一种柠檬苦素类物质的提取方法

摘要

本发明涉及一种从柠檬籽中提取柠檬苦素类物质的方法。它是将柠檬籽作为原料，按下列步骤进行提取：原料粉碎后加水和酶制剂进行酶解；静置，弃去酶解液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再采用吸附层析分离出浸提液中的柠檬苦素类物质，经干燥制得。本发明充分利用柠檬产品废弃物——柠檬籽作为原料，这样不仅将生产过程中产生的废弃物进行充分利用，降低了对原材料的浪费，减少了环境污染；且得到的柠檬苦素类物质含量高，其含量达到95％；其提取率达90％，比之现有提取技术提取率高30％；采用乙醇浸提、采用大孔树脂柱层析分离和硅胶色谱柱纯化，降低了生产成本。

权利要求

1. 一种柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于：它是将柠檬籽作为原料，按下列步 骤进行提取：原料粉碎后加水和酶制剂进行酶解，其中酶解是指粉碎后的柠檬籽中加入柠 檬籽3〜5倍重量的水，再加入酶制剂纤维素酶和果胶酶，它们在水中的量分别0. 3%〜 0. 6%和0. 5〜1. 0%，以重量百分比计；酶解充分后，静置2〜4h，弃去酶解液，将沉淀物中 加入95%乙醇搅拌混勻浸提1小时；收集滤液浓缩至60°C相对密度为1. 20〜1. 30 ；再将 浓缩滤液进行大孔树脂柱层析，用水洗脱去除具有极性的水溶性物质，再加入乙醇采用含 量20^30^^70%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70%洗脱液并浓缩；得到的浓缩洗脱液 进行硅胶色谱柱层析，用水洗至平衡，用乙醇洗脱，分段收集洗脱液并混合，最后浓缩、干燥 得柠檬苦素类物质。

2.如权利要求1所述的柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于：原料先干燥，再将其 粉碎至过60〜100目筛。

3.如权利要求1或2所述的柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于：所述酶解温度 为35〜45°C，时间5〜；所述吸附层析选用的大孔树脂柱为AB-8树脂，收集70%洗脱 液并减压浓缩；浓缩洗脱液进行硅胶色谱柱层析，用70%乙醇洗脱。

说明书

一种柠檬苦素类物质的提取方法

技术领域

[0001] 本发明涉及柠檬苦素类物质的提取方法，特别是涉及一种从柠檬籽中提取柠檬苦 素类物质的方法。

背景技术

[0002] 柠檬苦素类物质是指柠檬苦素及其类似物所组成的混合物，混合物中主要由柠檬 苦素、诺米林两种物质构成，它们都属三萜类的物质，是植物次生代谢的产物，主要存在于 多种芸香科和楝科植物中，也是引起柑橘类果汁苦味的主要物质，具有广泛的生物活性，如 杀虫、抗病毒、抗肿瘤形成和抑菌等作用。柠檬苦素类物质在抗癌、镇痛、调节体内胆固醇水 平，防止动脉粥样化和除虫等方面的作用，越来越受到人们的重视，但有关研究在国内刚刚 起步。由于柠檬苦素、诺米林结构相似，药理作用相同，所以统称为柠檬苦素类物质，通常两 者不用分离使用。现在市场上的柠檬苦素类物质主要是从甜橙籽或柚子籽中提取，提取得 到的柠檬苦素类物质价格昂贵，每千克近两万元。

[0003] 大家知道，在柠檬的加工过程中会产生众多的柠檬籽，它含有较多的柠檬苦素类 物质，但是目前却未对它加以合理利用，浪费严重且污染环境。

[0004] 目前对柠檬苦素类物质进行提取，常采用有机溶剂从甜橙籽或柚子籽中提取，所 用机溶剂为大量的石油醚。这种提取方法的成本高，有危险性，环境污染严重，且得到的柠 檬苦素类物质含量低，一般为80 %。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种从柠檬籽中提取柠檬苦素类物质的方法。这种方法制 备成本低、提取含量高。

[0006] 本发明的目的是这样实现的：一种柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于它是 将柠檬籽作为原料，按下列步骤进行提取：原料粉碎后加水和酶制剂进行酶解；静置，弃去 酶解液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再采用吸附层析分离出浸提液中的柠檬苦素类物质， 经干燥制得。

[0007] 为了便于粉碎，上述原料最好先干燥，再将其粉碎至过60〜100目筛。如果过细， 细粉容易结块，粘在一起，不易和酶制剂混合均勻，如果太粗，则酶解时间长，柠檬苦素类物 质释放也不充分。

[0008] 上述酶解是指粉碎后的柠檬籽中加入柠檬籽3〜5倍重量的水，再加入酶制剂纤 维素酶和果胶酶，它们在水中的量分别0. 3%〜0. 6%和0. 5〜1. 0%，以重量百分比计。加 入酶制剂，一方面是造成柠檬籽的细胞壁、果胶、纤维素的分解，而使柠檬苦素类物质释放； 同时柠檬籽中有约30%的柠檬苦素类物质，都是糖苷的形式存在，如柠檬苦素糖苷，诺米林 糖苷等，糖苷易溶于水，在现有提取过程中，因没有经酶制剂将糖苷水解为苷元形式，由于 糖苷和苷元的溶解性差异而没能提取，造成提取率低下，而在本发明加入的酶制剂可促使 柠檬苦素糖苷，诺米林糖苷等糖苷的糖苷键发生酶解而断裂，形成不溶于水的柠檬苦素、诺3米林等苷元，从而提高提取率。

[0009] 酶解充分后，静置2〜4h，弃去酶解液，将沉淀物加入95%乙醇搅拌混勻浸提1小 时；收集滤液浓缩至60°C相对密度为1. 20〜1. 30，再将浓缩滤液进行吸附层析分离提取柠 檬苦素类物质。吸附层析选用大孔树脂柱层析。

[0010] 为了进一步提高柠檬苦素类物质的纯度，上述浓缩液进行大孔树脂柱层析后，还 通过硅胶色谱柱层析进行分离纯化。

[0011] 具体地说，它是将柠檬籽作为原料，包括原料干燥，粉碎至60〜100目，加水和酶 制剂进行酶解提取得酶解液；酶解充分后，静置2〜4h，弃去酶解液，在沉淀物中加入95% 乙醇搅拌混勻浸提1小时，收集滤液；将滤液浓缩至60°C的相对密度为1. 20〜1. 30 ；再将 浓缩的滤液进行大孔树脂柱层析，用水洗脱去除具有一定极性水溶性物质，再加入乙醇进 行梯度洗脱，收集洗脱液并浓缩；得到的浓缩洗脱液进行硅胶色谱柱层析，用水洗至平衡， 用乙醇洗脱，分段收集洗脱液并混合，最后浓缩、干燥得柠檬苦素类物质。

[0012] 上述酶解温度为35〜45°C，时间5〜7小时；上述大孔树脂柱为AB_8树脂，采用 含量20 %、40 %、70 %的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70 %洗脱液并减压浓缩；浓缩洗脱液 进行硅胶色谱柱层析，用70%乙醇洗脱。

[0013] 本发明的有益效果为：

[0014] 1、发明人充分利用柠檬产品废弃物——梓檬籽作为原料，这样不仅将生产过程中 产生的废弃物进行充分利用，降低了对原材料的浪费，减少了环境污染；同时，还提高了柠 檬的附加值及工业生产的产值。发明人首创从柠檬籽中提取柠檬苦素类物质，且得到的柠 檬苦素类物质含量高，采用反相高效液相色谱法，使用C18色谱柱，以甲醇和水的混合液作 流动相，紫外检测器检测测定柠檬苦素类物质，其总含量达到95% (其中柠檬苦素50%以 上、诺米林达30%以上）。

[0015] 2、本发明采用的酶解提取方式，不同于现有技术常用的普通有机溶剂浸提工艺。 采用酶解技术可提高柠檬苦素类物质的释放，同时有利于将糖苷分解为统一的苷元，提高 收率；提取率达90 %，比之现有提取技术提取率高30 %。

[0016] 3、采用乙醇浸提、采用大孔树脂柱层析分离和硅胶色谱柱纯化，避免目前常用有 机溶剂提取法中使用大量有机溶剂而带来的高成本、危险性、以及环境污染问题。

具体实施方式

[0017] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明方法，但是本发明方法并不因此而限制 在所述实施例的范围内。

[0018] 实施例1 ：一种柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于：它是将柠檬籽作为原 料，原料先干燥再粉碎至过60目筛；

[0019] 加入原料4倍量的水、0. 4%纤维素酶和0. 8%果胶酶在35°C，酶解时间7小时，提 取得酶解液，这样可以分解细胞壁中的纤维素和果胶，使柠檬籽中的柠檬苦素类物质充分 释放出来，同时有利于将能溶于水的柠檬苦素类物质糖苷水解为柠檬苦素苷元，以利于后 处理；

[0020] 酶解充分后，静置2〜4h，弃去酶解液，在沉淀物中加入4-6倍重量的95 %乙醇搅 拌混勻浸提1小时，收集滤液；将滤液浓缩至60°C的相对密度为1. 20〜1. 30 ；再将浓缩的4滤液用AB-8树脂柱层析，用水洗脱去除具有极性的水溶性物质，再加入含量分别为20%、 40%、70%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70%洗脱液并减压浓缩；得到的浓缩洗脱液进 行硅胶色谱柱层析，用水洗至平衡，用乙醇洗脱，分段收集含有柠檬苦素类物质的洗脱液并 混合，最后浓缩、干燥得柠檬苦素类物质。

[0021] 所得的柠檬苦素类物质经检测，其总含量为96%。

[0022] 实施例2 ：—种柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于：将柠檬籽清洗，干燥，粉 碎至过60〜100目筛，用3倍原料量的水，加入0. 5%纤维素酶（15u/mg)和0. 9%果胶酶 (1. 8u/mg)进行酶解，温度40°C，时间Mi ；酶解充分后，静置2〜4h，弃去上层酶解液，在沉 淀物中加入5倍重量95%乙醇搅拌混勻浸提1小时，收集滤液；将滤液浓缩至60°C时相对 密度为1.20〜1.30 ；将浓缩滤液上大孔树脂柱（AB-8树脂）层析，用水洗脱，初步洗去水 溶性物质，加入乙醇至含醇量20 %、40 %、70 %并收集70 %的洗脱液，将收集的70 %洗脱液 减压浓缩，将浓缩的洗脱液再上硅胶色谱柱层析，用水洗至平衡，用70 %乙醇洗脱，分段收 集洗脱液，对各段收集洗脱液进行检测，将含有柠檬苦素类物质的洗脱液混合并减压浓缩， 最后进行喷雾干燥而制得柠檬苦素类物质。

[0023] 所得的柠檬苦素类物质经检测，其总含量为94%。