ml 1N碳酸钠水溶液，接着加入5mol％二
氯双-(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射在150℃下加热5分钟。冷却后，
反应混合物蒸发至干。残留物溶于2.5ml甲醇，然后经Prep-LC纯化，给出6.7mg(S)-2-氨
基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(4-嘧啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯
1
基)-丙酸。H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.82(s，2H)，8.26(s，2H)，8.02(d，J＝8Hz，2H)，
7.97(d，J＝8.4Hz，2H)，7.86(d，J＝8.4Hz，2H)，7.45(d，J＝8Hz 2H)，6.89(q，J＝6.8Hz，
1H)，6.81(d，J＝2Hz，1H)，4.29(t，J＝1.6Hz，1H)，3.39(m，1H)，3.19(m，1H)。

[0156] 5.合成(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2，2，2-三氟-1-(2-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0157]

[0158] 将四丁基氟化铵(0.027ml；1.0M的四氢呋喃溶液)0℃下添加至2-吡啶-4-基-苯甲醛(500mg，2.73mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(TMSCF3)(485μl，3.28mmol)
的5ml THF溶液中。所形成的混合物温热直至室温，并在室温下搅拌4小时。然后，反应混
合物以5ml 1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。溶剂蒸发至干，加入9ml 1M碳酸钠水溶
液，水相以氯仿抽提(3×10ml)，合并的氯仿层以水洗涤，对MgSO4干燥。蒸发有机溶剂，给
出300mg 2，2，2-三氟-1-(2-吡啶-4-基-苯基)乙醇，收率：43％。

[0159] 2，2，2-三氟-1-(2-吡啶-4-基-苯基)乙醇(100mg，0.40mmol)、4，6-二氯嘧啶(54mg，0.38mmol)，碳酸铯(468mg，1.44mmol)和1，4-二噁烷(1ml)的混合物。混合物110℃
下加热过夜。反应混合物冷却至室温。加入10ml乙酸乙酯，然后混合物通过C盐过滤。滤
液浓缩，给出110 mg 4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(2-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶，
收率：76％。

[0160] 在微波小瓶中，将4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶(30mg，0.080mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(21mg，0.098mmol)、1ml乙腈和
0.7ml水混合在一起。然后，向混合物中添加0.3ml 1N碳酸钠水溶液，接着加入5mol％二氯
双-(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射在150℃下加热5分钟。冷却后，
反应混合物蒸发至干。残留物溶于2.5ml甲醇，然后经Prep-LC纯化，给出19mg(S)-2-氨
基-3-(4-{6-[2，2，2-三氟-1-(2-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙
酸。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.94(d，J＝6Hz，2H)，8.79(d，J＝1.2Hz，1H)，8.15(m，
4H)，7.84(t，J＝5.2Hz，1H)，7.62(m，3H)，7.46(m，3H).6.66(q，J＝6.4Hz，1H)，4.31(q，J
＝6Hz，1H)，3.41(m，1H)，3.26(m，1H).

[0161] 6.合成(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0162]

[0163] 在微波小瓶中，将3-溴-4-甲基-噻吩(653mg，3.69mmol)、2-甲酰苯基硼酸(500mg，3.36mmol)和7ml乙腈混合在一起。向上述溶液加入6.7ml 1N碳酸钠水溶液，接着
加入5mol％二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射在150℃下加热5
分钟。冷却后，加入50ml乙酸乙酯，分离有机层，以水洗涤，用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，
给出粗产物，经ISCO CombiFlash柱纯化，给出530mg 2-(4-甲基-噻吩-3-基)苯甲醛，
收率：78％。

[0164] 将四丁基氟化铵(0.013ml；1.0M的四氢呋喃溶液)0℃下添加至2-(4-甲基噻吩-3-基)-苯甲醛(260mg，1.29mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(TMSCF3)(228μl，1.54mmol)
的5ml THF溶液中。形成的混合物温热直至室温，并在室温下搅拌4小时。然后，反应混合物
以5ml 1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。产物以乙酸乙酯抽提(3×50ml)。分离有机层并
对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出340mg 2，2，2-三氟-1-[2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯
基]-乙醇，收率：97％。

[0165] 2，2，2-三氟-1-[2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙醇(100mg，0.37mmol)、2-氨基-4，6-二氯-嘧啶(54mg，0.33mmol)、碳酸铯(481mg，1.48mmol)和1，4-二噁烷(1ml)的
混合物110℃下加热过夜。反应混合物冷却至室温；加入10ml乙酸乙酯。然后混合物通过
C盐过滤，滤液浓缩，给出100mg 4-氯-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯
基]-乙氧基}-嘧啶-2-基胺，收率：76％。

[0166] 在微波小瓶中，混合4-氯-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-2-基胺(30mg，0.075mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(19mg，
0.09mmol)、1ml乙腈和0.7ml水。向混合物中添加0.3ml 1N碳酸钠水溶液，接着加入
5mol％二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射在150℃下加热5分
钟。冷却后，反应混合物蒸发至干。残留物溶于2.5ml甲醇，然后经Prep-HPLC纯化，给出
15.1mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯
1
基]-乙氧基}-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)7.94(d，J
＝ 8Hz，2H)，7.80(s，1H)，7.50(m，5H)，7.25(m，2H)，7.03(s，1H)，6.94(s，1H)，4.31(t，J ＝
5.6，1H)，3.48(m，1H)，3.26(m，1H)，1.98(s，3H)。

[0167] 7.合成(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0168]

[0169] 在微波小瓶中，混合4-溴-2-甲基-噻吩(653mg，3.69mmol)、2-甲酰苯基硼酸(500mg，3.36mmol)和7ml乙腈。向上述溶液加入6.7ml1N碳酸钠水溶液，接着加入5mol％
二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射在150℃下加热5分钟。冷
却后，加入50ml乙酸乙酯，分离有机层，以水洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发有机溶剂，残留物经
ISCO纯化，给出550mg 2-(5-甲基-噻吩-3-基)苯甲醛，收率：81％。

[0170] 将四丁基氟化铵(0.028ml；1.0M的四氢呋喃溶液)0℃下添加至2-(5-甲基噻吩-3-基)-苯甲醛(550mg，1.29mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(TMSCF3)(483μl，3.27mmol)
的10ml THF溶液中。形成的混合物温热直至室温，并在室温下搅拌4小时。然后，反应
混合物以10ml 1NHCl处理，并在室温下搅拌过夜。产物以乙酸乙酯抽提(3×50ml)。分
离有机层并对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出650mg 2，2，2-三氟-1-[2-(5-甲基-噻
吩-3-基)-苯基]-乙醇，收率：87％。

[0171] 2，2，2-三氟-1-[2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙醇(100mg，0.37mmol)、2-氨基-4，6-二氯-嘧啶(54mg，0.33mmol)、碳酸铯(481mg，1.48mmol)和1，4-二噁烷(2ml)的
混合物110℃下加热过夜。反应混合物冷却至室温；加入10ml乙酸乙酯。然后混合物通过
C盐过滤，滤液浓缩，给出90mg 4-氯-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯
基]-乙氧基}-嘧啶-2-基胺，收率：68％。

[0172] 在微波小瓶中，混合4-氯-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-2-基胺(30mg，0.075mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(19mg，
0.09mmol)、1ml乙腈和0.7ml水。向混合物中添加0.3ml 1N碳酸钠水溶液，接着加入
5mol％二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射150℃下加热5分
钟。冷却后，反应混合物蒸发至干。残留物溶于2.5ml甲醇，然后经Prep-LC纯化，给出
10.1mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯
1
基]-乙氧基}-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)7.83(d，
J ＝ 8.4Hz，2H)，7.63(d，J ＝ 7.2Hz，1H)，7.34(m，4H)，7,26(m，1H)，7.12(d，J ＝ 1.2Hz，
1H)，6.92(q，J＝6.8，1H)，6.82(d，J＝1.2Hz，1H)，6.64(s，1H)，4.21(t，J＝5.6Hz，1H)，
3.29(m，1H)，3.20(m，1H)，2.47(s，3H)。

[0173] 8.合成(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0174]

[0175] 在微波小瓶中，混合3-溴-呋喃(590mg，4.02mmol)、4-甲酰苯基硼酸(600mg，4.02mmol)和7ml乙腈。然后向该混合物加入8ml 1N碳酸钠水溶液，接着加入5mol％二氯
双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射150℃下加热7分钟。冷却后，加入
50ml乙酸乙酯，分离有机层，以水洗涤，对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出粗产物，经ISCO
纯化，给出410mg 4-呋喃-3-基-苯甲醛，收率：60％。

[0176] 将四丁基氟化铵(0.024ml；1.0M的四氢呋喃溶液)0℃下添加至4-呋喃-3-基-苯甲醛(410mg，2.38mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(TMSCF3)(423μl，2.86mmol)
的5ml THF溶液。形成的混合物温热直 至室温，并在室温下搅拌4小时。然后，反应混合物
以5ml 1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。产物以乙酸乙酯抽提(3×50ml)。分离有机层
并对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出480mg 2，2，2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙
醇，收率：83％。

[0177] 2，2，2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙醇(100mg，0.4mmol)、2-氨基-4，6-二氯-嘧啶(60mg，0.36mmol)、碳酸铯(468mg，1.44mmol)和1，4-二噁烷(1ml)的混合物
110℃下加热过夜。反应混合物冷却至室温；加入10ml乙酸乙酯。然后混合物通过C盐过
滤，滤液浓缩，给出100mg 4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧
啶-2-基胺，收率：72％。

[0178] 在微波小瓶中，混合4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺(30mg，0.081mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(20mg，0.098mmol)、1ml
乙腈和0.7ml水。然后，向混合物中添加0.3ml1N碳酸钠水溶液，接着加入5mol％二氯
双-(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射150℃下加热5分钟。冷却后，反
应混合物蒸发至干。残留物溶于2.5ml甲醇，然后经Prep-LC纯化，给出7.2mg(S)-2-氨
基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯
1
基)-丙酸。H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)7.96(m，3H)，7.61(m，5H)，6.81(s，1H)，6.77(d，J
＝6.8Hz，1H)，6.74(d，J＝4，8Hz，1H)，4.27(q，J＝5.6Hz，1H)，3.36(m，1H)，3.21(m，1H)。 [0179] 9.合成(S)-2-氨基-3-[4-{2-氨基-6-{1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋
喃-2-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0180]

[0181] 将三乙酸基硼氢化钠(844mg，4mmol)加至5-溴-呋喃-2-甲醛(carbaldehyde)(350mg，2mmol)和二甲胺(2ml，2M的THF溶液)的10ml 1，2-二氯乙烷(DCE)的溶液中。
然后加入0.2ml HOAc。混合物室温下搅拌过夜，接着添加15ml DCE。有机相以水洗涤，对硫
酸钠干燥。通过离心蒸馏器(rotovap)去除溶剂，给出400mg(5-溴-呋喃-2-基甲基)-二
甲基-胺，收率：97％。

[0182] 在微波小瓶中，混合(5-溴-呋喃-2-基甲基)-二甲基-胺(385mg，1.88mmol)、2-甲酰苯基硼酸(288mg，1.93mmol)和3.7ml乙腈。然后，向该混合物加入3.7ml 1N碳酸钠
水溶液，接着加入5mol％二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射150℃
下加热5分钟。冷却后，加入20ml 1N HCl。该混合物以乙酸乙酯抽提(3×10ml)，并弃去
乙酸乙酯层。向水相加入1N NaOH溶液调节pH至10，然后以乙酸乙酯抽提(3×20ml)。合
并的有机层以水洗涤，并对硫酸钠干燥。蒸发溶剂，给出300mg 2-(4-二甲基氨基甲基-环
戊-1，3-二烯基)-苯甲醛，收率：69％。

[0183] 将四丁基氟化铵(0.013ml；1.0M的四氢呋喃溶液)0℃下添加至2-(4-二甲基氨基甲基-环戊-1，3-二烯基)-苯甲醛(287mg，1.25)和三氟甲基三甲基硅烷(TMSCF3)
(222μl，1.5mmol)的5ml THF溶液中。形成的混合物温热直至室温，并在室温下搅拌4小
时。然后，反应混合物以5ml 1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。产物以乙酸乙酯抽提
(3×50ml)。分离有机层并对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出250mg1-[2-(5-二甲基氨基
甲基-呋喃-2-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇，收率：66％。

[0184] 1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋喃-2-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇(225mg，0.75mmol)、2-氨基-4，6-二氯-嘧啶(111mg，0.67mmol)、碳酸铯(978mg，3.01mmol)和1，
4-二噁烷(3ml)的混合物110℃下加热过夜。反应混合物冷却至室温；加入10ml乙酸乙酯。
然后混合物通过C盐过滤，滤液浓缩，给出110mg 4-氯-6-{1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋
喃-2- 基)-苯基]2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-2-基胺，收率：87％。

[0185] 在微波小瓶中，混合4-氯-6-{1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋喃-2-基)-苯基]2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-2-基胺(37mg，0.087mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(22mg，
0.10mmol)、1ml乙腈和0.7ml水。然后，添加0.3ml 1N碳酸钠水溶液，接着加入5mol％二
氯双-(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射150℃下加热5分钟。冷却后，
反应混合物蒸发至干。残留物溶于2.5ml甲醇，然后经Prep-LC纯化，给出16mg(S)-2-氨
基-3-[4-{2-氨基-6-{1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋喃-2-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙
1
氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)7.88(d，J＝8.4Hz，
2H)，7.71(d，J＝7.6Hz，1H)，7.62(d，J＝7.6Hz，1H)，7.42(m，2H)，7.40(d，J＝1.6Hz，2H)，
7.34(d，J＝ 8.4Hz，1H)，6.89(q，J ＝ 3.6Hz，2H)，6.66(s，1H)，4.54(s，2H)，4.20(q，J ＝
6Hz，1H)，3.3(m，1H)，3.14(m，1H)，2.84(s，6H)。

[0186] 10.合成(S)-2-氨基-3[4-(2-氨基-6-{1-[2-(6-氰基-吡啶-3-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0187]

[0188] 在微波小瓶中，混合5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼戊环-2-基)-吡啶-2-腈(279mg，1.51mmol)、2-溴-苯甲醛(230mg，1mmol)和2ml乙腈。然后，加入2ml
1N碳酸钠水溶液，接着加入5mol％二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微
波照射100℃下加热10分钟。冷却后，加入50ml乙酸乙酯，分离有机层，以水洗涤并对硫
酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出粗产物，经ISCO纯化，给出150mg 5-(2-甲酰-苯基)-吡
啶-2-腈，收率：72％。

[0189] 将四丁基氟化铵(5.3μl，1.0M的四氢呋喃溶液)0℃下添加至5-(2-甲酰-苯基)-吡啶-2-腈(110mg，0.53mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(120μl，0.81mmol)的5ml
THF溶液。形成的混合物温热直至室温，并在室温下搅拌4小时。然后，反应混合物以5ml
1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。产物以乙酸乙酯抽提(3×50ml)。分离有机层并对硫
酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出140mg 5-[2-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-吡
啶-2-腈，收率：95％。

[0190] 5-[2-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-吡啶-2-腈(46mg，0.165mmol)、(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(59mg，
0.15mmol)、碳酸铯(195mg，0.6mmol)和1，4-二噁烷(1ml)的混合物110℃下加热过夜。
反应混合物冷却至室温，然后倾倒入5ml水。加入1N HCl调节pH至4.5，水相以乙酸乙
酯抽提(3×10ml)。合并的有机层用盐水洗涤，并对硫酸钠干燥。蒸发溶剂，给出80mg粗
(S)-3-[4-(2-氨基-6-{1-[2-(6-氰基吡啶-3-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧
啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸，收率：84％。

[0191] 将80mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{1-[2-(6-氰基吡啶-3-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸溶于30％三氟乙酸的二
氯甲烷(5ml)的溶液中。该混合物室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，残留物经制备型HPLC纯
化，给出12.6mg(S)-2-氨基-3[4-(2-氨基-6-{1-[2-(6-氰基-吡啶-3-基)-苯基]-2，
1
2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.86(s，
1H)，8.17(d，J ＝ 2Hz，1H)，8.15(d，J ＝ 2Hz，1H)，7.96(m，2H)，7.59(m，1H)，7.36(m，3H)，
6.7(s，1H)，6.65(d，J＝6.8Hz，1H)，4.25(m，1H)，3.47(m，1H)，3.23(m，1H)。

[0192] 11.合成(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-咪唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0193]

[0194] 向2-咪唑-1-基-苯甲醛(0.344g，2mmol)的THF溶液(8ml)加入三氟甲基三甲基硅烷(0.341g，2.4mmol)。反应混合物冷却至0-5℃(冰水浴)，加入四-正-丁基氟化
铵(0.035ml，0.035mmol，1M，在THF中)。移出冰浴，该混合物室温下搅拌6小时。加入2N
HCl(5ml)，该反应混合物室温下进一步搅拌3小时。通过离心蒸馏器减压下去除溶剂。粗
残留物溶于DCM(30ml)，以水(20ml)、盐水(20ml)洗涤，并对硫酸钠干燥。去除溶剂，给出
粗制的2，2，2-三氟-1-(2-咪唑-1-基-苯基)-乙醇(0.45g，93％)，直接用于下一步。

[0195] 将 2-氨 基-4，6- 二 氯 嘧 啶 (0.107g，0.65mmol)、2，2，2- 三 氟 -1-(2- 咪唑-1-基-苯基)-乙醇(0.157g，0.65mmol)、和NaH(0.03g，0.78mmol)氮气下添加至无水
THF(10ml)。该反应40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并用水(0.2ml)淬灭。该反应
混合物浓缩，给出粗制的4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(2-咪唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧
啶-2-基胺(0.24g，LCMS测得纯度＞90％)，直接用于下一步。

[0196] 将上述粗制中间体(0.24g)、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸(0.140g，0.67mmol)、碳酸钠(0.14g，1.32mmol)、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(15mg，0.021mmol)在微波小瓶中
溶于MeCN(2.0ml)和H2O(2.0ml)的混合物。密封该反应混合物，并在微波反应器中150℃
下搅拌6分钟。该混合物过滤，滤液浓缩。残留物溶于MeOH和H2O(1∶1)，并通过制备型
HPLC利用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统而纯化，给出(S)-2-氨基-3-(4-[2-氨基-6-[2，
2，2-三氟-1-(2-咪唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基]-苯基-丙酸的TFA盐。
1
LCMS：M+1＝499.H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ(ppm)3.20-3.41(m，2H)，4.30(t，1H)，6.61(m，
1H)，6.88 (s，1H)，7.48(d，2H)，7.69(d，1H)，7.72-7.81(m，2H)，7.83(m，1H)，7.98(m，3H)，
8.02(m，1H)，9.40(m，1H)。

[0197] 12.合成(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2，2，2-三氟-1-(2-吡唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0198]

[0199] 向2-吡唑-1-基-苯甲醛(0.344g，2mmol)的THF溶液(8ml)中加入三氟甲基三甲基硅烷(0.341g，2.4mmol)。混合物冷却至0-5℃(冰水浴)，加入四-正-丁基氟化
铵(0.035ml，0.035mmol，1M，在THF中)。移出冰浴，该混合物室温下搅拌6小时。加入2N
HCl(5ml)，该反应混合物室温下进一步搅拌3小时。通过离心蒸馏器减压下去除溶剂。残留
物溶于DCM(30ml)，以水(20ml)、盐水(20ml)洗涤，并对硫酸钠干燥。真空去除溶剂，给出
粗2，2，2-三氟-1-(2-吡唑-1-基-苯基)-乙醇(0.45g，93％)，直接用于下面的实验。

[0200] 将4，6-二氯嘧啶(0.082g，0.55mmol)、2，2，2-三氟-1-(2-吡唑-1-基-苯基)-乙醇(0.121g，0.50mmol)、NaH(0.03g，0.78mmol)在氮气气氛下添加至无水THF(10ml)中。该
反应40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并用水(0.2ml)淬灭。该反应混合物浓缩，给
出粗制的4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(2-吡唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶(0.20g，LCMS
测得纯度＞90％)，直接用于下一步。

[0201] 将该粗制中间体(0.20g)、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸(0.105g，0.50mmol)、碳酸钠(0.105g，1mmol)、二氯双(三苯基膦)-钯(II)(15mg，0.021mmol)在微波小瓶中溶
于MeCN(2.0ml)和H2O(2.0ml)的混合物。密封该微波瓶，让该反应混合物在微波反应器中
150℃下加热6分钟。该混合物过滤，滤液浓缩。残留物溶于MeOH和H2O(1∶1)，然后通
过 制备型HPLC利用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统而纯化，给出(S)-2-氨基-3-(4-[6-[2，
2，2-三氟-1-(2-吡唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基]-苯基-丙酸的TFA盐。
1
LCMS：M+1＝484.H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ(ppm)3.20-3.40(m，2H)，4.30(t，1H)，6.63(s，
1H)，7.10(m，1H)，7.50(m，3H)，7.60(m，3H)，7.84(m，2H)，8.16(m，3H)，8.68(s，1H)。

[0202] 13.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(3-三氟甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0203]

[0204] 将2，2，2-三氟-1-(2-碘-苯基)-乙醇(0.331g，1.1mmol)、3-三氟甲基吡唑(0.136g，1.0mmol)、CuI(0.019g，0.1mmol)、K2CO3(0.290g，2.1mmol)、(1R，2R)-N，N′-二甲
基-环己烷-1，2-二胺(0.028g，0.2mmol)和甲苯(10ml)在20ml压力管中合并。该混合物
130℃(油浴温度)下加热12小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O(2×20ml)、盐水洗
涤，并对硫酸钠干燥。去除溶剂后给出粗产物，通过ISCO柱色谱利用5-10％乙酸乙酯的己
烷溶液作为溶剂进行纯化，得到140mg 2，2，2-三氟-1-[2-(3-三氟甲基-吡唑-1-基)-苯
基]-乙醇。

[0205] 将2-氨基-4，6-二氯嘧啶(0.074g，0.45mmol)、2，2，2-三氟-1-[2-(3-三氟甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇(0.140g，0.45mmol)、和NaH(0.022g，0.59mmol)在氮气气氛
下添加至无水THF(10ml)。该反应40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并用水(0.2ml)
淬灭。该反应混合物浓缩，给出粗制的4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-[2-(3-三氟甲基-吡
唑-1-基)苯基]-乙氧基]-嘧啶-2-基胺(0.21g，LCMS测定纯度＞90％)，直接用于下
一步。

[0206] 将该粗制中间体(0.21g)、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸(0.1g，0.48mmol)、碳酸钠(0.1g，0.94mmol)、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(15mg，0.021mmol)在微波小瓶中
溶于MeCN(2.0ml)和H2O(2.0ml)的混合物中。密封该小瓶，让反应混合物在微波反应器
中150℃下加热6分钟。过滤反应混合物，浓缩滤液以给出粗产物，该粗产物溶于MeOH和
H2O(1∶1)，并通过制备型HPLC利用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，给出(S)-2-氨
基-3-[4-(2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-(3-三氟甲基-吡唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧
1
啶-4-基]-苯基-丙酸的TFA盐。LCMS：M+1＝567. H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ(ppm)3.2(m，
1H)，3.35(m，1H)，4.30(t，1H)，6.80(s，1H)，6.85(m，1H)，6.98(d，1H)，7.45(d，2H)，7.59(m，
1H)，7.68(m，2H)，7.88(m，1H)，7.95(d，2H)，8.20(1H)。

[0207] 14.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{1-[2-(3，5-二甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0208]

[0209] 将2，2，2-三氟-1-(2-碘-苯基)-乙醇(0.331g，1.1mmol)、3，5-二甲基吡唑(0.096g，1.0mmol)、CuI(0.019g，0.1mmol)、K2CO3(0.290g，2.1mmol)、(1R，2R)-N，N′-二甲
基-环己烷-1，2-二胺(0.028g，0.2mmol)和甲苯(10ml)在20ml压力管中合并，该混合物
130℃(油浴温度)下加热12小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O(2×20ml)、盐水洗
涤，并对硫酸钠干燥。去除溶剂给出粗产物，通过ISCO柱色谱利用5-10％乙酸乙酯的己烷
溶液作为溶剂进行纯化，得到1-[2-(3，5-二甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙
醇(120mg)。

[0210] 将2- 氨 基 -4，6-二 氯 嘧 啶(0.074g，0.45mmol)、1-[2-(3，5- 二 甲 基- 吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇(0.120g，0.45mmol)、NaH(0.022g，0.59mmol)在
氮气气氛下添加至无水THF(10ml)。该反应40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并
用水(0.2ml)淬灭。该反应混合物浓缩，给出粗制的4-氯-6-{1-[2-(3，5-二甲基-吡
唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基]-嘧啶-2-基胺(0.195g，LCMS测定纯度＞90％)，
直接用于下一步。

[0211] 将该粗制中间体(0.195g)、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸(0.10g，0.48mmol)、碳酸钠(0.10g，0.95mmol)、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(15mg，0.021mmol)在微波小
瓶中溶于MeCN(2.0ml)和H2O(2.0ml)的混合物。密封该小瓶，让该反应混合物在微波反
应器中150℃下加热6分钟。过滤混合物，浓缩滤液给出粗产物，该粗产物溶于MeOH和
H2O(1∶1)，并通过制备型HPLC利用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，给出(S)-2-氨
基-3-[4-(2-氨基-6-[1-(2-(3，5-二甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧
1
基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的TFA盐。LCMS：M+1＝527.H-NMR(400MHz，CD3OD)：
δ(ppm)4.32(t，1H)，3.39(m，1H)，3.25(m，1H)，2.30(s，3H)，2.10(s，3H)，7.92(m，3H)，
7.68(m，2H)，7.50(d，2H)，7.42(m，1H)，6.92(m，1H)，6.89(s，1H)，6.17(s，1H)。

[0212] 15.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(3-苯基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0213]

[0214] 将2，2，2-三氟-1-(2-碘-苯基)-乙醇(0.331g，1.1mmol)、3-苯基吡唑 (0.144g，1.0mmol)、CuI(0.019g，0.1mmol)、K2CO3(0.290g，2.1mmol)、(1R，2R)-N，N′-二甲基-环己
烷-1，2-二胺(0.028g，0.2mmol)和甲苯(10ml)置于20ml压力管中，该混合物130℃(油
浴温度)下加热12小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O(2×20ml)、盐水洗涤，并对硫酸钠
干燥。去除溶剂给出粗产物，通过ISCO柱色谱利用5-10％乙酸乙酯的己烷溶液作为溶剂进
行纯化，得到2，2，2-三氟-1-[2-(3-苯基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇(75mg)。

[0215] 将2-氨基-4，6-二氯嘧啶(0.041g，0.25mmol)、2，2，2-三氟-1-[2-(3-苯基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇(0.070g，0.22mmol)、和NaH(0.012g，0.31mmol)在氮气气氛下添加
至无水THF(7ml)。该反应40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并用水(0.04ml)淬灭。
该反应混合物浓缩，给出粗制的4-氯-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(3-苯基-吡唑-1-基)-苯
基]-乙氧基]-嘧啶-2-基胺(0.110g，LCMS测定纯度＞90％)，直接用于下一步。

[0216] 将该粗制中间体(0.110g)、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸(0.050g，0.24mmol)、碳酸钠(0.050g，0.48mmol)、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(8mg，0.010mmol)在微波小瓶中溶
于MeCN(2.0ml)和H2O(2.0ml)的混合物。密封该小瓶，让反应混合物在微波反应器中150℃
下加热6分钟。过滤混合物，浓缩滤液给出粗产物，该粗产物溶于MeOH和H2O(1∶1)，并通
过制备型HPLC利用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，给出(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨
基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(3-苯基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯
1
基]-丙 酸 的 TFA盐。LCMS：M+1＝575. H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ(ppm)3.20(m，1H)，
3.38(m，1H)，4.30(t，1H)，6.80(s，1H)，7.00(s，1H)，7.30-7.48(m，7H)，7.62(m，3H)，
7.90(m，4H)，8.10(s，1H)。

[0217] 16.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[5-甲氧基-2-(4-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0218]

[0219] 将1-(2-溴-5-甲氧基-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇(0.570g，2.0mmol)、4-甲基吡唑(0.164g，2.0mmol)、CuI(0.057g，0.3mmol)、K2CO3 (0.580g，4.2mmol)、(1R，2R)-N，
N′-二甲基-环己烷-1，2-二胺(0.071g，0.5mmol)和甲苯(10ml)合并在20ml压力管中，
该混合物130℃(油浴温度)下加热12小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O(2×20ml)、
盐水洗涤，并对硫酸钠干燥。去除溶剂给出粗产物，通过ISCO柱色谱利用5-10％乙酸
乙酯的己烷溶液作为溶剂进行纯化，得到2，2，2-三氟-1-[5-甲氧基-2-(4-甲基-吡
唑-1-基)-苯基]-乙醇(90mg)。

[0220] 将2，2，2-三氟-1-[5-甲氧基-2-(4-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇(0.090g，0.31mmol)、(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙
酸(0.122g，0.31mmol)、1，4-二噁烷(2ml)、Cs2CO3(0.503g，1.55mmol)合并在微波小瓶中，
加热至180℃，历时45分钟。该混合物过滤和浓缩。向残留物加入5％甲醇的DCM(50ml)。
过滤该混合物。浓缩滤液给出粗产物，该粗产物置于20％TFA的DCM溶液(30ml)中，室
温下搅拌30分钟。LCMS指示所需产物的反应完成。该反应混合物浓缩，给出粗产物，将该
粗产物溶于MeOH和H2O(1∶1)，通过制备型HPLC利用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行
纯化，得到(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[5-甲氧基-2-(4-甲基-吡
唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。

[0221] LCMS：M+1 ＝ 543.1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ(ppm)2.20(s，3H)，3.22(m，1H)，3.40(m，1H)，3.84(s，3H)，4.35(t，1H)，6.84(s，1H)，6.98(m，1H)，7.18(m，1H)，7.26(m，1H)，
7.40(d，1H)，7.48(d，2H)，7.66(d，2H)，7.96(d，2H).

[0222] 17.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(R)-2，2，2-三氟-1-[2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0223]

[0224] 将R-1-(2-溴-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇(1.53g，6mmol)、3-甲基吡唑(0.492g，6mmol)、CuI(0.456g，2.4mmol)、K2CO3(2.07g，15mmol)、(1R，2R)-N，N′-二甲基-环己烷-1，
2-二胺(0.170g，1.2mmol)和甲苯(10ml)合并在20ml压力管中，该混合物130℃(油浴温
度)下加热12小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O(2×20ml)、盐水洗涤，并对硫酸钠
干燥。去除溶剂给出粗产物，通过ISCO柱色谱利用5-10％乙酸乙酯的己烷溶液作为溶剂进
行纯化，得到R-2，2，2-三氟-1-[2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇(1.8g)。

[0225] 将2-氨基-4，6-二氯嘧啶(1.2g，7.4mmol)、R-2，2，2-三氟-1-[2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇(1.8g，7.03mmol)、和NaH(0.380g，10mmol)在氮气气氛下添加至
无水THF(40ml)。该反应40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并用水(0.1ml)淬灭。该
反应混合物浓缩，给出4-氯-6-{R-2，2，2-三氟-1-[2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙
氧基]-嘧啶-2-基胺(3.0g，LCMS测定纯度＞90％)，直接用于下一步。

[0226] 将该粗制中间体(0.750g)、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸(0.420g，2.0mmol)、碳酸钠(0.430g，4.0mmol)、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(30mg，0.043mmol)在微波小
瓶中溶于MeCN(7.0ml)和H2O(7.0ml)的混合物。密封该小瓶，让该反应混合物在微波反
应器中150℃下加热7分钟。过滤混合物，浓缩滤液给出粗产物，该粗产物溶于MeOH和
H2O(1∶1)，并通过制备型HPLC利用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，给出(S)-2-氨
基-3-[4-(2-氨基-6-{R-2，2，2-三氟-1-[2-(3-甲基-吡唑-1- 基)-苯基]-乙氧
基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的TFA盐。LCMS：M+1＝514. 1H-NMR(400MHz，CD3OD)：
δ(ppm)2.40(s，3H)，3.30(m，1H)，3.42(m，1H)，4.38(t，1H)，6.21(s，1H)，7.02(s，1H)，
7.18(m，1H)，7.54(d，1H)，7.61(m，4H)，7.82(m，2H)，7.97(d，2H)。

[0227] 18.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0228]

[0229] 将1-(4-氯-2-碘-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇(0.840g，2.5mmol)、3-甲基吡唑(0.230g，2.8mmol)、CuI(0.190g，1.0mmol)、K2CO3(0.863g，6.25mmol)、(1R，2R)-N，N′-二
甲基-环己烷-1，2-二胺(0.071g，0.5mmol)和甲苯(10ml)合并在20ml压力管中，该混合
物130℃(油浴温度)下加热12小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O(2×20ml)、盐水洗
涤，并对硫酸钠干燥。去除溶剂给出粗产物，通过ISCO柱色谱利用5-10％乙酸乙酯的己烷
作为溶剂进行纯化，得到1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇
(240mg)。

[0230] 将1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇(0.120g，0.41mmol)、(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙
酸(0.176g，0.45mmol)、1，4-二噁烷(4ml)、和Cs2CO3(0.533g，1.64mmol)合并在20ml密封
管中，该混合物100℃下加热12小时。浓缩该混合物。向残留物加入10％甲醇的DCM溶液
(50ml)，并过滤该混合物。滤液浓缩，给出粗产物，该粗产物置于THF/3N HCl(30ml/15ml)
中，所得混合物40-45℃下搅拌12小时。LCMS指示所需产物的反应完成。该混合物浓缩，
给出粗产物，将该粗产物溶于MeOH和H2O(1∶1)，通过制备型HPLC利用MeOH/H2O/TFA作
为溶剂系统进行纯化， 得到(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{1-[4-氯-2-(3-甲基-吡
唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的TFA盐。LCMS：
1
M+1 ＝ 547.H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ(ppm)2.30(s，3H)，3.10-3.30(m，2H)，4.20(t，1H)，
6.32(d，1H)，6.74(s，1H)，7.0(q，1H)，7.38(d，2H)，7.50(m，2H)，7.72(m，1H)，7.90(m，3H)。 [0231] 19.合 成(S)-2- 氨 基 -3-[4-(2- 氨 基 -6-{R-1-[4-氯 -2-(3- 甲 基 - 吡
唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸乙酯

[0232]

[0233] 标题化合物如下所述逐步制备：

[0234] 步骤1：合成1-(2-溴-4-氯-苯基)-2，2，2-三氟-乙酮。向含有无水甲醇(300ml)的500ml 2颈RB烧瓶中0-5℃(冰水浴)下用10分钟滴加亚硫酰氯(29.2ml，400mmol)。
移出冰水浴，加入2-溴-4-氯-苯甲酸(25g，106mmol)。该混合物加热至温和回流12小时。
反应进展由TLC和LCMS监控。反应完成后，浓缩反应混合物。粗产物溶于二氯甲烷(DCM，
250ml)，用水(50ml)、饱和NaHCO3水溶液(50ml)、盐水(50ml)洗涤，对硫酸钠干燥，浓缩给
出2-溴-4-氯-苯甲酸甲酯(26g，99％)，直接用于下一步。

[0235] 2-溴-4-氯-苯甲酸甲酯(12.4g，50mmol)的甲苯(200ml)冷却至-70℃，并加入三氟甲基三甲基硅烷(13ml，70mmol)。滴加四丁基氟化铵(1M，2.5ml)，并使该混
合物用4小时温热至室温，其后室温下搅拌10小时。浓缩该反应混合物，给出粗制的
[1-(2-溴-4-氯-苯基)-2，2，2-三氟-1-甲氧基-乙氧基]-三甲基-硅烷。将该粗制中
间体溶于甲醇(100ml)，并加入6N HCl(100ml)。该混合物维持在45-50℃下12小时。去
除甲醇，粗产物以二氯甲烷(200ml)抽提。合并的DCM层用水(50ml)、NaHCO3(50ml)、盐水
(50ml)洗涤，并对硫酸钠干燥。去除溶剂给出粗产物，该粗产物通过ISCO柱色谱利用1-2％
乙酸乙酯的己烷溶液作为溶剂进行纯化，得到1-(2-溴-4-氯-苯基)-2，2，2-三氟-乙酮
1
(10g，70％). H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ(ppm)7.50(d，1H)，7.65(d，1H)，7.80(s，1H)。

[0236] 步骤2：合成R-1-(2-溴-4-氯-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇。在氮气下向2L 3-颈RB烧瓶中的儿茶酚硼烷(1M，在THF 280ml中，280mmol)加入S-2-甲基-CBS噁唑硼烷
(7.76g，28mmol)，所得混合物室温下搅拌20分钟。反应混合物冷却至-78℃(干冰/丙酮
浴)，并用2小时滴加1-(2-溴-4-氯-苯基)-2，2，2-三氟-乙酮(40g，139mmol)的THF溶
液(400ml)。使反应混合物温热至-36℃，在此温度下搅拌24小时，并进一步在-32℃搅拌另
外的24小时。加入3N NaOH(250ml)，冷却浴以冰水浴替换。然后用30分钟滴加30％过氧
化氢的水溶液(250ml)。移出冰水浴，该混合物室温下搅拌4小时。分离有机层，浓缩并重新
溶于醚(200ml)。水层以醚抽提(2×200ml)。合并的有机层用1N NaOH水溶液(4×100ml)、
盐水洗涤，并对硫酸钠干燥。去除溶剂，给出粗产物，该粗产物通过柱色谱利用2-5％乙酸乙
酯的己烷作为溶剂进行纯化，给出所需的醇36.2g(90％，e.e.＞95％)。醇(36.2g)从己
烷(80ml)结晶，得到R-1-(2-溴-4-氯-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇28.2g(70％；99-100％
1
e.e.)。 H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)5.48(m，1H)，7.40(d，1H)，7.61(d，2H)。

[0237] 步骤3：合成R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇。将R-1-(2-溴-4-氯-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇(15.65g，54.06mmol)、3-甲基吡唑
(5.33g，65mmol)、CuI(2.06g，10.8mmol)、K2CO3(15.7g，113.5mmol)、(1R，2R)-N，N′-二甲
基-环己烷-1，2-二胺(1.54g，10.8mmol)和甲苯(80ml)合并在250ml压力管中，并加热
至130℃(油浴温度)，历时12小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O(4×100ml)、盐
水 洗涤，并对硫酸钠干燥。去除溶剂后得到粗产物，该粗产物通过ISCO柱色谱利用5-10％
乙酸乙酯的己烷溶液作为溶剂进行纯化，得到R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯
1
基]-2，2，2-三氟-乙醇(13.5g；86％)。 H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)2.30(s，3H)，
4.90(m，1H)，6.20(s，1H)，6.84(d，1H)，7.20(s，1H)，7.30(d，1H)，7.50(d，1H)。

[0238] 步骤4：合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基 ]-2，2，2-三氟-乙 氧基}-嘧 啶-4-基)-苯基]-丙 酸乙 酯。
R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇(17.78g，61.17mmol)、
(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(20.03g，
51mmol)、1，4-二噁烷(250ml)、和Cs2CO3(79.5g，244mmol)合并在3-颈500ml RB烧瓶中并
加热至100℃(油浴温度)，历时12-24小时。反应进展由LCMS监控。反应完成后，该混合
物冷却至60℃，加入(250ml)和THF(400ml)。分离有机层，并用盐水(150ml)洗涤。去除溶
剂给出粗制的BOC保护的产物，该产物置于THF(400ml)、3N HCl(200ml)。混合物35-40℃
下加热12小时。真空去除THF。剩余水层用乙酸异丙酯(2×100ml)洗涤，单独浓缩，回收
未反应的醇(3.5g)。从含水级分中真空下去除痕量的剩余有机溶剂。

[0239] 向装有温度控制仪和pH计的1L烧杯中，加入H3PO4(40ml，85％的水溶液)和水(300ml)，然后加入50％NaOH的水溶液，调节pH至6.15。温度升高至58℃，向缓冲液中
滴加上述酸性水溶液，同时加入50％NaOH的水溶液，使得pH维持在6.1-6.3之间。加入
完成后，过滤沉淀的固体，用热水(50-60℃)(2×200ml)洗涤，干燥得到粗制的(S)-2-氨
基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙
氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸(26.8g；95％)。LCMS和HPLC分析表明，化合物纯度
为约96-97％。

[0240] 0-5℃下向无水乙醇(400ml)中滴加SOCl2(22ml，306mmol)。加入上述反应的粗制酸(26.8g)。移出冰水浴，反应混合物40-45℃下 加热6-12小时。反应完成后，真空去除乙
醇。向残留物加入冰水(300ml)，并用乙酸异丙酯(2×100ml)抽提。该水溶液用饱和Na2CO3
中和，调节pH至6.5。该溶液用乙酸乙酯(2×300ml)抽提。合并的乙酸乙酯层用盐水洗涤，
浓缩得到24g粗制的酯(HPLC纯度96-97％)。然后，粗制的酯通过ISCO柱色谱利用5％乙醇
的DCM溶液作为溶剂进行纯化，得到(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲
基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸乙酯(20.5g；
1
70％；HPLC纯度98％)。LCMS M+1＝575.H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ(ppm)1.10(t，3H)，
2.25(s，3H)，2.85(m，2H)，3.65(m，1H)，4.00(q，2H)，6.35(s，1H)，6.60(s，1H)，6.90(m，1H)，
7.18(d，2H)，7.45(m，2H)，7.70(d，1H)，7.85(m，3H)。

[0241] 20.合成(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-1-(4-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸

[0242]

[0243] (S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸乙酯(22.2g，38.6mmol)溶于
THF(220ml)和水(50ml)。加入氢氧化锂一水合物(5.56g，132mmol)。反应混合物室温下搅
拌12小时。去除THF，将水(100ml)添加至残留物中，得到澄清溶液。

[0244] 向装有温度控制仪和pH计的1L烧杯加入H3PO4(40ml，85％，的水溶液)、水(300ml)和50％NaOH的水溶液，调节pH至6.15。温度升高至58℃，向缓冲液中滴加该
化合物的Li-盐水溶液，同时加入3N HCl，使得pH维持在6.1-6.2。加入完成后，过滤沉
淀的固体，用热水(50-60℃)(2×200ml)洗涤，并干燥，得到(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨
基 -6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧
啶-4-基)-苯基}-丙酸(19.39g；92％)。LCMS和HPLC分析表明，该化合物纯度约98-99％。
1
LCMS M+1＝547.H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ(ppm)2.40(s，3H)，3.22-3.42(m，2H)，4.38(t，
1H)，6.42(s，1H)，7.10(s，1H)，7.21(m，1H)，7.60(m，4H)，7.81(d，1H)，7.92(m，3H)。

[0245] 21.合成(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-噻唑-2-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0246]

[0247] 向40ml微波反应器中加入1.04g 2-甲酰苯基硼酸(6.9mmol)1.14g 2-溴噻唑(6.9mmol)、240mg双三苯基-膦二氯化钯(Pd(PPh3)2Cl2，0.34mmol)。然后，向该混合物加
入13.8ml 1M Na2CO3(13.8mmol)和10ml CH3CN。密封反应器，反应在微波下160℃运行5分
钟。LCMS显示所需产物的反应完成。接着，将该反应混合物倾倒入分离漏斗。加入200ml
二氯甲烷和100ml水，用于抽提。二氯甲烷层对MgSO4 干燥。去除溶剂给出粗产物，该粗
产物通过硅胶柱色谱用己烷/乙酸乙酯混合物(5/1至2/1)洗脱进行纯化，得到纯的2-噻
唑-2-基-苯甲醛(0.5g，收率：38％)。

[0248] 向50ml圆底烧瓶加入184mg 2-噻唑-2-基-苯甲醛(0.97mmol)和10ml无水四氢呋喃(THF)。然后，向该溶液加入145.4mg三氟甲基三甲基硅烷(1.02mmol)和20μl
1M叔-丁基氟化铵的THF溶液(0.02mmol)。该混合物室温下搅拌过夜，其后加入10ml 1N
HCl，反应混合物室温下搅拌15分钟。真空去除THF，该混合物用二氯甲烷抽提(3×50ml)。
合并的CH2Cl2层对MgSO4干燥。去除溶剂给出262mg粗 产物，纯度约95％，并用于下一步，
无需进一步纯化。

[0249] 在50ml密封管中，将2，2，2-三氟-1-(2-噻唑-2-基-苯基)-乙醇(260mg，1mmol)、(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸
(390mg，1mmol)、碳酸铯(1.3g，4mmol)和10ml 1，4-二噁烷混合在一起。反应混合物100℃
下加热3天。加入水(20ml)，然后缓慢加入1N HCl水溶液，调节pH至4，然后真空去除1，
4-二噁烷，所得混合物用二氯甲烷抽提(3×50ml)。合并的二氯甲烷层对MgSO4干燥。去
除溶剂给出粗产物，该粗产物置于下一步反应，无需进一步纯化。

[0250] 上述粗产物溶于5ml二氯甲烷，加入0.4ml三氟乙酸。混合物室温下搅拌过夜。然后真空去除三氟乙酸，给出粗产物，该粗产物通过制备型HPLC纯化，给出63mg纯产物。
HPLC；YMC Pack ODS-A 3×50mm，7um；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA
的甲醇。溶剂B用4分钟从10到90％；流速＝2ml/分钟；RT＝3分钟。HPLC纯度＝
1
100％。LCMS：M+1＝515.9。H NMR (400MHz，CD3OD)δ8.06ppm(2H，m)；7.92(2H，d，J＝
8Hz)；7.84(1H，m)；7.81(1H，m)；7.77(1H，d，J＝4Hz)；7.57(2H，m)；7.45(2H，d，J＝8Hz)；
6.84(1H，s)；4.30(2H，dd，J＝8Hz)；3.38(2H，dd，J＝12，2Hz)；3.23(2H，dd，J＝12，8Hz)。 [0251] 22.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(吡啶-3-基氧
基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸；(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，
2-三氟-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸；(S)-2-氨
基-3-[4-(6-{2，2，2-三氟-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯
基]-丙酸；(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(4-噻吩-2-基-苯基)-乙
氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸；(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2，2，2-三氟-1-(4-咪
唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸；和(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨
基-6-[2，2，2-三氟-1-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙
酸

[0252]

[0253]

[0254] 利用下列通用途径制备标题化合物：

[0255]

[0256] 在此途径中，向取代的苯甲醛(1当量)和三氟甲基三甲基硅烷(1.2当量)的THF溶液的混合物中，0℃下加入四-正-丁基氟化铵(0.05当量)。然后让温度温热至室温。
该混合物室温下搅拌5小时，接着用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，并用MgSO4干燥。减压
下去除溶剂，给出三氟-醇粗产物，该粗产物用于下一步，无需进一步纯化。

[0257] 上述制备的醇(1当量)溶于无水1，4-二噁烷。立即加入氢化钠(60％的矿物油溶液，1.2当量)，该混合物室温下搅拌30分钟。加入2-氨基-4，6-二氯嘧啶(1当量)，所
得混合物80℃下搅拌2小时。去除溶剂，残留物悬浮于乙酸乙酯，用水洗涤，对MgSO4干燥，
然后浓缩给出所需一氯化物产物，该产物用于下一步，无需进一步纯化。

[0258] 向含有4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(1当量)、Na2CO3(2当量)、乙腈(2ml)、水(2ml)和二氯双(三苯基膦)-钯(0.05当量)的5ml微波小瓶中加入上述粗产物(1当量)。该
小瓶加帽，该混合物150℃下以微波照射加热5分钟。该混合物冷却，通过注射过滤器过滤，
然后通过反相制备型-HPLC，利用YMC-Pack ODS 100×30mm ID柱(MeOH/H2O/TFA溶剂系
统)分离。纯级分合并，真空浓缩。然后将该产物悬浮于5ml水，冷冻并冻干，给出产物的
三氟乙酸(TFA)盐。

[0259] (S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：3.05-3.40(m，
2H)，3.81(m，1H)，6.64(s，1H)，7.01(d，1H)，7.15-7.54(m，7H)，7.74(d，1H)，7.94(d，2H)，
8.35(m，2H)。

[0260] (S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：3.20-3.41(m，2H)，
4.30(m，1H)，6.81(m，2H)，7.17(m，2H)，7.46-7.69(m，6H)，7.93(d，2H)，8.41(s，2H)。

[0261] (S)-2-氨基-3-[4-(6-{2，2，2-三氟-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸。1H-NMR(300MHz，CD3OD)δ：3.15-3.35(m，2H)，4.25(t，
1H)，6.90(q，1H)，7.25(d，2H)，7.45(d，2H)，7.71(m，3H)，7.99(m，3H)，8.14-8.18(m，1H)，
8.55(d，1H)，8.63(d，1H)，8.84(d，1H)。

[0262] (S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-(4-噻吩-2-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基}-丙酸。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：3.03-3.31(m，2H)，4.19(m，
1H)，6.68(m，2H)，7.00(m，1H)，7.31-7.36(m，4H)，7.52(m，2H)，7.62(d，2H)，7.85(d，2H)。 [0263] (S)-2-氨基-3-(4-{6-[2，2，2-三氟-1-(4-咪唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧
1
啶-4- 基}- 苯 基)- 丙 酸。H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：3.03-3.31(m，2H)，4.19(m，1H)，
6.88(m，1H)，7.32-8.63(m，11H)，8.64(s，1H)，9.25(s，1H)。

[0264] (S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯1
基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：3.07-3.36(m，2H)，
4.16(m，1H)，6.65(s，1H)，6.75(m，1H)，7.31(d，2H)，7.69(d，2H)，7.85(m，4H)，8.08(s，1H)，
9.03(s，1H)。

[0265] 23.合 成 (S)-2- 氨 基-3-(4-{2- 氨 基 -6-[2，2，2-三 氟 -1-(4-氟 -2- 噻吩-3-基-苯基)乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸；(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，
2，2-三氟-1-[4-氟-2-(4-甲基-噻吩-2-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙
酸；和(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{1-[2-(3，5-二甲基-异噁唑-4-基)-4-氟-苯
基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0266]

[0267]

[0268] 利用下列通用途径制备标题化合物：

[0269]

[0270] 在此途径中，将溴取代的苯甲醛(1当量)添加至20ml微波小瓶，该瓶含有芳香族杂环硼酸(1当量)、Na2CO3(2当量)、乙腈(8ml)/水(8ml)和二氯双(三苯基膦)-钯(0.05
当量)。该瓶加帽，并以微波照射在150℃下搅拌6分钟。反应混合物冷却，通过注射过滤
器过滤，然后用乙酸乙酯稀释。用水洗涤。然后加入硅胶制备胶塞，并通过色谱以己烷和乙
酸乙酯洗脱进行纯化。

[0271] 然后，上述制备的醛经历实施例22所述相同的反应。

[0272] (S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-噻吩-3-基-苯1
基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：3.08-3.30(m，
2H)，4.19(m，1H)，6.61(s，1H)，6.84(m，1H)，7.02-7013(m，2H)，7.22(dd，1H)，7.32(d，2H)，
7.47(m，1H)，7.77(m，1H)，7.84(d，2H)。

[0273] (S)-2-氨 基 -3-(4-{2-氨 基 -6-{2，2，2-三 氟 -1-(4-氟-2-(4- 甲 基- 噻1
吩-2-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。H-NMR(400MHz，CD3OD)
δ：2.26(s，3H)，3.09-3.30(m，2H)，4.20(m，1H)，6.64(s，1H)，6.95(m，2H)，7.13(m，3H)，
7.34(d，2H)，7.69(m，1H)，7.83(d，2H)。

[0274] (S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{1-[2-(3，5-二甲基-异噁唑-4-基)-4-氟-苯1
基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：
1.89-2.19(m，6H)，2.97-3.30(m，2H)，3.83(m，1H)，6.55(d，1H)，6.74-6.87(m，1H)，7.00(m，
1H)，7.7.24-7.33(m，3H)，7.88(m，3H)。

[0275] 24.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[5-氟-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0276]

[0277] 2-溴-5- 氟-苯 甲 酸 甲 酯(1g，4.292mmol)、NaBH4(0.423g，11.159mmol) 和LiCl(0.474g，11.159mmol)的THF/EtOH溶液(20ml/10ml)的混合物室温下搅拌过夜。加入
HCl水溶液(10ml，2N)，搅拌约10分钟。然后低真空下去除有机溶剂。残留物用水稀释，并
以乙酸乙酯抽提。有机层用NaHCO3水溶液(10％)、水和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，并浓
缩得到852mg(96.8％粗收率)粗产物，白色固体的(2-溴-5-氟-苯基)甲醇，使用无需进
一步纯化。

[0278] 向(2-溴-5-氟-苯基)甲醇(0.852g，4.156mmol)的DCM(15ml)的溶液加入MnO2(4.254g，85％，41.56mmol)。该混合物室温下搅拌两天，然后过滤并用DCM洗涤。滤液浓
缩得到777mg 2-溴-5-氟-苯甲醛(92％收率)。然后将新制备的醛(0.777g，3.828mmol)
溶于无水THF(10ml)，并冷却至0℃。加入三氟甲基三甲基硅烷(1.13ml，7.656mmol)，接着
加入四丁基氟化铵(0.020g，0.076mmol)。让温度温热至室温。该混合物室温下搅拌5小
时，然后用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，并经MgSO4干燥。减压下去除溶剂，得到粗产物
(2-溴-5-氟-苯基)2，2，2-三氟-乙醇，1.1g(90％纯度)，用于下一步，无需进一步纯化。

[0279] 将(2-溴-5-氟-苯基)2，2，2-三氟-乙醇(0.990g，3.263mmol，90％)、3-甲基吡唑(0.476g，4.895mmol)、CuI(0.367g，1.632mmol)、K2CO3 (1.334g，8.158mmol)、(1R，2R)-N，
N′-二甲基-环己烷-1，2-二胺(0.110g，0.653mmol)和甲苯(10ml)合并在20ml微波小
瓶中，接着密封，180℃下加热40分钟。该混合物过滤，并用乙酸乙酯洗涤。滤液用水洗涤3
次，然后加入硅胶制备胶塞。该化合物通过ISCO柱色谱，利用5-10％乙酸乙酯的己烷溶液
作为溶剂进行纯化，得到1-(5-氟-2-(3-甲基 -吡唑-1-基)-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇
1
75mg。H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.29(s，3H)，4.90(m，1H)，6.21(d，1H)，7.07-7.11(m，1H)，
7.19-7.22(m，1H)，7.29-7.32(m，1H)，7.51(d，1H)。

[0280] 上述制备的醇(0.075g，0.273mmol)溶于无水1，4-二噁烷(3ml)。立即加入氢化钠(0.013g，0.328mmol，60％的矿物油溶液)，该混合物室温下搅拌30分钟。加入
2-氨基-4，6-二氯-嘧啶(0.045g，0.273mmol)。该混合物80℃下搅拌约2小时。去
除溶剂，残留物悬浮于乙酸乙酯，用水洗涤，并对MgSO4干燥，然后浓缩给出所需的一氯
化物产物100mg(0.249mmol)，该产物添加至含有4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(0.052g，
0.249mmol)、Na2CO3(0.053g，0.498mmol)、乙腈(2ml)/水(2ml)和二氯双(三苯基膦)-钯
(5mg，0.007mmol)的5ml微波小瓶中。该小瓶加帽，并在微波照射下150℃搅拌5分钟。
反应混合物冷却，通过注射过滤器过滤，然后通过反相制备型-HPLC利用YMC-Pack ODS
100×30mmID柱(MeOH/H2O/TFA溶剂系统)分离。真空浓缩纯级分。然后该产物悬浮
于5ml水，冷冻和冻干，给出(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(R)-1-[5-氟-2-(3-甲
基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸的三氟盐，
1
37mg。H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ2.29(s，3H)，3.08-3.30(m，2H)，4.19(q，1H)，6.32(d，1H)，
6.82(s，1H)，6.85(m，1H)，7.26(m，1H)，7.33(d，2H)，7.42(m，2H)，7.75(d，1H)，7.87(d，2H)。 [0281] 25.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6{2，2，2-三氟-1-[5-氯-2-(3-甲基-吡
唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0282]

[0283] 标题化合物制备自R-1-[5-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇，是利用对R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇
的上述相同途径制备的。具体而言，R-1-[5-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，
2，2-三氟-乙醇(0.959g，3.318mmol)溶于无水1，4-二噁烷(8ml)中。立即加入氢化钠
(0.159g，3.982mmol，60％的矿物油溶液)，该混合物室温下搅拌30分钟。加入2-氨基-4，
6-二氯-嘧啶(0.544g，3.318mmol)。混合物80℃下搅拌约2小时。去除溶剂，残留物悬
浮于乙酸乙酯，用水洗涤，对MgSO4干燥，然后浓缩，给出所需的一氯化物产物1.38g，直接使
用，无需进一步纯化。

[0284] 将上述制备的一氯化物(0.460g，1.104mmol)添加至20ml微波小瓶，该小瓶含有4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(0.277g，1.325mmol)、Na2CO3(0.234g，2.208mmol)、乙
腈(8ml)/水(8ml)和二氯双(三苯基膦)-钯(0.039g，0.055mmol)。该小瓶加帽，混
合物以微波照射在150℃下搅拌10分钟。混合物冷却，通过注射过滤器过滤，然后通过
反相制备型-HPLC，利用YMC-Pack ODS 100×30mm ID柱(MeOH/H2O/TFA溶剂系统)分
离。真空浓缩纯级分。然后该产物悬浮于5ml水中，冷冻并冻干，给出580mg(S)-2-氨
基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[5-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙
1
氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸。H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ2.40(s，3H)，3.29-3.46(m，
2H)，4.38(q，1H)，6.45(d，1H)，7.09(s，1H)，7.24(m，1H)，7.53-7.70(m，4H)，7.82(s，1H)，
7.90(d，1H)，7.97(d，2H)。

[0285] 26.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[4-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0286]

[0287] 4-(2-氧-吡咯烷-1-基)-苯甲醛(500mg，2.64mmol)的THF(20ml)溶液冷却至0℃，并加入三氟甲基三甲基硅烷(375mg，2.64mmol)。滴加四丁基氟化铵(1M，0.1ml)，用1
小时让该混合物温热至室温，室温下进一步搅拌过夜。反应完成后，加入3N HCl (5ml)，该
反应混合物搅拌2小时。浓缩该混合物。加水(20ml)，该混合物以EtOAc抽提(2×20ml)，
用NaHCO3(20ml)、盐水(20ml)洗涤，并对硫酸钠干燥，浓缩得到590mg所需产物，该产物用
于下一步，无需进一步纯化(收率：86％)。

[0288] 4，6-二氯-嘧啶-2-基胺(700mg，2.69mmol)、NaHH(194mg，8.07mmol，60％)和1-(4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基)-吡咯烷-2-酮(441mg，2.69mmol)的无水
THF(10ml)溶液室温下搅拌过夜。反应完成后，减压下去除THF。加入水(10ml)，同时该混
合物冷却至0℃。然后该混合物用二氯甲烷抽提(2×40ml)。合并的有机溶液对Na2SO4干
燥。去除溶剂得到498mg所需产物，纯度92％，该产物用于下一步，无需进一步纯化(收率
498mg，48％)。

[0289] 微波用Emrys加工瓶(Emrys process vial)(20ml)装有1-(4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基氧基)-2，2，2-三氟-乙基)-苯基)-吡咯烷-2-酮(200mg，0.51mmol)、4-二羟
硼基-L-苯丙氨酸(108mg，0.51mmol)和5ml乙腈。向上述溶液加入5ml碳酸钠水溶液
(1M)，接着加入5mol％二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射加热至
160℃，历时7分钟。冷却后，蒸发反应混合物至干。残留物溶于4ml甲醇，并用Prep-LC纯
1
化，给出153mg产物(收率58％)。H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ(ppm)2.1(m，2H)，2.5(t，2H)，
3.05-3.4(m，2H)，3.85(t，2H)，4.2(m，1H)，6.6(m，1H)，6.75(s，1H)，7.3(d，2H)，7.5(d，2H)，
7.6(d，2H)，7.9(d，2H)。

[0290] 27.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(R)-2，2，2-三氟-1-[5-氟-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0291]

[0292] 将R-1-(2-溴-5-氟-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇(4.0g，14.65mmol)、3-甲基吡唑(1.56g，19.04mmol)、CuI(0.557g，2.93mmol)、K2CO3(4.25g，30.76mmol)、(1R，2R)-N，
N′-二甲基-环己烷-1，2-二胺(0.416g，2.93mmol)和甲苯(15ml)置于50ml密封管中，
所得混合物130℃(油浴温度)加热两天。混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O(4×30ml)、盐水
洗涤，并对硫酸钠干燥。去除溶剂给出粗产物，该粗产物通过ISCO柱色谱，利用5-10％乙酸
乙酯的己烷溶液作为溶剂进行纯化，得到1.75g R-2，2，2-三氟-1-[5-氟-2-(3-甲基-吡
1
唑-1-基)-苯基]-乙醇(收率：44％)。H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)2.35(s，3H)，
5.0(m，1H)，6.3(s，1H)，7.1(m，1H)，7.20(s，1H)，7.35(d，1H)，7.50(s，1H)。

[0293] 将4，6-二氯-嘧啶-2-基胺(938mg，5.72mmol)、NaHH(188mg，1.5当量8.17mmol，60％)和R-2，2，2-三氟-1-[5-氟-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇(1.5g，1当
量5.45mmol)的无水THF(10ml)溶液室温下搅拌10分钟，然后50℃下搅拌过夜。反应完成
后，减压下去除THF。加入水(10ml)淬灭该反应。然后该混合物以二氯甲烷(2×40ml)抽
提。合并的有机溶液对Na2SO4干燥。去除溶剂给出所需产物，纯度92％，该产物无需纯化
用于下一步(收率：85％)。

[0294] 微波用Emrys加工瓶(20ml)装有氯-6-R-2，2，2-三氟-1-(5-氟-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基)-乙氧基)-嘧啶-2-基胺(2.18g，5.45mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨
酸(1.13g，5.45mmol)，向上述溶液加入碳酸钠(1M10.90ml，2当量)，接着加入5mol％二
氯双(三苯基膦)-钯(II)(191 mg，0.27mmol)和5ml乙腈和5ml H2O。密封反应容器，
该混合物160℃下以微波照射加热10分钟。冷却后，反应混合物蒸发至干。残留物溶于
H2O(10ml)并以醚抽提。弃去醚层。然后真空去除水相中的大多数水，接着加入10ml甲醇。
1
粗产物经Prep-HPLC进行纯化，得到1.163g(收率75％)产物。H-NMR(400MHz，CD3OD)：
δ(ppm)2.4(s，3H)，3.35(m，1H)，3.5(m，1H)，4.36(m，1H)，6.4(s，1H)，7.0(s，1H)，7.1(m，
1H)，7.4(m，1H)，7.55(m，4H)，7.85(s，1H)，8.0(d，2H)。

[0295] 28.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0296]

[0297] 向4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯甲醛(213mg，1mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(0.2ml，1.2mmol)的10ml THF溶液中0℃下加入四丁基氟化铵(TBAF)(0.1ml，1M的THF溶
液)。该混合物温热直至室温，并搅拌4小时。然后，该反应混合物以12ml 1M HCl处理并
搅拌过夜。该产物用乙酸乙酯抽提(3×20ml)。分离有机层，并对硫酸钠干燥。蒸发有机溶
剂，给出0.25g 1-[4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇，直接用于下
一步，无需纯化。收率：90％。

[0298] 向1-[4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇(67mg，0.2mmol)的10ml无水1，4-二噁烷溶液中加入Cs2CO3(375mg，1mmol)。该混合物搅拌5分钟，然后加
入(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(78mg，
0.2mmol)，该混合物110℃下加热过夜。冷却后，加入5ml水，乙酸乙酯(20ml)用于抽提
产物。有机层对硫酸钠干燥。通过离心蒸馏器去除溶剂，给出112mg (S)-3-[4-(2-氨
基-6-{2，2，2-三氟-1-[4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯
基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(收率：88％)。

[0299] 将上述产物(112mg)添加至5ml 30％TFA/DCM溶液。反应完成后，蒸发溶剂，给出粗产物，该粗产物通过制备型HPLC纯化，给出5mg(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，
2-三氟-1-[4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]丙酸。
1
H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)8.18(d，J＝8.4Hz，2H)，7.94(d，J＝8.4Hz，2H)，7.74(m，
3H)，7.60(d，J＝8.4Hz，2H)，7.52(d，J＝7.2Hz，1H)，7.08(s，1H)，6.86(m，1H)，6.82(d，J
＝8.1Hz 1H)，4.37(t，1H)，4.03(s，3H)，3.5(m，2H)。

[0300] 29.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-氟-4-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0301]

[0302] 将TBAF(0.1ml)0 ℃ 下 添 加 至 4-溴 -2-氟 -苯 甲 醛(2.03g，10mmol) 和TMSCF3(20ml，12mmol)的10ml THF溶液。形成的混合物温热直至室温，并搅拌4小时。然
后该反应混合物以12ml 3M HCl处理，并搅拌过夜。该产物用乙酸乙酯(3×20ml)抽提。分
离有机层，并对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出2.4g 1-(4-溴-2-氟-苯基)-2，2，2-三
氟-乙醇(收率：90％)。

[0303] 向1-(4- 溴 -2-氟 - 苯 基 )-2，2，2- 三 氟- 乙 醇(1.4g，5.2mmol) 的 10ml无水1，4-二噁烷溶液加入Cs2CO3(8.45g，26mmol)，该混合物搅拌5分钟，然后加入
(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(2.0g，
5mmol)，所得混合物110℃下加热过夜。冷却后，加 入5ml水，乙酸乙酯(20ml)用于抽
提产物。有机层对硫酸钠干燥。通过离心蒸馏器去除溶剂，给出2.6g(S)-3-(4-{2-氨
基-6-[1-(4-溴-2-氟-苯基)-2，2，2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}苯基)2-叔丁氧基
羰基氨基-丙酸(收率：82％)。

[0304] 微波小瓶(2ml)装有(S)-3-(4-{2-氨基-6-[1-(4-溴-2-氟-苯基)-2，2，2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(130mg，0.2mmol)、3-甲
氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼戊环-2-基)-吡啶(70mg，0.3mmol)、1ml乙
腈、和0.7ml水。向该混合物加入0.4ml碳酸钠水溶液(1M)，接着加入14mg(5mol％)二
氯双(三苯基膦)钯(II)。密封反应容器，并以微波照射加热至150℃，历时5分钟。冷
却后，该反应混合物蒸发至干，残留物溶于2.5ml甲醇，并通过Prep HPLC进行纯化，给出
51mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-氟-4-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯
基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸。

[0305] 上述产物(51mg)溶于5ml 30％TFA/DCM溶液。该混合物室温下搅拌过夜。去除溶剂给出粗产物，该粗产物通过Prep HPLC进行纯化，给出17mg(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨
基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-氟-4-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧
1
啶-4-基 )-苯 基]- 丙 酸。H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.73(s，1H)，8.56(s，1H)，
8.25(s，1H)，7.94(d，J ＝ 8.2Hz，2H)，7.77(m，3H)，7.55(d，J ＝ 8.4Hz，2H)，7.16(m，1H)，
7.00(s，1H)，4.35(t，1H)，4.09(s，3H)，3.4(m，2H)。

[0306] 30.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2，2，2-三氟-1-[4-(2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0307]

[0308] 向(S)-1-(4-溴-苯 基)-2，2，2-三氟- 乙醇(2.55g，11.0mmol)的10ml 无水1，4-二噁烷溶液加入Cs2CO3(16.25g，50mmol)，该混合物搅拌5分钟，然后加入
(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(3.92g，
10mmol)。所得混合物110℃下加热过夜。冷却后，加入5ml水，乙酸乙酯(20ml)用于抽
提产物。有机层对硫酸钠干燥。通过离心蒸馏器去除溶剂，给出5.2g(S)-3-(4-{2-氨
基-6-[(S)-1-(4-溴-苯基)-2，2，2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}苯基)-2-叔丁氧基
羰基氨基-丙酸(收率：82％)。

[0309] 微波小瓶(2ml)装有(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-1-(4-溴-苯基)-2，2，2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(139mg，0.23mmol)、
2-氟吡啶-4-硼酸(40mg，0.27mmol)、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物加入0.4ml碳酸
钠水溶液(1M)，接着加入14mg(5mol％)二氯双(三苯基膦)钯(II)。密封反应容器，并
以微波照射加热至150℃，历时5分钟。冷却后，该反应混合物蒸发至干，残留物溶于2.5ml
甲醇。产物用制备型HPLC进行纯化，给出70mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2，2，2-三
氟-1-[4-(2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰
基氨基-丙酸。

[0310] 上述产物(70mg)溶于5ml 30％TFA的DCM溶液。该反应混合物室温下搅拌过夜。去除溶剂给出粗产物，该粗产物通过制备型HPLC进行纯化，给出52mg(S)-2-氨
基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2，2，2-三氟-1-[4-(2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-乙氧基}-嘧
1
啶-4-基)-苯基]-丙酸。H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)8.17(d，J＝5.7Hz，1H)，7.85(d，
J＝8.4Hz， 2H)，7.77(d，J＝6.9Hz，2H)，7.67(d，J＝8.2Hz，2H)，7.53(m，1H)，7.38(d，J
＝8.4Hz，，2H)，7.30(s，1H)，6.76(m，2H)，4.21(t，1H)，3.2(m，2H)。

[0311] 31.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2，2，2-三氟-1-[4-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0312]

[0313] 微波小瓶(2ml)装有(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-1-(4-溴-苯基)-2，2，2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(139mg，0.23mmol)、
3-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]-二氧硼戊环-2-基)-吡啶(69mg，0.27mmol)、
1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物加入0.4ml碳酸钠水溶液(1M)，接着加入14mg二氯
双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射加热至150℃，历时5分钟。冷
却后，该反应混合物蒸发至干，残留物溶于2.5ml甲醇并通过制备型HPLC进行纯化，给出
60mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2，2，2-三氟-1-[4-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-乙
氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸。

[0314] 上述产物(60mg)溶于5ml 30％TFA的DCM溶液。该反应混合物室温下搅拌过夜。去除溶剂给出粗产物，该粗产物通过制备型HPLC进行纯化，给出48mg(S)-2-氨
基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2，2，2-三氟-1-[4-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧
基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.54(d，J＝1.5Hz，1H)，
8.37(d，J＝2.7Hz，1H)，8.03(dd，J＝2.7Hz，1.5Hz，1H)，7.84(d，J＝8.2Hz，2H)，7.78(d，J
＝8.4Hz，2H)，7.70(d，J＝8.4Hz，2H)，7.41(d，J＝8.4Hz，，2H)，6.81(s，1H)，6.75(m，1H)，
4.22(t，1H)，3.95(t，3H)，3.25(m， 2H)。

[0315] 32.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2，2，2-三氟-1-[4-(4-三氟甲基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0316]

[0317] 微波小瓶(2ml)装有(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-1-(4-溴-苯基)-2，2，2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(139mg，0.23mmol)、4-三
氟甲基吡啶-3-硼酸(61mg，0.3mmol)、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物加入0.4ml碳酸
钠水溶液(1M)，接着加入14mg二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射
加热至150℃，历时5分钟。冷却后，该反应混合物蒸发至干，残留物溶于2.5ml甲醇并通过
制备型HPLC进行纯化，给出20mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2，2，2-三氟-1-[4-(4-三氟
甲基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙
酸。

[0318] 上述产物(20mg)溶于5ml 30％TFA的DCM溶液。该反应混合物室温下搅拌过夜。去除溶剂给出粗产物，该粗产物通过制备型HPLC进行纯化，给出10mg(S)-2-氨
基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2，2，2-三氟-1-[4-(4-三氟甲基-吡啶-3-基)-苯基]-乙
氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.72(d，J＝5.1Hz，
1H)，8.55(s，1H)，7.87(d，J＝8.2，2H)，7.72(d，J＝5.0Hz，1H)，7.63(d，J＝8.2Hz，2H)，
7.36(m，4H)，6.81(m，1H)，6.70(s，1H)，4.20(t，1H)，3.22(m，2H)。

[0319] 33.合 成(S)-2- 氨 基-3-(4-{2-氨 基 -6-[(S)-2，2，2-三 氟-1-(4- 异 噁唑-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0320]

[0321] 微波小瓶(2ml)装有(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-1-(4-溴-苯基)-2，2，2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸(139mg，0.23mmol)、
4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼戊环-2-基)-异噁唑(57.5mg，0.3mmol)、1ml乙
腈、和0.7ml水。向该混合物加入0.4ml碳酸钠水溶液(1M)，接着加入14mg二氯双
(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射加热至150℃，历时5分钟。冷却
后，该反应混合物蒸发至干，残留物溶于2.5ml甲醇并通过制备型HPLC进行纯化，给出
20mg(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-2，2，2-三氟-1-(4-异噁唑-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧
啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基丙酸。

[0322] 上述产物(20mg)溶于5ml 30％TFA的DCM溶液。该混合物室温下搅拌过夜。去除溶剂给出粗产物，该粗产物通过制备型HPLC进行纯化，给出10mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨
基-6-[(S)-2，2，2-三氟-1-(4-异噁唑-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙
1
酸。H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)9.03(s，1H)，8.77(s，1H)，7.84(m，2H)，7.63(d，J＝8.2，
1H)，7.56(d，J ＝ 8.4Hz，1H)，7.50(m，1H)，7.37(m，3H)，6.70(m，2H)，4.20(t，1H)，3.22(m，
2H)。

[0323] 34.合成(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0324]

[0325] 微波小瓶(20ml)装有2-甲酰苯基硼酸(290mg，2.0mmol)、5-溴-嘧啶(316mg，2.0mmol)和8ml乙腈。向该混合物加入4ml碳酸钠水溶液(1M)，接着加入100mg二氯双
(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射在150℃下加热5分钟。冷却后，该
反应混合物以乙酸乙酯抽提。蒸发有机层，提供粗材料，该粗材料通过ISCO进行纯化，给出
220mg 2-嘧啶-5-基-苯甲醛。

[0326] 将四丁基氟化铵(TBAF，0.1ml，1M的THF溶液)0℃下添加至2-嘧啶-5-基-苯甲醛(184mg，1mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(TMSCF3，0.2ml，1.2mmol)的10ml THF溶液。混
合物温热直至室温，并搅拌4小时。然后该混合物以3ml 1M HCl处理，并搅拌过夜。该产
物用乙酸乙酯(3×20ml)抽提。分离有机层，并对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出0.21g
2，2，2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙醇(收率：84％)，直接用于下一步无需纯化。

[0327] 向2，2，2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙醇(72mg，0.28mmol)的10ml无水THF溶液加入Cs2CO3(325mg，1.0mmol)。该混合物搅拌20分钟，加入2-氨基-4，6-二氯-嘧
啶(36.7mg，0.22mmol)，然后反应混合物110℃下加热，直到反应完成。冷却至室温后，加
入5ml水，乙酸乙酯(20ml)用于抽提产物。有机层对硫酸钠干燥。通过离心蒸馏器去除
溶剂，给出76mg粗制的4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙氧基]-嘧
啶-2-基胺(收率：92％)。

[0328] 微波小瓶(2ml)装有上述粗制中间体(38mg，0.1mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(31mg，0.15mmol)、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混 合物加入0.3ml碳酸钠水溶液(1M)，
接着加入4mg、5mol％的二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射加热
至150℃，历时5分钟。冷却后，该反应混合物蒸发至干，残留物溶于2.5ml甲醇，并通过
制备型HPLC进行纯化，给出10mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-嘧
1
啶-5-基-苯基)-乙 氧基]-嘧啶-4- 基}-苯基)-丙 酸。HNMR(300MHz，CD3OD)
δ(ppm)9.21(s，1H)，8.87(s，2H)，7.86(d，J＝8.4，2H)，7.75(m，1H)，7.53(m，2H)，7.37(d，J＝8.2，1H)，7.33(m，1H)，6.72(s，1H)，6.58(m，1H)，4.20(t，1H)，3.22(m，2H)。

[0329] 35.合成(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-噻吩-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0330]

[0331] 微波小瓶(20ml)装有2-甲酰苯基硼酸(290mg，2.0mmol)、3-溴-噻吩(326mg，2.0mmol)、和8ml乙腈。向该混合物加入4ml碳酸钠水溶液(1M)，接着加入50mg二氯双(三
苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射在150℃下加热5分钟。冷却后，该反应混
合物用乙酸乙酯抽提。蒸发有机层，提供粗材料，该粗材料通过ISCO进行纯化，给出211mg
2-噻吩-3-基-苯甲醛。

[0332] 将四丁基氟化铵(TBAF，0.1ml，1M的THF溶液)0℃下添加至2-噻吩-3-基-苯甲醛(100mg，0.53mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(0.1ml，0.64mmol)的10ml THF溶液。混合
物温热直至室温，并搅拌4小时。然后该反应混合物以3ml1M HCl处理，并搅拌过夜。该产
物用乙酸乙酯(3×20ml)抽提。有机层分离，并对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出0.12g
2，2，2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙醇，直接用于下一步无需纯化(收率：89％)。

[0333] 向2，2，2-三氟-1-(2-噻吩-3-基-苯基)-乙醇(72mg，0.28mmol)的10ml无水THF溶液加入Cs2CO3(325mg，1.0mmol)，该混合物搅拌20分钟。然后加入2-氨基-4，6-二
氯-嘧啶(36.7mg，0.22mmol)，混合物110℃下加热，直到反应完成。冷却后，加入5ml水，
乙酸乙酯(20ml)用于抽提产物。有机层对硫酸钠干燥。通过离心蒸馏器去除溶剂，给出
67mg 4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺(收率：
78％)。

[0334] 微波小瓶(2ml)装有上述粗材料(40mg，0.1mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(31mg，0.15mmol)、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物加入0.3ml碳酸钠水溶液(1M)，接着
加入5mol％二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射加热至150℃，历
时5分钟。冷却后，该反应混合物蒸发至干。残留物溶于2.5ml甲醇，然后用制备型HPLC进
行纯化，得到11.8mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-噻吩-3-基-苯
1
基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：7.84(d，J
＝8.0Hz，2H)，7.66(d，J＝7.6Hz，1H)，7.53(m，1H)，7.40(m，5H)，7.30(m，1H)，7.17(m，1H)，
6.91(m，1H)，6.82(s，1H)，4.23(t，1H)，3.25(m，2H)。

[0335] 36.合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸

[0336]

[0337] 微波小瓶(20ml)装有2-溴-苯甲醛(208mg，1.0mmol)、1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(222mg，1.2mmol)和8ml乙腈。向该混合物加
入2.4ml碳酸钠水溶液(1M)，接着加入50 mg二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，
并以微波照射在150℃下加热5分钟。冷却后，该反应混合物用乙酸乙酯抽提。蒸发有机层，
提供粗材料，该粗材料通过ISCO进行纯化，给出181mg 2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯
甲醛(96％收率)。

[0338] 将四丁基氟化铵(0.1ml，1M的THF溶液)0℃下添加至2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯甲醛(100mg，0.53mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(0.12ml，0.6mmol)的10ml
THF溶液。混合物温热直至室温，并搅拌4小时。然后该混合物以3ml 1M HCl处理，并搅拌
过夜。该产物用乙酸乙酯(3×20ml)抽提。分离有机层，并对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，
给出0.12g 2，2，2-三氟-1-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基-苯基)-乙醇，直接用于下一步
无需纯化(收率：89％)。

[0339] 向2，2，2-三氟-1-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-乙醇(60mg，0.2mmol)的10ml无水THF溶液加入Cs2CO3(325mg，1.0mmol)，该混合物搅拌20分钟。加入2-氨基-4，
6-二氯-嘧啶(32mg，0.2mmol)，然后反应混合物110℃下加热，直到反应完成。冷却后，加
入5ml水，乙酸乙酯(20ml)用于抽提产物。有机层对硫酸钠干燥。通过离心蒸馏器去除
溶剂，得到70mg 4-氯-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-乙氧
基}-嘧啶-2-基胺(收率：92％)。

[0340] 微波小瓶(2ml)装有上述粗材料(38mg，0.1mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(31mg，0.15mmol)、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物加入0.3ml碳酸钠水溶液(1M)，接
着加入5mol％二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射加热至150℃，
历时5分钟。冷却后，该混合物蒸发至干，残留物溶于2.5ml甲醇，并通过制备型HPLC进
行纯化，得到5.6mg(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-(1-甲基-1H-吡
唑-4-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。

[0341] 37.合成(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2，2，2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0342]

[0343] 微波小瓶(20ml)装有2-甲酰苯基硼酸(298mg，2.0mmol)、3-溴-呋喃(350mg，2.4mmol)和8ml乙腈。向该混合物加入4ml碳酸钠水溶液(1M)，接着加入100mg二氯双
(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射在150℃下加热5分钟。冷却后，该
反应混合物以乙酸乙酯抽提。蒸发有机层，提供粗材料，该粗材料通过ISCO进行纯化，给出
110mg 2-呋喃-3-基-苯甲醛(30％收率)。

[0344] 将四丁基氟化铵(0.1ml，1M的THF下)0℃下添加至2-呋喃-3-基-苯甲醛(110mg，0.64mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(109mg，0.78mmol)的10ml THF溶液。混合物温
热直至室温，并搅拌4小时。然后该混合物以3ml1M HCl处理，并搅拌过夜。产物用乙酸乙
酯(3×20ml)抽提。分离有机层，并对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出0.130g 2，2，2-三
氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙醇，直接用于下一步，无需纯化(收率：90％)。

[0345] 将60％NaHH(12mg，0.3mmol)添加至2，2，2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙醇(54mg，0.2mmol)的10ml无水THF溶液。该混合物搅拌20分钟，其后加入4，6-二氯-嘧
啶(30mg，0.2mmol)。然后该混合物70℃下加热，直到反应完成。冷却后，加入5ml水，以淬
灭反应，乙酸乙酯(20ml)用于抽提产物。有机层对硫酸钠干燥。通过离心蒸馏器去除溶
剂，得到67mg 4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶(收率：
94％)。

[0346] 微波小瓶(2ml)装有上述粗材料(38mg，0.1mmol)、4-二羟硼基-L- 苯丙氨酸(31mg，0.15mmol)、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物加入0.3ml碳酸钠水溶液(1M)，接着
加入5mol％二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射加热至150℃，历
时5分钟。冷却后，该反应混合物蒸发至干，残留物溶于2.5ml甲醇，然后通过制备型HPLC
进行纯化，得到6mg(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2，2，2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙氧
1
基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.82(s，1H)，8.13(d，
J ＝ 8.4Hz，2H)，7.73(m，2H)，7.46(m，6H)，6.82(m，1H)，6.54(s，1H)，4.20(t，1H)，3.22(m，
2H)。

[0347] 38.合成(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2，2，2-三氟-1-(2-呋喃-2-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸

[0348]

[0349] 微波小瓶(20ml)装有2-甲酰苯基硼酸(298mg，2.0mmol)、2-溴-呋喃(350mg，2.4mmol)和8ml乙腈。向该混合物加入4ml碳酸钠水溶液(1M)，接着加入100mg二氯双
(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射在150℃下加热5分钟。冷却后，该
反应混合物用乙酸乙酯抽提。蒸发有机层，提供粗材料，该粗材料通过ISCO进行纯化，给出
123mg 2-呋喃-2-基-苯甲醛(34％收率)。

[0350] 将四丁基氟化铵(0.1ml，1M的THF溶液)0℃下添加至2-呋喃-2-基-苯甲醛(123mg，0.71mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(120mg，0.86mmol)的10ml THF溶液。混合物
温热直至室温，并搅拌4小时。然后该混合物以3ml1M HCl处理，并搅拌过夜。该产物用乙
酸乙酯(3×20ml)抽提。分离有机层，并对硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，给出0.150g 2，2，
2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙醇，直接用于下一步，无需纯化(收率：90％)。

[0351] 将60％NaH(12mg，0.3mmol)添加至2，2，2-三氟-1-(2-呋喃-2-基-苯基)-乙醇(55mg，0.2mmol)的10ml无水THF溶液。该混合物搅拌20分钟，其后加入4，6-二氯-嘧
啶(29mg，0.2mmol)。该混合物然后于110℃下加热，直到反应完成。冷却后，加入5ml水，乙
酸乙酯(20ml)用于抽提产物。有机层对硫酸钠干燥。通过离心蒸馏器去除溶剂，得到60mg
4-氯-6-[2，2，2-三氟-1-(2-呋喃-2-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶(收率80％)。

[0352] 微波小瓶(2ml)装有上述粗材料(60mg，0.2mmol)、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸(62mg，0.3mmol)、1ml乙腈、和0.6ml水。向该混合物加入0.4ml碳酸钠水溶液(1M)，接着
加入5mol％二氯双(三苯基膦)-钯(II)。密封反应容器，并以微波照射加热至150℃，历
时5分钟。冷却后，该反应混合物蒸发至干燥，残留物溶于2.5ml甲醇，并通过制备型HPLC
进行纯化，得到6mg(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2，2，2-三氟-1-(2-呋喃-2-基-苯基)-乙氧
1
基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.66(s，1H)，8.11(d，J
＝8.4Hz，2H)，7.77(m，2H)，7.54(m，6H)，6.86(d，J＝3.3Hz，1H)，6.66(m，1H)，4.20(t，1H)，
3.22(m，2H)。

[0353] 39.其他化合物

[0354] 利用本领域公知和/或在此描述的方法制备的其他化合物以下列出：

[0355] 表1

[0356]化合物 LCMS (M+1) HPLC方法 (时间
(分))
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-(吡啶-3-基)苯基)乙 氧基) 510 A--
嘧啶-4-基)苯基)丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(2-甲基吡啶-4-基) 苯基)乙 524 A--
氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(4-甲基噻吩-3-基) 苯基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯 529 A--基)丙酸
(2S)-3-(4-(6-(1-(2-(1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)-2-氨 基嘧啶-4-基)苯基)-2-氨基丙 499 酸 A(2.86)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-(呋喃-2-基)苯基)乙 氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙 499 A--酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2，2，2-三氟-1-(2-(吡啶-3-基氧基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 512 A(1.36)
(2S)-3-(4-(6-(1-(2-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧 基)-2-氨基嘧啶-4-基)苯基)-2-氨 500 基丙酸 A(2.17)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(呋喃-3-基)苯基)乙 氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙 499 A--酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-(呋喃-2-基)-3-甲氧 基苯基)乙氧基)嘧啶-4-基) 529 苯基)丙酸 A(3.32)
(2S)-2-氨基-3-(4-(5-(2，2，2-三氟-1-(2-(呋喃-2-基)苯基)乙氧基)吡 嗪-2-基)苯基)丙酸 484 E--
(2S)-3-(4-(5-(1-(2-(1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)吡嗪 -2-基)苯基)-2-氨基丙酸 484 E--
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(1-(4，5-二甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基) 苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧 559 啶-4-基)苯基)丙酸 A(2.86)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(2-甲基-1H-咪唑-1- 基)苯基)乙氧基)嘧啶-4-基) 513 苯基)丙酸 A(2.30)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(5-甲基噻吩-2-基) 苯基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯 529 A--基)丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(1-(2-(5-(二甲基氨基甲酰基)呋喃-2- 基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基) 570 A--嘧啶-4-基)苯基)丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-(噻吩-2-基)苯 基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯 533 基)丙酸 A(1.61)
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-(噻吩-2-基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 518 A(1.65)
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-(噻吩-3-基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙 518 酸 A(3.76)
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-(4-甲基噻吩-2-基)苯 基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯 532 基)丙酸 A(3.88)
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-2，2，2-三氟-1-(4-(6-氟吡啶-3-基) 苯基)乙氧基)嘧啶-4-基) 528 苯基)丙酸 A(2.96)
(2S)-3-(4-(6-(1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)-2-氨 基嘧啶-4-基)苯基)-2-氨基 499 丙酸 A(2.07)
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2，2，2-三氟-1-(4-(噻吩-2-基)苯基)乙氧基)嘧 啶-4-基)苯基)丙酸 500 A(3.74)
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-2，2，2-三氟-1-(4-(嘧啶-5-基)苯基) 乙氧基)嘧啶-4-基)苯基) 511 丙酸 A(2.67)
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(1-(2-(3，5-二甲基异噁唑-4-基)-4-氟苯 基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基) 531 苯基)丙酸 A(1.55)
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-2，2，2-三氟-1-(4-(2-甲基吡啶-4- 基)苯基)乙氧基)嘧啶-4-基) 524 苯基)丙酸 A(2.28)
(2S)-3-(4-(6-(1-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基) 嘧啶-4-基)苯基)-2-氨基丙 485 酸 A(1.24)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-(哌啶-1-基甲基)苯 基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯 530 基)丙酸 B(3.00)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-氟-4-(2-甲基吡啶 -4-基)苯基)乙氧基)嘧啶-4-基) 542 苯基)丙酸 A(2.42)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(1-(4-(6-氯哒嗪-3-基)苯基)-2，2，2-三 氟乙氧基)嘧啶-4-基)苯 545 基)丙酸 A(3.33)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(1-(4-(4-叔-丁基噻唑-2-基)苯 基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基) 572 苯基)丙酸 A(1.82)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(3′-甲氧基-3-(3-甲基 -1H-吡唑-1-基)联苯-4-基) 619 乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 A(3.54)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(1-(5-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯 基)-2，2，2-二氟乙氧基)嘧 547 啶-4-基)苯基)丙酸 A(3.20)

[0357] 40.体外抑制分析

[0358] 人TPH1、TPH2、酪氨酸羟化酶(TH)和苯丙氨酸羟化酶(PH)均利用分别具有下列登录号的基因生成：X52836，AY098914，X05290，和U49897。

[0359] 人TPH1的全长编码序列克隆至细菌表达载体pET24(Novagen，Madison，WI，USA)中。将包藏表达载体的单菌落BL21(DE3)细胞接种至50ml L肉汤(LB)-卡那霉素培养基
并在37℃振荡生长过夜。然后将一半培养物(25ml)转移至3L培养基，所述培养基含有
1.5％酵母提取物、2％Bacto蛋白胨、0.1mM色氨酸、0.1mM硫酸亚铁铵、和50mM磷酸盐缓冲
液(pH 7.0)，并在37℃下，补充40％氧，维持pH 7.0，和增加葡萄糖，培养物生长至OD600＝
6。利用15％D-乳糖，在25℃下用10小时时间诱导TPH1的表达。细胞旋转沉降，并以磷
酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤一次。

[0360] 基于其与蝶呤的结合，TPH1通过亲和色谱纯化。细胞团重悬浮于裂解缓冲液(100ml/20g)，所述裂解缓冲液含有50mM Tris-Cl，pH 7.6，0.5M NaCl，0.1％Tween-20，2mM
EDTA，5mM DTT，蛋白酶抑制剂混合物(Roche Applied Science，Indianapolis，IN，USA)
和1mM苯甲基磺酰氟(PMSF)，细胞以微射流纳米均质机(microfluidizer)裂解。裂解液
离心，并将上清液上样至蝶呤偶联的琼脂糖凝胶4B柱上，该柱以含有50mM Tris，pH 8.0，
2M NaCl，0.1％Tween-20，0.5mM EDTA，和2mM DTT的缓冲液平衡。该柱以50ml该缓冲液
洗涤，并且TPH1以缓冲液洗脱，所述缓冲液含有30mM NaHCO3，pH 10.5，0.5M NaCl，0.1％
Tween-20，0.5mM EDTA，2mM DTT，和10％甘油。洗脱的酶立即以200mM KH2PO4，pH 7.0，0.5M
NaCl，20mM DTT，0.5mMEDTA，和10％甘油中和，并存储于-80℃。

[0361] 基本上以相同方式表达和纯化人色氨酸羟化酶II型(TPH2)、酪氨 酸羟化酶(TH)和苯丙氨酸羟化酶(PAH)，除在生长期间对TH而言细胞补充酪氨酸和对PAH而言补充苯丙
氨酸之外。

[0362] 在反应混合物中测量的TPH1和TPH2活性，所述混合物含有50mM 4-吗啉丙磺酸(MOPS)，pH 7.0，60μM色氨酸，100mM硫酸铵，100μM硫酸亚铁铵，0.5mM三(2-羧乙基)膦
(TCEP)，0.3mM 6-甲基四氢蝶呤，0.05mg/ml过氧化氢酶，和0.9mM DTT。添加TPHl至终浓
度7.5nM，开始反应。通过跟随360nm(激发波长＝300nm)处的荧光变化，确定反应的初始
速度。通过测量不同化合物浓度下它们的活性，确定TPH1和TPH2抑制，并利用下列方程计
算给定化合物的效力：

[0363]

[0364] 其中v是给定化合物浓度C的初始速度，v0是C＝0时的v，b是背景信号，D是接近等于1的Hill斜率，以及Ic50是化合物抑制最大酶活性一半的浓度。

[0365] 通过测量分别利用L-[3，4-3H]-酪氨酸和L-[4-3H]-苯丙氨酸生成的 3H2O的量，确定人TH和PAH活性。首先将酶(100nM)与其0.1mM底物温育约10分钟，并添加至反应混合
物，所述混合物含有50mMMOPS，pH 7.2，100mM硫酸铵，0.05％Tween-20，1.5mM TCEP，100μM
硫酸亚铁铵，0.1mM酪氨酸或苯丙氨酸，0.2mM 6-甲基四氢蝶呤，0.05mg/ml过氧化氢酶，和
2mM DTT。让反应继续10-15分钟，并通过添加2M HCl终止。然后，该混合物经过活性炭过
滤，并通过闪烁计数确定滤液的放射活性。利用该分析确定化合物对TH和PAH的活性，并以
对TPH1和TPH2相同的方式计算。

[0366] 64.基于细胞的抑制分析

[0367] 两种类型的细胞系用于筛选：RBL2H3是大鼠肥大细胞瘤细胞系，其含有TPH1，并自发制备5-羟色胺(5HT)；BON是人类癌细胞系，其含有TPH1，并制备5-羟基色氨酸(5HTP)。
CBA是以96-孔板形式进行 的。HPLC中所用的流动相含有97％100mM乙酸钠，pH 3.5和
3％乙腈。Waters C18柱(4.6×50mm)与Waters HPLC(型号2795)一起使用。通过设定
280nm作为激发波长，和360nm作为发射波长，多通道荧光计(型号2475)用于监控通流。

[0368] RBL CBA：细胞在完全培养基(含有5％牛血清)中生长3-4小，使细胞附着于板孔(7K细胞/孔)。然后将化合物以0.016μM-11.36μM的浓度范围添加至各孔。对照是在没
有任何化合物的完全培养基中的细胞。37℃下孵育3天后收集细胞。细胞在没有化合物时
＞95％汇合。从板中除去培养基，细胞以等体积的0.1N NaOH裂解。大部分的细胞裂解物
通过与等体积的1M TCA混合处理，然后通过玻璃纤维过滤。滤液上样至反相HPLC，用于分
析5HT浓度。小部分的细胞裂解物也被取出，以测量细胞的蛋白浓度，该浓度反映化合物在
使用浓度下的细胞毒性。利用BCA方法测量蛋白浓度。

[0369] 根据上述方程，在未经化合物处理的细胞中5HT的平均水平用作IC50推导中的最大值。5HT的最小值或者设定为0，或者来自以最高浓度的化合物处理的细胞，如果该浓度
的化合物没有细胞毒性。

[0370] BON CBA：细胞在等体积的带有5％牛血清的DMEM和F12K中生长3-4小时(20K细胞/孔)，并加入0.07μM-50μM浓度范围的化合物。细胞于37℃下孵育过夜。然后取
出50μM培养物上清，用于5HTP测量。上清与等体积的1M TCA混合，然后通过玻璃纤维过
滤。将滤液上样至反相HPLC上，用于5HTP浓度测量。利用Promega的Celltiter-Glo发
光细胞活力分析，通过处理剩余细胞，测量细胞活力。然后，以与RBL CBA中的相同方式计
算化合物效力。

[0371] 42.体外效果

[0372] 利用上述方法，测试化合物体外抑制人TPH1的能力。数据提供在下表2：

[0373] 表2

[0374]化合物 IC50(μM)
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯 基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯 0.068基)丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-(吡啶-4-基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.0352
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-(吡啶-3-基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.0327
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(2-甲基吡啶-4-基)苯 基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯基) 0.0362丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(4-甲基噻吩-3-基)苯 基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯基) 0.1891丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2，2，2-三氟-1-(2-(吡啶-4-基)苯基)乙氧基)嘧啶 -4-基)苯基)丙酸 0.0214
(2S)-3-(4-(6-(1-(2-(1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)-2-氨基嘧 啶-4-基)苯基)-2-氨基丙酸 0.0031
(2S)-3-(4-(6-(1-(2-(1H-咪唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)-2-氨基嘧 啶-4-基)苯基)-2-氨基丙酸 0.0209
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-(呋喃-3-基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.3592
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-(呋喃-2-基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.4562
(2S)-3-(4-(6-(1-(2-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)-2- 氨基嘧啶-4-基)苯基)-2-氨 0.0143基丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(呋喃-3-基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.0415
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-(呋喃-2-基)-3-甲氧基 苯基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯 0.3583基)丙酸
(2S)-3-(4-(5-(1-(2-(1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)吡嗪-2- 基)苯基)-2-氨基丙酰胺 0.1839
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2，2，2-三氟-1-(2-(呋喃-3-基)苯基)乙氧基)嘧啶 -4-基)苯基)丙酰胺 0.1025
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(4-甲基-1H-吡唑-1-基) 苯基)乙氧基)嘧啶-4-基) 0.0122苯基)丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(噻唑-2-基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.0115
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-(噻吩-3-基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.052
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(1-(2-(5-(二甲基氨基甲酰)呋喃-2-基)苯 基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧 0.2845啶-4-基)苯基)丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-(噻吩-2-基)苯基) 乙氧基)嘧啶-4-基)苯基) 0.1755丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-(噻吩-2-基)苯基)乙氧基) 嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.2096
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-(噻吩-3-基)苯基) 乙氧基)嘧啶-4-基)苯基) 0.2869丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-(噻吩-3-基)苯基)乙氧基) 嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.3262
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-(4-甲基噻吩-2-基) 苯基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯基) 0.5943丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2，2，2-三氟-1-(4-氟-2-(4-甲基噻吩-2-基)苯基) 乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 1.1832
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-2，2，2-三氟-1-(4-(6-氟吡啶-3-基)苯 基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙 0.219酸
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-2，2，2-三氟-1-(4-(异噁唑-4-基)苯基) 乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.1563
(2S)-3-(4-(6-(1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)-2-氨基嘧 啶-4-基)苯基)-2-氨基丙酸 0.1077
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-2，2，2-三氟-1-(4-(5-甲氧基吡啶-3-基) 苯基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯基) 0.0312丙酸
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-2，2，2-三氟-1-(4-(嘧啶-5-基)苯基)乙 氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸 0.0825
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(1-(2-(3，5-二甲基异噁唑-4-基)-4-氟苯基)-2，2，2- 三氟乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙 1.4637酸
(2S)-3-(4-(6-(1-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)-2- 氨基嘧啶-4-基)苯基)-2-氨基丙酸 0.3576
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(1-(2-(3，5-二甲基异噁唑-4-基)-4-氟苯 基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基) 0.5087苯基)丙酸
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-2，2，2-三氟-1-(2-(3-甲基-1H-吡唑-1- 基)苯基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯 0.0167基)丙酸
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-2，2，2-三氟-1-(4-(2-氟吡啶-4-基)苯 基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙 0.3575酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-氟-4-(2-甲基吡啶-4-基) 苯基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯基) 0.1464丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(2-氟-4-(5-甲氧基吡啶-3- 基)苯基)乙氧基)嘧啶-4-基)苯 0.2926基)丙酸
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((5-(1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基) 噻吩-2-基)甲氧基)嘧啶-4-基) 0.2897苯基)丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(1-(5-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯 基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基) 0.0919苯基)丙酸
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(5-氟-2-(3-甲基-1H-吡唑 -1-基)苯基)乙氧基)嘧啶-4-基) 0.0351苯基)丙酸
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-1-(4-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯 基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基) 0.0275苯基)丙酸
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-2，2，2-三氟-1-(5-氟-2-(3-甲基-1H-吡 唑-1-基)苯基)乙氧基)嘧啶-4-基) 0.0156苯基)丙酸
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-1-(5-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯 基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基) 0.0264苯基)丙酸

[0375] 43.体内5-羟色胺降低

[0376] (S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-1-(4-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸乙酯的体内效果是将它们配制成
溶液、然后口服给药确定的。一般而言，14-周龄雄性C57白化病小鼠通过口灌服5-10ml/
kg，每天给药一次，连续4天。最后一剂后5 小时，快速处死动物。每个动物用以异氟烷麻
醉，利用1ml注射器和255/8针，通过心脏穿刺法抽取血液，250μl血置于含有Capiject
EDTA的管中，维持轻轻旋转。然后动物去头，取出全脑，并速冻，清除掉空肠、回肠和结肠
的脂肪和腔内容物，速冻。5-HT从血液或组织抽提，并经装有在线荧光检测仪的高效液相
色谱(HPLC)测量。采集血液样品，用于暴露分析。利用实验动物管理和使用委员会(The
InstitutionalAnimal Care and Use Committee)批准的规程，实行所有动物研究。

[0377] 图1显示化合物对小鼠5-HT水平的剂量依赖性影响。

[0378] 44.对胃运输和排空的影响

[0379] 本 发 明 的 有 效 TPH1 抑 制 剂，(S)-2- 氨 基 -3-(4-(2- 氨基-6-((R)-1-(4-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-2，2，2-三氟乙氧基)嘧
啶-4-基)苯基)丙酸乙酯对胃肠(GI)运输时间和胃排空的影响在Sprague-Dawley大鼠
中确定。化合物以50，125和250mpk的剂量给药，口服，一天四次，为期14天。各服药组用
9只大鼠。还用9只大鼠作阴性对照组(仅给药介质)，而另有6只用作阳性对照(阿托
品)。

[0380] 大鼠以10ml/kg服药化合物或介质。阿托品仅在第14天给予至阳性对照组，而介质在第1-14天给予。研究全程采集体重和观测数据，第13天，炭餐前大鼠禁食过夜。第14
天，炭餐前30分钟，口服给药有效TPH1抑制剂、阿托品或介质。炭餐(介质中有5％炭)以
15ml/kg口服给药。炭餐服药后25分钟进行尸体剖检。通过测量炭餐沿小肠向下行走的距
离，将该距离除以小肠总长，确定GI运输时间。通过称重大鼠的胃，确定胃排空时间。

[0381] 如图2所示，施用有效TPH1抑制剂以剂量依赖性方式减缓了GI运动性。如图3所示，其还以剂量依赖性方式减缓了胃排空。以及如图4所示，该化合物对GI运输和胃排空的
影响与5-HT水平在血液和近结肠中的变化相关。脑5-HT水平不受该化合物影响。

[0382] 上述所有出版物(例如，专利和专利申请)以其全文并入在此引作参考。