无刺红花的组织培养和快速繁殖方法

摘要

本发明涉及无刺红花的组织培养和快速繁殖方法，提供了种子的消毒处理方法、最佳的芽增殖培养基和诱导芽生根培养基。通过获得无菌苗、芽的增殖、诱导芽生根和练苗与移栽四个步骤，在短时间里获得大量该红花的种苗。本发明具有方法简单，繁殖速率快，稳定性强，培育周期短，生根率高，易成活的优点，在实际生产应用中具有较强的可行性，适用于新疆红花的产业化栽培，也为裕民无刺红花多倍体新品种研究奠定了基础。

权利要求

1.一种无刺红花的组织培养和快速繁殖方法，其特征在于按下列步骤进行：a、挑取饱满的无刺红花种子，在超净工作台上用0.1％升汞灭菌15-30min，75％酒精表面消毒30sec-2min，无菌水冲洗4-6次；

b、将步骤a中处理后的种子接入培养基1/2MS中，置于温度23±1℃，光照强度

2000lx，光照时间16h/d，进行种子萌发培养；

c、将步骤b中7-15d苗龄的无菌苗切除叶片和根后，剩余部分1-2cm长茎段接入培养基MS+6-BA 0.2-1.0mg/L+TDZ 0.3-1.0mg/L+PP333 0.5-2.0mg/L中，置于温度23±1℃，光照强度2000lx，光照时间16h/d，进行扩繁培养；

d、将步骤c扩繁后1.0-2.0cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 0.2-1.0mg/L+IBA

0-0.5mg/L中，置于温度23±1℃，光照强度2000lx，光照时间16h/d，进行诱导生根；

e、将步骤d中获得的高为8-10cm的幼苗在温室进行炼苗移栽，先打开三角瓶的封口膜敞开置于温室中2-4d，洗去瓶苗根部上附着的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土比例为

1∶1∶1-3的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

说明书

无刺红花的组织培养和快速繁殖方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种无刺红花的组织培养和快速繁殖方法。

背景技术

[0002] 红花(Carthamus tinctorius L.)为一年生草本植物，属菊科红花属，约由20～25种组成。红花分布较广，在很多国家均有栽培。我国红花栽培历史悠久，汉代就有关于红花栽培和药用的记载。近年来，中国红花栽培面积在不断增加，主要是药用和油药兼用。中国红花产区主要集中在新疆、四川、云南、河南等省。红花具有活血通经，去瘀疗伤，宣毒透疹等功效，有效药用成分为红花色素，主要包括红花黄色素和红花红色素。红花种子含油率较高，尤其是亚油酸含量很高，且油质好，用途广。红花油大量用来制作油漆和染料。红花是一种适应性强，抗旱、抗寒、耐盐碱、耐贫瘠，用途广泛的经济作物。近年来临床上常用来治疗子宫充血、心血管、血栓形成等疾病，也作止痛，消炎剂等应用。

[0003] 在选育新的高产优质、抗病等品种方面仍然以常规杂交选育为主，也尚未取得突破性进展。红花组织培养和基因工程改良品种方面的研究，国内研究不多。国外虽然开展了一些研究，在实际研究中，到目前为止，由于红花的组织培养工作不象其他植物一样开展的广泛和深入，对在其他植物中影响组织再生的因素如基因型、性别及年龄、组织来源、生理状态等多种因素的影响在红花中并不是很清晰，因此有待继续加深研究。随着红花综合利用的开发和深加工的发展以及基因工程高新技术的应用，必将促进红花生产的迅速发展，也会带动整个红花产业的快速发展。

发明内容

[0004] 本发明涉及一种无刺红花的组织培养和快速繁殖方法，提供了种子的消毒处理方法、最佳的芽增殖培养基和诱导芽生根培养基。通过获得无菌苗、芽的增殖、诱导芽生根和练苗移栽四个步骤，在短时间里获得大量该红花的种苗，适用于裕民无刺红花的产业化栽培，也为新疆裕民无刺红花通过多倍体技术选育新品种研究奠定了基础。

[0005] 发明所述的裕民无刺红花的组织培养和快速繁殖方法，按下列步骤进行：

[0006] a、挑取饱满的无刺红花种子，在超净工作台上用0.1％升汞灭菌15-30min，75％酒精表面消毒30sec-2min，无菌水冲洗4-6次；

[0007] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照强度2000lx，光照时间16h/d，进行种子萌发培养；

[0008] c、将步骤b中苗龄7-15d的幼苗切除叶片和根，将1-2cm的茎段接入培养基MS+6-BA0.2-1.0mg/L+TDZ0.3-1.0mg/L+PP3330.5-2.0mg/L中，置于温度23±1℃，光照强度2000lx，光照时间16h/d，进行扩繁培养；

[0009] d、将步骤c扩繁后1.0-2.0cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 0.2-1.0mg/L+IBA 0-0.5mg/L中，置于温度23±1℃，光照强度2000lx，光照时间16h/d，进行诱导生根；

[0010] e、将步骤d中获得的高为8-10cm的幼苗，在室温进行炼苗移栽，先打开三角瓶的封口膜敞开置于温室中2-4d，洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土比例为1∶1∶1-3的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0011] 本发明所述无刺红花的组织培养和快速繁殖方法优点在于：

[0012] 方法简单，稳定性强。本发明所采用方法——组织培养，方法简单实用，对设备的要求较低，生产出的试管苗遗传性好。

[0013] 快繁材料的选择：本发明采用裕民无刺红花的茎为快繁对象，避免了用叶片等组织诱导成苗必须要经过的愈伤阶段，保证了周期短，生根率高，易成活。本发明的结果表明，在培养条件温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d下，培养基1/2MS+NAA 0.2-1.0mg/L+IBA0～0.5mg/L中，平均生根率在90％以上。

附图说明

[0014] 图1为本发明种子消毒萌发7d后的无菌苗图

[0015] 图2为本发明腋芽诱导30d后的苗

[0016] 图3为本发明继代20d后的苗

[0017] 图4为本发明诱导生根20d后的效果

[0018] 图5为本发明移栽存活后的苗图

具体实施方式

[0019] 实施例1：

[0020] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌15min，75％酒精表面消毒1min，无菌水冲洗5次；

[0021] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0022] c、将步骤b中苗龄7d的幼苗切除叶片和根，将1cm的茎段接入培养基MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.5mg/L+PP333 0.5mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行扩繁培养；

[0023] d、将步骤c扩繁厚的幼苗中1.0cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 0.2mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下诱导生根；

[0024] e、将步骤d中高为8cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗2d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶1的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0025] 实施例2：

[0026] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌17min，75％酒精表面消毒30sec，无菌水冲洗4次；

[0027] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0028] c、将步骤b中苗龄8d的幼苗切除叶片和根，将1.5cm的茎段接入培养基MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.3mg/L+PP333 2.0mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0029] d、将步骤c中1.0-2.0cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA0.2mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下诱导生根；

[0030] e、将步骤d中的高为9cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗3d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶1.5的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0031] 实施例3：

[0032] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌20min，75％酒精表面消毒1.5min，无菌水冲洗6次；

[0033] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0034] c、将步骤b中苗龄9d的幼苗切除叶片和根，将2cm的茎段接入培养基MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 1.0mg/L+PP333 1.0mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0035] d、将步骤c中1.0-2.0cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA0.2mg/L+IBA 0.2mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下诱导生根；

[0036] e、将步骤d中高为10cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗3d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶2的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0037] 实施例4：

[0038] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌15min，75％酒精表面消毒2min，无菌水冲洗5次；

[0039] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0040] c、将步骤b中苗龄10d的幼苗切除叶片和根，将1cm的茎段接入培养基MS+6-BA0.5mg/L+TDZ 1.0mg/L+PP333 0.5mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行扩繁培养；

[0041] d、将步骤c扩繁后的幼苗中2.0cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 0.4mg/L+IBA 0.1mg/L中，并于置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下进行诱导生根；

[0042] e、将步骤d中高为8cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗4d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶2.5的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0043] 实施例5：

[0044] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌17min，75％酒精表面消毒1min，无菌水冲洗5次；

[0045] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0046] c、将步骤b中苗龄11d的幼苗切除叶片和根，将2cm的茎段接入培养基MS+6-BA0.5mg/L+TDZ 0.5mg/L+PP333 2.0mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行扩繁培养；

[0047] d、将步骤c扩繁后的幼苗中1.5cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L中，并于置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下诱导生根；

[0048] e、将步骤d中高为8.5cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗2.5d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶3的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0049] 实施例6：

[0050] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌25min，75％酒精表面消毒2min，无菌水冲洗4次；

[0051] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0052] c、将步骤b中苗龄10d的幼苗切除叶片和根，将1-2cm的茎段接入培养基MS+6-BA0.5mg/L+TDZ 0.3mg/L+PP333 1.0mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行扩繁培养；

[0053] d、将步骤c扩繁后的幼苗中1.8cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 0.5mg/L+IBA 0.3mg/L中，并于置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下进行诱导生根；

[0054] e、将步骤d中高为9cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗4d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶1的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0055] 实施例7：

[0056] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌15min，75％酒精表面消毒30sec，无菌水冲洗5次；

[0057] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0058] c、将步骤b中苗龄12d的幼苗切除叶片和根，将1.8cm的茎段接入培养基MS+6-BA0.2mg/L+TDZ 0.3mg/L+PP333 0.5mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行扩繁培养；

[0059] d、将步骤c扩繁后的幼苗中2.0cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 0.2mg/L+IBA 0.5mg/L中，并于置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下诱导生根；

[0060] e、将步骤d中高为10cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗3d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶1.5的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0061] 实施例8：

[0062] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌30min，75％酒精表面消毒2min，无菌水冲洗6次；

[0063] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0064] c、将步骤b中苗龄14d的幼苗切除叶片和根，将2cm的茎段接入培养基MS+6-BA0.2mg/L+TDZ 0.5mg/L+PP333 1.0mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行扩繁培养；

[0065] d、将步骤c扩繁后的幼苗中1.8cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 0.5mg/L中，并置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下进行诱导生根；

[0066] e、将步骤d中高为9.5cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗3d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶2的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0067] 实施例9：

[0068] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌20min，75％酒精表面消毒30sec，无菌水冲洗5次；

[0069] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0070] c、将步骤b中苗龄15d的幼苗切除叶片和根，将2cm的茎段接入培养基MS+6-BA0.2mg/L+TDZ 1.0mg/L+PP333 2.0mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行扩繁培养；

[0071] d、将步骤c扩繁后的幼苗中2.0cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 0.5mg/L+IBA 0.2mg/L中，并置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下进行诱导生根；

[0072] e、将步骤d中高为10cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗3d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶3的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0073] 实施例10：

[0074] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌27min，75％酒精表面消毒1.5min，无菌水冲洗5次；

[0075] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0076] c、将步骤b中苗龄15d的幼苗切除叶片和根，将1cm的茎段接入培养基MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.5mg/L+PP333 0.5mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行扩繁培养；

[0077] d、将步骤c扩繁后的幼苗中2.0cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 1.0mg/L+IBA 0.2mg/L中，并于置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下进行诱导生根；

[0078] e、将步骤d中高为8cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗4d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶3的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0079] 实施例11：

[0080] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌25min，75％酒精表面消毒2min，无菌水冲洗6次；

[0081] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0082] c、将步骤b中苗龄12d的幼苗切除叶片和根，将2cm的茎段接入培养基MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.3mg/L+PP333 1.0mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行扩繁培养；

[0083] d、将步骤c扩繁后的幼苗中1.0cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 0.5mg/L+IBA 0.5mg/L中，并于置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下进行诱导生根；

[0084] e、将步骤d中高为9cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗3.5d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶2.8的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。

[0085] 实施例12：

[0086] a、挑取饱满的裕民无刺红花种子，然后将种子在超净工作台上用0.1％升汞灭菌18min，75％酒精表面消毒30sec，无菌水冲洗4次；

[0087] b、将步骤a中处理后的种子接入萌发培养基1/2MS中，温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行培养；

[0088] c、将步骤b中苗龄13d的幼苗切除叶片和根，将1cm的茎段接入培养基MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 1.0mg/L+PP333 0.5mg/L中，置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d进行扩繁培养；

[0089] d、将步骤c扩繁后的幼苗中1.5cm的腋芽切下，接入培养基1/2MS+NAA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L中，并于置于温度23±1℃，光照2000lx，时间16h/d条件下进行诱导生根；

[0090] e、将步骤d中高为10cm的幼苗，先打开封口膜于温室中炼苗4d，后洗去苗根部的培养基，移入蛭石、珍珠岩和营养土1∶1∶3的混合介质中，每天敞开薄膜，通风数次直至适应环境为止。