3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4-氯苯基)-1-丙酮制备治疗和/或预防雄激素受体相关疾病的药物的用途

摘要

本发明属于药物化学领域，涉及结构式如下的3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4-氯苯基)-1-丙酮作为非甾体雄激素受体调节剂的用途，该化合物具有雄激素受体拮抗剂，用于预防或/和治疗前列腺增生、前列腺癌、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发或痤疮等症状或疾病的药物。

权利要求

1.结构式如下的3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4-氯苯基)-1-丙酮或其药学上可接受的盐在制备预防或/和治疗与雄激素受体相关的前列腺增生、前列腺癌、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发或痤疮症状或疾病的非甾体类药物中的用途：

说明书

3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4-氯苯基)-1-丙酮制备治

疗和/或预防雄激素受体相关疾病

的药物的用途

[0001] 相关申请

[0002] 本申请是一件分案申请，原申请的申请号为200680018500.1(国际申请号PCT/CN2006/001106)，申请日为2006年5月26日，发明创造名称为“非甾体雄激素受体调节剂及其制备方法、药物组合物和用途”。

技术领域

[0003] 本发明属于药物化学领域，涉及3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4-氯苯基)-1-丙酮作为非甾体雄激素受体调节剂在制备预防或/和治疗前列腺增生、前列腺癌、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发或痤疮等症状或疾病的药物中的用途。

背景技术

[0004] 雄激素(Androgen)是人体内一类重要的甾体类性激素，通过与相应的特异受体结合促进细胞分化和组织生长，参与众多关键生理功能如男性胎儿生殖器官(如前列腺、贮精囊、附睾等)的形成、第二性征的发育与维持、以及精子产生等。男性或女性体内都存在一定比例的雄激素，如雄酮、二氢雄酮和肾上腺雄酮等。雄激素通过与雄激素受体(Androgen Receptor，AR)结合发挥重要的生理效应。雄激素或其受体的代谢及功能紊乱可诱发许多疾病或加速疾病进程，如前列腺增生、前列腺癌、男子不育、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发和痤疮等，这些疾病不仅严重影响了患者的生理和心理健康，而且极大地降低了他们的生活质量。

[0005] 良性前列腺增生是前列腺尿道周围区细胞的良性腺瘤性增生，并非癌症，生长缓慢且不会扩散到身体其他部分。良性前列腺增生是泌尿外科最常见的疾病之一，已经成为威胁男性健康的“隐形杀手”。临床统计表明，男性在40-79岁期间，良性前列腺增生症的发病率约为50％，80岁后则高达80％。随着生活节奏不断加快，良性前列腺增生患者日渐增多，且呈年轻化趋势。良性前列腺增生在困扰患者日常生活的同时，也易引起多种潜在并发症，如急性尿潴留、泌尿道感染、肉眼血尿、膀胱憩室、结石、肾积水及肾功能衰竭等。研究表明，患者体内的二氢睾酮是良性前列腺增生的最主要诱因。

[0006] 前列腺癌是一种严重的男性老年疾病，在欧美地区的发病率和死亡率非常高，占男性恶性肿瘤的首位[Landis SH，Murray T，1998，CA CancerJ.Clin.48，6-29]。我国前列腺癌的发病率虽低于欧美国家，但近年来随着人口老龄化程度的加速，传统饮食结构的改变，以及对这类疾病诊断水平的提高，发病率呈显著增长势态。临床调查显示，这类患者的年龄出现低龄化倾向，尤其在电脑操作员和出租车司机等需要长时间坐着工作的人群中。有关前列腺增生/前列腺癌的病因学研究和临床治疗已在全世界范围内受到医学界的广泛关注。

[0007] AR蛋白是核受体超家族的一个成员，属配体激活的转录因子，如图1所示，具有三个结构域：N端结构域(N Terminal Domain，NTD))、DNA结合域(DNA Binding Domain，DBD)和配体结合域(Ligand BindingDomain，LBD)[He B，Kemppainen JA，1999，J.Biol.Chem.274(52)，37219-25]。雄激素和AR的LBD形成复合物后，与位于靶基因启动子区的雄激素应答原件(Androgen Response Element，ARE)结合，起到激活或抑制靶基因表达的作用，从而调控靶组织的生理功能。前列腺是雄激素作用的重要靶器官，在胚胎期雄激素与分布于泌尿窦内胚层的AR结合，引起前列腺表皮细胞表型分化并诱导产生前列腺特异蛋白；在成熟腺体中，雄激素促进前列腺上皮细胞的分裂增殖从而维持器官的形态和功能[Waller AS，Sharrard RM，2000，J.Mol.Endocrinol.24(3)，339-351]。此外，雄激素还可调节前列腺的细胞代谢活动如脂类的生物合成，并控制一些前列腺特异表达蛋白的产生(如前列腺特异性抗原，Prostate-specificAntigen，PSA)等。

[0008] 雄激素与其受体的作用机制包括一系列复杂而又精密的信号转导过程，然而二者的特异性结合在其中扮演了不可替代的角色。很多AR相关疾病的产生，或是由于激素水平失常，或是因为受体功能紊乱，破坏了正常的相互作用平衡关系；在患病个体中，药物通过加强或抑制受体活化水平可达到治疗相关疾病的效果。因此，以AR为靶点，发现具有调节受体功能的药物已经成为全球性研究热点。干扰雄激素与AR作用的药物根据其效果，可分为雄激素激动剂和拮抗剂。雄激素拮抗剂一直是治疗前列腺增生/前列腺癌的重要手段(尤其是晚期病例)，它竞争结合肿瘤发生部位的AR，阻滞细胞对雄激素的摄取，抑制雄激素对靶器官的效应，从而抑制肿瘤细胞的生长，减小肿瘤体积并延缓疾病进程[Leewansangtong S，1998，Endocrine-related Cancer 5，325-339]。相比于其他抑制雄激素的治疗方法，例如睾丸切除、服用促黄体素释放激素类似物或睾酮合成酶(如5-还原酶)抑制剂，AR拮抗剂能够阻断雄激素与AR的结合[Hong-Chiang，C，Hiroshi M，1999，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96，11173-11177]，弥补前者的不足。此外，AR拮抗剂还能治疗妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发(秃顶)和痤疮等常见病症。目前广泛应用的雄激素拮抗剂可分为两类：甾体类和非甾体类。甾体类药物有醋酸环丙孕酮(Cyproterone Acetate，CPA)；非甾体类药物包括：氟他胺(Flutamide)、尼鲁米特(Nilutamide)及比卡鲁胺(Bicalutamide，Casodex)等。

[0009] 非甾体类抗雄激素药物对AR具有高度选择性，对其他甾体激素受体不会产生激素样或抗激素作用，在临床应用上颇受欢迎。然而，目前市售的抗雄激素药物均存在许多有待解决的问题。首先，病人服用后会出现各种副作用如胃肠道不适、恶心、呕吐、失眠、乏力、头痛、焦虑、视力模糊和性欲减退等；其次，前列腺增生/前列腺癌患者单一服用某种抗雄激素药物后会出现“抗雄激素减退综合症”(Antiandrogen WithdrawalSyndrome，AWS)，表现为用药一段时间后原本被抑制的PSA水平又迅速上升、肿瘤体积增大，只能停止服药或转用其他抗雄激素药物[Dicker AP，2003，Lancet Oncol.4(1)，30-36；Laufer M，Sinibaldi VJ，1999，Urology54(4)，745]。AWS的发生机理尚不清楚，一般认为是由于前列腺细胞的AR发生基因突变，使得原来起拮抗作用的药物反而产生激活AR的效应[Brinkmann AO，Trapman J，2000，Adv.Pharmacol.47，317-341]。因此，临床上迫切需要研究和开发具有全新化学结构的抗雄激素新药。

发明内容

[0010] 本发明通过高通量随机筛选和后继构效关系研究，合成并优化了一类三个系列的非甾体类小分子化合物。受体竞争结合试验表明代表性化合物对AR的亲和力小于0.2μM，荧光素酶报告基因共转染细胞水平检测提示其具有AR拮抗活性，显示了进一步开发成为新型雄激素受体调节剂的潜力。

[0011] 因此，本发明的目的在于提供一类具有如下通式I结构的非甾体雄激素受体调节剂化合物或其药学上可接受的盐；

[0012] 本发明的另一目的在于提供上述通式I化合物的制备方法；

[0013] 本发明的又一目的在于提供包含通式I化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物；

[0014] 本发明的再一目的在于提供通式I化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或/和治疗前列腺增生、前列腺癌、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发或痤疮等症状或疾病的非甾体类药物中的用途。

[0015] 本发明提供的非甾体雄激素受体功能调节剂化合物或其药学上可接受的盐具有如下通式I的结构：

[0016]

[0017] 其中：X1为N、CH、O或S；当X1为O或S时，R4不存在；

[0018] X2为O、NH或CHR；其中R为H、C1～6烷基、CF3、芳环或芳杂环；

[0019] R1和R2各为H、C1～6烷基、苄基、卤素、OR、SR、NR2、NO2、CN、CF3、COOR、CONR2、CONHR或COR，其中R的定义如上所述；

[0020] R3和R4各为H，C1～6烷基，苄基，任选被R7、R8和R9取代的C3～7环烷基，任选被R7、R8和R9取代的芳环，任选被R7、R8和R9取代的芳杂环，或(CHR)n，n是1～3的整数，其中R的定义如上所述；

[0021] R5为H，C1～18烷基，苄基，卤素，OR，SR，NR2，NO2，CN，CF3，任选被R7、R8和R9取代的C3～7环烷基，任选被R7、R8和R9取代的芳环，或任选被R7、R8和R9取代的芳杂环，其中R的定义如上所述；或所述的R5可与R3形成稠合环；

[0022] R6为H，C1～18烷基，苄基，卤素，OR，SR，NR2，NO2，CN，CF3，任选被R7、R8和R9取代的芳环，或任选被R7、R8和R9取代的芳杂环，其中R的定义如上所述；

[0023] 其中R7、R8和R9各为H、C1～18烷基、苄基、卤素、OR、SR、NR2、NO2、CN、CF3、COOR、CONR2、CONHR或COR，其中R的定义如上所述；

[0024] R10为C＝O、CHOH、或CH＝。

[0025] 根据R10的定义，在X1为N时，本发明的化合物即为以下三个系列：

[0026]

[0027] 本发明提供的通式I化合物，优选X1为N；R10为C＝O；R4为H；X2不存在；该化合物的具体结构式如下：

[0028]

[0029] 对于本发明的通式I化合物或其药学上可接受的盐，当分子中存在手性碳时，其为消旋体或光学活性体。

[0030] 本发明提供的通式I化合物，在X1为N时，可用下述两种方法来制备，其中：

[0031] 制备方法1，包括：

[0032] 以苯乙酮衍生物、芳香醛或脂肪醛和有机胺为原料，在极性溶剂(例如：乙醇、甲醇、异丙醇等)和催化量浓盐酸条件下，经Mannich反应，得到Mannich碱盐酸盐，用适量碱中和，得Mannich碱(1)；所制得的Mannich碱经催化氢化法(例如：Raney Ni/H2)或化学还原法(例如：NaBH4、LiAlH4等)将羰基还原，即得化合物(2)；该化合物(2)在酸催化条件下脱水(在硫酸、对甲苯磺酸等催化下，以苯或甲苯为溶剂，回流反应)，得到化合物(3)；反应流程如下：

[0033]

[0034] 其中对X2、R1、R2、R3、R4、R5和R6的定义如上所述；

[0035] 制备方法2，包括：

[0036] 以苯乙酮衍生物、芳香醛或脂肪醛、有机伯胺/仲胺为原料，在酸或碱性(例如：硫酸、盐酸、对甲苯磺酸、无机氢氧化物、醇钠等)条件下，苯乙酮衍生物先与芳香醛或脂肪醛缩合，生成α，β-不饱和羰基化合物，然后在催化量的碱作用下，与有机伯胺/仲胺经Michael加成反应，得化合物(1)；所得到的化合物(1)经催化氢化法或化学还原法将羰基还原，即得化合物(2)；化合物(2)在酸催化条件下脱水，得到化合物(3)。

[0037]

[0038] 本发明的通式I化合物可与任何合适的酸通过药学上常规成盐的方法得到其药物学上可接受的盐，例如，所述的酸为无机酸，如盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等；有机酸，诸如甲酸、乙酸、丙酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸等；烷基磺酸，如甲基磺酸、乙基磺酸等；芳基磺酸，如苯磺酸、对甲苯磺酸等均可使用。

[0039] 本发明提供的药物组合物包括治疗有效量的一种或多种通式I化合物或其药学上可接受的盐，该药物组合物可进一步含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

[0040] 本发明所提供的药物组合物其理想的比例是，通式I化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分占总重量比50％～99.5％，其余部分为占总重量比50％以下。

[0041] 本发明的通式I化合物或其药学上可接受的盐具有AR拮抗活性，因而可用于制备预防或/和治疗前列腺增生、前列腺癌、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发或痤疮等症状或疾病的非甾体类药物。

附图说明

[0042] 图1为说明AR蛋白三个结构域的示意图。

[0043] 图2是MWW6032化合物和比卡鲁胺在转染了报告基因的MDA-MB-453细胞中的作用对比。二氢睾酮(DHT)诱导细胞中萤光素酶的表达从而使化学发光读数增加，化合物对雄激素受体的拮抗作用表现为抑制DHT诱导的化学发光。

[0044] 图3检测MWW6032化合物和比卡鲁胺对DHT诱导的LNCaP细胞增殖的影响。结果显示，化合物MWW6032对DHT刺激的LNCaP细胞增殖有一定的抑制作用，其IC50值为2.28μM。

[0045] 图4和图5分别检测化合物MWW6032和比卡鲁胺对去势大鼠在雄激素作用下前列腺和精液囊组织湿重和干重的影响。比卡鲁胺对丙酸睾酮作用下前列腺和精液囊的生长具有显著抑制作用，化合物MWW6032对丙酸睾酮作用下上述组织的生长有一定的抑制趋势。

具体实施方式

[0046] 为了阐明本发明内容且不受其局限，对本发明分成以下几个小节进行详细描述。

[0047] 定义

[0048] 除非另有定义，本发明所用的技术和科学上的术语，与本发明所属领域的通用技术的一般理解具有相同意义。本处提到的来源于基因库和其他数据库的所有专利、申请、公布的申请和其他出版物和序列被全面收入引用作为参考。如果本节阐明的定义与本专利参用的来源于基因库和其他数据库的所有专利、申请、公布的申请和其他出版物和序列被收入和引用的定义阐述相反，或不一致时，以本节阐明的定义为准。

[0049] 本文所用，“一”或“一个”指“至少一个”或“一个或多个”。

[0050] 本文所用，“前列腺增生”指一类因尿道周围前列腺的良性腺瘤样增生而导致不同程度的膀胱流出道梗阻性疾病或症状，也称为“良性前列腺肥大”。

[0051] 本文所用，“前列腺癌”指一类男性生殖系统常见的恶性肿瘤，以腺癌为主。

[0052] 本文所用，“妇女多毛症”指一类因雄性激素分泌增多的疾病而在妇女中造成的多毛症状，即在不应该长毛的部位长出了许多又长又粗又黑的毛，或者毛发呈男性型分布，眉毛粗而浓黑、阴毛向腹部甚至脐部发展的现象。

[0053] 本文所用，“重度雄激素依赖型脱发”指一类严重的脂溢性脱发，又称男性型脱发。

[0054] 本文所用，“痤疮”指一类毛囊皮脂腺的慢性炎症，好发于颜面、胸背，表现为粉刺、丘疹、脓疱、结节、囊肿等损害，又称青年痤疮。

[0055] 本文所用的用于治疗某一特定疾病的化合物的“有效量”指足够改善或在某种程度上减轻与此病相伴的症状的量。这一剂量可以单一剂量给药，也可按照治疗方案给药。这一剂量可治愈疾病，但典型的是为了改善该症状而给药。为改善症状重复给药可能是需要的。

[0056] 本文所用，“药物学上可接受的盐、酯或其他衍生物”包括领域技术人员用已知方法易于制备的任何盐、酯或衍生物。这样衍生和生成的化合物可对动物和人给药，不具有毒性作用。该化合物或是具有药物活性，或是前体药物。

[0057] 本文所用，“治疗”指疾病和症状用任何方式得以改善，或其他有益的改变。治疗也包括本发明化合物在药物上的应用。

[0058] 本文所用，给予某一特定药物组合物“改善”某一特定疾病的症状是指任何减轻，无论永久的、临时的、长时期的、短暂的，都能归因于或与该药物组合物的施用有关。

[0059] 本文所用，“基本上纯”是指足够均匀，通过本领域技术人员为评价纯度使用的标准分析方法探测不出杂质，所述标准分析方法有如薄层层析法(TLC)，凝胶电泳和高效液相色谱法(HPLC)。或者足够纯也指即使进一步纯化也不能改变该物质可探测到的理化特性，例如酶活性和生物活性。用于纯化化合物制得基本上化学纯的方法，是本领域技术人员所公知的。然而基本上化学纯的化合物可以是立体异构体或同分异构体的混合物。在这种情况下，进一步纯化也许会增加化合物的比活性。

[0060] 本文所用，“前体药物”是指一种体内给药的化合物，该化合物可被代谢，或转化为生物学上、药物学上或治疗学上的活性形式。为了制造前体药物，药物活性化合物将被修饰，使该活性化合物通过代谢过程再产生。药物前体可被设计成改变其代谢稳定性，或运输特性的前体，以掩盖其副作用或毒性，改良药物的味觉，或改变其他特性。凭借药代动力学及药物体内代谢的知识，一旦药物学上活性化合物为已知，本领域技术人员就可以设计出该化合物的前体药物。[参见Medicinal Chemistry ABiochemical Approach，Oxford University Press，New York，1985，pages388-392]。

[0061] 术语“基本上”相同或均匀或相似，按照本领域技术人员对相关技术的理解可在上下文中有所改变，并且一般为至少70％，优选为至少80％，更优为至少90％，最优为至少95％相同。

[0062] 这里所用的“组合物”指任何混合物。可以是溶液、混悬液、液体、粉末、油膏、水性的、非水性的或它们的任何组合。

[0063] 这里所用的“联合”指两种或多种之间的任何联合。

[0064] 这里使用的术语“对象”包括人和动物，例如，狗，猫，牛，猪，啮齿动物等。有经验的实施者应可理解对象为适于并愿意对由雄激素和/或雄激素受体功能失调引起或伴随的前列腺增生、前列腺癌、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发和痤疮等疾病或症状进行治疗和预防。

[0065] 这里使用的任何保护性基团，氨基酸和其他化合物的缩写，与它们通用的、公认的缩写或IUPAC-IUB委员会颁布生化命名一致，除非特别说明。

[0066] 配方和剂量

[0067] 根据本发明，本发明的化合物单独或与其它药剂、载体或赋形剂联合，为任何合适的给药途径制定制剂，例如腔内注射、皮下注射、静脉内注射、肌内注射、真皮内注射、口服或局部用药。本方法可以使用注射给药制剂，以单剂量的形式在安瓿，或多剂量容器中与添加的缓冲剂注射给药。制剂可采取以下形式如混悬液、溶液或在油性或水性媒介中的乳液。制剂可以含有配方试剂如混悬剂、稳定剂和/或分散剂。此外，使用前，活性成分可以粉末形式与合适的载体，无菌无热源水或其他溶剂构成剂型。本发明的局部用药可采用泡沫，凝胶，软膏，油膏，转皮膜片，或膏状物。

[0068] 本发明中可以使用的用于给药的药用组合物和方法包括，但不局限于，美国专利5,736,154、6,197,801B1、5,741,511、5,886,039、5,941,868、6,258,374B1和5,686,102所报道的内容。

[0069] 治疗或预防的剂量大小会因病情的严重性和给药途径而有所变化。剂量和用药频度会因年龄、体重、健康状况和病人个体反应不同而不同。

[0070] 需要指出的是(诊治医生也应知道)，根据毒性和副反应，必须采取必要措施终止、中断或降低治疗剂量。相反，如果临床反应不明显(排除毒性和副反应)，医生应适当调整治疗方案，提高剂量。

[0071] 任何合适的给药途径均可被采用。剂型包括片剂，锭剂，豆状胶囊，分散剂，悬浮剂，溶液，胶囊，膜片及类似物等。

[0072] 在实际应用中，本发明的化合物，单独或与其他制剂联合，可以按照一般药物学混合技术与药物载体或赋形剂，例如β-环糊精和2-羟基-丙基-β-环糊精紧密混和。根据投药的需要，可采用通用载体、局部或非肠道途径的特殊载体。制备非肠道剂型，例如静脉内注射或灌输的组合物，可采用类似的药物媒质，本领域技术人员所公知的水，乙二醇，油，缓冲剂，糖，防腐剂，脂质体等。这种非肠道组合物的例子包括，但不限制于5％W/V的右旋糖，生理盐水或其他溶液。本发明的化合物的总剂量，单独或和其他制剂联合给药，可用小瓶静脉注射液给药，体积大约从1毫升到2000毫升。根据给药的总剂量，稀释液量也会不同。

[0073] 本发明还提供了实现治疗方案的药盒。该药盒将有效剂量的本发明的化合物以药物学上可接受的形式单独或与其他试剂联合，包含在一个或多个容器中。优选的药物形式是与无菌盐水，右旋糖溶液，缓冲溶液，或其他药物学上可接受的无菌液体合用。或者，组合物可被冻干或干燥；在这种情况下，药盒任选地进一步将一种药物学上可接受的溶液，优选无菌的溶液包含在一个容器中，以重新组成复合物形成用于注射目的的溶液。典型的药物学上可接受的溶液是盐水溶液和右旋糖溶液。

[0074] 在另一个实施方案中，本发明的药盒进一步包含用于注射组合物的优选以无菌形式包装的针或针筒和/或包装的酒精垫。可任选地包括供医生或患者使用的说明书。

[0075] 下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

[0076] 实施例1

[0077] 3-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙酮的合成

[0078]

[0079] 将苯甲醛10.60克(0.1mol)、4-氯苯胺12.76克(0.1mol)、无水乙醇150ml加入反应瓶中，室温搅拌10分钟后，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.1mol)和催化量的浓盐酸，然后室温搅拌反应20小时。反应结束后，将反应液冷却过夜，抽滤析出的固体，并用无水乙醇洗涤。所得固体悬浮于150ml 95％乙醇中，室温搅拌2小时，用饱和NaHCO3中和溶液至碱性，继续搅拌1小时，抽滤，用少量无水乙醇洗涤滤饼，粗品经乙醇/水混合溶剂(体积比1∶1)重结晶，得针状结晶25.61克，，收率73.2％；

[0080] mp 152～154℃；1HNMR(CDCl3)：7.79(2H，d，J＝8.2Hz，Ar-H)，7.12～7.42(7H，m，Ar-H)，7.02(2H，d，J＝8.8Hz，Ar-H)，6.50(2H，d，J＝8.8Hz，Ar-H)，4.92(1H，dd，J＝7.4Hz，CH)，3.45(2H，t，J＝7.4Hz，CH2)，2.40(3H，s，CH3)；MS(FAB)：350(M+H)。

[0081] 实施例2

[0082] 3-苯基-3-(4-溴苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙酮的合成

[0083]

[0084] 将苯甲醛10.60克(0.1mol)、4-溴苯胺17.20克(0.1mol)、无水乙醇150ml加入反应瓶中，室温搅拌10分钟后，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.1mol)和催化量的浓盐酸，然后室温搅拌反应24小时。反应结束后，将反应液冷却过夜，抽滤析出的固体，并用无水乙醇洗涤。所得固体悬浮于180ml 95％乙醇中，室温搅拌1.5小时，用饱和NaHCO3中和溶液至碱性，抽滤，用少量无水乙醇洗涤滤饼，粗品经乙醇/水混合溶剂(体积比1∶1)重结晶，得针状结晶28.04克，收率71.1％；

[0085] mp 147～149℃；1HNMR(CDCl3)：7.79(2H，d，J＝8.2Hz，Ar-H)，7.12～7.42(7H，m，Ar-H)，6.79(2H，d，J＝8.1Hz，Ar-H)，6.42(2H，d，J＝8.1Hz，Ar-H)，4.91(1H，dd，J＝7.4Hz，CH)，3.49(1H，d，J＝7.4Hz，CH2)，3.42(1H，d，J＝7.4Hz，CH2)，2.40(3H，s，CH3)；
MS(FAB)：395(M+H)。

[0086] 实施例3

[0087] 3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙酮的合成

[0088]

[0089] 将苯甲醛10.60克(0.1mol)、4-硝基苯胺13.82克(0.1mol)、无水乙醇150ml加入反应瓶中，室温搅拌10分钟后，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.1mol)和催化量的浓盐酸，然后于32℃搅拌反应24小时。反应结束后，将反应液冷却过夜，抽滤析出的固体，并用无水乙醇洗涤。所得固体悬浮于160ml 95％乙醇中，室温搅拌1.5小时，用饱和NaHCO3中和溶液至碱性，抽滤，用少量无水乙醇洗涤滤饼，粗品经乙醇/水混合溶剂(体积比1∶1)重结晶，得结晶32.04克，收率88.9％；

[0090] mp 157～159℃；1HNMR(CDCl3)：7.79(2H，d，J＝9.1Hz，Ar-H)，7.78(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，7.22～7.40(7H，m，Ar-H)，6.50(2H，d，J＝9.1Hz，p-NO2C6H4NH-)，5.58(1H，brs，NH)，5.07(1H，t，J ＝ 5.8Hz，CH)，3.48(2H，d，J ＝ 5.8Hz，CH2)，2.40(3H，s，CH3)；
MS(FAB)：361(M+H)。

[0091] 实施例4

[0092] 3-苯基-3-(4-羧基苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙酮的合成

[0093]

[0094] 将苯甲醛10.60克(0.1mol)、4-氨基苯甲酸13.72克(0.1mol)、无水乙醇140ml加入反应瓶中，室温搅拌5分钟后，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.1mol)和催化量的浓盐酸，然后于32℃搅拌反应20小时。反应结束后，将反应液冷却过夜，抽滤析出的固体，并用无水乙醇洗涤。所得固体悬浮于170ml 95％乙醇中，室温搅拌1.5小时，用饱和NaHCO3中和溶液至碱性，抽滤，用少量无水乙醇洗涤滤饼，粗品经乙醇重结晶，得结晶30.59克，收率85.1％；

[0095] mp 208～210℃；1HNMR(DMSO-d6)：7.86(2H，d，J＝8.2Hz，Ar-H)，7.58(2H，d，J＝8.6Hz，Ar-H)，6.98～7.46(7H，m，Ar-H)，6.51(2H，d，J＝8.6Hz，Ar-H)，5.06(1H，m，CH)，
3.24-3.35(2H，m，CH2)，2.37(3H，s，CH3)；MS(FAB)：360(M+H)。

[0096] 实施例5

[0097] 3-(4-甲基苯基)-3-苯胺基-1-(4-甲基苯基)-1-丙酮的合成

[0098]

[0099] 将4-甲基苯甲醛12.02克(0.1mol)、苯胺9.31克(0.1mol)、无水乙醇150ml加入反应瓶中，室温搅拌10分钟后，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.1mol)和催化量的浓盐酸，然后于32℃搅拌反应21小时。反应结束后，将反应液冷却过夜，抽滤析出的固体，并用无水乙醇洗涤。所得固体悬浮于160ml 95％乙醇中，室温搅拌2小时，用饱和NaHCO3中和溶液至碱性，抽滤，用少量无水乙醇洗涤滤饼，粗品经乙醇/水混合溶剂(体积比1∶1)重结晶，得结晶24.05克，收率73.0％；

[0100] mp 131～132℃；1HNMR(CDCl3)：7.81(2H，d，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.04～7.34(9H，m，Ar-H)，6.55(2H，d，J＝7.8Hz，Ar-H)，4.95(1H，dd，J＝6.4Hz，8.0Hz，CH)，3.43(1H，d，J＝6.4Hz，CH2)，3.41(1H，d，J＝8.0Hz，CH2)，2.40(3H，s，CH3)，2.30(3H，s，CH3)；MS(FAB)：330(M+H)。

[0101] 实施例6

[0102] 3-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-硝基苯基)-1-丙酮的合成

[0103]

[0104] 将苯甲醛10.60克(0.1mol)、4-氯苯胺12.76克(0.1mol)、无水乙醇180ml加入反应瓶中，室温搅拌10分钟后，加入4-硝基苯乙酮16.52克(0.1mol)和催化量的浓盐酸，然后室温搅拌反应26小时。反应结束后，将反应液冷却过夜，抽滤析出的固体，并用无水乙醇洗涤。所得固体悬浮于200ml 95％乙醇中，室温搅拌1小时，用饱和NaHCO3中和溶液至碱性，抽滤，用少量无水乙醇洗涤滤饼，粗品经乙醇/水混合溶剂(体积比1∶1)重结晶，得结晶31.23克，收率82.0％；

[0105] 1HNMR(CDCl3)：8.26(2H，d，J ＝ 8.6Hz，Ar-H)，7.99(2H，d，J ＝ 8.6Hz，Ar-H)，7.23-7.52(5H，m，Ar-H)，7.04(2H，d，J＝6.4Hz，Ar-H)，6.52(2H，d，J＝6.4Hz，Ar-H)，
4.97(1H，t，J＝6.2Hz，CH)，3.54(2H，d，J＝6.0Hz，CH2)；MS(FAB)：382(M+H)。

[0106] 实施例7

[0107] 3-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙醇的合成

[0108]

[0109] 将3-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙酮6.98克(0.02mol)和甲醇120ml加入反应釜中，室温搅拌至固体全溶解后，加入催化量Raney Ni催化剂，密闭反应釜后用氢气置换三次，然后于60～70℃通氢还原12小时。反应结束后，冷却至室温，过滤，少量甲醇洗涤滤饼，滤液减压蒸除溶剂，得一粉末固体，经乙醇/水混合溶剂(体积比1∶1)重结晶，得结晶5.80克，收率82.6％；

[0110] 1HNMR(CDCl3)：7.81(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，7.11～7.40(7H，m，Ar-H)，7.03(2H，d，J＝8.2Hz，Ar-H)，6.49(2H，d，J＝8.2Hz，Ar-H)，5.05(1H，t，J＝7.1Hz，CHOH)，4.94(1H，dd，J＝7.4Hz，CH)，3.51(2H，m，CH2)，2.41(3H，s，CH3)；MS(FAB)：351(M+)。

[0111] 实施例8

[0112] 3-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙烯的合成

[0113]

[0114] 将3-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙醇3.51克(0.01mol)、催化量对甲苯磺酸和甲苯80ml加入反应瓶中，升温回流搅拌反应3小时。反应结束后，冷却至室温，依次用饱和NaHCO3水溶液和饱和食盐水洗涤甲苯层，有机层经无水Na2SO4干燥，减压蒸除溶剂，残余物用无水乙醇重结晶，得白色固体2.50克，收率75.1％；1

[0115] HNMR(CDCl3)：7.82(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，7.16～7.42(7H，m，Ar-H)，7.01(2H，d，J＝8.2Hz，Ar-H)，6.63(1H，dd，J＝16.2Hz，7.4Hz，CH)，6.46(2H，d，J＝8.2Hz，Ar-H)，6.32(1H，d，J ＝ 16.2Hz，CH)，4.94(1H，d，J ＝ 7.4Hz，CH)，2.45(3H，s，CH3)；MS(FAB)：
334(M+H)。

[0116] 实施例9

[0117] 3-苯基-3-(1-哌啶基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙酮的合成

[0118]

[0119] 将苯甲醛10.60克(0.1mol)、哌啶8.52克(0.1mol)、无水乙醇150ml加入反应瓶中，室温搅拌10分钟后，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.1mol)和催化量的浓盐酸，然后于45℃搅拌反应18小时。反应结束后，将反应液冷却过夜，抽滤析出的固体，并用无水乙醇洗涤。所得固体悬浮于150ml 95％乙醇中，室温搅拌2小时，用饱和NaHCO3中和溶液至碱性，继续搅拌1小时，抽滤，用少量无水乙醇洗涤滤饼，粗品经无水乙醇重结晶，得粉末固体
23.37克，收率76.0％；

[0120] 1HNMR(CDCl3)：7.76(2H，d，J＝7.6Hz，Ar-H)，7.12～7.42(7H，m，Ar-H)，4.92(1H，dd，J ＝ 7.4Hz，CH)，3.45(2H，t，J ＝ 7.4Hz，CH2)，2.78(4H，m，CH2)，1.55(6H，m，CH2)；MS(FAB)：307(M+)。

[0121] 实施例10

[0122] 3-苯基-3-(1-哌啶基)-1-(4-硝基苯基)-1-丙酮的合成

[0123]

[0124] 将苯甲醛10.60克(0.1mol)、哌啶8.52克(0.1mol)、无水乙醇180ml加入反应瓶中，室温搅拌10分钟后，加入4-硝基苯乙酮16.52克(0.1mol)和催化量的浓盐酸，然后于45℃搅拌反应18小时。反应结束后，将反应液冷却过夜，抽滤析出的固体，并用无水乙醇洗涤。所得固体悬浮于150ml 95％乙醇中，室温搅拌2小时，用饱和NaHCO3中和溶液至碱性，继续搅拌1小时，抽滤，用少量无水乙醇洗涤滤饼，粗品经无水乙醇重结晶，得粉末固体
20.31克，收率60.0％；

[0125] 1HNMR(CDCl3)：8.27(2H，d，J ＝ 8.4Hz，Ar-H)，7.96(2H，d，J ＝ 8.4Hz，Ar-H)，7.18-7.49(5H，m，Ar-H)，4.89(1H，t，J＝6.2Hz，CH)，3.54(2H，d，J＝6.2Hz，CH2)，2.75(4H，+
m，CH2)，1.58(6H，m，CH2)；MS(FAB)：338(M)。

[0126] 实施例11

[0127] 3-甲基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙酮的合成

[0128]

[0129] 将乙醛4.84克(0.11mol)、4-氯苯胺12.76克(0.1mol)、无水乙醇150ml加入反应瓶中，室温搅拌5分钟后，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.1mol)和催化量的浓盐酸，然后室温搅拌反应16小时。反应结束后，抽滤析出的固体，并用无水乙醇洗涤。所得固体悬浮于120ml无水乙醇中，室温搅拌1小时，用饱和NaHCO3中和溶液至碱性，抽滤，用少量无水乙醇洗涤滤饼，粗品经无水乙醇重结晶，得粉末固体22.45克，收率78.0％。

[0130] 1HNMR(CDCl3)：7.81(2H，d，J ＝ 8.4Hz，Ar-H)，7.30(2H，d，J ＝ 8.4Hz，Ar-H)，7.05(2H，d，J＝8.6Hz，Ar-H)，6.47(2H，d，J＝8.6Hz，Ar-H)，4.75(1H，m，CH)，3.43(2H，t，J＝7.4Hz，CH2)，2.40(3H，s，CH3)，2.26(3H，d，J＝6.4Hz，CH3)；MS(FAB)：288(M+H)。

[0131] 实施例12

[0132] 3-异丙基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙酮的合成

[0133]

[0134] 将异丁醛7.30克(0.1mol)、4-氯苯胺12.76克(0.1mol)、无水乙醇150ml加入反应瓶中，室温搅拌5分钟后，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.1mol)和催化量的浓盐酸，然后室温搅拌反应20小时。反应结束后，抽滤析出的固体，并用无水乙醇洗涤。所得固体悬浮于150ml无水乙醇中，室温搅拌1小时，用饱和NaHCO3中和溶液至碱性，抽滤，用少量无水乙醇洗涤滤饼，粗品经无水乙醇重结晶，得粉末固体22.11克，收率70.0％；

[0135] 1HNMR(CDCl3)：7.82(2H，d，J ＝ 8.4Hz，Ar-H)，7.28(2H，d，J ＝ 8.4Hz，Ar-H)，7.02(2H，d，J＝8.8Hz，Ar-H)，6.51(2H，d，J＝8.8Hz，Ar-H)，4.75(1H，m，CH)，3.43(2H，m CH2)，2.34(3H，s，CH3)，1.81(1H，m CH)，0.98(6H，d，J＝6.4Hz，2CH3)；MS(FAB)：316(M+H)。

[0136] 生物活性测试

[0137] 1.材料设备

[0138] 1.1质粒和细胞株：雄激素受体表达质粒和荧光素酶报告基因质粒由国家新药筛选中心构建；人乳腺癌细胞株MDA-MB-453和人前列腺癌细胞株LNCaP均购自美国ATCC。

[0139] 1.2试剂：胎牛血清(Fetal bovine serum，FBS，GIBCO/BRL，USA)；活性炭和葡聚糖处理胎牛血清(CD-FBS，Hyclone，USA)；DMEM及RPMI 1640培养基(GIBCO/BRL，USA)；IMEM培养基(Bioresource，USA)，荧光素酶检测试剂盒(Promega Corporation，USA)；
Fugene 6(Roche Ltd.，USA)；[3H]二氢雄酮(Dehydrotestosterone，DHT，Amersham，UK)；
闪烁液(SuperMixTM，PerkinElmer，USA)；雄激素受体蛋白为该受体基因在昆虫细胞中的表达产物。

[0140] 1.3仪器：Envision 2101 Multilabel Reader(PerkinElmer，USA)；二氧化碳培养箱(Forma，USA)；Wallac TriLux 1450(PerkinElmer，USA)；VERSAmaxMicroplate Reader(Molecular Devices，USA)。

[0141] 2.实验方法及结果

[0142] 2.1受体结合活力测试

[0143] 以DMSO配制表1中示出的DHT和本发明的各化合物的梯度溶液，DHT浓度依次为0、0.3、1、3、10、30、100nM，化合物浓度依次为0、0.128、0.64、3.2、16、80、400、2000nM，分别加5μl各梯度DHT或待测化合物溶液至排管各孔中。将雄激素受体蛋白加入预先配有1μg/μl抑肽酶(Aprotinin)及亮抑酶肽(Leupeptin)等蛋白酶抑制剂的缓冲液(25mM
3
NaPO4，10％甘油(Glycerol)，10mM NaMoO4，10mM KF，pH7.5)中，加入终浓度为5nM的[H]DHT，充分混匀后，迅速按每孔195μl的量加入排管中，4℃孵育过夜。孵育完毕后，在排管每孔中加入50μl羟基磷灰石(HA)溶液(25％HA，25mM Na3PO4，pH7.4)，震荡混匀，孵育10分钟，其间每三分钟震荡一次。2500rpm离心3分钟，吸走上清液，保留沉淀。每孔加
200μl上述缓冲液，尽量避免振动沉淀，再次离心3分钟。吸走上清液，保留沉淀，重复离心1次，吸走上清液，保留沉淀，每孔加入300μl闪烁液，震荡混匀，用Wallac
TriLux1450读数。其中9个化合物对雄激素受体的亲和力与阳性药物DHT相当，其IC50值小于10nM(见表1)。

[0144] 表1 化合物对雄激素受体的结合活力测试

[0145]

[0146]

[0147] 2.2报告基因表达检测

[0148] MDA-MB-453细胞培养在含10％FBS和2mM L型谷氨酸盐(L-glutamine)的IMEM培养基中。转染前一天换成含5％CD-FBS的IMEM培养基，转染采用Fugene 6试剂。将报告基因载体和Fugene 6以1∶3的比例混合均匀逐滴加入细胞中，在37℃及5％CO2条件下培养6小时。细胞消化后以20000个/100μl/孔接入96孔培养板，以含5％CD-FBS的IMEM培养基于37℃培养2小时。加入待测化合物，比卡鲁胺浓度依次为0、0.256、1.28、6.4，32、160、800、4000nM，化合物MWW6032的浓度依次为0、2.56、12.8、64、320、1600、8000、
40000nM。培养24小时后，应用荧光素酶检测试剂盒检测酶活性，以此评估化合物对雄激素受体的药理活性。数据如图2所示，MWW6032显示了一定的雄激素受体拮抗活性。

[0149] 2.3前列腺癌细胞株增殖检测

[0150] LNCaP细胞培养在含10％FBS和2mM L型谷氨酸盐(L-glutamine)的RPMI1640培养基中。实验前一天换成含5％CD-FBS的RPMI1640培养基，待长至90％融合，用胰酶消化后以4000/90μL/孔加入96孔板，37℃培养过夜。将待测化合物以一定浓度稀释后以10μL/孔加入细胞，比卡鲁胺浓度依次为0、0.64、3.2、16、80、400、2000nM，化合物MWW6032的浓度依次为0、5.12、25.6、128、640、3200、16000nM，孵育30分钟后加入激动剂DHT(终浓度5nM)。37℃培养6天，第三天时换药一次。培养结束前加入MTT溶液(5mg/mL)，20μL/孔，测560nm光吸收值，参比波长690nm。实验数据如图3所示，该化合物对DHT刺激的LNCaP细胞增殖有一定的抑制作用，其IC50值为2.28μM。

[0151] 2.4大鼠动物模型检测化合物的雄激素受体拮抗活性

[0152] 取3周龄雄性SD大鼠24只，随机分为6组，分别为对照组(组1)，睾酮(Testosterone)组(组2)，睾酮(T)+比卡鲁胺(Casodex)25组(组3)，睾酮(T)+比卡鲁胺(Casodex)50组(组4)，睾酮(T)+MWW6032组(组5)，假手术(Sham)组(组6)。适应1周后，假手术组施行伪手术，其他五组切除睾丸(去势)。手术后8周，Testosterone组每天皮下注射0.25mg/kg丙酸睾酮；睾酮+比卡鲁胺25组每天皮下注射0.25mg/kg丙酸睾酮及灌胃25mg/kg比卡鲁胺；睾酮+比卡鲁胺50组每天给予0.25mg/kg丙酸睾酮及50mg/kg比卡鲁胺；睾酮+MWW6032组每天皮下给药0.25mg/kg丙酸睾酮及腹腔注射250mg/kg化合物MWW6032。连续给药10天后，于最后一次给药后24小时，处死大鼠，分别摘取前列腺和精液囊，称其湿重与干重，经体重(BW)校正后比较各组间的差异。实验结果如表2、表3及图
4、图5所示，皮下给药丙酸睾酮(0.25mg/kg)对于11周龄的去势SD大鼠，可以产生明显药效；25mg/kg的比卡鲁胺可以明显拮抗丙酸睾酮的作用；化合物MWW6032作用组的前列腺重量(PW)和精液囊重量(SVW)均比丙酸睾酮组为低，显示雄激素受体的拮抗活性。

[0153] 表2 大鼠组织湿重数据统计

[0154]前列腺重量/体重 精液囊重量/体重
组号 组别
*1000 *1000
1 对照 0.14±0.03 0.06±0.03
2 睾酮 1.49±0.28 0.97±0.54
3 睾酮+比卡鲁胺25 0.30±0.04 0.11±0.03
4 睾酮+比卡鲁胺50 0.22±0.03 0.07±0.04
5 睾酮+MWW6032 1.12±0.30 0.69±0.22
6 假手术 3.03±0.56 2.52±0.34

[0155] 表3 大鼠组织干重数据统计

[0156]

[0157] 3.实验结论

[0158] (1)化合物WMW6003、6015、6016、6021、6022、6030、6031、6032和6033在雄激素受体竞争性结合活力测试中显示较好的结合活性，其IC50数值小于10nM，与DHT相当。

[0159] (2)报告基因检测方法表明上述化合物(如MWW6003和MWW6032)具有较好的雄激素受体拮抗活性，其IC50数值接近市售雄激素受体拮抗剂比卡鲁胺。

[0160] (3)化合物MWW6032对前列腺癌细胞株LNCaP的雄激素依赖性增殖显示一定的抑制活性，IC50值为2.28μM，提示其在治疗前列腺癌方面的用途。

[0161] (4)化合物MWW6032在去势大鼠动物模型中，对丙酸睾酮作用下前列腺和精液囊的生长有一定的抑制趋势。