培美曲塞硫脲盐及其制备方法

摘要

本发明公开了培美曲塞硫脲盐及其制备方法，以及含有培美曲塞硫脲盐的药物组合物。培美曲塞硫脲盐是由培美曲塞与硫脲在水和/或有机溶剂中反应生成，制备工艺简单，收率高，稳定性好。

权利要求

1.培美曲塞硫脲盐，其特征在于，具有式(1)所示的结构，

2.一种制备如权利要求1所述的培美曲塞硫脲盐的方法，其特征在于，所述方法是以培美曲塞和硫脲为原料，在水、或有机溶剂、或水/有机溶剂混合液中进行反应，然后从该含有培美曲塞硫脲盐的反应溶液中分离得到培美曲塞硫脲盐。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙酸乙酯。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，培美曲塞和硫脲的摩尔比例为1∶1～

20。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，培美曲塞和硫脲的摩尔比例为1∶5。

6.一种药物组合物，其特征在于，含有有效量的权利要求1的培美曲塞硫脲盐，以及药学上可接受的载体。

说明书

培美曲塞硫脲盐及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于药学领域，具体地说，涉及培美曲塞硫脲盐及其制备方法。

背景技术

[0002] 培美曲塞二钠是礼来(Eli Lily)公司开发的用于治疗恶性胸膜间皮瘤和非小细胞肺癌的二线新药，商品名为Alimta，结构式如下：

[0003]

[0004] Alimta是一种抗叶酸代谢的抗肿瘤药物，它通过干扰细胞复制过程中叶酸依赖性代谢过程而发挥作用。体外试验显示，该药物可以抑制胸苷酸合成酶、二氢叶酸还原酶、甘氨酸核糖核苷甲酰基转移酶等叶酸依赖性酶。这些酶参与胸腺嘧啶核苷和嘌呤核苷的生物合成，当其中一种或一种以上的酶被阻断时，癌细胞就不能生长繁殖。在当前已被批准的叶酸拮抗剂中，除Alimta外均不能实现以三种不同的酶作为靶，因此Alimta较其他叶酸拮抗剂作用时间长。

[0005] 2004年2月5日，Alimta被美国食品药品监督管理局(FDA)正式批准为与顺铂联合用于治疗不能手术的恶性胸膜间皮瘤的一线药物。Alimta早先已被FDA指定为治疗此适应症的罕见病用药，它也是得到FDA批准的第一种治疗此症的药物。

[0006] 目前，培美曲塞的主要剂型为二钠盐，美国专利US5344932公开了培美曲塞及其药用盐化合物。US6013828公开了制备培美曲塞二钠盐的方法。CN03138056.5公开了使用培美曲塞或其钠盐与二价金属离子的氧化物或氯化物反应制备培美曲塞二价金属离子盐，培美曲塞与有机胺或无机氨反应制备培美曲塞铵盐化合物的方法，但使用的有机胺未提及硫脲。

[0007] 现有的作为临床药物的培美曲塞盐存在稳定性差、制备过程复杂、收率低等缺点，因此开发新的稳定性良好，制备工艺简单且临床用药效果好的培美曲塞盐具有重要意义。

发明内容

[0008] 本发明的目的在于提供一种培美曲塞硫脲盐，其具有式(I)所示的结构，化学名称N-[4-[2-(2-氨基-4，7-二氢-4-氧代-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸·硫脲盐。

[0009]

[0010] 进一步地，所述培美曲塞硫脲盐含有0～10个结晶水分子；更优选地，其含有1～6个结晶水分子。

[0011] 本发明另一目的在于提供制备培美曲塞硫脲盐的方法，所述方法是以培美曲塞和硫脲为原料，在水、或有机溶剂、或水/有机溶剂混合液中进行反应，然后从该含有培美曲塞硫脲盐的反应溶液中分离得到培美曲塞硫脲盐。

[0012] 进一步地，所述有机溶剂可以为在反应条件不影响原料和产物结构的任何一种有机溶剂。应理解，只要能够不使所述培美曲塞及其硫脲盐在反应过程中发生结构变化且不影响反应的任何有机溶剂都是可用的。更优选地，所述有机溶剂为醇、醚、酯，例如甲醇、乙醇或乙酸乙酯。

[0013] 进一步地，原料培美曲塞和硫脲的摩尔比例为1∶1～20，更优选为1∶5。

[0014] 进一步地，步骤(3)所得的培美曲塞硫脲盐为不含结晶水的培美曲塞硫脲盐或含有1～10个结晶水的水合培美曲塞硫脲盐。

[0015] 本发明的再一目的是提供一种药物组合物，其含有有效量的培美曲塞硫脲盐化合物，以及药学上可接受的载体。

[0016] 进一步地，所述有效量为所述化合物占药物组合物的0.01-99.99％；更进一步地，所述有效量为所述化合物占药物组合物的0.01-85％；更特别地，所述有效量为所述化合物占药物组合物的0.1-60％。

[0017] 所述药物组合物可以施用于个体，作为一种叶酸拮抗剂，或者作为治疗性胸膜间皮瘤或非小细胞肺癌的药物。通常，可将所述化合物或组合物配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中。配制好的药物可以通过常规途径进行给药，其中包括但并不限于：肌内、静脉内或皮下给药。

[0018] 所述药学上可接受的载体包括但不限于：生理盐水、缓冲液、葡萄糖溶液、注射用水、氯化钠、甘露醇、乙醇及其组合。

[0019] 本发明的药物组合物可以制成针剂形式，其中包括但不限于：无菌溶液型注射液，注射用无菌粉末。此外，也可制备成其他给药途径的药物组合物。

[0020] 本发明的培美曲塞硫脲盐是一种很好的水溶性培美曲塞胺盐类化合物，与其他形式的培美曲塞相比，它具有稳定性好，易于制备的优点，为培美曲塞的剂型研究提供了新的选择。

具体实施方式

[0021] 以下结合具体实施方式，对本发明作进一步详述，以下实施例只是作为对本发明的说明，不用于限制本发明的范围。

[0022] 实施例1培美曲塞硫脲盐的制备工艺1

[0023] 在100ml反应瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmol)，加入去离子水25ml，硫脲盐0.668g(8.78mmol)，常温搅拌反应1小时，过滤，滤液减压蒸馏析出固体，加入甲醇，至大部分产物析出，过滤，真空干燥，得2.26g，收率76.4％。

[0024] 元素分析：C：49.90(理论值49.79％)，H：5.49(理论值5.57％)，N：19.53(理论值19.36％)。

[0025] 红外光谱(KBr压片)：特征吸收峰(cm-1)及其归属：3330(C-NH2，-NH，-OH)，3046(C6H4，苯环碳氢伸缩振动)，2929(-CH2-)，2510(-NH3’)，1648(C＝O)，1500，1392(C6H4，苯环骨架振动)。

[0026] 1H核磁共振图谱(DMSO-d6)，化学位移δ(ppm)及质子数的归属：8.03(s，br，1H，Ph-CO-NH)，7.90(d，2H，C6H4)，7.32(d，2H，C6H4)，6.26(s，1H，CH)，6.05(s，2H，NH2)，4.45(m，1H，CH)，2.82(t，2H，CH2)，2.76(t，2H，CH2)，2.40(m，2H，CH2)，2.21(t，2H，CH2)。

[0027] 实施例2 培美曲塞硫脲盐的制备工艺2

[0028] 在100ml反应瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmol)，加入无水甲醇60ml，搅拌溶解，加入硫脲0.445g(5.85mmol)，常温搅拌反应0.5小时，过滤，用甲醇和水洗涤，真空干燥，得1.64g，收率55.3％。

[0029] 实施例3培美曲塞硫脲盐的制备工艺3

[0030] 在100ml反应瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmol)，加入无水乙醇60ml，搅拌溶解，加入硫脲2.23g(29.27mmol)，常温搅拌反应1小时，过滤，用乙醇和水洗涤，真空干燥，得1.90g，收率64.2％。

[0031] 实施例4培美曲塞硫脲盐的制备工艺4

[0032] 在250ml反应瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmol)，加入乙酸乙酯100ml，搅拌，加入硫脲0.668g(8.78mmol)，常温搅拌反应2小时，过滤，用乙醇洗涤，真空干燥，得1.37g，收率46.3％。

[0033] 实施例5培美曲塞硫脲盐的制备工艺5

[0034] 在100ml反应瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmol)，加入去离子水25ml、甲醇25ml，搅拌，加入硫脲8.9g(117mmol)，常温搅拌反应1小时，过滤，滤液减压蒸馏析出固体。
加入甲醇，至大部分产物析出，过滤，真空干燥，得4.74g，收率80.2％。

[0035] 实施例6培美曲塞硫脲盐的制备工艺6

[0036] 在100ml反应瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmol)，加入去离子水25ml、乙醇25ml，加入硫脲0.668g(8.78mmol)，常温搅拌反应5小时，过滤，滤液减压蒸馏析出固体。加入乙醇，至产物析出，过滤，真空干燥，得2.34g，收率78.9％。

[0037] 实施例7含有培美曲塞硫脲盐的药物组合物

[0038] 一种注射用的培美曲塞硫脲盐的药物组合物，具体配方见表1。

[0039] 表1

[0040]

[0041] 将上述物料量的培美曲塞硫脲盐和氯化钠溶解于5ml注射用水中，注入棕色安瓿瓶中充氮密封。

[0042] 实施例8含有培美曲塞硫脲盐的药物组合物

[0043] 一种注射用的培美曲塞硫脲盐的药物组合物，具体配方见表2。

[0044] 表2

[0045]

[0046] 将上述物料量的培美曲塞硫脲盐和甘露醇溶解于5ml注射用水中置于西林瓶内，于-60℃预冻4小时后抽真空干燥至水份在3～5％后充氮密封。

[0047] 实施例9培美曲塞硫脲盐的药理活性试验

[0048] 1)细胞培养

[0049] 将A549细胞系在含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中培养。待细胞长至80％融合时，用等体积的0.25％胰蛋白酶和依地酸二钠(EDTANa2)消化细胞，制成单细胞悬液备用。

[0050] 2)培美曲塞硫脲盐对肺癌细胞增殖活性的影响

[0051] 肺癌细胞与牛血清白蛋白(BSA)共同孵育24h后，细胞活性与正常对照组相近。而与纤连蛋白(FN)蛋白共培养后，其增殖活性明显增强，与正常对照组相比差异非常显著(P＜0.01)。加入不同浓度培美曲塞硫脲盐干预24h后可见，40nmol/L和80nmol/L两个高浓度组的细胞活性明显低于FN组(P＜0.01)，但20nmol/L低浓度组未能表现出类似的抑制效应。相反在BSA对照实验中，所有浓度的培美曲塞硫脲盐干预的BSA组活性明显低于FN组(P＜0.01)，见表3。

[0052] 表3培美曲塞硫脲盐对肺癌增殖活性影响(n＝12，x±s)

[0053]

[0054]

[0055] a.预处理组与正常对照组比较，P＜0.01；b.培美曲塞硫脲盐个剂量组与预处理组比较，P＜0.01；c.BSA预处理组与FN预处理组比较，P＜0.01。

[0056] 3)对肺癌细胞黏附作用的影响

[0057] 从倒置显微镜下可以观察到，肺癌细胞对FN板有较强的黏附性。最早在10min时便有细胞粘壁，并随时间延长，细胞附壁并伸展的数量逐渐增多。与相同时间点的FN组相比，经培美曲塞硫脲盐预处理的癌细胞，其粘壁数量明显减少(P＜0.01)，并且时间显著推迟。此外，培美曲塞硫脲盐的剂量对细胞粘附作用的大小呈正相关(以12h为例，r＝0.8557)，即剂量愈高，抑制效果愈显著。见表4。

[0058] 表4培美曲塞硫脲盐对肺癌细胞黏附作用影响(n＝12，x±s)

[0059]

[0060] 4)对肺癌细胞迁移能力的影响

[0061] 基于黏附实验结果，选取8h作为考察点。细胞计数结果显示，FN组穿膜细胞数为(125±16)个，显著高于BSA组的(45±7)个(P＜0.01)。同样使用含FN的Matrigel，在20、40和80nmol/L浓度培美曲塞硫脲盐预处理组，肺癌细胞穿膜数分别为(58±5)个、(46±3)个、(17±4)个，均明显低于FN组，有着显著统计学差异(P＜0.01)。并且这种对迁移运动的阻断作用与浓度成正相关(r＝0.852)，剂量越大则作用越强。

[0062] 实施例10培美曲塞硫脲盐的稳定性试验

[0063] 1)制备样品

[0064] 根据培美曲塞硫脲盐易溶于水的性质，制备培美曲塞硫脲盐水针剂(处方1，见实施例7)；参照国外已上市的培美曲塞二钠盐剂型，制备培美曲塞硫脲盐冻干粉针(处方2，见实施例8)；同样参照国外已上市的培美曲塞二钠盐的处方，制备培美曲塞二钠盐冻干粉针(处方3，作为对照)。具体制剂组分及影响因素的考察结果见表5：

[0065] 表5培美曲塞盐制剂样品及成分

[0066]组成成分 处方1 处方2 处方3
培美曲塞硫脲盐(g) 500 500 -
培美曲塞二钠盐(g) - - 500
氯化钠(g) 50 - -
甘露醇(g) - 50 500
注射用水加至(ml) 5000 5000 5000
pH值 7.6 7.5 7.4
共制成(支) 1000 1000 1000

[0067] 2)60℃稳定性试验

[0068] 将处方1、处方2去除外包装，置于西林瓶中，加盖放置于60℃恒温箱中，放置10天，观察比较它们在0、5、10天的外观、杂质量的变化，考察制剂的热稳定性。用高效液相色谱法测定其在0、5、10的有关物质。结果显示，与市售产品比较，处方1、处方2样品于60℃下放置5、10后，其外观、杂质量均无明显变化，表明其具有良好的热稳定性。具体数据见表6。

[0069] 表6注射用培美曲塞硫脲盐高温试验结果(60℃)

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