本发明涉及天然药物的分离提纯方法，尤其涉及一种模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法。模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法，该方法采用白芍总苷提取物作为原料，应用模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷，模拟移动床色谱的固定相采用C18硅胶，流动相采用甲醇或乙腈与水、甲酸、异丙醇的混合溶液，混合溶液中按体积百分计：甲醇或乙腈10％～50％、水50％～90％、甲酸0～1％、异丙醇0～2％，上述的各组分的总和为100％。本发明芍药内酯苷产品的收率高，纯度达到90％以上。由于模拟移动床色谱过程是连续过程，可以提高生产的自动化水平和生产效率，并使生产环境得到极大的改善，真正实现了清洁生产。
1.模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法，其特征在于：该方法采用白芍总苷提取物作为原料，应用模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷，模拟移动床色谱的固定相采用C18硅胶，流动相采用甲醇或乙腈与水、甲酸、异丙醇的混合溶液，混合溶液中按体积百分计：甲醇或乙腈 10％～50％水 50％～90％甲酸 0～1％异丙醇 0～2％
上述的模拟移动床由4～8根色谱柱组成，色谱柱分四个区域，每区由1～2支相同的色谱柱串联；进样液流速Up为2～20ml/min；洗脱液流速UE为5～～40ml/min；萃余液流速UR为2～20ml/min；萃取液流速UX为5～30ml/min；切换时间Ts为0.5～30min。
2.根据权利要求1所述的模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法，其特征在于混合溶液中按体积比例计：甲醇或乙腈 10％～50％水 50％～90％甲酸 0.05％～0.5％异丙醇 1％～2％。
3.根据权利要求1或2所述的模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法，其特征在于：白芍总苷提取物为通过提取纯化手段从白芍药材中提取得到，纯度为40％～90％。
4.根据权利要求1或2所述的模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法，其特征在于：进入模拟移动床色谱分离的白芍总苷提取物采用甲醇溶解，溶解后白芍总苷提取物的浓度为10～100mg/mL。
5.根据权利要求1所述的模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法，其特征在于：模拟移动床色谱系统的操作温度为20～60℃。
6.根据权利要求5所述的模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法，其特征在于：模拟移动床色谱系统的操作温度为20～40℃。
模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及天然药物的分离提纯方法，尤其涉及一种模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法。
背景技术
[0002] 芍药内酯苷作为具有抗炎、抗溃疡及免疫调节作用的白芍总苷(TGP)中的特征组分，是从白芍中提取得到的。由于在白芍中，除了芍药内酯苷，还含有芍药苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷和苯甲酰羟基芍药苷等多种苷类成分和其他杂质等多种组分，所以在芍药内酯苷的生产过程中，最关键的步骤就是分离提纯。目前在药物工业中常采用的精制手段，包括硅胶柱层析，树脂柱层析，凝胶柱层析等方法。以上设备简单，成本低，但是不足之处在于分离的效率较低，流动相和固定相的利用率较低，成本高，产量低，对于成分较复杂的物质不适合分离。此外，产品纯度和收率之间的矛盾在柱层析中得不到解决。要保持纯度，只有牺牲收率，这种低收率必将导致高成本。
[0003] 20世纪70年代初期，美国UOP公司开发了模拟移动床(SMBC)原理的色谱技术【模拟移动床色谱技术及其应用，色谱，第22卷，P111～115，2004年3月】，该技术使吸附剂颗粒装填后不在移动，由原料进出口和产品液进出口不断切换的方法，形成吸附剂颗粒和流动相相对逆流运动来模拟固定相的移动。该技术优点在于可以连续运转，填料更加有效利用，溶剂消耗大量减少，收集到的产品稀释度小。SMBC技术的发展从石油化工领域开始，其后是食品中的制糖工业，在20世纪末进入药物领域，并得到了快速的应用和发展。但是，对于芍药内酯苷的模拟移动床色谱制备工艺仍未见公开报道。
发明内容
[0004] 为了解决芍药内酯苷分离提取成本高、产量低的技术缺陷，本发明的目的在于提供应用模拟移动床色谱分离制备芍药内酯苷的方法，该方法连续生产，提高了产品的纯度和收率，并降低生产成本。
[0005] 为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：
[0006] 模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法，该方法采用白芍总苷提取物作为原料，应用模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷，模拟移动床色谱的固定相采用C18硅胶，流动相采用甲醇或乙腈与水、甲酸、异丙醇的混合溶液，混合溶液中按体积百分计：
[0007] 甲醇或乙腈 10％～50％
[0008] 水 50％～90％
[0009] 甲酸 0～1％
[0010] 异丙醇 0～2％
[0011] 上述的各组分的总和为100％。
[0012] 本发明的流动相中可以加入甲酸和异丙醇，用以调整芍药内酯苷的峰型，减少拖尾，使它和芍药苷在进样浓度较大的情况下能达到较好的基线分离，从而通过SMBC得到纯度较高的芍药内酯苷。作为优选，上述混合溶液中按体积比例计：
[0013] 甲醇或乙腈 10％～50％
[0014] 水 50％～90％
[0015] 甲酸 0.05％～0.5％
[0016] 异丙醇 1％～2％。
[0017] 上述的各组分的总和为100％。
[0018] 上述的白芍总苷提取物可以通过提取纯化手段从白芍药材中提取得到，主要成分为芍药内酯苷和芍药苷。作为优选，白芍总苷提取物的纯度为40％～90％。
[0019] 作为优选，上述进入模拟移动床色谱分离的白芍总苷提取物采用甲醇溶解，溶解后白芍总苷提取物的浓度为10～200mg/mL。
[0020] 作为优选，上述的模拟移动床由4～8根色谱柱组成，色谱柱分四个区域，每区由1～2支相同的色谱柱串联。作为优选，进样液流速Up为2～20ml/min；洗脱液流速UE为
5～40ml/min；萃余液流速UR为2～20ml/min；萃取液流速UX为5～30ml/min；切换时间Ts为0.5～30min。
[0021] 作为优选，上述的模拟移动床色谱系统的操作温度为20～60℃。再优选，模拟移动床色谱系统的操作温度为20～40℃。
[0022] 本发明由于采用了上述的技术方案，芍药内酯苷产品的收率高，纯度达到90％以上。由于模拟移动床色谱过程是连续过程，可以提高生产的自动化水平和生产效率，并使生产环境得到极大的改善，真正实现了清洁生产。
附图说明
[0023] 图1为本发明模拟移动床色谱的结构示意图。
[0024] 图2为本发明芍药内酯苷的HPLC图谱。
具体实施方式
[0025] 下面对本发明的具体实施方式做一个详细说明。模拟移动床色谱分离制备芍药内酯苷的方法，该方法包括以下的步骤：
[0026] 一、样品溶液的制备
[0027] 通过乙醇回流提取和硅胶柱层析分离，从白芍药材中制得含芍药苷80％的白芍总苷提取物(TGP)。将得到的TGP样品溶于甲醇溶液中，沉降，经0.45μm滤膜过滤得浓度为100mg/mL的溶液，将此作为SMBC的进样液。此过程可以除去部分不可逆吸附的杂质，从而防止其对SMBC系统中色谱柱的污染，延长色谱柱的使用寿命。
[0028] 二、色谱柱填装与流动相的组成
[0029] 用匀浆法填装8根色谱柱(10mm×100mm)，填料为反相C18硅胶，粒径5～10μm，孔径100～ 流动相中甲醇与水、甲酸、异丙醇的体积比例为30∶70∶0.1∶1.5。
[0030] 当然，上述的流动相也可以采用甲醇与水的混合液，甲醇与水的体积比例为30∶70。或者，流动相采用甲醇与水、甲酸的混合液，甲醇与水、甲酸的体积比例为30∶70∶1。
[0031] 三、模拟移动床色谱系统(SMBC)
[0032] SMBC系统包括进样泵、洗脱液泵、萃取泵、萃余泵和循环泵、旋转阀和色谱柱。如图1所示，阿拉伯数字为色谱柱编号，样品溶液和洗脱液分别从样品液入口与洗脱液入口注入色谱系统(如图1实线箭头所指位置)。每隔一定时间，样品液和洗脱液入口、萃取液和萃余液出口同时沿流动相方向切换至下一根色谱柱出口(如图1虚线箭头所指位置)。经过SMBC的分离，从萃取液出口可获得高纯度的芍药内酯苷，从萃余液出口则可获得较高纯度的芍药苷。
[0033] 四、模拟移动床色谱参数
[0034] 本发明方法中的模拟移动床由8支色谱柱组成4个区域，经电磁阀切换改变进料口、出料口位置。进样液流速：Up＝4～10ml/min；洗脱液流速：UE＝10～20ml/min；萃余液流速：UR＝5～10ml/min；萃取液流速：UX＝10～20ml/min；切换时间：Ts＝1～5min。操作温度范围为20～40℃。
[0035] 五、浓缩
[0036] 将萃取液和萃余液分别用薄膜旋转蒸发器浓缩至无醇味，用乙醇洗出后在真空干燥箱烘干至恒重。
[0037] 六、成品检验
[0038] Agilent 1100高效液相色谱系统，二极管阵列检测器，Hypersil-C18柱-1(250mm×4.6mm i.d，5μm)，流动相为乙腈和水(体积比为30∶70)，流速1.0ml·mL ，柱温40℃，检测波长230nm，检测图谱如图2所示。通过外标法测定成品中芍药内酯苷的纯度为90％以上。
