治疗肺间质纤维化的灯盏花素与三七皂苷Rgl组合物及其应用

摘要

本发明提供了一种用于治疗肺间质纤维化的灯盏花素与三七皂苷Rg1组合物，其重量比为2～5∶1～2。本发明还提供了所述组合物在制备治疗肺间质纤维化药物中的应用。本发明的灯盏花素与三七皂苷Rg1组合物按照一定比例进行复配，具有良好的抗肺间质纤维化作用，效果显著，副作用少；该组合物原料易得，并且能够通过常规方法制成各种常用剂型，如片剂、胶囊剂、注射剂等，制备方法简单；所述组合物的药理作用明显，主要表现为：体外能抑制人胚肺成纤维细胞的活性，有较好的剂量依赖性；体内能降低肺间质纤维化小鼠的肺系数和肺组织羟脯氨酸的含量；还能减轻肺间质纤维化小鼠的肺泡炎和肺间质纤维化的程度。

权利要求

1.一种用于治疗肺间质纤维化的灯盏花素与三七皂苷Rg1组合物，其特征在于，灯盏花素与三七皂苷Rg1的重量比为2～5∶1～2。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，灯盏花素与三七皂苷Rg1的重量比为

2～3∶1。

3.权利要求1或2所述的组合物在制备治疗肺间质纤维化药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物为以灯盏花素与三七皂苷Rg1组合物为活性成分，与可药用载体制成的片剂、胶囊剂、注射剂。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述片剂按重量份计的配方为：灯盏花素

200～500份、三七皂苷Rg1 100～200份、崩解剂8～150份、润滑剂5～15份；所述崩解剂为微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素或羧甲基淀粉钠；所述润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述片剂还包括矫味剂120～360份；所述矫味剂为乳糖。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述胶囊剂按重量份计的配方为：灯盏花素200～500份、三七皂苷Rg1 100～200份、润滑剂5～15份；所述润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述胶囊剂还包括矫味剂80～200份；

所述矫味剂为乳糖。

9.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述注射剂按重量份计的配方为：灯盏花素300～600份、三七皂苷Rg1 150～300份、氯化钠120～360份、注射用水500～1500份。

说明书

治疗肺间质纤维化的灯盏花素与三七皂苷Rgl组合物及其

应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种用于治疗肺间质纤维化的组合物，具体地说，涉及一种灯盏花素与三七皂苷Rg1组成的组合物，以及该组合物在制备药品中的应用。

背景技术

[0002] 肺间质纤维化是由不同病因或不明原因引起的肺间质病变，其病理特征是早期有肺泡结构破坏和弥漫性肺泡炎，继发出现细胞外基质过度沉积，并逐渐演变为弥漫性肺间质纤维化，从而造成肺功能障碍，患者多死于进行性加重的呼吸衰竭。据资料显示，不明原因引起的特发性肺间质纤维化(Idiopathicpulmonary Fibrosis，IPF)约占肺间质疾病的60～65％，是最常见的肺间质疾病，其5年生存率低于50％，10年生存率约30％。目前，肺间质纤维化的发病率呈不断上升趋势，且病死率高，严重威胁着人们的生命健康。 [0003] 目前，临床上对于肺间质纤维化的治疗主要采用激素、免疫抑制剂、细胞毒类药物(如硫哇嚷吟、环磷酞胺)和抗纤维化制剂(如秋水仙碱、D-青霉胺)单用或联用，但无论哪一种治疗方法都缺乏有效性、且副作用较大。

[0004] 此外，对于肺间质纤维化的治疗也出现了一些新的观点和治疗方法，比如采用细胞因子抑制剂、抗粘附分子抗体、抗C-C趋化因子、抗氧化剂、细胞外基质沉积的拮抗、抗蛋白酶等，但是以上几种治疗肺间质纤维化的方法，很多都还处在实验研究或临床研究阶段。而至今尚没有一种药物可以改变或逆转肺间质纤维化的炎症过程以及纤维化过程。因此，研究和开发治疗肺间质纤维化的有效药物，有着重要的现实意义和发展前景。 [0005] 灯盏花和三七主要分布于我国西南省区，灯盏花的主要活性成分是灯盏花素(Breviscapine)，对其药理作用的研究多集中在其对心、脑、血管、血液和消化系统等的影响方面，也有研究表明灯盏花素具有一定的抗肺间质纤维化作用；三七具有抗疲劳、提高耐缺氧能力、活血化瘀及提高免疫功能等多方面的作用，有研究表明三七总皂苷具有抗肝纤维化作用，三七皂苷Rg1(Ginsenoside-Rg1)是其主要成份；本发明人将灯盏花素和三七皂苷Rg1按照一定比例混合后，进行抗肺纤维化研究，发现该组合物具有良好的抗肺间质纤维化作用。

[0006] 发明内容

[0007] 本发明的目的在于提供一种用于治疗肺间质纤维化的灯盏花素和三七皂苷Rg1组合物。

[0008] 本发明的另一目的在于提供所述组合物在制备治疗肺间质纤维化药物中的应用。 [0009] 为了实现本发明的目的，本发明治疗肺间质纤维化的灯盏花素和三七皂苷Rg1的组合物，其灯盏花素与三七皂苷Rg1的重量比为2～5∶1～2。

[0010] 优选的是，灯盏花素与三七皂苷Rg1的重量比为2～3∶1。

[0011] 特别地，本发明中的灯盏花素和三七皂苷Rg1均为从天然植物中提取的单体化合物，其结构分别如式I、式II所示，分子量分别为462.5及801.01，且水溶性好，易制成各种制剂。

[0012]

[0013] 所述灯盏花素及三七皂苷Rg1组合物在制备治疗肺间质纤维化 药物中的应用。 [0014] 所述药物为以灯盏花素与三七皂苷Rg1组合物为活性成分，与可药用载体制成的常用剂型，如片剂、胶囊剂、注射剂等。

[0015] 所述片剂按重量份计的配方为：灯盏花素200～500份、三七皂苷Rg1100～200份、崩解剂8～150份、润滑剂5～15份；所述崩解剂为微晶纤维素(MCC)、低取代羟丙基纤维素或羧甲基淀粉钠；所述润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇。此外，还可以包括矫味剂120～360份；所述矫味剂为乳糖。

[0016] 制备方法：将除润滑剂之外的原料混合均匀，用水润湿，过筛(16～20目)，干燥，再次过筛(18～22目)，加入润滑剂，混合均匀，压片。

[0017] 所述胶囊剂按重量份计的配方为：灯盏花素200～500份、三七皂苷Rg1100～200份、润滑剂5～15份；所述润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇。此外，还可以包括矫味剂80～200份；所述矫味剂为乳糖。

[0018] 制备方法：将除润滑剂之外的原料混合均匀，用水润湿，过筛(18～20目)，干燥，再次过筛(20～22目)，加入润滑剂，混合均匀，装入胶囊。

[0019] 所述注射剂按重量份计的配方为：灯盏花素300～600份、三七皂苷Rg1150～300份、氯化钠120～360份、注射用水500～1500份。

[0020] 制备方法：将活性成分和氯化钠溶于注射用水中，过滤，将滤液在无菌条件下装入安瓶中。

[0021] 本发明通过体外细胞试验、小鼠体内试验以及临床试验，进一步说明了本发明组合物的药理作用及药效。体外实验结果表明，本发明中的灯盏花素与三七皂苷Rg1按一定比例复配后，对人胚肺成纤维细胞的抑制率显著高于单用灯盏花素及三七皂苷Rg1(同浓度相比)；体内实验也表明本发明组合物在降低肺组织羟脯氨酸含量、肺泡炎和肺纤维化评分方面优于单用灯盏花素及三七皂苷Rg1；本发明中的灯 盏花素与三七皂苷Rg1按一定比例复配后，灯盏花素和三七皂苷Rg1之间具有优异的协同作用。

[0022] 本发明的优点在于：

[0023] 1、三七皂苷Rg1与灯盏花素按一定比例进行复配，具有良好的抗肺间质纤维化作用，效果显著，副作用少。

[0024] 2、组合物原料易得，且能够通过常规方法制成各种常用剂型，如片剂、胶囊剂、注射剂等，制备方法简单。

[0025] 3、三七皂苷Rg1与灯盏花素组合物的药理作用明显，主要表现为：体外能抑制人胚肺成纤维细胞的活性，有较好的剂量依赖性；体内能降低肺间质纤维化小鼠的肺系数和肺组织羟脯氨酸的含量；还能减轻肺间质纤维化小鼠的肺泡炎和肺间质纤维化程度。 附图说明

[0026] 图1为本发明中灯盏花素、三七皂苷Rg1和组合物对MRC-5细胞的抑制率量-效曲线。

[0027] 图2为本发明中正常对照组的MRC-5细胞的形态。

[0028] 图3～9依次为本发明中不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L和320μmol/L)的灯盏花素对MRC-5细胞作用后的细胞形态。 [0029] 图10-16依次为本发明中不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L和320μmol/L)的三七皂苷Rg1对MRC-5细胞作用后的细胞形态。

[0030] 图17～23依次为本发明中不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L和320μmol/L)的组合物对MRC-5细胞作用后的细胞形态。 具体实施方式

[0031] 实施例1组合物片剂的制备(1000片)

[0032] 配方：三七皂苷Rg1(昆明制药厂，以下实施例均相同)100g、 灯盏花素粉剂(杰象药物原料有限公司，以下实施例均相同)200g、乳糖120g、MCC 50g、硬脂酸镁5g。 [0033] 制备方法：将活性成分、乳糖及MCC混合均匀，用水润湿，然后18目筛，干燥，再次过20目筛，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片。

[0034] 实施例2组合物片剂的制备(1000片)

[0035] 配方：灯盏花素300g、三七皂苷Rg1100g、羧甲基淀粉钠24g、硬脂酸镁5g。 [0036] 制备方法：将活性成分、MCC混合均匀，用水润湿，然后18目筛，干燥，再次过20目筛，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片。实施例3组合物胶囊剂的制备(1000粒) [0037] 配方：灯盏花素200g、三七皂苷Rg1100g、乳糖80g、硬脂酸镁5g。 [0038] 制备方法：将活性成分、乳糖混合均匀，用水润湿，然后过20目筛，干燥，再次过22目筛，加入硬脂酸镁，混合均匀，装入胶囊。实施例4组合物胶囊剂的制备(1000粒) [0039] 配方：灯盏花素250g、三七皂苷Rg1100g、乳糖100g、硬脂酸镁15g。 [0040] 制备方法：将活性成分、乳糖混合均匀，用水润湿，然后过20目筛，干燥，再次过22目筛，加入硬脂酸镁，混合均匀，装入胶囊。实施例5组合物注射剂的制备(100瓶) [0041] 配方：灯盏花素30g、三七皂苷Rg115g、氯化钠12g、注射用水1.5L。 [0042] 制备方法：将活性成分和氯化钠溶于注射用水中，过滤，在无菌条件下，将滤液装入安瓶中，每瓶装15mL。

[0043] 以下通过药理及临床试验进一步说明本发明。

[0044] 试验例1细胞活性试验

[0045] 1、试验材料

[0046] 1.1药品与试剂：胎牛血清(杭州四季青公司)、MEM培养液 (Gibco公司)、胰酶(Gibco公司)、MTT(广州威佳生物科技有限公司)；三七皂苷Rg1(白色粉末，纯度＞98％，昆明制药厂)、灯盏花素粉剂(淡黄色粉末，纯度＞95％，杰象药物原料有限公司)。 [0047] 1.2供试细胞：人胚肺成纤维细胞(MRC-5细胞，上海中科院细胞库)。 [0048] MRC-5细胞在含有10％(体积百分数)新生小牛血清，100U/mL青霉素，100U/mL链霉素的MEM培养液中贴壁生长，在37℃的温度下，含5％(体积分数)CO2、95％(体积分数)O2的培养箱中培养，2天更换一次培养液，培养瓶铺满时用2.5g/L胰酶消化传代，细胞培养至对数期。

[0049] 1.3仪器：CO2培养箱(MCO-15AC，日本三洋)、Mk3型自动酶标仪(美国Thermro公司)、倒置显微镜(XDS-200D，上海蔡康光学仪器有限公司)。

[0050] 1.4统计方法：采用SPSS-10进行统计学处理，计量资料均用x±s表示。 [0051] 2、方法与结果

[0052] 2.1配制药物原液：定量称取4.63mg灯盏花素、8.01mg三七皂苷Rg1以及5.47mg灯盏花素与三七皂苷Rg1组合物(灯盏花素与三七皂苷Rg1的重量比为3∶1)，分别加入4
1mL MEM培养液，配制成1×10μmol/L的灯盏花素、三七皂苷Rg1与三七皂苷Rg1组合物药物原液，备用。

[0053] 2.2MTT法测定三七皂苷Rg1、灯盏花素及组合物对MRC-5细胞的抑制作用：取3
培养至对数生长期的MRC-5细胞，细胞计数约5×10 个/mL，接种于96孔板中，每孔液体
100μL，细胞贴壁后倾去原液；然后加入含有0.5％(体积百分数)胎牛血清的MEM培养液，饥饿培养；24h后更换培养液，并分别加入上述灯盏花素、三七皂苷Rg1及组合物的药物原液，各配制成5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、 80μmol/L、160μmol/L和
320μmol/L七个不同浓度剂量组，同时设置正常细胞作为对照组(每组设置6个复孔)，继续培养24h；然后每孔加入15μL MTT，4h后倾去所有液体，加入115μL DMSO，使固体溶解，在37℃温度下静置0.5h；用自动酶标仪在570nm的波长下检测，630nm波长作为参考；计算灯盏花素、三七皂苷Rg1及组合物对MRC-5细胞抑制率和半数抑制浓度(IC50)。 [0054] 结果表明，灯盏花素对MRC-5细胞的IC50为100.67μmo/L，三七皂苷Rg1对MRC-5细胞的IC50为81.26μmol/L，组合物对MRC-5细胞的IC50为40μmol/L，抑制率结果如表1所示，抑制率量-效曲线图如图1所示。

[0055] 从上述IC50值可以看出：组合物对MRC-5细胞的抑制强度明显优于灯盏花素和三七皂苷Rg1单体对MRC-5细胞的抑制作用。

[0056] 表1不同浓度的灯盏花素、三七皂苷Rg1及组合物对MRC-5细胞的抑制率 [0057]

[0058] 注：抑制率＝(1-剂量组OD 值/正常对照组OD值)×100％；

[0059] aP＜0.05，aaP＜0.01，与同浓度灯盏花素相比；bP＜0.05，bbP＜0.01，与同浓度三七皂苷Rg1相比

[0060] 从表1可以看出：同浓度的组合物对MRC-5细胞的抑制作用与同浓度的灯盏花素和三七皂苷Rg1相比存在显著性差异，结果表明组合物对MRC-5细胞的抑制作用显著。从图1可以更直观地观测出不同浓度组合物对MRC-5细胞的抑制作用明显强于等浓度两种单体 对MRC-5细胞的抑制作用。

[0061] 2.3倒置显微镜下细胞形态学的观察：取培养至对数生长期的MRC-5细胞，细胞4
计数约1×10 个/mL，接种于96孔板中，每孔液体100μL，细胞贴壁后倾去原液；加入含
0.5％(体积百分数)胎牛血清的MEM培养液，饥饿培养；24h后更换培养液，并加入灯盏花素药物原液、三七皂苷Rg1药物原液及组合物药物原液，分别配制成5μmol/L、10μmol/L、
20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L和320μmol/L七个不同浓度药物剂量组，同时设置正常细胞作为对照组(每组设置6个复孔)，继续培养24h后，在倒置显微镜下(10×20)拍照(如图2-23所示)。

[0062] 观察结果表明，正常对照组(图2)、5μmol/L灯盏花素组(图3)、5μmol/L三七皂苷Rg1组(图10)和5μmol/L的组合物组(图17)，MRC-5细胞呈条索状，细胞饱满，生长旺盛，形态正常；10μmol/L和20μmol/L灯盏花素组(图3-4)，细胞形态基本正常，有少数细胞出现皱缩、变形；40μmol/L灯盏花素组(图6)可看到少量死亡细胞；80μmol/L和160μmol/L灯盏花素剂量组(图7-8)大量细胞失去正常条索状形态，细胞碎片明显可见，多数细胞死亡；320μmol/L灯盏花素组(图9)，细胞失去正常纤维细胞形态，细胞基本完全死亡；10μmol/L和20μmol/L三七皂苷Rg1组(图11-12)MRC-5细胞开始出现皱缩，部分细胞条索状形态消失；40μmol/L三七皂苷Rg1组(图13)细胞碎片明显，皱缩细胞清晰可见，细胞出现明显死亡；80μmol/L三七皂苷Rg1组(图14)细胞死亡数量明显增加，但存活细胞仍清晰可见；160μmol/L和320μmol/L三七皂苷Rg1组(图15-16)MRC-5细胞完全失去正常细胞形态，细胞基本全部死亡；10μmol/L和20μmol/L组合物组(图18-19)，细胞出现明显皱缩，并可看到部分细胞碎片，部分细胞出现死亡；40μmol/L和80μmol/L组合物组(图20-21)作用明显，细胞大量死亡；160μmol/L和320μmol/L组合物 组(图
22-23)，细胞失去正常成纤维细胞形态，基本完全死亡。

[0063] 从体外试验结果可以看出，三七皂苷Rg1、灯盏花素和组合物均有抑制MRC-5细胞的作用，均有显著的剂量依赖性，且组合物作用优于灯盏花素和三七皂苷Rg1。 [0064] 试验例2小鼠体内试验

[0065] 1、试验材料

[0066] 1.1药品与试剂：三七皂苷Rg1(白色粉末，纯度＞98％，昆明制药厂)、灯盏花素粉剂(淡黄色粉末，纯度＞95％，杰象药物原料有限公司)、博来霉素(BLM，日本化药株式会社)、片强的松(5mg/片，安阳玉威制药厂)、羟脯氨酸试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

[0067] 1.2供试动物和分组：ICR小鼠，体重18～22g，共112只。随机分为正常对照组、模型组、阳性药物对照组、灯盏花素组(经预试验得出最佳有效剂量为20mg/kg)、三七皂苷Rg1组(经前期实验得出最佳有效剂量为100mg/kg)、灯盏花素与三七皂苷组合物(灯盏花素与三七皂苷Rg1的重量比为2∶1)高剂量组(180mg/kg)、中剂量组(90mg/kg)、低剂量组(45mg/kg)8组，每组14只。

[0068] 1.3统计方法：采用SPSS-10进行统计学处理，计量资料均用x±s表示，采用方差分析，两两比较，方差齐者采用LSD法，方差不齐者采用Duttet法，P＜0.05者有显著性差异。

[0069] 2、方法与结果

[0070] 2.1肺间质纤维化模型的建立

[0071] 采用BLM诱导法，对ICR小鼠一次气管内给予博来霉素，给药量5mg/kg。 [0072] 2.2给药方法

[0073] ICR小鼠于造模后第2天开始给药，正常对照组和模型组给予蒸馏水，灯盏花素组按20mg/kg给药，三七皂苷Rg1组按100mg/kg给药，组合物高剂量组、中剂量组、低剂量组均按剂量给药，各组供试 小鼠均按20mL/kg进行腹腔注射，阳性对照组给予强的松片，给药量6mg/kg，将药品溶解后，按20mL/kg灌胃给药。

[0074] 试验药物均为每天给药1次，连续用药至所需天数。用药后第7天处死一半小鼠，剩余小鼠于给药后第28天全部处死。

[0075] 2.3肺系数测定

[0076] 处死小鼠后打开胸腔，取全肺，用滤纸吸干血迹称体重和全肺重，按下式计算出肺系数，肺系数＝肺重(mg)/体重(g)。结果如表2所示。

[0077] 表2组合物和灯盏花素用药后7天对小鼠肺系数的影响

[0078]

[0079] 注：aP＜0.05，aaP＜0.01，与模型组比较；bP＜0.05，bbP＜0.01，与阳性对照组比c cc d dd较； P＜0.05，P＜0.01，模型组与正常组比较；P＜0.05，P＜0.01，组合物与灯盏花e ee
素比较；P＜0.05，P＜0.01，组合物与三七皂苷Rg1组比较

[0080] 从表2可以看出：用药后7天，模型组与正常组比较有显著性差异(P＜0.01)，证明模型成功；灯盏花素组、组合物各剂量组与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)；组合物各剂量组与阳性药对照组比较也有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)；组合物各剂量组与灯盏花素组比较有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)；结果表明，灯盏花素与三七皂苷Rg1组合物具有良好的抗肺间质纤维化作用，且优于阳性对照药强的松和单体药物灯盏花素，但与三七皂苷Rg1作用相当。

[0081] 2.4形态学研究

[0082] 取右肺用10％甲醛溶液固定，取中肺叶制作肺组织病理标本， 用石蜡冷冻两用切片机进行石蜡连续切片，间隔2张取1张，每个标本取4张切片，每2张为一组，分别进行HE和Masson染色，进行形态学观察和肺泡炎及肺间质纤维化评分。

[0083] 2.4.1一般光镜观察正常组无肺泡炎及肺间质纤维化改变，肺泡结构完整；模型组肺泡壁破坏，形成肺大泡，部分实变，肺泡隔增宽明显，有纤维结缔组织增生，呈中重度肺间质纤维化改变，淋巴细胞浸润，病损范围广泛；阳性对照组肺泡隔增宽，有间质水肿，部分大鼠肺内有片状坏死，灶性脓肿，有较多纤维结缔组织增生，部分肺泡实变；灯盏花素组肺组织有轻度的间质水肿和片状坏死，有少量纤维结缔组织增生，部分肺泡实变；组合物组肺部有轻度炎症，病损范围有限，有少量淋巴细胞浸润，偶有纤维结缔组织增生，肺间质纤维化改变程度极轻。

[0084] 2.4.2肺泡炎和肺间质纤维化程度评价HE染色和Masson染色后，进行光镜观察，根据以下判别标准，进行评分。肺泡炎和肺间质纤维化程度的判别标准(共4级)为：0级无明显改变；1级轻度改变，病变范围小于全肺的20％；2级中度改变，病变范围占全肺的20％～50％；3级重度改变，病变范围占全肺的50％以上。然后分别进行评分，0级计0分，
1级计1分，以此类推；对每组小鼠分别评分，求平均值。结果如表3-4所示。 [0085] 表3组合物和灯盏花素用药7天后对小鼠肺泡炎程度的影响

[0086]

[0087] 注：aP＜0.05，aaP＜0.01，与模型组比较；bP＜0.05，bbP＜0.01，与阳性对照组比较；

[0088] cP＜0.05，ccP＜0.01，模型组与正常组比较；dP＜0.05，ddP＜0.01，组合物与灯ee盏花素比较；P＜0.05，P＜0.01，组合物与三七皂苷Rg1组比较

[0089] 表4组合物和灯盏花素用药28天后对小鼠肺间质纤维化程度

[0090]

[0091] 注：aP＜0.05，aaP＜0.01，与模型组比较；bP＜0.05，bbP＜0.01，与阳性对照组比c cc d dd较； P＜0.05，P＜0.01，模型组与正常组比较；P＜0.05，P＜0.01，组合物与灯盏花e ee
素比较；P＜0.05，P＜0.01，组合物与三七皂苷Rg1组比较.

[0092] 从表3-4可以看出，用药后7天肺泡炎程度和28天肺间质纤维化程度的模型组与正常组比较有显著性差异(P＜0.01)，证明模型成功；灯盏花素组、组合物各剂量组与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)；组合物中、高剂量组与阳性对照药和灯盏花素组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)；组合物高剂量组与三七皂苷Rg1组比较有显著性差异(P＜0.05)。试验结果表明，灯盏花素与三七皂苷Rg1组合物能显著改善小鼠肺间质纤维化的程度，有良好的抗肺间质纤维化作用，且某些剂量作用优于阳性对照药、灯盏花素和三七皂苷Rg1。

[0093] 2.5肺组织羟脯氨酸(HyP)含量测定

[0094] 用酸解法测定肺组织HyP含量，测定步骤按照试剂盒说明书进行。结果如表5所示。

[0095] 表5组合物和灯盏花素用药后28天对小鼠肺组织羟脯氨酸含量的影响 [0096]

[0097]

[0098] 注：aP＜0.05，aaP＜0.01，与模型组比较；bP＜0.05，bbP＜0.01，与阳性对照组比较； cP＜0.05，ccP＜0.01，模型组与正常组比较；dP＜0.05，ddP＜0.01，组合物与灯盏花素比较；eP＜0.05，eeP＜0.01，组合物与三七皂苷Rg1组比较

[0099] 从表5可以看出：模型组与正常组比较有显著性差异(P＜0.01)，证明模型成功；灯盏花素组、组合物各剂量组与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)；组合物中、高剂量组与阳性对照药、灯盏花素组和三七皂苷Rg1组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)；结果表明，灯盏花素与三七皂苷Rg1组合物能降低羟脯氨酸含量，优于阳性对照药、灯盏花素和单用三七皂苷Rg1单剂良好的抗肺间质纤维化作用。 [0100] 试验例3临床试验

[0101] 1临床资料

[0102] 选择2008年10月～2009年12月期间，新乡市一院门诊根据《特发性肺(间质)纤维化诊断和治疗指南(草案)》诊断为特发性肺间质纤维化的患者20例。按照随机原则分为治疗组与对照组，其中，治疗组共15例(男性10例，女性5例)，年龄35-65岁，平均年龄50±10.3岁，病程3个月至10年，平均病程4.05±1.35年；对照组10例(男性6例，女性4例)，年龄40-60岁，平均年龄45+9.6岁，病程5个月至8年，平均病程5.02±2.15年。两组性别、年龄、病程无显著差异性。

[0103] 2方法

[0104] 2.1治疗方法

[0105] 治疗组口服实施例3的组合物胶囊，每次4粒，每日3次，温开水冲服；原来服用强地松的患者(5例)，以每周5mg递减至完全停 用；用药期间患有其它疾病予以相应治疗。 [0106] 对照组每天给予强的松0.5mg/kg口服；治疗3个月观察疗效。

[0107] 2.2判断标准

[0108] 观察两组治疗前后症状(咳嗽、咳痰、呼吸困难、活动能力)、体征(Velcro啰音)、HRCT及肺功能、动脉血气分析变化。

[0109] 具体判定标准如下：

[0110] 气短：重(+++)，安静时气短不得接续，不能平卧；中(++)，安静时气短不著，稍事活动后即加重；轻(+)，安静时不觉气短，明显活动(如登楼、劳作等)后轻度气短。 [0111] 咳嗽：重(+++)，昼夜咳嗽频繁，影响工作及睡眠；中(++)，阵咳，不影响睡眠；轻(+)，间断咳。

[0112] 唾痰涎：多(+++)，24h痰量在100mL以上；中(++)，24h痰量50～100mL；轻(+)，24h痰量20～50mL。

[0113] Velcros啰音：多(+++)，两肺时时可闻及；中(++)，介于多、轻之间；轻(+)，偶闻。 [0114] 此外，对于HRCT，初诊时按常规扫描，复查时统一规定为选取3个区，即：1、右中叶支气管开口水平；2、主动脉弓水平；3、右隔上2cm水平，每区扫4层，每层厚2.5mm。 [0115] 2.3疗效标准

[0116] 参照《特发性肺(间质)纤维化诊断和治疗指南(草案)》，按照如下标准判定疗效：

[0117] 2.3.1改善或反应良好①症状体征中有两项及以上明显减轻为有效，两项以下减轻为无效；②X线胸片或HRCT异常影像减少；③肺功能表现为肺总量(TLC)、肺活量(VC)、一氧化碳弥散率(DLCO)、氧分压(PaOz)较长时间保持保持稳定(具有两项或两项以上者认为肺功能改善)；

[0118] 2.3.2恶化或反应差①症状加重，特别是呼吸困难和咳嗽；②X 线胸片或HRCT上异常影像增多，特别是出现了蜂窝肺或肺动脉高压迹象；③肺功能恶化，TLC或VC下降≥10％或下降200ml，DLCO下降≥15％或至少下降≥3mL/min·mmHg。

[0119] 2.4统计方法：计量资料以(x±s)表示，采用t检验和X2检验。

[0120] 3结果

[0121] 3.1两组症状、体征改善的比较，结果显示：治疗6个月后治疗组临床症状、体征改善均明显优于对照组，组间差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05)，结果如表6所示。 [0122] 表6两组患者症状体征改善的比较

[0123]

[0124] 注：*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组比较

[0125] 3.2两组患者肺功能变化的比较，结果表明：肺功能各项指标改善情况均明显优于对照组，组间差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05)，结果见表7。

[0126] 表7两组患者治疗前后肺功能指标变化的比较

[0127]

[0128] 注：*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组比较

[0129] 3.3两组患者治疗前后胸部影像学的比较，治疗组患者胸部影像学的治疗后计分减小，与治疗前相比有显著性差异(P＜0.01)；对照组治疗后积分增加，显示病情恶化，与治疗前比较有显著性差异(P＜0.05)；治疗后，治疗组与对照组比较也有显著性差异(P＜0.01)，结果表明，本发明的灯盏花素与三七皂苷Rg1组合物具有良好的抗肺间质纤维化作用(见表8)。

[0130] 表8两组治疗前后胸部影响学结果的比较

[0131]

[0132] 注：*P＜0.05，**P＜0.01，治疗组治疗后与对照组治疗后比较；△P＜0.05，△△P＜0.01，治疗后与治疗前比较

[0133] 虽然，上文中已经通过一般性说明、具体实施方案以及临床试验等对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。