白芷香豆素提取物、制备方法及其质量检测方法

摘要

本发明提供了白芷香豆素提取物，其中，总香豆素的含量应不低于44.672mg/g，欧前胡素的含量应不低于68.623mg/g。本发明还提供了该提取物的提取方法和质量控制方法。本发明白芷香豆素提取物，提取纯度高，总香豆素的含量高，质量稳定，具有5-羟色胺调节作用，除了治疗偏头痛外，还可治疗5-羟色胺降低引起的其它疾病，药效明确，适应症针对性强，为临床提供了一种新的选择。

权利要求

1.白芷香豆素提取物，其特征在于：总香豆素的含量应不低于44.672mg/g，欧前胡素的含量应不低于68.623mg/g；其中，白芷香豆素提取物的制备方法是：a、取白芷药材，粒度为20目，加入75％乙醇热回流提取，提取液减压回收乙醇，浓缩；

b、将a步骤浓缩，加入石油醚萃取，弃去石油醚萃取层；萃余相加入乙酸乙酯萃取，合并萃取相，减压回收乙酸乙酯，即得白芷香豆素提取物。

2.根据权利要求1所述的白芷香豆素提取物，其特征在于：它的HPLC色谱如图1所示，含有14个共有指纹峰；

其色谱条件为：

色谱柱：Aichrom Reliasil C18色谱柱4.6mm×250mm，5μm，流动相：甲醇、水和四氢呋喃梯度洗脱，柱温：40℃，流速：1ml/min，波长：300nm，进样量：5μl，甲醇、水及四氢呋喃梯度洗脱时间和比例为：洗脱时间：0min，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为：水占60％，四氢呋喃8％，甲醇32％；洗脱时间：10min，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为：水占60％，四氢呋喃

8％，甲醇32％；洗脱时间50min，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为：水占20％，四氢呋喃16％，甲醇64％。

3.根据权利要求2所述的白芷香豆素提取物，其特征在于：所述的共有峰的平均相对保留时间min为：7.911、9.731、13.390、16.59、19.997、23.964、29.512、30.271、31.949、

34.525、37.298、39.161、39.957、42.096。

4.一种权利要求1所述的白芷香豆素提取物的质量检测方法，它是采用HPLC指纹图谱进行质量控制，其中，色谱条件为：色谱柱：Aichrom Reliasil C18色谱柱4.6mm×250mm，5μm，流动相：甲醇、水和四氢呋喃梯度洗脱，柱温：40℃，流速：1ml/min，波长：300nm，进样量：5μl，甲醇、水及四氢呋喃梯度洗脱时间和比例为：洗脱时间：0min，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为：水占60％，四氢呋喃8％，甲醇32％；洗脱时间：10min，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为：水占60％，四氢呋喃

8％，甲醇32％；洗脱时间50min，水、四氢呋喃、甲醇的重量百分比分别为：水占20％，四氢呋喃16％，甲醇64％。

5.一种制备权利要求1-3任一项所述的白芷香豆素提取物的方法，包括如下步骤：a、取白芷药材，粒度为20目，加入75％乙醇热回流提取，提取液减压 回收乙醇，浓缩；

b、将a步骤浓缩，加入石油醚萃取，弃去石油醚萃取层；萃余相加入乙酸乙酯萃取，合并萃取相，减压回收乙酸乙酯，即得。

说明书

白芷香豆素提取物、制备方法及其质量检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及白芷香豆素提取物及质量控制方法，属药物领域。

背景技术

[0002] 白芷为一种常用中药，具有驱风散寒、燥湿排脓之功效，常用于治疗风寒感冒、鼻渊头痛等症。《中国药典》2000年版收载的白芷为伞形科植物白芷Angelica
dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.或杭白芷A.dahurica(Fisch.ex Hoffm.)
Benth.etHook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan的干燥根。所含有效成分主要为
氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素等香豆素类化合物。白芷香豆素有抗炎、抑制前列腺素
E2的产生、抗组胺作用、光敏作用、对脂肪细胞的作用、对平滑肌的作用、抗微生物作用等
(见：杜兴旭等，中药白芷香豆素类成分的研究进展，井冈山学院学报(自然科学)，第26卷
第2期，2005年10月)；秦旭华等，川白芷总香豆素治疗偏头痛的部分药效学实验研究，四
川中医，2008年06期，报道中药白芷香豆素对硝酸甘油致实验性偏头痛的药效。目前尚无
相关白芷总香素提取物作为5-羟色胺调节剂的药物的文献报道。

[0003] 已有相关文献报道从中药白芷中提取香豆素类成分，如：张涵庆等运用硅胶柱层析方法从白芷的乙醚及乙醇提取物中分得硬脂酸、佛手柑内酯、水合氧化前胡素、欧前
胡素、异欧前胡素、别欧前胡素(alloimperatorin)、比克白芷素、氧化前胡素等香豆素成
分(张涵庆，袁昌齐，陈桂英，等.杭白芷根的化学成分的研究【J】.药学通报，1980，15k：
386.)，其中文献多针对具体化合物的报道，如黄欣，苏乐群，邵伟，等，白芷香豆素化合物的
成分分析及CO2超临界萃取工艺的研究.中国药房，2005，16(11)：824～825。而针对白芷
总香素的提取方法，目前报道了采用渗漉法进行提取，如：袁瑜，渗漉法提取白芷总香豆素
的工艺研究，时珍国医国药2008年第19卷第2期。该文献中报道了采用95％乙醇进行超
声波、热回流提取、渗漉法提取，其中渗漉法得到了总香豆素含量较高，但得到的总香豆素
提取物仅通过粗提取，未经纯化分离，得到的总香豆素的含量低，不能达到药用的要求。

[0004] 此外，目前报道的白芷的质量控制方法较多，如：张秀琴，徐礼檠.中药白芷中有效成分的极谱测定法.药物分析杂志，1983，3(4)：218；李宏 宇，戴跃进，谢成科，等.川
白芷中香豆素类成分的反相高效液相色谱分析.华西药学杂志，1990，5(4)：231；王立人，
李宏宇，谢成科.白芷中香豆精类成分的反相高效液相色谱测定.药学学报，1990，25(2)：
131，是采用品欧前胡素，异欧前胡素、氧化前胡素等总香豆素中的指标成分，欧前胡素、异
欧前胡素、氧化前胡素的紫外最大吸收波长表现各异，但均在254nm左右具有较宽的吸收
谱带；或以白芷中总香素的含量进行测定。由于天然药物有效部分中含有的成分复杂，仅仅
通过其中几种指标成分，不能准确判断有效部位的质量。

发明内容

[0005] 本发明的技术方案是提供了一种白芷香豆素提取物。本发明的另一技术方案是提供了该提取物的质量控制方法。

[0006] 本发明提供了白芷香豆素提取物，其中，总香豆素的含量应不低于44.672mg/g，欧前胡素的含量应不低于68.623mg/g。

[0007] 本发明提取物的HPLC色谱如图1所示，含有14个共有指纹峰；

[0008] 其色谱条件为：

[0009] 色谱柱：Aichrom Reliasil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：甲醇、水和四氢呋喃梯度洗脱，柱温：40℃，流速：1ml/min，波长：300nm，进样量：5μl，甲醇、水及四氢
呋喃梯度洗脱时间和比例为：

[0010]洗脱时间(min) A水(％) B四氢呋喃(％) C甲醇(％)
0 60 8 32
10 60 8 32
50 20 16 64

[0011] 其中，所述的共有峰的平均相对保留时间(min)为：7.911、9.731、13.390、16.59、19.997、23.964、29.512、30.271、31.949、34.525、37.298、39.161、39.957、42.096。

[0012] 本发明还提供了一种控制白芷香豆素提取物的质量的方法，它是采用HPLC指纹图谱进行质量控制，其中，色谱条件为：

[0013] 色谱柱：Aichrom Reliasil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：甲醇、水和四氢呋喃梯度洗脱，柱温：40℃，流速：1ml/min，波长：300nm，进样量：5μl，甲醇、水及四氢
呋喃梯度洗脱时间和比例为：

[0014]洗脱时间(min) A水(％) B四氢呋喃(％) C甲醇(％)
0 10 50 60 60 20 8 8 16 32 32 64

[0015] 本发明还提供了一种制备所述的白芷香豆素提取物的方法，包括如下步 骤：

[0016] a、白芷55-95％乙醇提取液减压回收乙醇，浓缩；

[0017] b、将a步骤浓缩，加入石油醚萃取，弃去石油醚萃取层；萃余相加入乙酸乙酯萃取，合并萃取相，减压回收乙酸乙酯，即得。

[0018] 其中，a步骤所述的白芷药材粒度为：20目，乙醇提取为75％乙醇热回流提取。

[0019] 本发明白芷香豆素提取物，提取纯度高，总香豆素的含量高，质量稳定，具有5-羟色胺调节作用，除了治疗偏头痛外，还可治疗5-羟色胺降低引起的其它疾病，药效明确，适
应症针对性强，为临床提供了一种新的选择。

[0020] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

附图说明

[0021] 图1标注共有峰的样品HPLC色谱图

[0022] 图210批样品的HPLC指纹图谱

[0023] 图3白芷粒度考察结果

具体实施方式

[0024] 实施例1本发明白芷香豆素的制备

[0025] 称取白芷药材粗粉(20目)5000g，共10份，分别加入8倍量75％的乙醇回流提取3次，每次3小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，将药液减压浓缩至浓度为每ml相当于
2g药材，放冷，分别加入2倍量石油醚萃取1次后，弃去石油醚层(即萃取相)，萃余相再分
别加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入2倍量乙酸乙酯，合并萃取相，减压回收乙酸乙酯，将浸
膏进行真空浓缩干燥，即得川白芷香豆素提取物。

[0026] 由于白芷总香豆素是一大类已知成分和未知成分组成的混合物，直接通过香豆素类成分的理化性质，是很难从植物中提取出含量高，纯度高、质量稳定的总香豆素。以下实
施例说明提取工艺中各参数选择的实验依据。

[0027] 实施例2川白芷香豆素的提取工艺筛选试验

[0028] 1、仪器与材料

[0029] 1.1仪器

[0030] 752型紫外分光度计(上海光谱仪器有限公司)；IS09001电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；KQ-100DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；
HA121-50-01型超临界CO2萃取装置(江苏华安超临界萃取有限公司)；RE-52A旋转蒸发仪
(上海亚荣生化仪器厂)；SHB-3循环式真空泵(郑州杜甫仪器厂)；HH-S数显恒温水浴锅
(江苏省金坛市医疗仪器厂)；SL500锈钢渗漉罐(衡阳市金山中药设备制造有限公司)；
DHG-9070A电热衡温鼓风干燥箱(上海齐欣仪器有限公司)。

[0031] 1.2材料

[0032] 甲醇、乙醇均为分析纯(成都科龙试剂厂)；95％医用酒精；欧前胡素对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号：110826-200511)，川白芷购自遂宁、绵阳市、阆中
市中药材公司，经成都中医药大学中药鉴定教研室马逾英教授鉴定为伞形科植物川白芷
Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.的干燥根.。

[0033] 2、实验方法与结果

[0034] 2.1药材产地的确定

[0035] 白芷是四川的道地药材，近年来，省内许多地区都开展了白芷生长、抚育及引种技术的研究，造成了白芷药材质量参差不齐的现状，为了保证成品质量的稳定性和均一性，对
省内不同产地的川白芷提取的总香豆素的含量进行了测定，以确定最佳的产地。

[0036] 表1不同产地川白芷总香豆素含量测定结果

[0037]

[0038] 根据上述测定结果，遂宁产地川白芷药材中总香豆素含量相对高于绵阳和阆中的川白芷药材，故选择遂宁川白芷作为实验用药材。

[0039] 2.2不同川白芷香豆素提取方法的比较试验

[0040] 本实验以总香豆素含量为评价指标，对白芷的提取方法(超声波提取法、热回流法、渗漉法，以及超临界CO2萃取)进行系统、全面的比较，从而确定川白芷总香豆素的最佳
提取方法。

[0041] (1)实验方法

[0042] ①超声波提取法

[0043] 取白芷粗粉(过20目筛)500g，加8倍量75％乙醇，浸泡1小时，超声提取3小时(超声条件：功率500W，频率50KHz)，收集提取液，测定总香素含量。

[0044] ②热回流法

[0045] 取白芷粗粉(过20目筛)500g，加8倍量75％乙醇，热回流提取3小时，收集提取液，测定总香素含量。

[0046] ③渗漉法

[0047] 取白芷粗粉(过20目筛)500g，加8倍量75％乙醇，以1ml/min/Kg的速度渗漉，收集渗漉液，测定总香素含量。

[0048] ④超临界CO2萃取法

[0049] 取白芷粗粉(过20目筛)500g，加入超临界萃取装置中，进行超临界CO2萃取(萃取条件：温度50℃，压力30MPa，萃取3.5h，分离压力7.0MPa，萃取3小时)收集萃取液，测
定总香豆素含量

[0050] (2)实验结果

[0051] 对不同提取方法所得的提取液总香豆素含量进行比较。结果见表2。

[0052] 表2不同提取方法的比较

[0053]提取方法 总香豆素含量(mg/g)
超声波提取 6.480
热回流提取 10.971
渗漉法提取 9.020
超临界CO2萃取 7.514

[0054] 由上表可知，通过四种方法的比较，结果以热回流法提取所测白芷总香豆素含量最高，且该方法操作简单，适用于大生产研究，因此，选用热回流法提取。

[0055] 2.3川白芷乙醇回流提取吸醇率的考察

[0056] 称取川白芷粗粉100g，加500ml75％乙醇浸泡，观察药材润湿的情况，待药材全部浸透，滤出全部未被吸收的溶剂，计算吸醇率，结果见表3。

[0057] 表3川白芷吸醇率考察结果

[0058]

[0059] 以上结果表明：川白芷药材吸醇率为109.3％，故在川白芷乙醇回流提取时，药材第一次多加109.3％的确定浓度的乙醇。

[0060] 2.4川白芷回流提取药材粒度的考察

[0061] 为了考察川白芷药材总香豆素的提取效果与粒度的关系，分别对四种药材粒度(10目、20目、30目和40目)进行了考察。

[0062] (1)实验方法

[0063] 称取四种粒度(10目、20目、30目和40目)的药材各100g，加入8倍量75％的乙醇，回流提取3次，每次1h，收集提取液，测定总香豆素的含量。

[0064] (2)实验结果

[0065] 对不同药材粒度所得提取液总香豆素含量进行比较，其结果见表4、图3。

[0066] 表4药材粒度考察结果

[0067]药材粒度(目) 总香豆素含量(mg/g)
10 8.593
20 9.657
30 9.564
40 9.235

[0068] 上述结果表明：药材粒度为20目时，药材中总香豆素提取率相对较高，因此，采用粒度为20目的药材进行提取。

[0069] 2.5川白芷回流提取工艺研究

[0070] (1)实验方法

[0071] ①正交试验因素水平设计

[0072] 采用乙醇热回流法提取，选择乙醇浓度、乙醇用量、提取次数和提取时间四个主要4
影响因素，每个因素选择三个水平(见表5)，按L9(3)正交表安排试验(见表6)。每次试
验取白芷药材粉末(20目)20g，共计9份进行试验，以白芷总香豆素含量及干膏率为评价指
标，进行综合评分，其所占比例分别为80％、20％，从中筛选最佳乙醇提取工艺。

[0073] 表5因素水平表

[0074]因素 乙醇浓度(％) A 乙醇用量(倍) B 提取次数(次) C 提取时间(h) D
1 55 4倍 1 1
2 75 6倍 2 2
3 95 8倍 3 3

[0075] ②供试品溶液的制备

[0076] 称取白芷药材(20目)20g，按照正交试验表进行试验，提取液定容至100～500ml，分别吸取5ml于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，用甲醇溶解并定容至50ml，摇匀，分
别精密吸取0.8～2ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，以甲醇
为空白，于300nm处测定吸光度，并根据标准曲线计算白芷总香豆素含量。

[0077] (2)实验结果

[0078] 对正交试验结果采用中国医统软件包SPSS进行处理分析，结果见表6和表7。

[0079] 表6白芷醇提正交试验设计及结果

[0080]

[0081] 注：Z＝(y1/ymax)×20+(y2/ymax)×80

[0082] 表7方差分析表

[0083]

[0084] 注：F0.01(2，2)＝99 F0.05(2，2)＝19.0 F0.1(2，2)＝9

[0085] 从方差分析结果可以看出：川白芷乙醇回流提取的影响因素主次顺序为： C＞D＞A＞B。C因素的影响有显著意义(P＜0.05)，最佳条件为：A2B3C3D3，即加8倍量75％的
乙醇，提取3次，每次提取3h。

[0086] 2.6川白芷回流提取工艺验证试验

[0087] (1)实验方法

[0088] 为了验证上述结果的科学性、合理性和可行性，称取川白芷药材3份，各500g，按以上确定的最佳提取条件进行重复试验。

[0089] (2)实验结果

[0090] 验证试验结果见表8。

[0091] 表8验证试验结果

[0092]

[0093] 从上述验证试验结果可知：所筛选出的工艺合理可行，可操作性和重现性较好。

[0094] 实施例3川白芷香豆素分离纯化工艺的条件参数选择试验

[0095] 1仪器与材料

[0096] 1.1仪器

[0097] 752型紫外分光度计(上海光谱仪器有限公司)；RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；SHB-3循环式真空泵(郑州杜甫仪器厂)；HH-S数显恒温水浴锅(江苏省金
坛市医疗仪器厂)；ISO9001电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；Centrifuge冷冻离
心机(德国Eppendorf公司)；PHs-2c型酸度计(成都方舟科技开发公司)

[0098] 1.2材料

[0099] 氯仿、环己烷、乙醚、乙酸乙酯、石油醚，盐酸、氯化钠、碳酸氯钠及磷酸氯钠均为分析纯(成都科龙试剂厂)

[0100] 2、实验方法与结果

[0101] 2.1样品液制备

[0102] 根据实施例2的川白芷回流提取工艺，称取5kg川白芷药材，加8倍量75％的乙醇，提取3次，每次3h，合并提取液，减压回收乙醇至2500ml(即药液的 浓度为每ml药液相
当于2g药材，以下药液的浓度表示为2g/ml)，备用。

[0103] 2.2白芷香豆素分离纯化方法考察

[0104] 根据川白芷香豆素的理化性质和结构特点，选择了酸沉、碱溶酸沉、大孔树脂分离及有机溶剂萃取几种方法对白芷乙醇提取液进行分离纯化，并对影响各种纯化方法的主要
因素进行了考察，以川白芷总香豆素的含量及保留率为评价指标，对其纯化工艺进行优化，
筛选最佳分离纯化方法。

[0105] (1)酸沉分离法

[0106] ①pH值考察

[0107] 取上述样品液(2g/ml)20ml，共7份，分别调至不同pH值，置冰箱中放置过夜，离心(4000r/min)15分钟，测定沉淀中总香豆素含量并计算其保留率，从而筛选最佳pH值，结果
见表9。

[0108] 表9pH值考察结果

[0109]pH值 沉淀中香豆素含量 (％) 沉淀中香豆素保留率 (％)
1.0 20.02 70.89
2.0 23.88 71.25
2.5 23.96 75.29
3.0 23.98 76.48
3.5 22.02 72.25
4.0 22.12 69.57
4.5 21.83 68.45
原料液 6.82 100

[0110] 上述结果表明：酸沉效果较佳的pH值为2～3，且在此pH值范围内，香豆素含量和保留率均较高，因此将酸沉的pH值定为2～3。

[0111] ②温度考察

[0112] 将上述样品液(2g/ml)的pH调为2～3，取20ml，共6份，分别于0℃、10℃、20℃、30℃、40℃、50℃放置过夜，离心(4000r/min)15分钟，测定沉淀中总香豆素含量并计算总
香豆素保留率，其结果见表10。

[0113] 表10温度考察结果

[0114]温度(℃) 沉淀中香豆素含量 (％) 沉淀中香豆素保留率 (％)
0 20.02 71.25
10 22.88 70.68
20 23.17 75.88
30 22.93 76.32
40 21.59 72.91
50 20.02 69.83
原料液 6.82 100

[0115] 上述结果表明：静置温度在0～50℃范围内，无显著性差异，但静置温 度在20℃～30℃相对较佳，与室温接近，故将静置温度定为室温。

[0116] 但是：采用酸沉法处理时，沉淀中总香豆素的含量较低，保留率也较低，同时发现上清液所含的总香素较多，未能达到预期目标，因此，考虑采用其它方法进行纯化

[0117] (2)碱溶酸沉法

[0118] 该方法为香豆素的经典分离法之一，是由于香豆素具有酚羟基或内酯结构，能在碱溶液中解离或开环生成可溶性盐，加酸还原后恢复为内酯而不溶于酸水，而杂质在碱性
环境中不溶解或在碱性和酸性环境中都溶解，故可利用碱溶酸沉法将其分离出来。

[0119] ①碱的种类和浓度考察

[0120] 取上述样品液(2g/ml)20ml，共8份，分别加下述碱液100ml，热回流1小时，放冷，滤过，测定滤液中总香豆素的含量并计算总香豆素的保留率，筛选碱的种类和浓度，结果见
表11。

[0121] 表11碱的种类和浓度考察结果

[0122]碱种类 滤液中总香豆素含量(％) 滤液中总香豆素保留率(％)
0.5％NaOH 11.32 85.13
1％NaOH 3.01 44.84
0.1％NaOH 7.31 67.18
0.5％Ca(OH)2 2.31 31.42
5％Na2CO3 5.01 49.34
5％Na2HCO3 4.68 45.42
5％Na2HPO3 4.86 47.28
0.5％KOH 10.02 83.37
原料液 6.82 100

[0123] 上述结果表明：采用0.5％NaOH溶液进行溶解时，滤液中总香豆素含量及保留率相对较高，因此确定采用0.5％NaOH进行碱溶。

[0124] ②白芷乙醇提取液碱溶酸沉工艺考察：

[0125] 取上述样品液(2g/ml)20ml，共3份，分别加入100ml0.5％NaOH溶液，加热回流1h，冷却后，按酸沉的最佳纯化工艺条件进行酸沉(即调pH值2～3，室温静置过夜，离心
(4000r/min)15分钟，取沉淀部分，测定沉淀中总香豆素的含量并计算总香豆素的保留率，
结果见表12。

[0126] 表12白芷乙醇提取液碱溶酸沉工艺表

[0127]试验次数 沉淀中总香豆素含量(％) 沉淀中总香豆素保留率 (％)
1 24.81 74.72
2 26.54 79.59
3 26.97 80.63
原料液 6.82 100

[0128] [0128] 上述结果表明：碱溶酸沉工艺较稳定，但药液经酸沉后，沉淀较少。沉淀中总香素含量及保留率相对较低，与酸沉处理差异不大。

[0129] 碱溶过程中碱浓度过高或碱性较强时，总香豆素保留率较低，这可能是由于在强碱环境中长时间加热，内酯类成分结构被破坏，酸化后未能还原，仍然以盐的形式存在于溶
液中导致保留率低，同时采用碱溶酸沉法进行处理，对酸碱敏感的香豆素，可能无法得到原
存物质。因此，考虑采用其它方法进行纯化。

[0130] (3)大孔树脂吸附法

[0131] ①大孔树脂种类的考察

[0132] 吸取上述样品液(2g/ml)适量，稀释成浓度为每ml相当于0.5g药材的药液，取20ml，共5份，分别加于不同型号的大孔吸附树脂柱顶，先用水洗脱至无色，再以75％乙醇
洗脱至流出液无色，收集75％乙醇洗脱液，测定洗脱液中总香豆素含量并计算总香豆素的
保留率，结果见表13。

[0133] 表13大孔树脂种类考察结果

[0134]试验号 树脂型号 洗脱液香豆素含量 (％) 香豆素保留率 (％)
1 D101 16.23 50.14
2 SP70 15.35 42.86
3 AB-8 29.83 65.28
4 D2820 17.94 52.11
5 X-5 14.52 40.12
原药液 6.82 100

[0135] 上述结果表明：AB-8大孔树脂分离纯化效果较好，洗脱液中总香豆素含量有较大提高，为进一步提高总香豆素有效部位的相对含量和保留率，拟对影响吸附的其它因素进
行考察。

[0136] ②洗脱溶剂的考察

[0137] 吸取上述样品液(2g/ml)适量，稀释成浓度为每ml相当于0.5g药材的药液，取20ml，共4份，分别加于80mlAB-8大孔树脂柱顶，先用水洗脱至无色，再分别以45％乙醇、
60％乙醇、75％乙醇、90％乙醇洗脱至流出液无色，收集乙醇洗脱液，测定洗脱液总香豆素
含量并计算总香豆素的保留率，其结果见表14。

[0138] 表14洗脱溶媒考察结果

[0139]试验号 洗脱溶媒 洗脱液总香豆素含量(％) 香豆素保留率(％)
1 45％乙醇 8.63 28.31
2 60％乙醇 17.13 46.18
3 75％乙醇 29.67 64.25
4 90％乙醇 30.42 65.92
原药液 6.82 100

[0140] [0140] 以上结果表明：以45％乙醇作为洗脱溶剂，香豆素洗脱效果较差，大部分香豆素未被解吸，以75％、90％乙醇作为洗脱溶剂，香豆素洗脱效果较好、但保留率仍较低，
试验表明，用大孔吸附树脂除杂，有效物质损失较大，故考虑采用其它除杂方法来提高浸膏
中香豆素有效部位的含量和保留率。

[0141] (4)有机溶剂萃取法

[0142] 川白芷香豆素脂溶性较强，易溶于氯仿、环己烷、乙醚、乙酸乙酯、石油醚等有机溶剂，故考虑采用以上有机溶剂萃取进行药液的分离纯化，以川白芷总香豆素含量为指标，筛
选最优萃取工艺。

[0143] ①有机溶剂种类的筛选

[0144] 取上述样品液(2g/ml)20ml，共5份，分别加入氯仿、环己烷、乙酸乙酯、乙醚和石油醚进行萃取，萃取3次，每次加入40ml，合并萃取液，测定萃取相中总香豆素含量并计算
总香豆素保留率，结果见表15。

[0145] 表15有机溶剂萃取试验结果

[0146]溶剂种类 萃取相中总香豆素含量 (％) 萃取相中总香豆素保留率 (％)
氯仿 26.57 81.98
环己烷 9.85 13.28
乙酸乙酯 33.42 92.37
乙醚 30.24 84.32
石油醚 9.45 12.04
原料液 6.82 100

[0147] 上述结果表明：采用乙酸乙酯萃取，总香豆素含量及保留率较其它有机溶剂高。

[0148] 实验过程中发现采用上述有机溶剂进行萃取，所得萃取物中油脂性成份较多，以致总香豆素含量偏低，从上表结果可以看出，石油醚对川白芷香豆素类成分的萃取率不高，
而石油醚脱酯效果较好，因此，采用石油醚先进行脱酯处理，再使用上表中对总香豆素萃取
率较高的氯仿、乙酸乙酯和乙醚对石油醚的萃余相进行萃取。

[0149] ②与石油醚联用的有机溶剂的筛选

[0150] 取上述样品液(2g/ml)20ml，共3份，分别加入40ml石油醚萃取1次，弃去石油醚层(即萃取相)，萃余相再分别加入氯仿、乙酸乙酯和乙醚进行萃取，分别萃取3次，每次各
加入40ml，分别测定氯仿、乙酸乙酯和乙醚萃取液中川白芷总香豆素含量并计算总香豆素
的保留率，从而确定与石油醚联用萃取效果较好的有机溶剂，结果见表16。

[0151] 表16与石油醚联用有机溶剂考察结果

[0152]溶剂种类 萃取相中总香豆素含量 (％) 萃取相中总香豆素保留率 (％)
氯仿 43.87 71.11
乙酸乙酯 59.78 82.26
乙醚 47.52 74.73
原料液 6.82 100

[0153] 上述结果表明：提取液经石油醚萃取后，萃余相再用乙酸乙酯萃取，得到的总香豆素含量相对较高，同时乙酸乙酯的安全性高于氯仿和乙醚。因此，选用乙酸乙酯作为与石油
醚联用的有机溶剂。

[0154] ③石油醚-乙酸乙酯联用萃取工艺

[0155] 为了确定分离纯化的最佳工艺条件，对石油醚-乙酸乙酯联用萃取方法中的主要影响因素进行考察。

[0156] A石油醚萃取次数的考察

[0157] 取上述样品液(2g/ml)20ml，共3份，分别用石油醚萃取1次、2次、3次，每次加入石油醚40ml，分别测定不同萃取次数的萃余相中总香豆素含量并计算总香豆素的保留率，
以确定石油醚萃取次数，其结果见表17。

[0158] 表17石油醚萃取次数考察结果

[0159]萃取次数 (次) 萃余相中总香豆素含量 (％) 萃余相中总豆素的保留率 (％)
1 12.78 90.08
2 10.33 89.47
3 9.87 87.15
原料液 6.82 100

[0160] 上述结果表明：随着石油醚萃取次数的增加，萃余相中总香豆素的含量略有降低，这可能是由于随着石油醚用量增加，油脂成分被去除的同时，香豆素类成分损失增加，因
此，根据上表结果确定石油醚萃取次数为1次。

[0161] B石油醚用量的考察

[0162] 取上述样品液(2g/ml)20ml，共3份，分别加入20ml、40ml、60ml(即1倍量、2倍量、3倍量)石油醚萃取1次，弃去萃取相，测定萃余相中总香豆素含量并计算总香豆素的保留
率，以确定石油醚的用量，其结果见表18。

[0163] 表18石油醚用量考察结果

[0164]石油醚用量 (倍) 萃余相中总香豆素含量 (％) 萃余相中总豆素的保留率 (％)
1 10.95 91.08
2 12.63 90.28
3 12.97 89.35
原料液 6.82 100

[0165] 上述结果表明：石油醚用量为2倍量以上时，萃余相中总香豆素含量增 加较明显。但随着石油醚用量继续增加，香豆素含量变化不大，因此，从节约成本方面考虑，采用2
倍量石油醚进行萃取。

[0166] C乙酸乙酯用量的考察

[0167] 取上述样品液(2g/ml)共3份，各20ml，分别加入石油醚40ml萃取1次，弃去萃取相，萃余相再分别加入20ml、40ml、60ml(即1倍量、2倍量、3倍量)乙酸乙酯萃取1次，测
定萃取相中总香豆素含量并计算香豆素的保留率，以确定乙酸乙酯用量，其结果见表19。

[0168] 表19乙酸乙酯用量考察结果

[0169]乙酸乙酯用量 (倍) 萃取相中总香豆素含量 (％) 萃取相中总豆素的保留率 (％)
1 39.46 65.52
2 42.39 68.05
3 43.17 68.48
原料液 6.82 100

[0170] 上述结果表明：随着乙酸乙酯用量的增加，萃取相中总香豆素含量逐渐增加，但乙酸乙酯用量为2倍量以上时，香豆素的含量及保留率增加不再明显，因此，确定采用2倍量
的乙酸乙酯进行萃取。

[0171] D乙酸乙酯萃取次数考察

[0172] 取上述样品液(2g/ml)共3份，各20ml，分别加入石油醚40ml萃取1次，弃去萃取相，萃余相加入乙酸乙酯分别萃取1次、2次、3次，每次加入乙酸乙酯40ml，分别测定不同萃
取次数的萃取相中总香豆素含量并计算总香豆素的保留率，以确定乙酸乙酯萃取次数，其
结果表20。

[0173] 表20乙酸乙酯萃取次数考察结果

[0174]乙酸乙酯萃取次数 (次) 萃取相中总香豆素含量 (％) 萃取相中总豆素的保留率 (％)
1 43.39 68.05
2 52.02 73.96
3 58.78 82.65
4 59.25 83.12
原料液 6.82 100

[0175] 上述结果表明：乙酸乙酯萃取次数增加到3次以上时，萃取相中总香豆素的含量及保留率的增加不再明显，从节约成本和时间的角度考虑，确定乙酸乙酯萃取次数为3次。

[0176] E提取液浓度的考察

[0177] 取上述样品液(2g/ml)适量，分别稀释或浓缩到药液浓度为每ml相当于药材1g，2g，3g，各取20ml，分别加入石油醚40ml萃取1次，弃去萃取相，萃余相加入乙酸乙酯萃取3
次，每次加入乙酸乙酯40ml，测定乙酸乙酯萃取相中总香豆素的含量并计算总香豆素的保
留率，确定提取液的最佳浓度，结果见表21。

[0178] 表21提取液浓度的考察结果

[0179]药液浓度 (g/ml) 萃取相中总香豆素含量 (％) 萃取相中总豆素的保留 率(％)
1 46.18 66.30
2 57.03 85.28
3 53.96 81.03
原料液 6.82 100

[0180] 由上表结果可知：提取液浓度为每ml药液相当于2g药材时，川白芷总香豆素的含量及保留率较高，故确定提取液浓度为2g/ml。

[0181] 综上所述，川白芷香豆素分离纯化工艺的最佳条件为：白芷乙醇提取液减压回收乙醇，将药液减压浓缩至浓度为每ml相当于2g药材，放冷，加入2倍量石油醚，萃取1次，
弃去石油醚萃取层(即萃取相)，萃余相加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入2倍量乙酸乙酯，
合并萃取相，减压回收乙酸乙酯，即得。

[0182] 采用本发明方法制备的白芷香豆素提取物，药效明确，提取纯度高，总香豆素的含量高，质量稳定，可控性强，能达到药用的要求。

[0183] 实施例4本发明白芷香豆素提取物的含量测定

[0184] ①色谱条件

[0185] 色谱柱：Aichrom Reliasil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水-1
(70∶30)；流速1.0mL·min ；检测波长：300nm；柱温：35℃。

[0186] ②溶液的制备

[0187] A对照品溶液的制备

[0188] 精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.0521mg的溶液作为对照品溶液。

[0189] B样品供试液的制备

[0190] 称取实施例1川白芷香豆素有效部位样品0.101g(批号：061008)置50ml量瓶中，用甲醇溶解并定至刻度，精密量取2ml至10ml量瓶中，用甲醇稀释并定至刻度，摇匀，用
0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得样品供试液。

[0191] ③系统适用性试验

[0192] 分别吸取对照品溶液7μL、样品溶液10μL，按以上色谱条件注入液相色谱仪测定，记录色谱图。采用上述色谱条件，欧前胡素的保留时间为：11.5min，分离度大于1.5，可
见欧前胡素的分离效果较好。

[0193] 重现性试验

[0194] 按上述含量测定方法，对同一批样品(批号：061008)平行实验5次，测定样品中欧前胡素的含量，其结果见表22。

[0195] 表22样品重复性试验结果

[0196]

[0197] 上述结果表明：相对偏差RSD为0.52％＜2％，说明测定时样品供试液重现性良好。

[0198] ⑤白芷有效部位中总香豆素及欧前胡素的含量测定

[0199] 取10批样品(批号：061006、061008、061010、061012、061014、061016、061018、061020、061022、061024)，按UV含量测定方法和上述HPLC含量测定方法对川白芷香豆素提
取物进行总香豆素和欧前胡素含量测定，结果见表23。

[0200] 表23白芷有效部位提取物含量测定结果

[0201]批号 总香豆素含量(％) 欧前胡素含量(mg/g)
061006 54.955 85.295
061008 55.875 85.482
061010 56.692 86.369
061012 56.474 86.250
061014 55.837 85.479
061016 57.382 87.973
061018 56.297 86.213
061020 55.285 85.125
061022 54.567 84.440
061024 55.129 85.164
平均值 55.849 85.779

[0202] 以上结果表明：制备工艺条件较稳定，各批川白芷香豆素有效部位含量变化较小，总香豆素含量平均值为：55.849％，欧前胡素的平均值为：85.779％，以上述平均值的80％
计，暂定川白芷药材中总香豆素的含量应不低于44.672mg/g，欧前胡素的含量应不低于
68.623mg/g。

[0203] 实施例5川白芷香豆素有效部位的HPLC指纹图谱

[0204] (1)溶液制备

[0205] ①对照品溶液的制备

[0206] 精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每1ml含欧前胡素0.0521mg的溶液作为对照品溶液。

[0207] ②样品供试液的制备

[0208] 取川白芷香豆素有效部位样品(批号：061008)0.1g置50ml量瓶中，加甲醇溶解并定至刻度，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得样品供试液。

[0209] (2)色谱方法的建立

[0210] 川白芷香豆素有效部位HPLC指纹图谱研究的最佳色谱条件为：色谱柱：AichromReliasil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：甲醇、水和四氢呋喃梯度洗脱，柱温：
40℃，流速：1ml/min，波长：300nm，进样量：5μl。

[0211] (3)川白芷香豆素有效部位HPLC指纹图谱的建立与分析

[0212] ①供试品溶液的制备

[0213] 取川白芷香豆素有效部位样品(批号：061006、061008、061010、061012、061014、061016、061018、061020、061022、061024)各约0.1g，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并定至刻
度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得样品供试液。

[0214] ②川白芷香豆素有效部位指纹图谱的建立和相似度评价

[0215] a参照物选择

[0216] 欧前胡素为香豆素类成分，同时也是白芷中主要药效成分之一，含量较大，结构明确，在样品HPLC色谱图中，欧前胡素的色谱峰与相邻色谱峰分离度良好，峰位较居中，同时
是所有样品所共有的色谱峰，因此选择香豆素的主要指标成分欧前胡素(9号色谱峰)为白
芷有效部位指纹图谱的参照物。

[0217] b共有峰的确定

[0218] 按上述实验方法及色谱条件对10批样品进行测定，比较各样品的色谱图，找出其相对稳定的共有峰，以欧前胡素为参照峰(9号峰)，其它峰以阿拉伯数字按顺序标定，共标
定14个共有指纹峰，见图1。

[0219] c共有峰相对保留时间及相对峰面积的比较

[0220] 进行10批样品分析，以9号峰作为参照峰，各指纹峰的峰面积及相对峰面积、保留时间及相对保留时间均具有较好的重现性，RSD值均低于3％。共有峰的平均相对保留时间
(min) 为：7.911、9.731、13.390、16.59、19.997、23.964、29.512、30.271、31.949、34.525、
37.298、39.161、39.957、42.096，见图1。

[0221] d指纹图谱的建立

[0222] 将所得的10批样品HPLC色谱图数据用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版A”进行共有图谱拟合，结果见图2。

[0223] 由上图结果可知：10批样品的HPLC色谱峰的峰数、峰位、各峰面积之间均具有较高的相似性。

[0224] e指纹图谱相似度评价

[0225] 将所得的10批样品HPLC色谱图数据用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版A”进行全谱的相似度评价，结果见表24。

[0226] 表24白芷有效部位中间体指纹图谱的相似度结果

[0227]S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照指 纹图谱
S1 1 0.985 0.996 0.997 0.988 0.993 0.994 0.996 0.997 0.997 0.998
S2 0.985 1 0.984 0.986 0.998 0.983 0.98 0.99 0.984 0.987 0.991
S3 0.996 0.984 1 0.998 0.984 0.994 0.999 0.993 0.995 0.998 0.998
S4 0.997 0.986 0.998 1 0.987 0.994 0.996 0.995 0.998 0.998 0.999
S5 0.988 0.998 0.984 0.987 1 0.979 0.98 0.989 0.985 0.987 0.991
S6 0.993 0.983 0.994 0.994 0.979 1 0.993 0.992 0.996 0.993 0.996
S7 0.994 0.98 0.999 0.996 0.98 0.993 1 0.99 0.994 0.996 0.996
S8 0.996 0.99 0.993 0.995 0.989 0.992 0.99 1 0.992 0.997 0.997
S9 0.997 0.984 0.995 0.998 0.985 0.996 0.994 0.992 1 0.995 0.997
S10 0.997 0.987 0.998 0.998 0.987 0.993 0.996 0.997 0.995 1 0.999
对照 指纹 图谱 0.998 0.991 0.998 0.999 0.991 0.996 0.996 0.997 0.997 0.999 1[0228] 上述结果表明：10批样品相似度值分别为：0.998、0.991、0.998、0.999、0.991、
0.996、0.996、0.997、0.997、0.999、1(参照图谱)，10批样品相关系数＞0.99，具有较好的
相似度。

[0229] 本法选取10批样品建立共有模式，较好地保证了共有模式建立的代表性和科学性，样品指纹图谱中主要峰群的整体图貌基本一致，虽然不同批次川白芷香豆素提取物中
各成分含量的相对比值稍有差别，但相似度计算结果表明，10批样品相似度较高，相似度计
算结果均大于0.99，说明批次之间差异不明显，该指纹图谱能较全面的控制川白芷有效部
位的质量。

[0230] 通过上述实施例证明，采用本发明方法制备的白芷香豆素提取物，与其它提取方法和选择的条件参数相比，纯度更高，总香豆素的含量高，质量更稳定，能达到药用的要求。

[0231] 以下通过具体的药效学试验证明本发明的有益效果。

[0232] 试验例1川白芷总香豆素对低5-HT性偏头痛动物模型的影响

[0233] 1、材料

[0234] 1.1药物川白芷购于四川遂宁白芷GAP生产基地，川白芷总香豆素浸膏(由西华大学中药制剂教研室制备，总香豆素含量测定为55.8％)，实验时用蒸馏水(含0.5％吐
温-80助溶)配成所需浓度的混悬液备用。

[0235] 1.2试剂麦角胺咖啡因片，上海医药(集团)有限公司信谊制药总厂，生产批号20060401；利血平注射液，广东邦民制药厂有限公司，批号060308；其余药品试剂均为国产
分析纯。

[0236] 1.3仪器ACS-AA型电子计重秤，上海友声衡器有限公司；FA1004N电子天平(万分之一)，法国塞多利斯公司。

[0237] 1.4动物SD大鼠，雌雄兼用，体重180～200g；昆明种小鼠，全雌，体重18～20g；均由成都中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号scxk(川2004-11)。

[0238] 2、方法：

[0239] 2.1川白芷总香豆素对利血平化低5-HT型偏头痛动物模型的影响

[0240] 用热板法筛选符合实验的合格雌性昆明种小鼠60只(痛阈值大于10s，小于30s)，按体重分层随机分为5组，每组12只，分别为空白组、模型组、川白芷总香豆素高剂量
组、中剂量组、低剂量组。除空白组外，其余各组小鼠每只均皮下注射利血平10mg/kg，每日
一次，共14d后，实验组予川白芷总香豆素混悬液灌胃(给药剂量见表7)，空白组和模型组
给予等容积蒸馏水(含0.5％吐温-80)，每日一次，连续3d。于第3d给药后1h，热板法测
痛阈值。

[0241] 2.2统计学方法用《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包PEMS3.1进行。两两比较采用t检验，多组比较采用方差分析，方差齐性用LSD或Tukey等多重比较方法，
方差不齐用Tamhane′s T2多重比较方法。

[0242] 3、结果

[0243] 表25川白芷总香豆素对利血平化低5-HT型偏头痛模型小鼠痛阈值的影响(x±s，n＝10)

[0244]组别 动物数(只) 给药量(g/kg) 痛阈值(秒)
空白对照组 12 - 16.17±4.47
模型对照组 12 - 15.83±5.17
白芷总香豆素组 12 0.72Qd×3 21.67±5.28*
白芷总香豆素组 12 0.36Qd×3 18.83±6.63
白芷总香豆素组 12 0.18Qd×3 17.42±7.57

[0245] 注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

[0246] 表25结果显示：川白芷总香豆素高剂量组可明显提高模型小鼠的痛阈 值，与模型组比较有显著差异(P＜0.05)。

[0247] 4、讨论

[0248] 本次实验研究显示：在单胺类递质耗竭剂利血平诱导低5-HT性偏头痛小鼠模型上，川白芷总香豆素在0.72g/kg剂量下可明显提高小鼠的痛阈值(P＜0.05)，具有明确的
镇痛作用。

[0249] 试验例2川白芷总香豆素对五羟色胺及单胺氧化酶的影响

[0250] 1、材料

[0251] 1.1药物川白芷购于四川遂宁白芷GAP生产基地，川白芷总香豆素浸膏(由西华大学中药制剂教研室制备，总香豆素含量测定为55.8％)，实验时用蒸馏水(含0.5％吐
温-80助溶)配成所需浓度的混悬液备用。

[0252] 1.2试剂5-羟色胺硫酸肌酐，中国医药公司上海化学试剂采购站进口分装；其余试剂均为进口或国产分析纯。单胺氧化酶，由南京建成生物工程研究所提供。

[0253] 1.3仪器

[0254] 960CRT荧光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；751紫外分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；Heraeus BioFuge pico台式离心机(德国)；Heraeus BioFuge
stratos低温高速离心机(德国)；SANYO全自动制冰机(日本)；SANYO超低温冰箱(日
本)；超声波匀浆机，浙江省三门超声波仪器厂；ACS-AA型电子计重秤，上海友声衡器有限
公司；FA1004N电子天平(万分之一)，法国塞多利斯公司。

[0255] 1.4动物 昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18～20g；均由成都中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号scxk(川2004-11)。

[0256] 2、方法

[0257] 2.1实验方法

[0258] 取昆明种小鼠60只，按体重分层随机分为5组，每组12只，分别为空白组、模型组、川白芷总香豆素高剂量组、中剂量组、低剂量组。除空白组外，其余各组小鼠每只均皮下
注射利血平10mg/kg，共14d。从第7d起，实验组予川白芷总香豆素混悬液灌胃(给药剂量
见表14)，空白组和模型组予等容积蒸馏水(含0.5％吐温-80)，连续7d。于第14d给药后
1h，摘眼球取血，而后脱颈椎处死动物，迅速分离脑组织。

[0259] 2.2血和脑中5-HT和单胺氧化酶MAO测定的检测方法

[0260] 血和脑中5-HT按文献方法测定，单胺氧化酶测定按试剂盒说明书进行。

[0261] 脑中5-HT的测定具体方法如下：

[0262] 置少量酸化正丁醇于匀浆器中。取组织称重后放入匀浆器中，在冰浴中制备匀浆。将匀浆转移至刻度离心管，用酸化正丁醇补至4ml。振荡5min。 离心5min，取上清液2.5ml
放入另一离心管。每管加入正庚烷5ml和0.1MHCL 1.2ml。振荡5min。离心5min，此时溶液
分为两相，从水相中分别取0.5ml于另一支试管中。加0.5％半胱氨酸0.1ml，再加0.004％
OPT 3ml，沸水浴10min后，冷水冷却，在480nm/365nm处测定5-HT荧光强度。然后将测得
的5-HT的荧光强度A值代入下列公式即可：

[0263]

[0264] 同法检测血中5-HT含量。

[0265] 2.3统计学方法用《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包PEMS3.1进行。两两比较采用t检验，多组比较采用方差分析，方差齐性用LSD或Tukey等多重比较方法，
方差不齐用Tamhane′s T2多重比较方法。

[0266] 3、结果

[0267] 表26川白芷总香豆素对偏头痛模型小鼠脑内5-HT的影响(x±s)

[0268]组别 动物数(只) 给药量(g/kg) 5-HT含量(ng/g)
空白对照组 12 - 0.0630±0.0171**
模型对照组 12 - 0.0374±0.0153
白芷总香豆素组 12 0.72Qd×7 0.0531±0.0157*
白芷总香豆素组 12 0.36Qd×7 0.0513±0.0010*
白芷总香豆素组 12 0.18Qd×7 0.0419±0.0200

[0269] 注：与模型组比较，*P＜0.05

[0270] 表26结果显示：川白芷总香豆素在0.72g/kg和0.36g/kg剂量下可升高模型动物脑内5-HT含量，与模型组比较有明显差异(P＜0.05)。

[0271] 表27川白芷总香豆素对偏头痛模型小鼠血中5-HT的影响(x±s)

[0272]组别 动物数(只) 给药量(g/kg) 5-HT含量(ng/g)
空白对照组 12 - 0.1358±0.0371**
模型对照组 12 - 0.0812±0.0166
白芷总香豆素组 12 0.72Qd×7 0.1209±0.0208**
白芷总香豆素组 12 0.36Qd×7 0.1149±0.0415*
白芷总香豆素组 12 0.18Qd×7 0.1014±0.0200

[0273] 注：与模型组比较，**P＜0.01，*P＜0.05

[0274] 表27结果显示：川白芷总香豆素在0.72g/kg和0.36g/kg剂量下可升高模型动物血中5-HT含量，与模型组比较有明显差异(P＜0.05，P＜0.01)。

[0275] 表28川白芷总香豆素对偏头痛模型小鼠脑内单胺氧化酶的影响(x±s)

[0276]组别 动物数(只) 给药量(g/kg) MAO含量(U/mgprot)
空白对照组 10 - 17.49±9.39
模型对照组 10 - 19.34±6.75
白芷总香豆素组 10 0.72Qd×7 15.09±4.65
白芷总香豆素组 10 0.36Qd×7 18.25±8.18

[0277] 注：与模型组比较，P＞0.05

[0278] 表28结果显示：川白芷总香豆素在0.72g/kg和0.36g/kg剂量下对模型动物脑内MAO活性均无明显影响(P＞0.05)。

[0279] 表29川白芷总香豆素对偏头痛模型小鼠血中单胺氧化酶的影响(x±s)

[0280]组别 动物数(只) 给药量(g/kg) MAO含量(U/ml)
空白对照组 10 - 7.97±2.79
模型对照组 10 - 8.84±2.12
白芷总香豆素组 10 0.72Qd×7 10.04±2.79
白芷总香豆素组 10 0.36Qd×7 9.13±2.28

[0281] 注：与模型组比较，P＞0.05

[0282] 表29结果显示：川白芷总香豆素在0.72g/kg和0.36g/kg剂量下对模型动物血中MAO活性均无明显影响(P＞0.05)。

[0283] 4、讨论

[0284] 在偏头痛的发病理论中，生化源5-羟色胺(5-hydroxvtryptamine，5-HT)的耗竭学说占有重要的位置。首先因某些原因偏头痛患者血液中可特异性作用于血小板的5-HT
释放因子升高，使血小板释放5-HT。释放的5-HT使颅内血管收缩，引起缺血的前驱症状。
同时颅内血管收缩导致应激反应，兴奋交感神经，使血中肾上腺素和游离脂肪酸增加，作用
于血小板，产生血栓素A2(Thromboxan A2，TXA2)，TXA2主要在血小板微粒体内合成，具有很
强的收缩血管作用，进一步促进5-HT对颅内血管收缩的作用。升高的5-HT被单胺氧化酶
A(monoamine oxidase a，MAO-A)所不断分解，其结果使5-HT耗竭，继发性地引起血管的过
度扩张，从而产生搏动性头痛。国外学者发现偏头痛发作期患者血浆中5-HT含量降低，而
偏头痛临床治疗中两类5-HT受体激动剂的肯定疗效也部分证明了该学说的合理性。因此，
考察了川白芷总香豆素对5-HT和单胺氧化酶的影响。

[0285] 采用利血平化低5-HT实验性偏头痛小鼠模型进行实验，结果显示：川白芷总香豆素在0.72g/kg和0.36g/kg剂量下可明显升高模型小鼠脑内及血中5-HT水平(P＜0.05，
P＜0.01)；但在单胺氧化酶的研究中，川白芷总香豆素各剂量组对模型动物中脑和血中单
胺氧化酶活性无明显影响，说明川白芷总香豆素升高模型动物脑和血中5-HT的作用。

[0286] 上述药效试验说明，采用本发明提取方法制备的高纯度的总香豆素，质 量稳定，具有5-羟色胺调节作用，除了治疗偏头痛外，还可治疗5-羟色胺降低引起的其它疾病，药
效明确，适应症针对性强，为临床提供了一种新的选择。