本发明公开了一种木香、川芎、醋制延胡索、当归、熟地黄、赤芍、红花、乌药、白术、丹参、制香附、菟丝子、甘草水制吴茱萸、泽兰和鸡血藤等十五味原料药组成的具有调经活血作用的中药复方制剂的质量检测方法。该方法包括延胡索、木香、川芎、当归、红花、丹参的薄层鉴别和赤芍的含量测定，从而能够更好地控制所述中药复方制剂的质量。
1.一种原料药组成如下的调经活血中药复方制剂的检测方法，
木香10-80重量份，川芎10-80重量份，醋制延胡索10-80重量份，当归30-240重量份，熟地黄20-160重量份，赤芍20-160重量份，红花15-120重量份，乌药15-120重量份，白术
15-120重量份，丹参30-240重量份，制香附30-240重量份，鸡血藤30-240重量份，甘草水制吴茱萸5-40重量份，泽兰30-240重量份，菟丝子40-320重量份；
所述中药复方制剂是指：取上述原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床上可以接受的任一种制剂；其特征在于所述检测方法包括如下I、II、III、IV和V的鉴定方法I、取所述中药复方制剂的日用剂量的5/6，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为
10∶6∶1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约3分钟，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
II、取所述中药复方制剂的日用剂量的5/6，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为27∶1的甲苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
III、取所述中药复方制剂的日用剂量的5/12，研细，加30-60℃石油醚10ml，超声处理
20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
IV、取所述中药复方制剂的日用剂量的1/4，研细，加正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.3g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至
20ml，加水饱和的正丁醇20ml，振摇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的20％亚硝酸钠溶液-30％钼酸钠溶液混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
V、取所述中药复方制剂的日用剂量的5/6，加水20ml，研磨10分钟，离心，取上清液加盐酸调PH值至2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，残渣加无水乙醇
1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为60∶5∶2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.根据权利要求1所述的调经活血中药复方制剂的检测方法，其特征在于所述的检测方法还包括如下的高效液相色谱法的含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为22∶78的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000，芍药苷峰与相邻峰的分离度大于1.5；
对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加50％甲醇溶液制成每1ml含25μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取所述中药复方制剂日用剂量的5/3，研细，称取细粉约日用剂量的5/18，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再次称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；
所述中药复方制剂日用剂量的1/12含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于0.30mg。
3.根据权利要求1或2所述的调经活血中药复方制剂的检测方法，其特征在于所述的中药复方制剂是通过如下方法制备的胶囊剂：
(1)将全部重量份的木香、川芎、醋制延胡索和三分之二重量份的当归粉碎成细粉；
(2)将剩余三分之一重量份的当归与全部重量份的熟地黄、赤芍、红花、乌药、白术、丹参、制香附、甘草水制吴茱萸、泽兰、鸡血藤、菟丝子加水煎煮两次，第一次3小时，第二次2小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏；
(3)将步骤2制得的稠膏加入步骤1制得的细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，每粒装0.38g。
4.根据权利要求3所述的调经活血中药复方制剂的检测方法，其特征在于所述胶囊剂制备步骤2中，加入10倍量水煎煮两次；所述滤液减压浓缩成60℃相对密度为1.32-1.35的稠膏；所述颗粒干燥温度为60℃。
5.根据权利要求3所述的调经活血中药复方制剂的检测方法，其特征在于所述胶囊剂的检测方法包括如下I、II、III、IV和V的鉴定方法I、取所述胶囊剂内容物3.8g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液
2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶6∶1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约3分钟，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
II、取所述胶囊剂内容物3.8g，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为27∶1的甲苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
III、取所述胶囊剂内容物1.9g，研细，加30-60℃石油醚10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
IV、取所述胶囊剂内容物1.14g，研细，加正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.3g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，加水饱和的正丁醇20ml，振摇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的20％亚硝酸钠溶液-30％钼酸钠溶液混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
V、取所述胶囊剂内容物3.8g，加水20ml，研磨10分钟，离心，取上清液加盐酸调PH值至2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为60∶5∶2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
6.根据权利要求3所述的调经活血中药复方制剂的检测方法，其特征在于所述胶囊剂的检测方法还包括如下的照高效液相色谱法的含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为22∶78的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000，芍药苷峰与相邻峰的分离度大于1.5；
对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加50％甲醇溶液制成每1ml含25μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取所述胶囊内容物7.6g，研细，称取细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再次称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；
所述胶囊剂每粒含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于0.30mg。
7.根据权利要求4所述的调经活血中药复方制剂的检测方法，其特征在于所述胶囊剂的检测方法包括如下I、II、III、IV和V的鉴定方法I、取所述胶囊剂内容物3.8g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液
2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶6∶1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约3分钟，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
II、取所述胶囊剂内容物3.8g，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为27∶1的甲苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
III、取所述胶囊剂内容物1.9g，研细，加30-60℃石油醚10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
IV、取所述胶囊剂内容物1.14g，研细，加正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.3g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，加水饱和的正丁醇20ml，振摇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的20％亚硝酸钠溶液-30％钼酸钠溶液混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
V、取所述胶囊剂内容物3.8g，加水20ml，研磨10分钟，离心，取上清液加盐酸调PH值至2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为60∶5∶2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8.根据权利要求4所述的调经活血中药复方制剂的检测方法，其特征在于所述胶囊剂的检测方法还包括如下的照高效液相色谱法的含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为22∶78的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000，芍药苷峰与相邻峰的分离度大于1.5；
对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加50％甲醇溶液制成每1ml含25μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取所述胶囊内容物7.6g，研细，称取细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再次称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；
所述胶囊剂每粒含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于0.30mg。
一种调经活血中药复方制剂的检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及中药复方制剂的检测方法，特别是一种调经活血中药复方制剂的检测方法。
[0002] 调经活血片收载于《中华人民共和国卫生部部颁标准》(1991：150)的“WS3-B-0614-91调经活血片”，处方组成为木香、川芎、延胡索(醋制)、当归、赤芍等，具有调经活血，行气止痛的功效，用于月经不调，行经腹痛等妇科疾病，临床疗效显著，见效快，市场反应良好。现有的质量标准中，鉴别项下除了显微鉴别外，仅有延胡索药材的薄层色谱鉴别，更没有含量测定；对于由十五味中药材组成的复方制剂，这样的鉴别方法显然难以控制、反映其真实的质量。因此，有必要建立更多专属性强的鉴别方法，另外寻找适宜的含量测定方法，从而更好地控制制剂的质量，保证患者的用药安全。
[0003] 本发明的目的是提供一种调经活血中药复方制剂的检测方法。
[0004] 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
[0005] 本发明所述调经活血中药复方制剂的原料药组成如下：
[0006] 木香10-80重量份 川芎10-80重量份 醋制延胡索10-80重量份 [0007] 当归30-240重量份 熟地黄20-160重量份 赤芍20-160重量份 [0008] 红花15-120重量份 乌药15-120重量份 白术15-120重量份 [0009] 丹参30-240重量份 制香附30-240重量份 鸡血藤30-240重量份 [0010] 甘草水制吴茱萸5-40重量份 泽兰30-240重量份 菟丝子40-320重量份 [0011] 本发明所述调经活血中药复方制剂的原料药组成优选：
[0012] 木香41.67重量份 川芎41.67重量份 醋制延胡索41.67重量份 [0013] 当归125重量份 熟地黄83.34重量份 赤芍83.34重量份 [0014] 红花62.5重量份 乌药62.5重量份 白术62.5重量份
[0015] 丹参125重量份 制香附125重量份 鸡血藤125重量份 [0016] 甘草水制吴茱萸20.83重量份 泽兰125重量份 菟丝子166.67重量份 [0017] 取上述原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床上可以接受的任一种制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、缓释制剂或控释制剂。
[0018] 本发明所述中药复方胶囊剂的制备工艺是：
[0019] (1)将全部重量份的木香、川芎、醋制延胡索和三分之二重量份的当归粉碎成细粉。
[0020] (2)将剩余三分之一重量份的当归与全部重量份的熟地黄、赤芍、红花、乌药、白术、 丹参、制香附、甘草水制吴茱萸、泽兰、鸡血藤、菟丝子加水煎煮两次，第一次3小时，第二次2小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏；其中优选每次加入10倍量水煎煮，滤液减压浓缩成60℃相对密度为1.32-1.35的稠膏。
[0021] (3)将步骤2制得的稠膏加入步骤1制得的细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，每粒装0.38g。
[0022] 所述中药复方胶囊剂口服，一次4粒，一日3次，日服剂量折算成生药量为15.501g。
[0023] 本发明中药复方不同制剂的日服剂量是确定的，而且不同制剂的日服剂量折算成生药量是相同的。故本发明检测方法以日用剂量为单位来称取检测制剂的。 [0024] 本发明所述中药复方制剂的检测方法包括如下I、II、III、IV和V的鉴定方法： [0025] I、取所述中药复方制剂的日用剂量的5/6，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液
10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶6∶1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约3分钟，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0026] II、取所述中药复方制剂的日用剂量的5/6，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为27∶1的甲苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； [0027] III、取所述中药复方制剂的日用剂量的5/12，研细，加30-60℃石油醚10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； [0028] IV、取所述中药复方制剂的日用剂量的1/4，研细，加正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.3g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，加水饱和的正丁醇20ml，振摇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的20％亚硝酸钠溶液-30％钼酸钠溶液混合液， 在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0029] V、取所述中药复方制剂的日用剂量的5/6，加水20ml，研磨10分钟，离心，取上清液加盐酸调PH值至2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为60∶5∶2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0030] 本发明所述中药复方制剂的质量检测方法还包括如下的高效液相色谱法的含量测定：
[0031] 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为22∶78的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000，芍药苷峰与相邻峰的分离度大于1.5；
[0032] 对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加50％甲醇溶液制成每1ml含25μg的溶液，即得；
[0033] 供试品溶液的制备：取所述中药复方制剂日用剂量的5/3，研细，称取细粉约日用剂量的5/18，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再次称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0034] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；
[0035] 所述中药复方制剂日用剂量的1/12含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于0.30mg。
[0036] 本发明所述胶囊剂的检测方法包括如下I、II、III、IV和V的鉴定方法 [0037] I、取所述胶囊剂内容物3.8g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶6∶1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约3分钟，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0038] II、取所述胶囊剂内容物3.8g，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为27∶1的甲苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0039] III、取所述胶囊剂内容物1.9g，研细，加30-60℃石油醚10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； [0040] IV、取所述胶囊剂内容物1.14g，研细，加正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.3g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，加水饱和的正丁醇20ml，振摇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的20％亚硝酸钠溶液-30％钼酸钠溶液混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0041] V、取所述胶囊剂内容物3.8g，加水20ml，研磨10分钟，离心，取上清液加盐酸调PH值至2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为60∶5∶2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 [0042] 本发明所述胶囊剂的质量检测方法还包括如下的高效液相色谱法的含量测定： [0043] 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为22∶78的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000，芍药苷峰与相邻峰的分离度大于1.5；
[0044] 对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加50％甲醇溶液制成每1ml含25μg的溶液，即得；
[0045] 供试品溶液的制备：取所述胶囊剂内容物7.6g，研细，称取细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再次称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； [0046] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；
[0047] 所述胶囊剂每粒含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于0.30mg。 [0048] 调经活血片质量标准((WS3-B-0614-91)中，片剂中延胡索乙素以毒性大的苯为提取溶剂，本发明以甲醇为提取溶剂，超声处理30分钟，以此取代毒性大的苯，降低了毒性；实验结果证明，此前处理方法可行。另外，该标准中薄层色谱采用普通硅胶G薄层板，展开剂添加二乙胺以保持展开时的碱性环境，但该方法受环境的温度、湿度影响大。本发明采用以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板，以正己烷-氯仿-甲醇(10∶6∶1)为展开剂，不滴加二乙胺，展开后，置碘蒸气中熏，置紫外灯(365nm)下检视斑点圆整，分离效果好，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，色谱特征明显；薄层展开受环境影响小，实验结果更稳定。
[0049] 本发明所述延胡索薄层鉴别(鉴别方法I)中，甲醇提取液蒸干后得到的水溶液，只要加浓氨试液调至PH＞7，即可实现延胡索乙素从水相转移至有机溶剂的乙醚相，从而在薄层色谱中检视出延胡索乙素的斑点。
[0050] 本发明所述薄层鉴别II、III、V无论采用市售的预制硅胶G薄层板，还是采用手工铺制的薄层板，都可以实现本发明所述的分离效果；薄层鉴别I、IV由于对粘合剂有特殊要求，则采用手工铺制的薄层板。
[0051] 与现有标准比，本发明增加了木香、川芎、当归、红花对照药材和丹参中原儿茶醛的鉴别，以及芍药苷的含量测定，兼顾了以原粉入药和水提浸膏入药的两部分药材，从而使该质量检测方法更全面地控制所述中药复方制剂的质量。
[0052] 下面通过实验说明所述胶囊剂的制剂工艺条件的优选，并以胶囊剂为例说明本发明所述质量检测方法的建立。
[0053] 实验例1所述胶囊剂制剂工艺的优选
[0054] 现有的调经活血片的制备工艺中未对每次煎煮加水量进行规定，而加水量的多少直接影响制剂的质量。本发明采用调经活血片处方单倍量，以干浸膏得率和芍药苷的含量作为考察指标，对加水量进行考察。实验分组以及结果见表1。
[0055] 表1加水量考察表
[0056]
[0057] 根据实验结果，煎煮加水量为8倍时干膏得率和芍药苷含量均较低，加水量10倍和12倍时，干膏得率和芍药苷含量相差不大，根据生产中节能降耗实际情况，确定加水量优选10倍。
[0058] 由于木香、当归、川芎含有较多活性挥发性成分，并以原粉入药，因此水煎煮提取的药液浓缩时，清膏的相对密度可以相对稠些，还易于湿法制粒，故浓缩稠膏的相对密度优选1.32-1.35(60℃)。
[0059] 湿法制粒得到的颗粒干燥时，为了防止木香、当归、川芎所含活性挥发性成分散失，干燥温度控制在60℃。
[0060] 实验例2延胡索薄层鉴别的专属性试验
[0061] 取处方中不含延胡索的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，取供试品3.8g，阴性样品3.4g，延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110726-200208)按说明书所述的方法配制成供试品溶液、阴性样品溶液、对照品溶液。吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶6∶1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约3分钟，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品色谱中与对照品色谱相应的位置上无相应的斑点。说明阴性无干扰。(见图1)
[0062] 实验例3木香薄层鉴别的专属性试验
[0063] 取处方中不含木香的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，取供试品3.8g，阴性样品3.4g，木香对照药材(中国药品生物制品检定所，批号：120921-20405)0.3g按说明书所述的方法配制成供试品溶液、阴性样品溶液、对照药材溶液。吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为27∶1的甲苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品色谱中与对照品色谱相应的位置上无相应的斑点。说明阴性无干扰。(见图2)
[0064] 实验例4当归及川芎薄层鉴别的专属性试验
[0065] 取处方中不含当归及川芎的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，取供试品2g，阴性样品1.5g，当归对照药材(中国药品生物制品检定所，批号：120927-200310)、川芎对照药材(中国药品生物制品检定所，批号：120918-200406)各0.5g按说明书所述的方法配制成供试品溶液、阴性样品溶液、对照药材溶液。吸取上述溶液各
5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品色谱中与对照品色谱相应的位置上无相应的斑点。说明阴性无干扰。(见图3)
[0066] 实验例5红花薄层鉴别的专属性试验
[0067] 取处方中不含红花的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，取供试品1.2g，阴性样品1.2g，红花对照药材(中国药品生物制品检定所，批号：120906-200308)0.3g按说明书所述的方法配制成供试品溶液、阴性样品溶液、对照药材溶液。吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的20％亚硝酸钠溶液-30％钼酸钠溶液混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品色谱中与对照品色谱相应的位置上无相应的斑点。说明阴性无干扰。(见图4)
[0068] 实验例6丹参薄层鉴别的专属性试验
[0069] 取处方中不含丹参的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，取供试品2g，阴性样品2g，原儿茶醛对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110810-200205)按说明书所述的方法配制成供试品溶液、阴性样品溶液、对照品溶液。吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为60∶5∶2的氯仿-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品色谱中与对照品色谱相应的位置上无相应的斑点。说明阴性无干扰。(见图5)
[0070] 实验例7含量测定
[0071] 1)仪器与试药
[0072] 岛津LC-10ADVP溶剂输送泵，SPD-10ADVP检测器，CTO-10ADVP柱温箱，PhenomenexC18色谱柱，Startorius BS电子天平；色谱纯甲醇，其它试剂均为分析纯；芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110736-200220)。
[0073] 2)系统适应性试验
[0074] 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为22∶78的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，流速0.5-1.0ml/min，检测波长为230nm，柱温30-40℃。照此分析条件，芍药苷与制剂中的其它组分均能达到基线分离(见图6和7)，分离度大于1.5，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000。
[0075] 3)波长选择
[0076] 取芍药苷对照品溶液，置TU-1900UV Win4.0型紫外仪内扫描，结果芍药苷在230nm处有一吸收峰(见图8)，故选择230nm为检测波长。
[0077] 4)流动相的选择
[0078] 现有技术中以体积比为40∶65的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相；经过试验发现以体积比为22∶78的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，可将芍药苷与制剂中的其它组分分开(见图6和7)。
[0079] 5)供试品溶液的制备
[0080] 在提取溶剂种类和体积一定的情况下，超声处理时间对供试品中芍药苷的浸出率有重要影响，故考察了不同超声时间对供试品含量测定的影响，试验分组及结果见表2。 [0081] 表2超声处理时间的确定
[0082]
[0083] 由上表可见，超声提取40分钟，样品中的芍药苷便可充分提出，故确定超声时间为40分钟。
[0084] 6)空白试验
[0085] 取处方中不含赤芍的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，再按照说明书中记载的供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液，依说明书记载的含量测定方法试验，结果阴性无干扰。(见图9)
[0086] 7)线性关系考察
[0087] 精密称取芍药苷对照品15.0mg，置50ml容量瓶中，加50％甲醇溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取适量，用50％甲醇溶液稀释成不同浓度的对照品溶液：6.2μg/ml、14.4μg/ml、18.6μg/ml、24.8μg/ml、31.0μg/ml。分别精密吸取上不同浓度的对照品溶液各20μl，按照说明书记载的色谱分析条件，测定峰面积，结果见表3。 [0088] 表3线性关系考察结果
[0089]
[0090] 以峰面积积分值为纵坐标，芍药苷的量为横坐标绘制标准曲线(见图10)，计算得回归方程：
[0091] Y＝2489267X-35225，R＝0.9996
[0092] 表明芍药苷在0.124μg-0.620μg范围内具有良好线性关系。
[0093] 8)精密度试验
[0094] 精密吸取芍药苷对照品溶液(18.6μg/ml)20μl，重复进样5次，测定峰面积(见表4)，RSD＝0.59％，表明本法精密度良好。
[0095] 表4精密度试验结果
[0096]
[0097] 9)稳定性试验
[0098] 取所述胶囊剂内容物约1g，精密称定，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，精密吸取所述供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，每隔2小时进样测定一次，在8小时内，峰面积基本保持一致，RSD＝1.02％。表明芍药苷在50％甲醇溶液中8小时内稳定，结果见表5。
[0099] 表5稳定性试验结果
[0100]
[0101] 10)重复性试验
[0102] 分别取同一批所述胶囊剂内容物5份，精密称定，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定芍药苷的含量，RSD＝0.37％，表明本法重复性良好，结果见表6。
[0103] 表6重复性试验结果
[0104]
[0105] 11)加样回收率试验
[0106] 取同一批已知含量的所述胶囊剂内容物5份，每份约0.5g，精密称定，分别加入芍药苷对照品适量，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定芍药苷的含量，计算回收率，平均回收率为99.7％，RSD＝1.57％，表明本法回收率良好，结果见表7。
[0107] 表7回收率试验结果
[0108]
附图说明
[0109] 图1延胡索薄层鉴别，其中1为延胡索乙素对照品，2、3、4为三批样品，5为阴性样品
[0110] 图2是木香薄层鉴别，其中1为木香对照药材，2、3、4为三批样品，5为阴性样品 [0111] 图3是当归及川芎薄层鉴别，其中1为川芎对照药材，2为当归对照药材，3、4、5为三批样 品，6为阴性样品
[0112] 图4是红花薄层鉴别，其中1为红花对照药材，2、3、4为三批样品，5为阴性样品 [0113] 图5是丹参薄层鉴别，其中1为原儿茶醛对照品，2、3、4为三批样品，5为阴性样品 [0114] 图6是芍药苷对照品溶液HPLC图谱
[0115] 图7是所述胶囊剂供试品溶液HPLC图谱
[0116] 图8是芍药苷对照品溶液紫外扫描图
[0117] 图9是阴性样品溶液HPLC图谱
[0118] 图10是芍药苷标准品溶液标准曲线图
具体实施方式
[0119] 下述实施例均能实现上述实验例的效果，但本发明并不限于所述实施例。 [0120] 实施例1本发明胶囊剂
[0121] 木香41.67g 川芎41.67g 醋制延胡索41.67g [0122] 当归125g 熟地黄83.34g 赤芍83.34g
[0123] 红花62.5g 乌药62.5g 白术62.5g
[0124] 丹参125g 制香附125g 鸡血藤125g
[0125] 甘草水制吴茱萸20.83g 泽兰125g 菟丝子166.67g
[0126] 以上十五味，将木香、川芎、延胡索及83.33g当归粉碎成细粉，将41.67g当归与熟地黄等十一味加9倍量水煎煮两次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩成60℃相对密度1.32-1.35的稠膏，加入上述细粉混匀，制成颗粒，60℃干燥，装入胶囊，制成1000粒，0.38g/粒。
[0127] 服用方法及日服用剂量：口服，一次4粒，一天三次。
[0128] 实施例2本发明片剂
[0129] 木香20g 川芎20g 醋制延胡索20g 当归60g 熟地黄40g [0130] 赤芍40g 红花30g 乌药30g 白术30g 丹参60g [0131] 制香附60g 鸡血藤60g 甘草水制吴茱萸10g 泽兰60g 菟丝子80g [0132] 以上十五味，将木香、川芎、延胡索及40g当归粉碎成细粉，将当归20g与熟地黄等十一味加9倍量水煎煮两次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成60℃相对密度1.32-1.35的稠膏，加入上述细粉及辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压成600片，
0.3g/片。
[0133] 服用方法及日服用剂量：口服，一次5片，一天三次。
[0134] 实施例3本发明颗粒剂
[0135] 木香15g 川芎30g 醋制延胡索30g 当归80g 熟地黄60g [0136] 赤芍80g 红花30g 乌药30g 白术60g 丹参70g [0137] 制香附60g 鸡血藤80g 甘草水制吴茱萸5g 泽兰60g 菟丝子120g [0138] 以上十五味，按照常规工艺，加入适量辅料，制成颗粒剂，1.0g/袋。 [0139] 服用方法及日服用剂量：开水冲服，一次一袋，一天三次。
[0140] 实施例4本发明水蜜丸剂
[0141] 木香10g 川芎10g 醋制延胡索15g 当归40g 熟地黄30g [0142] 赤芍25g 红花20g 乌药15g 白术20g 丹参40g [0143] 制香附40g 鸡血藤60g 甘草水制吴茱萸5g 泽兰30g 菟丝子40g [0144] 以上十五味，按照常规工艺，加入适量辅料，制成水蜜丸剂，6.0g/袋。 [0145] 服用方法及日服剂量：一次一袋，一天三次。
[0146] 实施例5本发明控释剂
[0147] 木香80g 川芎80g 醋制延胡索80g 当归200g
[0148] 熟地黄100g 赤芍80g 红花100g 乌药95g
[0149] 白术120g 丹参240g 制香附200g 鸡血藤240g
[0150] 甘草水制吴茱萸20g 泽兰180g 菟丝子300g
[0151] 以上十五味，按照常规工艺，加入适量辅料，制成控释剂。
[0152] 服用方法：口服，一天一至二次，。
[0153] 实施例6实施例1制备的胶囊剂检测方法
[0154] 【鉴别】
[0155] I、取所述胶囊剂内容物3.8g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶6∶1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约3分钟，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0156] II、取所述胶囊剂内容物3.8g，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为27∶1的甲苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0157] III、取所述胶囊剂内容物1.9g，研细，加30-60℃石油醚10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 [0158] IV、取所述胶囊剂内容物1.14g，研细，加正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.3g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，加水饱和的正丁醇20ml，振摇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的20％亚硝酸钠溶液-30％钼酸钠溶液混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0159] V、取所述胶囊剂内容物3.8g，加水20ml，研磨10分钟，离心，取上清液加盐酸调PH值至2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为60∶5∶2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 [0160] 【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定 [0161] 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为22∶78的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000，芍药苷峰与相邻峰的分离度大于1.5。
[0162] 对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加50％甲醇溶液制成每1ml含25μg的溶液，即得。
[0163] 供试品溶液的制备：取所述胶囊剂内容物7.6g，研细，称取细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再次称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 [0164] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算， 即得。
[0165] 所述胶囊剂每粒含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于0.30mg。 [0166] 实施例7实施例2制备的片剂的检测方法
[0167] I、取所述片剂3.75g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶6∶1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约3分钟，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0168] II、取所述片剂3.75g，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为27∶1的甲苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0169] III、取所述片剂1.9g，研细，加30-60℃石油醚10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为
9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0170] IV、取所述片剂1.1g，研细，加正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.3g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，加水饱和的正丁醇20ml，振摇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的20％亚硝酸钠溶液-30％钼酸钠溶液混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 [0171] V、取所述片剂3.75g，加水20ml，研磨10分钟，离心，取上清液加盐酸调PH值至2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为
60∶5∶2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 [0172] 【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定 [0173] 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为
22∶78的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000，芍药苷峰与相邻峰的分离度大于1.5。
[0174] 对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加50％甲醇溶液制成每1ml含25μg的溶液，即得。
[0175] 供试品溶液的制备：取所述片剂10片，研细，称取细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再次称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0176] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
[0177] 所述片剂每片含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于0.23mg。
[0178] 实施例8实施例3制备的颗粒剂的检测方法
[0179] 【鉴别】
[0180] I、取所述颗粒剂的日用剂量的5/6，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶6∶1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约3分钟，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0181] II、取所述颗粒剂的日用剂量的5/6，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为27∶1的甲苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 [0182] III、取所述颗粒剂的日用剂量的5/12，研细，加30-60℃石油醚10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 [0183] IV、取所述颗粒剂的日用剂量的1/4，研细，加正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.3g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，加水饱和的正丁醇20ml，振摇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的20％亚硝酸钠溶液-30％钼酸钠溶液混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0184] V、取所述颗粒剂的日用剂量的5/6，加水20ml，研磨10分钟，离心，取上清液加盐酸调PH值至2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为60∶5∶2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 [0185] 【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定 [0186] 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为22∶78的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000，芍药苷峰与相邻峰的分离度大于1.5。
[0187] 对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加50％甲醇溶液制成每1ml含25μg的溶液，即得。
[0188] 供试品溶液的制备：取所述颗粒剂日用计量的5/3，研细，称取细粉约日用剂量的5/18，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理
40分钟，放冷，再次称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0189] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
[0190] 所述颗粒剂日用剂量的1/12含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于0.30mg。 [0191] 实施例9实施例4制备的水蜜丸剂的检测方法
[0192] 【鉴别】
[0193] I、取所述水蜜丸剂的日用剂量的5/6，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过， 滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为10∶6∶1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏约3分钟，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0194] II、取所述水蜜丸剂的日用剂量的5/6，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为27∶1的甲苯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 [0195] III、取所述水蜜丸剂的日用剂量的5/12，研细，加30-60℃石油醚10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 [0196] IV、取所述水蜜丸剂的日用剂量的1/4，研细，加正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.3g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至
20ml，加水饱和的正丁醇20ml，振摇提取，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的20％亚硝酸钠溶液-30％钼酸钠溶液混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0197] V、取所述水蜜丸剂的日用剂量的5/6，加水20ml，研磨10分钟，离心，取上清液加盐酸调PH值至2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为60∶5∶2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
