本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂及制法。该复配生物杀虫剂主要由苏云金芽孢杆菌发酵液和蜡蚧轮枝菌分生或芽生孢子与乌头生物碱按一定比例与适宜助剂混配而成，其中主药和助剂的质量百分比为：主药50％-90％、助剂10-50％。本发明提供的复配制剂特点为：广谱，对多种作物害虫有防治效果，尤其对同翅目、鳞翅目、鞘翅目害虫效果显著；杀虫速度快；持效期长；害虫难以产生抗药性；对人畜、环境和天敌安全；生产工艺简单，原料来源广泛，成本低；剂型多样，应用领域广泛。
1.一种苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂的制备方法，其特征在于：
将主药与助剂混配，主药的重量百分比为50％-94％、助剂的重量百分比为6-50％；主药为重量比为1∶1∶0.1的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)发酵物、蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)发酵物和乌头生物碱的混合物，助剂包括乳化剂和活性物质保护剂。
2.根据权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂的制备方法，其特征在于：主药中乌头生物碱来自铁棒锤乙醇提取物，铁棒锤乙醇提取物的制备方法为，将干燥的铁棒锤根粉碎成60目细粉，以95％乙醇为提取溶媒，乙醇的体积量为铁棒锤细粉体积的三倍，共置于摇瓶中振摇提取120小时，过滤，滤渣再用三倍体积量的乙醇溶媒振摇提取120小时，过滤，滤渣用溶媒洗涤3次，合并所有滤液，减压回收乙醇，即得含总乌头生物碱82.3％的铁棒锤乙醇提取物。
3.根据权利要求1或2所述的苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂的制备方法，其特征在于：乳化剂选自十六烷基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、聚山梨醇酯-80、聚甘油酯、聚甘油亚油酸一酯或三乙醇胺中的一种；活性物质保护剂选自海藻酸钠、脱脂牛奶、L-丝氨酸、磷酸二氢钠、糖蜜、蔗糖或吐温-80中的一种。
4.根据权利要求3所述的苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂的制备方法，其特征在于：复配杀虫剂为微囊剂型，主药中苏云金芽孢杆菌发酵物和蜡蚧轮枝菌发酵物均为发酵液，助剂还包括囊材和抗氧化剂，各成分含量以重量百分比计为，主药49.5-49.8％、乳化剂0.2-0.5％、活性物质保护剂0.1-0.3％、囊材49.5-49.8％和抗氧化剂0.1-0.2％，囊材选自单一囊材或由主囊材和副囊材组成的囊材混合物，单一囊材为甲基纤维素或聚酰胺，主囊材和副囊材为质量配比是1∶1的海藻酸钠和聚赖氨酸、质量配比是1∶1的海藻酸钠和壳聚糖、质量配比是1∶1的海藻酸钠和脱乙酰壳聚糖、质量配比是1∶1的阿拉伯胶和明胶、质量配比是1∶1的果胶和明胶、质 量配比是1∶1的玉米淀粉和聚乙二醇、质量配比是1∶1的羧甲基纤维素钠和明胶、质量配比是1∶1的海藻酸钠和白蛋白或者质量配比是1∶1的海藻酸钠和氯化钡；抗氧化剂选自维生素C、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠中的一种；
A、取单一囊材溶液在121℃高压灭菌25分钟，助剂紫外灭菌40分钟，再将
49.5-49.8％的苏云金芽孢杆菌发酵液、蜡蚧轮枝菌发酵液和乌头生物碱混合物分散在
49.5-49.8％的单一囊材溶液中，然后按先后顺序加入0.2-0.5％的乳化剂、0.1-0.3％的活性物质保护剂和0.1-0.2％的抗氧化剂，充分搅拌混匀2小时得混合液，用孔径调至0.01微米的挤压机将上述混合液均匀挤入预制备产品总量10倍体积的固化剂中，固化20-30分钟后，过滤分离后得凝胶粒；
B、将其悬浮在预制备产品总量10倍体积的囊心物液化剂中液化24小时，囊心物液化剂的pH值为6.8-7.4，过滤分离，用无菌水冲洗两次，用占预制备产品总量重量百分含量为
0.2％的润滑剂分散微粒后，常温下干燥，即得成品；
如选取囊材混合物，在上述A步骤中则需将49.5-49.8％的苏云金芽孢杆菌发酵液、蜡蚧轮枝菌发酵液和乌头生物碱混合物分散在49.5-49.8％的主囊材溶液中，制得凝胶粒后，将凝胶粒在副囊材溶液中悬浮60分钟，然后进行B步骤；
上述制备方法中固化剂选自浓度为65％的Na2SO4溶液、浓度为1.5％的CaCl2溶液、浓度为36％的甲醛溶液、浓度为5％的醋酸溶液或浓度为50％的氯化钠溶液中的一种；囊心物液化剂选自pH值为6.8-7.4的中性盐溶液，即醋酸钠溶液、氯化钠溶液或氯化钙溶液，润滑剂选自滑石粉或硬脂酸镁。
5.根据权利要求4所述制备方法制得的苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂微囊剂型。
6.根据权利要求3所述的苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂的制备方法，其特征在于：复配杀虫剂为液体制剂，主药中苏云金芽孢杆菌发酵物和蜡蚧轮枝菌发酵物均为发酵液，助剂还包括抗氧化剂、紫外保护剂、助悬剂和防冻剂，各成分含量以重量百分比计为，主药88.78-93.49％、活性物质保护剂0.1-0.5％、乳化剂0.3-0.5％、抗氧化剂
0.1-0.2％、紫外保护剂0.01-0.02％、助悬剂5-8％、防冻剂1-2％；
抗氧化剂选自维生素C、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠中的一种；紫外保护剂选自荧光素钠、茶多酚、七叶灵、叶酸、吖啶黄、刚果红或甲基绿中的一种；助悬剂选自阿拉伯胶溶液、甘油、淀粉浆、海藻酸钠溶液、甲基纤维素溶液或硅藻土中的一种；防冻剂选自乙二醇或甘油；
将助悬剂、紫外保护剂和抗氧化剂在121℃高压灭菌25分钟，其它助剂紫外照射灭菌40分钟，再将88.78-93.49％苏云金芽孢杆菌发酵液、蜡蚧轮枝菌发酵液和乌头生物碱
1∶1∶0.1混合物与0.01-0.02％紫外保护剂、0.1-0.5％活性物质保护剂、0.3-0.5％乳化剂、5-8％助悬剂和0.1-0.2％抗氧化剂按先后顺序加入混匀机中，以150转/分的速度搅拌混匀60分钟，再加入1-2％防冻剂，继续搅拌混匀30分钟，即得均一透明的液体制剂。
7.根据权利要求6所述制备方法制得的苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂液体制剂。
8.根据权利要求3所述的苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂的制备方法，其特征在于：复配杀虫剂为复合粉剂，主药中苏云金芽孢杆菌发酵物为其发酵液离心沉淀物，蜡蚧轮枝菌发酵物为固体培养的分生孢子粉；助剂还包括紫外保护剂和填料，各成分含量以重量百分比计为，主药75-85％、乳化剂0.3-0.5％、活性物质保护剂0.1-0.2％、紫外保护剂
0.01-0.02％、填料14.59-24.28％；
紫外保护剂选自荧光素钠、茶多酚、七叶灵、叶酸、吖啶黄、刚果红或甲基绿中的一种；
填料选自硅藻土、微晶纤维素、预胶化淀粉、海藻酸钠、硫酸钙中的一种，或者选自粘土和蔗糖的混合物，或者选自麦芽糖和糊精的混合物，粘土和蔗糖的质量配比为10∶1，麦芽糖和糊精的质量配比为1∶8；
蜡蚧轮枝菌分生孢子粉的制备方法是：将土豆培养基中长满的蜡蚧轮枝菌孢子用少量无菌高岭土洗脱，并连同菌苔剥离下来，在无菌的条件下常温干燥，粉碎，过100目筛即得；
助剂预先过100目筛，紫外照射灭菌40分钟，将75-85％苏云金芽孢杆菌发酵液的离心沉淀物、蜡蚧轮枝菌分生孢子粉与乌头生物碱的1∶1∶0.1混合物置于混匀机中，以60转/分的速度搅拌混匀，边搅拌边先后加入0.01-0.02％紫 外保护剂、0.1-0.2％活性物质保护剂、0.3-0.5％乳化剂和14.59-24.28％填料，再以150转/分的速度充分混匀90分钟，过100目筛，即得成品。
9.根据权利要求8所述制备方法制得的苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂复合粉剂。
苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂及
制法
技术领域
[0001] 本发明属于生物农药领域，具体的说是一种苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂。
[0002] 背景技术
[0003] 为了发挥生物农药成分的各自优势，克服其弊端，降低生产农用成本，提高药效，延长持效期，拓宽杀虫谱，开发出对人畜、环境和天敌安全的无毒环保型生物农药，人们通常把一些可以兼容的生物农药成分进行合理地组合搭配，制成各种复配生物制剂，使各种活性物质能够相互增补。
[0004] 现已有一些实验产品，如：苏云金芽孢杆菌(Bt)与阿维菌素(Av)，苏云金芽孢杆菌、阿维菌素和苦参碱，苏云金芽孢杆菌、白僵菌和印楝素，苦参碱与烟碱复配生物农药，但都存在着生产工艺复杂或有效成分不明确，生产成本高，植物源成分提取过程中有机溶剂的大量使用，使其安全性降低，剂型单一，防治效果不理想诸多缺点，使得其开发应用受到限制。
[0005] 发明内容
[0006] 本发明目的在于提供一种高效、环保、安全的苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂。
[0007] 本发明的另一个目的在于提供复配杀虫剂的制备方法。
[0008] 本发明苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂是将主药与助剂混配，主药的重量百分比为50％-94％、助剂的重量百分比为6-50％；主药为重量比为1∶1∶0.1的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)发酵物、蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)发酵物和乌头生物碱的混合物。
[0009] 主要菌种及来源：苏云金芽孢杆菌为CGMCC1.767和CGMCC1.1012按1∶1混合物；蜡蚧轮枝菌CGMCC3.4505，均购自中国微生物菌种保藏中心。
[0010] 主药中乌头生物碱来自铁棒锤乙醇提取物，铁棒锤乙醇提取物的制备方法为，将干燥的铁棒锤根粉碎成60目细粉，以95％乙醇为提取溶媒，乙醇的体积量为铁棒锤细粉体积的三倍，共置于摇瓶中振摇提取120小时，过滤，滤渣再用三倍体积量的乙醇溶媒振摇提取120小时，过滤，滤渣用溶媒洗涤3次，合并所有滤液，减压回收乙醇，即得含总乌头生物碱82.3％的铁棒锤乙醇提取物。
[0011] 本发明苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂的制备方法有三种剂型，即微囊剂型、液体制剂和复合粉剂。
[0012] 针对复配杀虫剂为微囊剂型，其主药中苏云金芽孢杆菌发酵物和蜡蚧轮枝菌发酵物均为发酵液，各成分含量以重量百分比计为，
[0013] 主药49.5-49.8％，
[0014] 助剂：乳化剂0.2-0.5％、活性物质保护剂0.1-0.3％、囊材49.5-49.8％和抗氧化剂0.1-0.2％，
[0015] 囊材选自单一囊材或由主囊材和副囊材组成的囊材混合物，单一囊材为甲基纤维素或聚酰胺，主囊材和副囊材为质量配比是1∶1的海藻酸钠和聚赖氨酸、质量配比是1∶1的海藻酸钠和壳聚糖、质量配比是1∶1的海藻酸钠和脱乙酰壳聚糖、质量配比是
1∶1的阿拉伯胶和明胶、质量配比是1∶1的果胶和明胶、质量配比是1∶1的玉米淀粉和聚乙二醇、质量配比是1∶1的羧甲基纤维素钠和明胶、质量配比是1∶1的海藻酸钠和白蛋白或者质量配比是1∶1的海藻酸钠和氯化钡；
[0016] 抗氧化剂选自维生素C、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠中的一种；
[0017] 微囊剂型制备方法为：
[0018] A、取单一囊材溶液在121℃高压灭菌25分钟，助剂紫外灭菌40分钟，再将49.5-49.8％的苏云金芽孢杆菌发酵液、蜡蚧轮枝菌发酵液和乌头生物碱混合物分散在
49.5-49.8％的单一囊材溶液中，然后按先后顺序加入0.2-0.5％的乳化剂、0.1-0.3％的活性物质保护剂和0.1-0.2％的抗氧化剂，充分搅拌混匀2小时得混合液，用孔径调至0.01微米的挤压机将上述混合液均匀挤入预制备产品总量10倍体积(重量体积比)的固化剂中，固化20-30分钟后，过滤分离后得凝胶粒；
[0019] B、将其悬浮在预制备产品总量10倍体积的囊心物液化剂(重量体积比)中液化24小时，囊心物液化剂的pH值为6.8-7.4，过滤分离，用无菌水冲洗两次，用占预制备产品总量重量百分比为0.2％的润滑剂分散微粒后，常温下干燥，即得成品；
[0020] 如选取囊材混合物，在上述A步骤中则需将49.5-49.8％的苏云金芽孢杆菌发酵液、蜡蚧轮枝菌发酵液和乌头生物碱混合物分散在49.5-49.8％的主囊材溶液中，制得凝胶粒后，将凝胶粒在副囊材溶液中悬浮60分钟，然后进行B步骤；
[0021] 上述制备方法中固化剂选自浓度为65％的Na2SO4溶液、浓度为1.5％的CaCl2 溶液、浓度为36％的甲醛溶液、浓度为5％的醋酸溶液或浓度为50％的氯化钠溶液中的一种；囊心物液化剂选自pH值为6.8-7.4的中性盐溶液，即醋酸钠溶液、氯化钠溶液或氯化钙溶液，润滑剂选自滑石粉或硬脂酸镁。
[0022] 注解：固化剂、囊心物液化剂和润滑剂都属辅助微囊制备的物质，所以不占欲制备物的百分含量。
[0023] 微囊剂型产品优点：安全无毒、保质期长、抗逆境能力强、防治效果好。 [0024] 针对复配杀虫剂为液体制剂，主药中苏云金芽孢杆菌发酵物和蜡蚧轮枝菌发酵物均为发酵液，各成分含量以重量百分比计为，
[0025] 主药88.78-93.49％，
[0026] 助剂：活性物质保护剂0.1-0.5％、乳化剂0.3-0.5％、抗氧化剂0.1-0.2％、紫外保护剂0.01-0.02％、助悬剂5-8％、防冻剂1-2％；
[0027] 抗氧化剂选自维生素C、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠中的一种；
[0028] 紫外保护剂选自荧光素钠、茶多酚、七叶灵、叶酸、吖啶黄、刚果红或甲基绿中的一种；
[0029] 助悬剂选自阿拉伯胶溶液、甘油、淀粉浆、海藻酸钠溶液、甲基纤维素溶液或硅藻土中的一种；
[0030] 防冻剂选自乙二醇或甘油；
[0031] 液体制剂制法为：将助悬剂、紫外保护剂和抗氧化剂在121℃高压灭菌25 分钟，其它助剂紫外照射灭菌40分钟，再将88.78-93.49％苏云金芽孢杆菌发酵液、蜡蚧轮枝菌发酵液和乌头生物碱1∶1∶0.1混合物与0.01-0.02％紫外保护剂、0.1-0.5％活性物质保护剂、0.3-0.5％乳化剂、5-8％助悬剂和0.1-0.2％抗氧化剂按先后顺序加入混匀机中，以150转/分的速度搅拌混匀60分钟，再加入1-2％防冻剂，继续搅拌混匀30分钟，即得均一透明的液体制剂。
[0032] 液体制剂产品优点：生产工艺简单、产品与水能以任意比混合、使用方便、无污染、防治效果好。
[0033] 针对复配杀虫剂为复合粉剂，主药中苏云金芽孢杆菌发酵物是固体为其发酵液离心沉淀物，蜡蚧轮枝菌发酵物为固体培养的分生孢子粉；各成分含量以重量百分比计为， [0034] 主药75-85％、
[0035] 助剂：乳化剂0.3-0.5％、活性物质保护剂0.1-0.2％、紫外保护剂0.01-0.02％、填料14.59-24.28％；
[0036] 蜡蚧轮枝菌分生孢子粉的制备方法是：将土豆培养基中长满的蜡蚧轮枝菌孢子用少量无菌高岭土洗脱，并连同菌苔剥离下来，在无菌的条件下常温干燥，粉碎，过100目筛即得；
[0037] 紫外保护剂选自荧光素钠、茶多酚、七叶灵、叶酸、吖啶黄、刚果红或甲基绿中的一种；
[0038] 填料选自硅藻土、微晶纤维素、预胶化淀粉、海藻酸钠、硫酸钙中的一种，或者选自粘土和蔗糖的混合物，或者选自麦芽糖和糊精的混合物，粘土和蔗糖的质量配比为10∶1，麦芽糖和糊精的质量配比为1∶8。
[0039] 预胶化淀粉购于曲阜市天利药用辅料有限公司。
[0040] 复合粉剂制法为：助剂预先过100目筛，紫外照射灭菌40分钟，将75-85％苏云金芽孢杆菌发酵液的离心沉淀物、蜡蚧轮枝菌分生孢子粉与乌头生物碱的1∶1∶0.1混合物置于混匀机中，以60转/分的速度搅拌混匀，边搅拌边先后加入0.01-0.02％紫外保护剂、0.1-0.2％活性物质保护剂、0.3-0.5％乳化剂和14.59-24.28％填料，再以150转/分的速度充分混匀90分钟，过100目筛，即 得成品。
[0041] 复合粉剂产品优点：生产工艺简单、成本低、保质期长、贮运方便、防治效果好。 [0042] 以上三种剂型中乳化剂选自十六烷基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、聚山梨醇酯-80、聚甘油酯、聚甘油亚油酸一酯或三乙醇胺中的一种；活性物质保护剂选自海藻酸钠、脱脂牛奶、L-丝氨酸、磷酸二氢钠、糖蜜、蔗糖或吐温-80中的一种。
[0043] 苏云金芽孢杆菌发酵液的离心沉淀物是常规制法：将苏云金芽孢杆菌发酵液用4000转/分的速度离心20分钟，倾去上清液，即得。
[0044] 苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)简称Bt，是当前世界上生产量最大、应用最为广泛的一类微生物杀虫剂，占整个生物农药市场的70％以上份额，我国对苏云金芽孢杆菌的研究始于1958年，现在已有几十个生产厂家，年产量达3万吨以上，产品剂型也由单一的粉剂发展到液剂、乳剂和可湿性粉剂等新剂型，苏云金芽孢杆菌在病虫害的绿色防治中起着重要作用，但其杀虫速度缓慢，易受环境因素影响，持效期短，杀虫谱窄，因为是通过胃毒作用杀虫，所以对蚜虫、白粉虱剌吸式害虫几乎没有效果，且国内目前生产成本还是太高，通过基因工程构建新菌种也有如稳定性、安全性诸多因素的限制，使得其进一步应用发展受到很大影响。
[0045] 蜡蚧轮枝菌(vertillum lecanni zimmermanv viegas)是上世纪七十年代发现的一类真菌杀虫剂，是一种寄生范围和地理分布均十分广泛的昆虫病原真菌，其主要寄生于同翅目昆虫，特别是蚜虫、粉虱和蚧类，国外目前主要用于防治蚜虫和温室粉虱类害虫，它具有防治范围广，持效期长，不污染环境，对人畜和天敌安全，可以与多数化学杀虫剂混用起增效、扩谱作用的优点，并且在适宜的环境条件下可以引起害虫病原病流行，达到持续控制害虫种群的目的，还可作为植物病害的杀菌剂，是一种极具发展潜力的生防开发菌，国外已有好多国家注册了多种商品。其不足之处为：单独使用时杀虫速度较慢，一般在施药后5-6天才见到大量虫体死亡，因其为接触寄生式杀虫，所以对药物未 能喷洒到的虫体无杀灭作用；产品保质期短，因为主要有效成份为活性菌孢子，保存相对困难；环境因素对其影响较大，尤其是温度、湿度是影响其致病力的主要因素，只有在适温、高湿(25-30℃、RH80％以上)的条件下孢子才能萌发，对寄主致病。国内目前尚无其注册商品出现，也无大面积推广应用报道。
[0046] 乌头生物碱(Aconitine)是铁棒锤(Aconitum pendulum Busch)根、茎的主要有效成份，西北各省广泛分布，各省市都已有药材标准记载，其性热、味苦辛、有大毒。具有活血祛淤、祛风除湿、止痛消肿的功效，但其块根有剧毒。目前，国内主要用作人药，但它也是优质杀虫剂，尤其对磷翅目、鞘翅目害虫有特效，其优点：来源广泛(乌头生物碱也是川乌头等多种植物的主要有效成分，还可用细胞悬浮培养法获得，从而克服了资源的可持续性问题)、杀虫速度快、毒力强、保质期长、残留低。缺点：持效期短，高浓度时对人畜有危害，吸入过量会引起中毒，严重者导致死亡，张宏利人利用铁棒锤提取物作杀鼠剂证明对小白鼠有累积致毒现象，属有毒农药类，从而限制了其在农药领域的发展。
[0047] 乌头生物碱对两种复配活性菌无影响(即：不降低蜡蚧轮枝菌孢子的萌发和浸染害虫的能力，也不影响苏云金芽孢杆菌的正常生长)，所用助剂对人畜安全。 [0048] 本发明克服了其各单剂的缺点，三种有效单剂能产生较高的协同效应，拓宽了杀虫谱，提高了杀虫速度和杀虫效果，延长了持效期，降低了毒性，生产、农用成本降低，且生产工艺简单，原料来源广泛，安全环保，剂型多样，从而抗逆境能力增强，应用领域拓宽，具有很高的开发价值和广阔的发展前景。
[0049] 本发明复配杀虫剂能防治多种植物害虫，尤其对同翅目、鳞翅目、鞘翅目多发而难治的害虫有持续的控制效果，是一种高效、环保、安全的复配生物农药制剂。 [0050] 本发明对温室白粉虱和菜青虫的致死高峰期从第二天开始可持续到第十五天，防效可达90％以上，保质期在1.5年以上。
具体实施方式
[0051] 下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0052] 主要菌种及来源：苏云金芽孢杆菌为CGMCC1.767和CGMCC1.1012按1∶1混合物；蜡蚧轮枝菌CGMCC3.4505，均购自中国微生物菌种保藏中心。
[0053] 主药中乌头生物碱来自铁棒锤乙醇提取物，铁棒锤乙醇提取物的制备方法为，将干燥的铁棒锤根粉碎成60目细粉，以95％乙醇为提取溶媒，乙醇的体积量为铁棒锤细粉体积的三倍，共置于摇瓶中振摇提取120小时，过滤，滤渣再用三倍体积量的乙醇溶媒振摇提取120小时，过滤，滤渣用溶媒洗涤3次，合并所有滤液，减压回收乙醇，即得含总乌头生物碱82.3％的铁棒锤乙醇提取物。
[0054] 实施例1-11：苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配微囊剂型。 [0055] 针对复配杀虫剂为微囊剂型，其主药中苏云金芽孢杆菌发酵物和蜡蚧轮枝菌发酵物均为发酵液，各成分含量分别见表一和表二。
[0056] 微囊剂型制备方法为：
[0057] A、取单一囊材溶液在121℃高压灭菌25分钟，助剂紫外灭菌40分钟，再将苏云金芽孢杆菌发酵液、蜡蚧轮枝菌发酵液和乌头生物碱混合物分散在单一囊材溶液中，然后按先后顺序加入乳化剂、活性物质保护剂和抗氧化剂，充分搅拌混匀2小时得混合液，用孔径调至0.01微米的挤压机将上述混合液均匀挤入预制备产品总量10倍体积(重量体积比)的固化剂中，固化20-30分钟后，过滤分离后得凝胶粒；
[0058] B、将其悬浮在预制备产品总量10倍体积的囊心物液化剂(重量体积比)中液化24小时，囊心物液化剂的pH值为6.8-7.4，过滤分离，用无菌水冲洗两次，用占预制备产品总量重量百分比为0.2％的润滑剂分散微粒后，常温下干燥，即得成品；
[0059] 如选取囊材混合物，在上述A步骤中则需将苏云金芽孢杆菌发酵液、蜡蚧轮枝菌发酵液和乌头生物碱混合物分散在主囊材溶液中，制得凝胶粒后，将凝胶粒在副囊材溶液中悬浮60分钟，然后进行B步骤；
[0060] 上述制备方法中固化剂选自浓度为65％的Na2SO4溶液、浓度为1.5％的CaCl2 溶液、浓度为36％的甲醛溶液、浓度为5％的醋酸溶液或浓度为50％的氯化钠溶液中的一种；囊心物液化剂选自pH值为6.8-7.4的中性盐溶液，即醋酸钠溶液、氯化钠溶液或氯化钙溶液，润滑剂选自滑石粉或硬脂酸镁。
[0061] 注解：固化剂、囊心物液化剂和润滑剂都属辅助微囊制备的物质，所以不占欲制备物的百分含量。如果欲制备50千克湿微囊，按微囊收率80.6％计，则需要投料总量为62.03千克。
[0062] 微囊剂型产品优点：安全无毒、保质期长、抗逆境能力强、防治效果好。 [0063] 表一、苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配微囊剂实施例配方量 [0064]
[0065] 表二、苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配微囊剂实施例配方量 [0066]
[0067] 注释：预制备80千克终产品。
[0068] 实施例12-17、苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配液体制剂 [0069] 针对复配杀虫剂为液体制剂，主药中苏云金芽孢杆菌发酵物和蜡蚧轮枝菌发酵物均为发酵液，各成分含量见表三。
[0070] 液体制剂制法为：将助悬剂、紫外保护剂和抗氧化剂在121℃高压灭菌25分钟，其它助剂紫外照射灭菌40分钟，再将苏云金芽孢杆菌发酵液、蜡蚧轮枝菌发酵液和乌头生物碱1∶1∶0.1混合物与紫外保护剂、活性物质保护剂、 乳化剂、助悬剂和抗氧化剂按先后顺序加入混匀机中，以150转/分的速度搅拌混匀60分钟，再加入1-2％防冻剂，继续搅拌混匀30分钟，即得均一透明的液体制剂。
[0071] 液体制剂产品优点：生产工艺简单、产品与水能以任意比混合、使用方便、无污染、防治效果好。
[0072] 表三、苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配液体制剂实施例配方量 [0073]
[0074] 注释：预制备80千克终产品。
[0075] 实施例18-24、苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复合粉剂 [0076] 针对复配杀虫剂为复合粉剂，主药中苏云金芽孢杆菌发酵物是固体为其发酵液离心沉淀物，蜡蚧轮枝菌发酵物为固体培养的分生孢子粉；各成分含量见表四。 [0077] 蜡蚧轮枝菌分生孢子粉的制备方法是：在500ml培养瓶中将土豆培养基中长满的蜡蚧轮枝菌孢子200ml用1-2g无菌高岭土洗脱，并连同菌苔剥离下来， 在无菌的条件下常温干燥，粉碎，过100目筛即得；
[0078] 预胶化淀粉购于曲阜市天利药用辅料有限公司。
[0079] 复合粉剂制法为：助剂预先过100目筛，紫外照射灭菌40分钟，将苏云金芽孢杆菌发酵液的离心沉淀物、蜡蚧轮枝菌分生孢子粉与乌头生物碱的1∶1∶0.1混合物置于混匀机中，以60转/分的速度搅拌混匀，边搅拌边先后加入紫外保护剂、活性物质保护剂、乳化剂和填料，再以150转/分的速度充分混匀90分钟，过100目筛，即得成品。 [0080] 苏云金芽孢杆菌发酵液的离心沉淀物是常规制法：将苏云金芽孢杆菌发酵液用4000转/分的速度离心20分钟，倾去上清液，即得。复合粉剂产品优点：生产工艺简单、成本低、保质期长、贮运方便、防治效果好。
[0081] 表四、苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复合粉剂实施例配方量 [0082]
[0083] 注释：预制备80千克终产品。
[0084] 以上实施例中，实施例5、11、16和23制得产品保质期长，防治效果好，与同剂型的其它实施例相比较好。
[0085] 对温室白粉虱的田间防效试验
[0086] 在栽培一品红的温室里，选取温室白粉虱危害严重的二年生且已经开花的一品红植株560株，平均分成7个长方形小区，五个为试验药品小区，一个为阳性对照小区，一个为空白对照小区，每两个小区之间加保护行，每小区试验植株80株，每小区随机取20株，每株选三片(从植株上、中、下三个位置选取)虫数较多的叶片记录基础虫数并挂牌标记，然后，同时喷施实验药品、对照药品和清水，从叶片两面喷施，以叶片滴水为度。施药后的前两天遮阴、保湿，并于施药后第三、五、七、十五天观察记录活虫数及其有无药害。试样保质期内的药效试验方法同上，试验结果见表五。
[0087] 表五、苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂对温室白粉虱的田间防效
[0088]
[0089] 注释：表中保质期内的校正防效是当时施药后五天调查的结果。复配液体制剂按实施例16制备，复合粉剂按实施例23制备，其余单组分液体制剂配方与实施例16相同，只换了主药。
[0090] 苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂对菜青虫的田间防效试验 [0091] 在栽培大白菜的温室里，选取菜青虫危害严重的植株420株，平均分成7个长方形小区，五个为试验药品小区，一个为阳性对照小区，一个为空白对照小区，每两个小区之间设保护行，每小区试验植株60株，每小区随机取30株，记录每株基础虫数并挂牌标记，然后，同时喷施实验药品、对照药品和清水，从植株上下全株喷施，以叶片滴水为度。施药后的前两天遮阴、保湿，并于施药后第三、五、七、十五天观察记录活虫数及其有无药害。保质期内的药效试验方法同上，试验结果见表六。
[0092] 表六、苏云金芽孢杆菌、蜡蚧轮枝菌和乌头生物碱复配杀虫剂对菜青虫的田间防效
[0093]
[0094] 注释：表中保质期内的校正防效是当时施药后五天调查的结果。复配液体制剂按实施例5制备，复合粉剂按实施例23制备，其余单组分液体制剂配方与实施例16相同，只换了主药。
[0095] 根据实施例可知，本发明的复配制剂与其组成的单剂和阳性对照相比具有以下优点：
[0096] (1)扩大了杀虫谱，降低了毒性。苏云金芽孢杆菌主要以杀鳞翅目、鞘翅目害虫为主，对同翅目害虫基本无效。蜡蚧轮枝菌属广谱杀虫真菌，但其对同翅目害虫有特效，尤其对蚜虫和温室白粉虱有特殊的防治效果。乌头碱对鳞翅目和同翅目害虫都有效，但是其高浓度时对人畜有危害。将三者组成复配制剂后，可同时有效防治同翅目、鳞翅目和鞘翅目害虫，还避免了其毒性危害。
