苯骈异恶唑哌啶衍生物及在制备镇痛、镇静药物中的应用

摘要

本发明公开了一种苯骈异恶唑哌啶衍生物及在制备镇痛、镇静药物中的应用。该类化合物具有5-HT2A拮抗作用，以及5-HT再摄取抑制等五羟色胺系统的调解作用。本发明所述的衍生物为具有以下结构通式化合物的游离碱或盐。药理试验表明本发明化合物具有良好的镇痛、镇静活性及较小的毒副作用。

权利要求

1.苯骈异恶唑哌啶衍生物，其特征在于，为具有以下结构通式化合物的游离碱或盐：其中：

R代表：H、F、Cl、C1-C3的烷基或C1-C3的烷氧基；

X、Y分别独立代表：CH或N；

R’代表：H、F、Cl、CN、CHO、COOCH3、CF3、OCH3或OCF3；

T代表饱和或不饱和的含有2-7个碳的直链或含有支链的碳链。

2.根据权利要求1所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物，其特征在于，R为H、F或OCH3中的一种。

3.根据权利要求1所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物，其特征在于，R’为H、Cl、F、CN或COOCH3中的一种。

4.根据权利要求2所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物，其特征在于，R’为H、Cl、F、CN或COOCH3中的一种。

5.根据权利要求1所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物，其特征在于：R代表的C1-C3的烷基，烷基部分的氢原子任选被1-3个氟原子取代。

6.根据权利要求1所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物，其特征在于：T代表饱和或不饱和的含有2-7个碳的直链或含有支链的碳链，其中，烷基部分的氢原子任选被1-3个氟原子取代。

7.根据权利要求1所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物，其特征在于，所述的盐为盐酸盐、溴氢酸盐、硫酸盐、三氟醋酸盐或甲磺酸盐。

8.根据权利要求1所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物，其特征在于，所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物包括：II-1 N-(2-(1-吲哚基)乙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-2 N-(3-(1-吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-3 N-(4-(1-吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-4 N-(5-(1-吲哚基)戊基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-5 N-(3-(6-氟吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-6 N-(3-(6-氰基吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-7 N-(3-(6-甲氧羰基吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-8 N-(4-(6-氟吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-9 N-(4-(6-氰基吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-10 N-(4-(6-氯吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-11 N-(3-(1-苯骈咪唑基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-12 N-(4-(1-苯骈咪唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-13 N-(3-(1-苯骈吡唑基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-14 N-(4-(6-氰基苯骈吡唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、II-15 N-(4-(6-氰基吲哚基)丁基)-4-(3-苯骈异恶唑)哌啶、III-1 N-(3-(6-氟苯骈咪唑基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、III-2 N-(4-(6-氟苯骈咪唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶或III-3 N-(4-(6-氰基苯骈咪唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶。

9.一种苯骈异恶唑哌啶衍生物，其特征在于，为：

IV-1 N-(2-(6-氰基吲哚基)乙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、IV-2 N-(3-(6-氰基吲哚基)丙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、IV-3 N-(2-(6-氯苯骈三氮唑基)乙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶或IV-4 N-(3-(6-氯苯骈三氮唑基)丙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶。

10.权利要求1～9任一项所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物在制备镇痛、镇静药物中的应用。

11.一种药物组合物，包括权利要求1～9任一项所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物和医药学上可接受的载体。

说明书

苯骈异恶唑哌啶衍生物及在制备镇痛、镇静药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种新型的苯骈异恶唑哌啶衍生物以及在制备镇痛、镇静药物中的应用。

背景技术

[0002] 诸如肿瘤疼痛、术后疼痛、各种反复发作的严重的急慢性疼痛困扰着数以千万计的患者，是目前临床一大难题。现有的临床镇痛药物主要可分为三类：1)非甾体消炎镇痛药2)阿片类镇痛药3)其他非阿片类的镇痛药，主要包括：局部麻醉药，抗抑郁药，抗癫痫药等。针对急性疼痛和癌症疼痛，目前临床主要应用阿片类镇痛药或辅助一些非甾体消炎镇痛药。而阿片类镇痛药物的成瘾性及呼吸抑制，胃蠕动减少等副作用，限制了它的广泛使用。在各种慢性非癌症疼痛和神经性疼痛的治疗中，阿片类镇痛药或非甾体消炎镇痛药的治疗效果却很难令人满意。而近年来在临床应用的过程中，发现一些治疗抑郁、癫痫、麻醉的药物对缓解上述疼痛具有良好的疗效。

[0003] 因此，寻找既能保持强镇痛效应，又能克服阿片类镇痛药和非甾体消炎镇痛药的诸多副作用，安全用于临床的广谱镇痛药物，成为镇痛领域的主要研究目标。近年来，国外一些大制药公司如美国辉瑞公司，默克公司等纷纷投巨资开发新型非阿片类镇痛剂。

[0004] 选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)在各种动物和人的多种疼痛适应症试验中已被证实是有效的。目前，抗抑郁药度洛西汀在镇痛方面的新适应症已批准上市，用于治疗糖尿病性神经痛、骨骼肌痛及纤维肌痛等疼痛。而去甲文拉法辛用于神经性疼痛和肌纤维痛方面的研究也已处于三期临床阶段。大量的研究表明SSRIs不仅可增强传统阿片类镇痛药的作用，而且对各种动物模型中的急性疼痛、炎症疼痛和神经病理性疼痛都具有明显效果。例如：(Psychopharmacol.Commun.)1975，1：511-521；Hynes等；(Pharmacol.Toxicol.)1999，85：263-268；Sawynok等；(Pain)2000，85：311-312；(Expert Opinion on DrugDiscovery)2007，2：169-184；等等。

[0005] 近年来，很多文献报道了内源性5-HT通过作用于外周神经组织的5-HT2A和5-HT2C受体产生多种伤害性感受，因此，采用5-HT2A拮抗剂或是反相激动剂可有效抑制各种疼痛，尤其是急性炎症疼痛和各种原因引起的痛觉过敏。(Neurochemistry International)2005，47(6)：394-400，(Neuroscience)2005，130(2)：465-474，(Pain)2006，122：130-6；(EuropeanJournal of Pain)2008，In Press，Corrected Proof，Available online 24 July等。

[0006] 作为5-HT再摄取抑制和5-HT2A拮抗剂具有双重作用的萘法唑酮曾经作为镇痛药物进行临床研究。最近的一些研究中，将5-HT再摄取抑制帕罗西汀和5-HT2A拮抗剂酮舍林联合使用，在动物模型中明显增强前者的镇痛作用。(J.Pharmacol.Sci.)2005，97：61-66。

[0007] 但是，目前开发的5-HT再摄取抑制和5-HT2A拮抗剂在镇痛效果及毒副作用方面还存在一些缺陷，如5-HT再摄取抑制和5-HT2A拮抗剂曲唑酮虽然对一些持续性疼痛疗效确切，临床效果优于布洛芬，但对其他各种严重急慢性疼痛的治疗效果较差，远不能满足临床上治疗要求；而萘法唑酮因其严重的肝毒性，现已被撤市。因此，需要不断开发既能保持强效镇痛，同时亦可安全用于临床的新型5-HT再摄取抑制和5-HT2A拮抗剂，以满足临床的需要。

发明内容

[0008] 本发明需要解决的技术问题是公开一种苯骈异恶唑哌啶衍生物及在制备镇痛、镇静药物中的应用，以克服现有技术存在的上述缺陷，满足临床的需要。

[0009] 本发明所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物，为具有以下结构通式化合物的游离碱或盐，盐为盐酸盐、溴氢酸盐、硫酸盐、三氟醋酸盐或甲磺酸盐等，优选的盐为盐酸盐、溴氢酸盐，其盐可含0.5-3分子的结晶水：

[0010]

[0011] 其中：

[0012] R代表：H、F、Cl、C1-C3的烷基或C1-C3的烷氧基，烷基部分的氢原子可以任选被1-3个氟原子取代；

[0013] X、Y分别独立代表：CH或N；

[0014] R’代表：H、F、Cl、CN、CHO、COOCH3、CF3、OCH3或OCF3；

[0015] T代表饱和或不饱和的含有2-7个碳的直链或含有支链的碳链，其中，任意一个碳原子可以被氧原子或硫原子取代，烷基部分的氢原子可以任选被1-3个氟原子取代；

[0016] 优选的R为H、F或OCH3中的一种；

[0017] 优选的R’为H、Cl、F、CN或COOCH3中的一种；

[0018] 所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物包括：

[0019] II-1 N-(2-(1-吲哚基)乙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0020] II-2 N-(3-(1-吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0021] II-3 N-(4-(1-吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0022] II-4 N-(5-(1-吲哚基)戊基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0023] II-5 N-(3-(6-氟吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0024] II-6 N-(3-(6-氰基吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0025] II-7 N-(3-(6-甲氧羰基吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、[0026] II-8 N-(4-(6-氟吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0027] II-9 N-(4-(6-氰基吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0028] II-10 N-(4-(6-氯吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0029] II-11 N-(3-(1-苯骈咪唑基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0030] II-12 N-(4-(1-苯骈咪唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0031] II-13 N-(3-(1-苯骈吡唑基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0032] II-14 N-(4-(6-氰基苯骈吡唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、[0033] II-15 N-(4-(6-氰基吲哚基)丁基)-4-(3-苯骈异恶唑)哌啶、

[0034] III-1 N-(3-(6-氟苯骈咪唑基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、[0035] III-2 N-(4-(6-氟苯骈咪唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、[0036] III-3 N-(4-(6-氰基苯骈咪唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、[0037] IV-1 N-(2-(6-氰基吲哚基)乙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、[0038] IV-2 N-(3-(6-氰基吲哚基)丙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、[0039] IV-3 N-(2-(6-氯苯骈三氮唑基)乙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶或[0040] IV-4 N-(3-(6-氯苯骈三氮唑基)丙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、[0041] 具体化学结构式如表1所示：

[0042]

[0043]

[0044]

[0045] 其中，优选的化合物为：

[0046] II-8 N-(4-(6-氟吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶、

[0047] II-9 N-(4-(6-氰基吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶或

[0048] III-2 N-(4-(6-氟苯骈咪唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶；

[0049] 本发明的化合物可采用如下的方法进行合成：

[0050] (一)化合物结构通式中的关键中间体取代-3-(4-哌啶基)苯骈异恶唑的结构通式如下：

[0051]

[0052] 化合物(I)可以通过常用的合成方法制备，亦可直接从相关化学品供应商处购买。

[0053] (二)本发明所述及的的化合物可采用如下的方法分别进行合成：

[0054] 合成路线一：

[0055]

[0056] a.NaH，NMP b.Cl(CH2)nCH2Br，NMP c.DIPEA，KI，CH3CN

[0057] R：H，F等 R′：H，F，Cl，CN，COOCH3等 n：1，2，3，4

[0058] X：N，CH Y：N，CH

[0059] 以取代的苯骈五原氮杂环为起始原料，首先用氢化钠交换活泼氢得到相应的钠盐，与氯代烷基溴反应得到相应的氯化物，再与化合物(I)在DIPEA/KI作用下，乙腈中回流6～18小时，得到缩合产物(II)。

[0060] 采用上述步骤可获得目标化合物II-1至II-15。

[0061] 合成路线二：

[0062]

[0063] d.NH2CH2(CH2)nOH，DIPEA，CH3CN e.Pd/C，H2，C2H5OH f.HCOOH，reflux[0064] g.PPh3，imidazole，I2 h.DIPEA，CH3CN R：H，F R′：F，CN n：2，3

[0065] 以取代的邻位卤代硝基苯为起始原料，首先与氨基烷醇发生亲核取代反应，经还原硝基为氨基，然后在甲酸中回流环合得到相应的苯骈咪唑基烷醇，在三苯基磷催化下，醇羟基发生碘代反应，得到相应的碘化物。最后，与化合物(I)在DIPEA/KI作用下，乙腈中回流6～18小时，得到缩合产物(III)。

[0066] 采用上述步骤可获得目标化合物III-1至III-3。

[0067] 合成路线三：

[0068]

[0069] a.NaH，NMP b.Cl(CH2)nCH2Br，NMP c.DIPEA，KI，CH3CN

[0070] R′：CN，Cl X：N，CH Y：N，CH n：1，2，3

[0071] 以取代的苯骈氮杂环酚或取代的萘酚为起始原料，首先，用氢化钠交换酚羟基的活泼氢得到相应的钠盐，与氯代烷基溴反应得到相应的氯化物，再与化合物(I)在DIPEA/KI作用下，乙腈中回流6～18小时，得到缩合产物(IV)。

[0072] 采用上述步骤可获得目标化合物IV-1至IV-4。

[0073] 动物试验证明：苯骈异恶唑哌啶系列新化合物在小鼠化学品致痛药理模型上，多数化合物显示较强的抗疼痛扭体反应作用，具有镇痛和镇静活性。小鼠的热板药理模型试验也表明化合物具有镇痛作用。

[0074] 动物模型研究结果表明，II-9具有明显镇痛作用，口服吸收较好。II-9多次用药后不显耐药性，药物依赖性潜力很低，Ames试验阴性，治疗指数较大，具备作为新型非成瘾性镇痛剂研究开发的潜在价值。

[0075] 本发明人发现，本发明的衍生物毒性较低，神经副反应小。

[0076] 以上研究结果证明，本发明所述苯骈异恶唑哌啶衍生物可用于制备镇痛、镇静剂。

[0077] 本发明涉及所述苯骈异恶唑哌啶衍生物还可能用于制备其它中枢神经系统紊乱性疾病的药物。例如：用于治疗神经性疼痛、躁狂症、焦虑症、各种抑郁症、精神分裂症、帕金森病(PD)、亨廷顿舞蹈病(HD)、阿尔茨海默氏病、老年性痴呆、阿尔茨海默氏型痴呆、记忆障碍、执行功能丧失、血管性痴呆和其它痴呆，以及与智力、学习或记忆相关的功能障碍性疾病等药物。

[0078] 本发明的衍生物可以组合物的形式通过口服、注射等方式施用于需要这种治疗的患者，给药日剂量一般为0.1～1mg/kg(口服)或0.02～0.5mg/kg(注射)，可根据临床实验结果及患者的病情、年龄等由医师决定。

[0079] 所述组合物包括治疗有效量的所述的苯骈异恶唑哌啶衍生物和医学上可接受的载体；

[0080] 所述及的载体是指药学领域常规的载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等；粘合剂如纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂如淀粉等；崩裂剂如碳酸钙、碳酸氢钠；润滑剂如硬脂酸钙或硬脂酸镁等。另外，还可以在组合物中加入其他辅助剂如香味剂和甜味剂。用于口服时，可将其制备成常规的固体制剂如片剂、粉剂或胶囊等；用于注射时，可将其制备成注射液。

[0081] 本发明的组合物的各种剂型可以采用医学领域常规的方法进行制备，其中活性成分的含量为0.1％～99.5％(重量比)。

[0082] 本发明涉及的新型的苯骈异恶唑哌啶衍生物及其生理上可接受的盐具有非常有用的药学性质及良好的耐受性，它们显示出对中枢神经系统的作用，特别是选择性5-羟色胺再摄取抑制和选择性5-HT2A受体的作用。这类化合物对各种类型的疼痛都具有镇痛作用，包括各种伤害感受性疼痛、急性疼痛、慢性疼痛、神经性疼痛、精神性疼痛和混合性疼痛等。它特别包括但不限于：手术后疼痛、神经原性疼痛、中枢性痛、躯体痛、内脏痛、慢性后背痛、颈和腰痛、癌症痛、炎症疼痛、糖尿病性神经痛、坐骨神经痛、紧张性头痛、丛集性头痛、每日慢性头痛、疱疹神经痛、面部和口腔神经痛以及肌筋膜痛综合征、假性肢痛、残肢痛和截瘫痛、牙痛、耐阿片样物质疼痛、包括心脏手术和乳房切除术在内的术后疼痛、心绞痛、骨盆疼痛、膀胱炎以及阴道前庭炎和睾丸痛在内的泌尿生殖道疼痛、月经前期疼痛综合症。中风后疼痛、过敏性肠综合征、劳累和分娩疼痛、分娩后疼痛、因烧伤和化学损伤或日晒导致的疼痛和骨损伤性疼痛。

[0083] 此外，本发明涉及的新型的苯骈异恶唑哌啶衍生物及其生理上可接受的盐显示出对中枢神经系统的作用，特别是对5-羟色胺再摄取和5-HT2A受体的双重作用，可通过调节神经突触间隙的5-羟色胺水平而发挥多种生理和药理作用，可以用作药物活性物质，特别是抗抑郁药、抗焦虑药、抗精神病药、抗高血压药，并且还可以用作制备其它药物活性化合物的中间体。

[0084] 本发明涉及的新型的苯骈异恶唑哌啶衍生物及其生理上可接受的盐具有非常有用的药学性质及良好的耐受性，尤其是作为新型镇痛、镇静药物的应用。该类化合物为具有非成瘾性的中枢镇痛剂，且具有较小的毒副作用和较高的安全指数。

具体实施方式

[0085] 通法一：苯骈异恶唑哌啶类化合物(II)盐酸盐的制备

[0086] 取代的吲哚(苯骈咪唑或苯骈吡唑)(0.01mol)溶解于10ml NMP中，分批加入重量百分含量为50％钠氢(0.01mol)的固体石蜡混合物，搅拌反应0.5小时。氯代烷基溴(0.015mol)溶解于5ml NMP中，加入到上述的溶液中，室温下反应12小时。将反应液倒入50ml水中，乙酸乙酯萃取(3×30ml)，合并有机相，用20ml水洗，加入无水硫酸镁干燥有机相，过滤，蒸干溶剂，剩余物经Al2O3柱层析分离纯化，石油醚/二氯甲烷洗脱，浓缩得相应的氯化物，收率80～85％。

[0087] 上 述 氯 化 物 (0.0055mol)，化 合 物 (I)(0.005mol)、KI(0.005mol) 和DIPEA(0.02mol)加入到30ml的乙腈溶液中，升温至回流，反应8～16小时，减压蒸除溶剂，剩余物经Al2O3柱层析分离纯化，二氯甲烷/甲醇洗脱，洗脱液浓缩至干，溶解于30ml乙酸乙酯中，用HCl/C2H5OH(5N)调PH＜3，固体析出，过滤固体，经乙酸乙酯/乙醇溶剂重结晶，得目标化合物(II)的盐酸盐，收率60～70％。

[0088] 通法二：苯骈异恶唑哌啶类化合物(III)盐酸盐的制备

[0089] 取 代 的 邻卤 代 硝 基 苯(25.2mmol)，相 应 的 氨 基 烷 醇(30.2mmol) 和DIPEA(60.35mmol)溶解于50ml乙腈中，室温下搅拌反应72小时。减压蒸除溶解，残余物溶解于50ml二氯甲烷中，用20ml×2水洗，饱和食盐水洗。蒸除溶剂，得到相应的邻硝基苯氨基烷醇。

[0090] 将上述邻硝基苯氨基烷醇(0.02mmol)溶解于120ml的重量百分含量为95％乙醇中，搅拌下加入重量百分比为5％的钯碳(0.4g)，置于摇瓶中，通入氢气反应1小时至无氢气消耗。过滤，蒸除母液，得油状物。将所得油状物和15ml 96％的甲酸混合，升温回流反应2.5小时。冷却至室温，加入15ml水，冰水冷却下，缓慢加入30ml氢氧化钠水溶液(重量百分比为40％)，搅拌反应2小时。用二氯甲烷(30ml×3)萃取，合并有机相，用20ml水洗涤，20ml饱和食盐水洗涤，干燥有机相，蒸干溶剂得油状物粗品，用硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇洗脱，得到相应的苯骈咪唑基烷醇，收率：65～70％。

[0091] 将三苯基磷(4.16mmol)，咪唑(4.16mmol)溶解于15ml的二氯甲烷，加入碘(4.16mmol)，室温下搅拌反应20分钟。将所得苯骈咪唑基烷醇(3.2mmol)溶解于5ml二氯甲烷中，滴加到上述反应液中，搅拌反应20小时。加入20ml水，搅拌10分钟，分液。用20ml二氯甲烷萃取水层，合并有机相，用重量百分含量为5％硫酸氢钠水溶液洗涤(2×10ml)，再用20ml饱和食盐水洗。有机相经干燥，硅胶柱层析分离纯化，得苯骈咪唑烷基碘化物，收率85～90％。

[0092] 上述所得的碘化物(0.0055mol)，化合物(I)(0.005mol)和DIPEA(0.02mol)加入到30ml的乙腈溶液中，升温至回流，反应8-16小时，减压蒸除溶剂，剩余物经Al2O3柱层析分离纯化，二氯甲烷/甲醇洗脱，洗脱液浓缩至干，溶解于30ml乙酸乙酯中，用HCl/C2H5OH(5N)调PH＜3，固体析出，过滤固体，经乙酸乙酯/乙醇溶剂重结晶，得目标化合物(III)的盐酸盐，收率60～70％。

[0093] 通法三：苯骈异恶唑哌啶类化合物(IV)盐酸盐的制备

[0094] 取代N-羟基苯骈五元氮杂化合物(0.01mol)溶解于10ml NMP中，分批加入重量百分含量为50％钠氢(0.01mol)的固体石蜡混合物，搅拌反应0.5小时。氯代烷基溴(0.015mol)溶解于5ml NMP中，加入到上述的溶液中，室温下反应12小时。将反应液倒入50ml水中，乙酸乙酯萃取(3×30ml)，合并有机相，用20ml水洗，加入无水硫酸镁干燥有机相，过滤，蒸干溶剂，剩余物经Al2O3柱层析分离纯化，石油醚/二氯甲烷洗脱，浓缩得相应的氯化物，收率80～85％。

[0095] 上述所得的氯化物(0.0055mol)，化合物(I)(0.005mol)、KI(0.005mol)和DIPEA(0.02mol)加入到30ml的乙腈溶液中，升温至回流，反应8～16小时，减压蒸除溶剂，剩余物经Al2O3柱层析分离纯化，二氯甲烷/甲醇洗脱，洗脱液浓缩至干，溶解于30ml乙酸乙酯中，用HCl/C2H5OH(5N)调PH＜3，固体析出，过滤固体，经乙酸乙酯/乙醇溶剂重结晶，得目标化合物(VI)的盐酸盐，收率60～70％。

[0096] 实施例1

[0097] N-(2-(1-吲哚基)乙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(II-1)盐酸盐的制备

[0098] 以吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(2-氯乙基)吲哚。取N-(2-氯乙基)吲哚(1.0g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应
12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.31g，收率65.5％。熔点：216～218℃。

[0099] 元素分析：C22H22FN3O·HCl·H2O(理论值％：C 63.23，H 6.03，N 10.05，Cl 8.48；+
实验值％C 63.15，H 6.021，N 10.08，Cl 8.51)；MS：m/z 363.2(M)

[0100] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.21～2.25(m，2H)，2.34～2.44(m，2H)3.13～3.22(m，2H，)，3.43～ 3.52(m，3H)，3.63 ～3.67(m，2H)，4.76 ～ 4.81(m，2H)，6.50～ 6.52(d，1H，J ＝
3.2Hz，)，7.05～7.09(t，1H，J＝7.6Hz)，7.17～7.22(t，1H，J＝7.6Hz)，7.32～7.38(td，
1H，J＝9.2Hz，J＝2.0Hz)，7.49～7.51(d，1H，J＝3.2Hz)，7.54～7.60(d，1H，J＝7.6Hz)，
7.70～7.75(m，2H)，8.20～8.24(dd，1H，J＝9.2Hz，J＝3.2Hz)，11.46(br，1H，HCl)。

[0101] 实施例2

[0102] N-(3-(1-吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(II-2)盐酸盐的制备

[0103] 以吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(3-氯丙基)吲哚。取N-(3-氯丙基)吲哚(1.07g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应
12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.28g，收率61.8％。熔点：209～211℃。

[0104] 元素分析：C23H24FN3O·HCl·2H2O(理论值％：C 66.74，H 6.02，N 10.15，Cl 8.57；+
实验值％C 66.70，H 6.01，N 10.12，Cl 8.55)；MS：m/z 377.2(M)

[0105] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.12～2.20(m，2H)，2.21～2.25(m，2H)，2.34～2.45(m，2H)，3.14～3.22(m，2H)，3.42～3.50(m，3H)3.64～3.67(m，2H)，4.77～4.80(m，2H2)，6.52～
8.22(m，9H，Ar-H)，11.20(br，1H，HCl)。

[0106] 实施例3

[0107] N-(4-(1-吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-3)盐酸盐的制备[0108] 以吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(4-氯丁基)吲哚。取N-(4-氯丁基)吲哚(1.14g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml的乙腈溶液中，回流反应16小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.33g，收率62.1％。熔点：201～
203℃。

[0109] MS：m/z 391.2(M+)

[0110] 1HNMR(DMSO-d6)：1.68～1.74(m，2H)，1.79～1.85(m，2H)，2.16 ～2.21(m，2H)，2.27～2.37(m，2H)，3.00～3.13(m，4H)，3.41～3.48(m，1H)，3.53～3.57(m，2H)，4.20～
4.25(t，2H，J＝ 6.8Hz)，6.43(d，1H，J＝ 6.4Hz)，7.01(t，1H，J＝ 7.6Hz)，7.13(t，1H，J＝7.6Hz)，7.33(td，1H，J＝9.2Hz，J＝2.0Hz)，7.42(d，1H，J＝3.2Hz)，7.52(d，1H，J＝
7.6Hz)，7.54(d，1H，J＝7.6Hz)，7.71(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz)，8.20(dd，1H，J＝
8.8Hz，J＝3.2Hz)，10.60(br，1H，HCl)。

[0111] 实施例4

[0112] N-(5-(1-吲哚基)戊基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-4)盐酸盐的制备[0113] 以吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(5-氯戊基)吲哚。取N-(5-氯戊基)吲哚(1.22g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应
15小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.41g，收率63.8％。熔点：181～183℃。

[0114] MS：m/z 405.2(M+)

[0115] 1HNMR(DMSO-d6)：δ1.45～1.54(m，2H)，1.81～1.93(m，4H)，2.20～2.25(m，2H)，2.34～2.46(m，2H)，3.15～3.22(m，2H)，3.44～3.50(m，3H)，3.65～3.67(m，2H)，4.77～
4.82(m，2H)，6.50～8.21(m，9H，Ar-H)，11.14(br，1H，HCl)。

[0116] 实施例5

[0117] N-(3-(6-氟吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-5)盐酸盐的制备

[0118] 以6-氟吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(3-氯丙基)-6-氟吲哚。取N-(3-氯丙基)-6-氟吲哚(1.16g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.37g，收率63.4％。熔点：211～213℃。

[0119] MS：m/z 395.2(M+)

[0120] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.10 ～ 2.18(m，2H)，2.21 ～ 2.25(m，2H)，2.34 ～ 2.45(m，2H，)，3.14～3.22(m，2H)，3.42～3.50(m，3H)，3.64～3.67(m，2H)，4.77～4.80(m，2H)，
6.53～8.20(m，8H，Ar-H)，10.90(br，1H，HCl)。

[0121] 实施例6

[0122] N-(3-(6-氰基吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-6)盐酸盐的制备

[0123] 以6-氰基吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(3-氯丙基)-6-氰基吲哚。取N-(3-氯丙基)-6-氰基吲哚(1.20g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.32g，收率
60.3％。熔点：203～205℃。

[0124] MS：m/z 402.2(M+)

[0125] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.15 ～ 2.20(m，2H)，2.27 ～ 2.38(m，4H)，3.04 ～ 3.11(m，4H)，3.40-3.44(m，1H)，3.58～3.62(m，2H)，4.39～4.43(m，2H)，6.63(d，1H，J＝6.8Hz)，
7.31(dd，2H，J＝9.2Hz，J＝2.0Hz)，7.37(d，1H，J＝8.4Hz)，7.70～7.75(m，2H)，7.76(d，
1H，J＝6.8Hz)，8.20(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝3.6Hz)，8.23(s，1H)，10.91(br，1H，HCl)。

[0126] 实施例7

[0127] N-(3-(6-甲氧羰基吲哚基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-7)盐酸盐的制备

[0128] 以6-甲氧羰基吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(3-氯丙基)-6-甲氧羰基吲哚。取N-(3-氯丙基)-6-甲氧羰基吲哚(1.38g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟 苯 骈 异 恶 唑 基)) 哌 啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol) 和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.44g，收率61.0％。熔点：208～210℃。

[0129] MS：m/z 435.2(M+)

[0130] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.16～2.21(m，2H)，2.26～2.38(m，4H)，3.05～3.15(m，4H)，3.40-3.43(m，1H)，3.59～3.64(m，2H)，3.89(s，3H)，4.40～4.43(m，2H)，6.65～8.22(m，
8H)，11.02(br，1H，HCl)。

[0131] 实施例8

[0132] N-(4-(6-氟吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-8)盐酸盐的制备

[0133] 以6-氟吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(4-氯丁基)-6-氟吲哚。取N-(4-氯丁基)-6-氟吲哚(1.24g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.38g，收率61.9％。熔点：198～200℃。

[0134] MS：m/z 409.2(M+)

[0135] 1HNMR(DMSO-d6)：1.69 ～ 1.75(m，4H)，2.18 ～ 2.36(m，4H)，3.01 ～ 3.15(m，4H)，3.41 ～ 3.47(m，1H)，3.55 ～ 3.58(m，2H)，4.33(t，2H)，6.60 ～ 8.22(m，8H，Ar-H)，
10.76(br，1H，HCl)。

[0136] 实施例9

[0137] N-(4-(6-氰基吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-9)盐酸盐的制备

[0138] 以6-氰基吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(4-氯丁基)-6-氰基吲哚。取N-(4-氯丁基)-6-氰基吲哚(1.28g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.45g，收率
64.2％，熔点：216～218℃。

[0139] MS：m/z 416.2(M+)

[0140] 1HNMR(DMSO-d6)：1.68～1.76(m，4H)，2.17～2.36(m，4H)，3.01 ～3.14(m，4H)，3.42～3.49(m，1H)，3.54～3.58(m，2H)，4.32(t，2H，J＝8.4Hz)，6.61(d，1H，J＝2.8Hz)，
7.31-7.36(m，2H)，7.72(d，1H，J＝8.4Hz)，7.75(d，2H，J＝2.8Hz)，8.15～8.22(m，2H)，
10.53(br，1H，HCl)。

[0141] 实施例10

[0142] N-(4-(6-氯吲哚基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-10)盐酸盐的制备

[0143] 以6-氯吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(4-氯丁基)-6-氯吲哚。取N-(4-氯丁基)-6-氯吲哚(1.33g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.54g，收率66.7％。熔点：203～204℃。

[0144] MS：m/z 425.2(M+)

[0145] 1HNMR(DMSO-d6)：1.68～1.76(m，4H)，2.17～2.36(m，4H)，3.01 ～3.14(m，4H)，3.42～3.49(m，1H)，3.54～3.58(m，2H)，4.32(t，2H，J＝8.4Hz)，6.61(d，1H，J＝2.8Hz)，
7.29-7.40(m，2H，)，7.72(d，1H，J＝8.4Hz)，7.76(d，2H，J＝2.8Hz)，8.16～8.24(m，2H)，
10.80(br，1H，HCl)。

[0146] 实施例11

[0147] N-(3-(1-苯骈咪唑基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-11)盐酸盐的制备

[0148] 以苯骈咪唑为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(3-氯丙基)苯骈咪唑。取N-(3-氯丙基)苯骈咪唑(1.07g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.32g，收率63.8％。熔点：252～254℃。

[0149] MS：m/z 378.2(M+)

[0150] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.15～2.19(m，2H)，2.44～2.49(m，2H)，3.07～3.22(m，4H)，3.43～3.49(m，1H)，3.61～3.65(m，2H)，4.70(t，2H，J＝6.8Hz)，7.32(tt，1H，J＝9.2Hz，J＝ 2.0Hz)，7.62(t，2H，J＝ 6.8Hz)，7.72(dd，1H，J＝ 9.2Hz，J＝ 2.0Hz)，7.89(d，1H，J＝6.8Hz)，8.13(d，1H，J＝6.8Hz)，8.26(dd，1H，J＝9.2Hz，J＝3.2Hz)，9.74(s，1H)，
11.51(br，1H，HCl)。

[0151] 实施例12

[0152] N-(4-(1-苯骈咪唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-12)盐酸盐的制备

[0153] 以苯骈咪唑为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(4-氯丁基)苯骈咪唑。取N-(4-氯丁基)苯骈咪唑(1.15g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.37g，收率63.9％。熔点：205～207℃。

[0154] MS：m/z 392.2(M+)

[0155] 1HNMR(DMSO-d6)：δ1.83-1.86(m，2H)，1.97-2.08(m，2H)，2.15-2.19(m，2H，)，2.39～2.48(m，2H)，3.04～3.16(m，4H)，3.46～3.50(m，1H)，3.57-3.61(m，2H)，4.56(t，
2H，J＝6.8Hz)，7.32(td，1H，J＝9.2Hz，J＝2.0Hz)，7.62(m，2H)，7.72(dd，1H，J＝9.2Hz，J＝2.0Hz)，7.88(dd，1H，J＝6.8Hz，J＝2.0Hz)，8.07(d，1H，J＝6.8Hz)，8.26(dd，1H，J＝9.2Hz，J＝3.6Hz)，9.71(s，1H)，11.20(br，1H，HCl)。

[0156] 实施例13

[0157] N-(3-(1-苯骈吡唑基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-13)盐酸盐的制备

[0158] 以苯骈吡唑为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备1-(3-氯丙基)苯骈吡唑。取1-(3-氯丙基)苯骈吡唑(1.07g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.30g，收率62.7％。熔点：201～203℃。

[0159] MS：m/z 378.2(M+)

[0160] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.10～2.21(m，2H)，2.41～2.52(m，2H)，3.05～3.29(m，4H)，3.41 ～ 3.65(m，3H)，4.68(t，2H，J ＝ 6.8Hz)，7.20 ～ 9.86(m，8H，Ar-H)，11.32(br，1H，HCl)。

[0161] 实施例14

[0162] N-(4-(6-氰基苯骈吡唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(II-14)盐酸盐的制备

[0163] 以6-氰基苯骈吡唑为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备1-(4-氯丁基)-6-氰基苯骈吡唑。取1-(4-氯丁基)-6-氰基苯骈吡唑(1.29g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟 苯 骈 异 恶 唑 基)) 哌 啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol) 和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.43g，收率63.0％。熔点：189～191℃。

[0164] MS：m/z 417.2(M+)

[0165] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.09～2.22(m，2H)，2.40～2.53(m，2H)，3.04～3.29(m，4H)，3.43 ～ 3.67(m，3H)，4.71(t，2H，J ＝ 6.8Hz)，7.15 ～ 8.29(m，7H，Ar-H)，11.07(br，1H，HCl)。

[0166] 实施例15

[0167] N-(4-(6-氰基吲哚基)丁基)-4-(3-骈异恶唑)哌啶(II-15)盐酸盐的制备[0168] 以6-氰基吲哚为原料，按通法一中的合成及后处理方法制备N-(4-氯丁基)-6-氰基吲哚。取N-(4-氯丁基)-6-氰基吲哚(1.28g，0.0055mol)，4-(3-苯骈异恶唑基)哌啶(1.01g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法一中的后处理操作，得到白色晶体1.41g，收率64.8％。熔点：215～217℃。

[0169] MS：m/z 398.2(M+)

[0170] 1HNMR(DMSO-d6)：1.66～1.75(m，4H)，2.18～2.40(m，4H)，3.00 ～3.14(m，4H)，3.42～ 3.51(m，1H)，3.54～ 3.59(m，2H)，4.31(t，2H，J＝ 8.4Hz)，6.82～ 7.79(m，9H)，
10.92(br，1H，HCl)。

[0171] 实施例16

[0172] N-(3-(6-氟苯骈咪唑基)丙基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(III-1)盐酸盐的制备

[0173] 以2，4-二氟硝基苯为原料，按通法二中的合成及后处理方法制备6-氟-1-(3-碘丙基)苯骈咪唑。取6-氟-1-(3-碘丙基)苯骈咪唑(1.67g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(1.10g，0.005mol)和DIPEA(2.58g，0.02mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应15小时，按通法二中的后处理操作，得到白色晶体1.51g，收率69.6％。熔点：206～208℃。

[0174] MS：m/z 397.2(M+)

[0175] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.04～2.27(m，2H)，2.40～2.54(m，2H)，3.03～3.30(m，4H)，3.41 ～ 3.66(m，3H)，4.63(t，2H，J ＝ 6.8Hz)，7.21 ～ 9.82(m，8H，Ar-H)，10.96(br，1H，HCl)。

[0176] 实施例17

[0177] N-(4-(6-氟苯骈咪唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(III-2)盐酸盐的制备

[0178] 以2，4-二氟硝基苯为原料，按通法二中的合成及后处理方法制备6-氟-1-(4-碘丁基)苯骈咪唑。取6-氟-1-(4-碘丁基)苯骈咪唑(1.75g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(1.10g，0.005mol)和DIPEA(2.58g，0.02mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应15小时，按通法二中的后处理操作，得到白色晶体1.49g，收率66.5％。熔点：199～201℃。

[0179] MS：m/z 411.2(M+)

[0180] 1HNMR(DMSO-d6)：δ1.81～2.09(m，4H)，2.10～2.48(m，4H)，3.04～3.22(m，4H)，3.43～3.68(m，3H)，4.59(t，2H，J＝6.8Hz)，7.27～9.76(m，7H)，11.14(br，1H，HCl)。

[0181] 实施例18

[0182] N-(4-(6-氰基苯骈咪唑基)丁基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(III-3)盐酸盐的制备

[0183] 以2-氯-4-氰基硝基苯为原料，按通法二中的合成及后处理方法制备1-(3-碘丁基)-6-氰基苯骈咪唑。取1-(3-碘丁基)-6-氰基苯骈咪唑(1.79g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(1.10g，0.005mol)和DIPEA(2.58g，0.02mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应15小时，按通法二中的后处理操作，得到白色晶体1.55g，收率68.1％。
熔点：188～190℃。

[0184] MS：m/z 418.2(M+)

[0185] 1HNMR(DMSO-d6)：δ1.83～2.08(m，4H)，2.12～2.53(m，4H)，3.03～3.21(m，4H)，3.45～3.69(m，3H)，4.61(t，2H，J＝6.8Hz)，7.25～9.79(m，7H)，11.08(br，1H，HCl)。

[0186] 实施例19

[0187] N-(2-(6-氰基吲哚基)乙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(IV-1)盐酸盐的制备

[0188] 以N-羟基-6-氰基吲哚为原料，按通法三中的合成及后处理方法制备N-(2-氯乙氧基)-6-氰基吲哚。取N-(2-氯乙氧基)-6-氰基吲哚(1.21g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应15小时，按通法三中的后处理操作，得到白色晶体1.39g，收率63.0％。熔点：212～214℃。

[0189] MS：m/z 429.2(M+)

[0190] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.30～2.47(m，4H)，3.32～3.53(m，3H)，3.76～3.86(m，4H，A-H)，5.05～5.08(m，2H)，7.41～8.30(m，8H，Ar-H)，10.98(br，1H，HCl)。

[0191] 实施例20

[0192] N-(3-(6-氰基吲哚基)丙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(IV-2)盐酸盐的制备

[0193] 以N-羟基-6-氰基吲哚为原料，按通法三中的合成及后处理方法制备N-(3-氯丙氧基)-6-氰基吲哚。取N-(3-氯丙氧基)-6-氰基吲哚(1.29g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法三中的后处理操作，得到白色晶体1.44g，收率63.3％。熔点：207～209℃。

[0194] MS：m/z 418.2(M+)

[0195] 1HNMR(DMSO-d6)：2.21～2.32(m，2H)，2.34～2.56(m，4H)，3.14～3.53(m，5H)，3.64 ～ 3.77(m，2H)，4.73(t，2H，J ＝ 6.0Hz)，7.34 ～ 8.22(m，8H，Ar-H)，11.04(br，1H，HCl)。

[0196] 实施例21

[0197] N-(2-(6-氯苯骈三氮唑基)乙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(IV-3)盐酸盐的制备

[0198] 以N-羟基-6-氯苯骈三氮唑为原料，按通法三中的合成及后处理方法制备N-(2-氯乙氧基)-6-氯苯骈三氮唑。取N-(2-氯乙氧基)-6-氯苯骈三氮唑(1.28g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法三中的后处理操作，得到白色晶体1.41g，收率62.4％。熔点：208～210℃。

[0199] MS：m/z 415.1(M+)

[0200] 1HNMR(DMSO-d6)：δ2.33～2.41(m，4H)，3.32～3.40(m，2H)，3.48～3.53(m，1H)，3.76～3.78(m，2H)，3.82-3.86(m，2H)，5.06～5.08(m，2H)，7.36(tt，1H，J＝9.2Hz，J＝
2.0Hz)，7.53(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝2.2Hz)7.72～7.76(dd，1H，J＝9.2Hz，J＝2.0Hz)，
8.14(d，1H，J＝8.8Hz，J＝2.2Hz)，8.20(dd，1H，J＝9.2Hz，J＝ 3.2Hz)，8.30(s，1H)，
11.03(br，1H，HCl)。

[0201] 实施例22

[0202] N-(3-(6-氯苯骈三氮唑基)丙氧基)-4-(3-(6-氟苯骈异恶唑))哌啶(IV-4)盐酸盐的制备

[0203] 以N-羟基-6-氯苯骈三氮唑为原料，按通法三中的合成及后处理方法制备N-(3-氯丙氧基)-6-氯苯骈三氮唑。取N-(3-氯丙氧基)-6-氯苯骈三氮唑(1.35g，0.0055mol)，4-(3-(6-氟苯骈异恶唑基))哌啶(1.10g，0.005mol)，DIPEA(2.58g，0.02mol)和KI(0.83g，0.005mol)在30ml乙腈溶液中，回流反应12小时，按通法三中的后处理操作，得到白色晶体1.57g，收率67.4％。熔点：218～220℃。

[0204] MS：m/z 429.1(M+)

[0205] 1HNMR(DMSO-d6)：2.22～2.30(m，2H)，2.34～2.54(m，4H)，3.14～3.23(m，2H)，3.42～3.53(m，3H)，3.68～3.72(m，2H)，4.71(t，2H，J＝6.0Hz)，7.34(t，1H，J＝8.8Hz)，
7.51(d，1H，J ＝ 8.8Hz)，7.73(d，1H，J ＝ 8.8Hz)，8.12(d，1H，J ＝ 8.8Hz)，8.17(s，1H)，
8.22(dd，1H，J＝8.8Hz，J＝3.2Hz)，11.02(br，1H，HCl)。

[0206] 实施例23

[0207] 片剂：实施例1-22的化合物 25mg

[0208] 蔗糖 155mg

[0209] 玉米淀粉 65mg

[0210] 硬脂酸镁 5mg

[0211] 制备方法：将活性成分与蔗糖、玉米淀粉混合，加水湿润，搅拌均匀，干燥，粉碎过筛，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片。每片重250mg，活性成分含量为25mg。

[0212] 实施例24

[0213] 针剂：实施例1-22的化合物 10mg

[0214] 注射用水 990mg

[0215] 制备方法：将活性成分溶解于注射用水，混合均匀，过滤，将所获得的溶液在无菌条件下分装于安瓿瓶中，每瓶100mg，活性成分含量为1mg/瓶。

[0216] 实施例25

[0217] 化合物体外与5-HT2A受体结合作用

[0218] 1受试样品

[0219] 受试样品均用DMSO溶解至0.01mol/L，然后用去离子水稀释至100umol/L。

[0220] 2实验材料：

[0221] 1)5-HT2A细胞转染：

[0222] 本实验用含有5-HT2A受体蛋白基因的质粒载体转染HEK293细胞，使用磷酸钙转染法，并从转染后的细胞中，通过含G418的培养液培养，以及挑选细胞单克隆和放射性培基结合实验，最终获得能稳定表达5-HT2A受体蛋白的稳定细胞株。

[0223] 2)受体结合实验材料：

[0224] 同位 素 配 基[3H]-Ketanserin(67.0Ci/mmol)，购 自PerkinElmer公 司；(+)spiperone，购自RBI公司；GF/C玻璃纤维滤纸，购自Whatman公司；Tris进口分装；PPO、POPOP购自上海试剂一厂；脂溶性闪烁液。Beckman LS-6500型多功能液体闪烁计数仪。

[0225] 3实验方法：

[0226] 1)受体竞争结合实验：

[0227] 用含以上各种基因的重组病毒分别感染HEK-293细胞，48-72小时后受体蛋白在膜上大量表达，将细胞1000rpm离心5min后弃培液，收胞体，保存于-20℃冰箱内备用。实验时用Tris-HCl反应缓冲液(PH 7.7)重悬。

[0228] 受体竞争结合实验：将待测化合物与放射性配基各10ul及80ul受体蛋白加入反应试管中，使受试化合物及阳性药物终浓度均为10umol/L，37℃水浴孵育15min后，即刻移至冰浴终止其反应；在Millipore细胞样品收集器上，经过GF/C玻璃纤维滤纸快速抽滤，并用洗脱液(50mM Tris-HCl，PH 7.7)3ml×3次，用微波炉8～9min烘干，将滤纸移入0.5ml离心管中，加入500ul脂溶性闪烁液。避光静置30min以上，计数测定放射性强度。按以下公式计算各化合物对同位素配基结合的抑制率百分率：抑制率(I％)＝总结合管cpm-化合物cpm/总结合管cpm-非特异结合管cpm×100％；

[0229] 化合物每次实验做两复管，进行两次单独实验。

[0230] 4实验结果：

[0231] 1)粗筛结果：

[0232] 表1.化合物10umol/L下竞争结合抑制率

[0233]终浓度 5-HT2A[3H]-Ketanserin
序号 化合物编号
umol/L 抑制率％
1 II-1 10 99.5
2 II-3 10 100
3 II-4 10 99.9
4 II-6 10 100
5 II-8 10 100
6 II-9 10 99.3
7 II-11 10 99.6
8 II-12 10 99.5
9 II-14 10 99.7
10 II-17 10 101
11 III-2 10 99.1
12 IV-3 10 92.8
13 IV-4 10 97.4

[0234] 2)高亲和力化合物的IC50及Ki值

[0235] 对粗筛结果显示有较高亲和力的7个化合物进行浓度梯度实验，测定其IC50及Ki值，结果见表2。

[0236] 表2.化合物对5-HT2A受体亲和力的IC50及Ki值

[0237]化合物 IC50结果(nM) Ki值(nM)
阿立派唑 3.7631 1.9806
II-3 1.6590 1.1167
II-6 4.7807 3.2178
II-8 5.3290 2.7864
II-9 2.9223 1.9670
II-14 3.0920 2.0614
II-17 3.6319 2.4445
III-2 3.9937 2.6881

[0238] 化合物II-3、II-6、II-8、II-9、II-14、II-17、III-2、七个化合物对5-HT2A具有较强的抑制活性，其作用强度与阿立派唑相当。

[0239] 实施例26

[0240] 化合物5-HT再摄取抑制作用

[0241] 采用(Biochem Phearmacol 1973，22，311-322)报道的脑突触体对单胺类神经递质再摄取的研究方法，是目前国际上对中枢神经药理研究的重要手段之一，该方法不仅可以用来研究药物的作用机制，还可以筛选作用于此类环节的新药。本发明采用脑突触体对单胺类神经递质5-HT再摄取的研究方法，以有效的5-HT、NA双重再摄取抑制剂文拉法辛(Venlafaxine)作为阳性对照品，对所发明化合物抑制脑突触体对5-HT再摄取的作用进行研究。方法如下：

[0242] 1大鼠脑突触体的制备：

[0243] 雄性SD大鼠拉颈处死后迅速断头取脑，置于冰上，分离相关脑组织([3H]5-HT、3 3
[H]NA再摄取试验取前额皮层，[H]DA再摄取试验取纹状体)。

[0244] 称重后，加入10倍(V/W)冰冷0.32mol/L蔗糖液，玻璃-teflon电动匀浆；匀浆液4℃下1000g×10min离心；取上清，4℃下17000g×20min离心；取沉淀，以30倍体积KRH Buffer(125mM NaCl，4.8mM KCl，1.2mM CaCl2，1.2mM MgSO4，1.0mM KH2PO4，22mM HaHCO3，25mM HEPES，10mM Glucose，10μM Pargyline，0.2mg/ml Ascorbic Acid)悬浮，置于冰浴中备用。

[0245] 2.[3H]5-HT再摄取试验：

[0246] 综 合 文 献 (a.Biochem Phearmacol 1973，22，311-322，b.Methods in Neurochemistry，IVol.2，New York：Marcel Dakker，1972，1-52)，受试品贮备液临用前取出解冻，以KRHBuffer稀释至100μmol/L，取50μl加入500μl总反应体系中，终浓度即为10μmol/L，再加入50μl悬浮的突触体膜，混匀，37℃水浴中孵育30min；加入10nmol/L[3H]5-HT，37℃水浴孵育10min后立即取出加入2ml冰冷的150mmol/L Tris-HCl缓冲液终止反应，真空抽滤收集样品于圆形玻璃纤维膜上，以冰冷的Tris-HCl缓冲液3ml洗膜三次；取下滤膜，远红外烤箱中烘烤15min后置于EP管中，加入1.5ml闪烁液，过夜后液体闪烁计数仪检测。溶剂对照总结合管与非特异性结合管中不加受试物，总结合管中加入50μl3
溶剂，[H]5-HT再摄取试验的非特异性结合管中加入600μmol/L Cocaine。

[0247] 3.试验结果：

[0248] 在相同浓度条件(对照药及待测药物均为0.1mmol/L)下，以度洛西汀为阳性对照品，对5-HT再摄取的抑制率测定结果见表3。

[0249] 表3.化合物对脑突触体5-羟色胺(5-HT)再摄取的抑制作用

[0250]

[0251] 浓度为10μmol/L时，化合物II-3、II-6、II-8、II-9、II-14、III-2，六个化合物对5-HT再摄取具有较强的抑制活性，其作用强度与度洛西汀相当。

[0252] 实施例27

[0253] 化合物小鼠醋酸扭体法体内镇痛作用

[0254] 1、实验动物：

[0255] 昆明种小鼠，清洁级KM小鼠购自上海斯莱克实验动物公司，普通环境内饲养。

[0256] 2、实验给药方式：

[0257] 将化合物用注射用水配制成4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml溶液，对照组及给药组均采用动物经颈部皮下注射给药。

[0258] 3、实验给药剂量：

[0259] 给药组采用三种不同剂量给药，分别为：10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg。

[0260] 4、实验方法：

[0261] 以阿斯匹林为阳性对照药物，采用醋酸扭体法进行实验。

[0262] 5、具体实验操作：

[0263] 取小鼠30只，雌雄各半，体重在18-23克之间。将其分为五组，分别为：阴性对照组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，具体如下：

[0264] 阴性对照组 生理盐水 0.2ml

[0265] 阳性对照组 阿斯匹林 200mg/kg

[0266] 低剂量组 受试药物 10mg/kg

[0267] 中剂量组 受试药物 20mg/kg

[0268] 高剂量组 受试药物 40mg/kg

[0269] 小鼠先经灌胃给药测试样品(10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg)，阴性对照组口服生理盐水(20ml/kg)，阳性对照组口服阿斯匹林(200mg/kg)，1小时后各组小鼠分别ip 0.7％乙酸10ml/kg，间隔5min后记录各组小鼠在15min内出现的扭体反应次数，按下列公式计算各给药组的扭体反应抑制率。

[0270]

[0271] 6、化合物多剂量给药实验结果：详见表3

[0272] 表3.化合物小鼠醋酸扭体法筛选结果

[0273]
* **

[0274] 注：表示P值＜0.05， 表示P值＜0.01

[0275] 实施例28

[0276] 化合物小鼠热板法体内镇痛作用

[0277] 1、实验动物：

[0278] 昆明种小鼠，清洁级KM小鼠购自上海斯莱克实验动物公司，普通环境内饲养。

[0279] 2、实验给药方式：

[0280] 将化合物用注射用水配制成4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml溶液，对照组及给药组均采用动物经颈部皮下注射给药。

[0281] 3、实验给药剂量：

[0282] 给药组采用三种不同剂量给药，分别为：10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg。

[0283] 4、实验方法：

[0284] 以吗啡为阳性对照药物，采用热板法进行实验。

[0285] 5、具体实验操作：

[0286] 取小鼠30～40只，雌雄各半，体重在18-23克之间。首先，分别将小鼠置于55.5℃的热板上测试2～3次基础痛阈值，基础痛阈值5～30s为合格，淘汰不合格的小鼠。取30只合格小鼠将其分为五组，分别为：阴性对照组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，具体如下：

[0287] 阴性对照组 直接测试基础痛阈值

[0288] 阳性对照组 吗啡0.2mg/ml 0.2ml

[0289] 低剂量组 受试药物1mg/ml 0.2ml

[0290] 中剂量组 受试药物2mg/ml 0.2ml

[0291] 高剂量组 受试药物4mg/ml 0.2ml

[0292] 小鼠经颈部皮下注射测试样品溶液(10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg)，阳性对照组皮下注射吗啡(2mg/kg)，1小时后各组小鼠分别测痛阈值作为给药后痛阈值。按下面的公式计算痛阈提高率：

[0293]

[0294] 6、部分化合物实验结果：详见表5

[0295] 表5.化合物小鼠热板法筛选结果

[0296]

[0297] 注：*表示P值＜0.05，**表示P值＜0.01

[0298] 实施例29

[0299] 化合物小鼠体内镇静作用

[0300] 采用交电管记录小鼠自发活动，单剂量(20mg/kg)给药测试化合物的镇静作用，实验结果：详见表4。

[0301] 表4.化合物镇静作用筛选结果

[0302]名称 镇静 名称 镇静
II-1 43* II-12 52*
II-2 44* II-13 66*
II-3 35 II-14 20
II-4 91** III-1 54*
II-5 65* III-2 64**
II-6 75** III-3 52*
II-7 96** IV-1 20
II-8 42* IV-2 52*
II-9 47* IV-3 67*
** *
II-10 99 IV-4 70.8
II-11 0

[0303] 注：*表示P值＜0.05，**表示P值＜0.01

[0304] 实施例30

[0305] 化合物与阿片受体亚型μ、δ、κ的竞争性结合作用

[0306] 应用放射性配体结合实验测定化合物对阿片受体亚型μ、δ、κ的竞争结合能力，来验证该类化合物的镇痛途径属非阿片类。

[0307] 受体竞争实验分为总结合管、非特异性结合管及试样管。总结合管中加入30μg膜蛋白、[3H]Diprenorphine(终浓度为0.4nM)，用50mM Tris-HCl(pH7.4)调节终体积至200μL；相对应的非特异结合管中另加10μM Naloxone；试样管分别加入待测化合物(终浓度为10-5M)，37℃温育30min，然后置冰浴终止反应。在Millipore样品收集器上经GF/C(Whatman)玻璃纤维滤纸负压抽滤。用冰冷的50mM Tris-HCl(pH7.4)冲洗滤纸三次，每次
4ml，滤纸烘干后置于0.5ml Eppendorf管，加0.5ml亲脂闪烁液，BeckmanLS6500多功能液体闪烁计数仪测定放射性强度。每一浓度为三复管，每一独立实验重复3～4次。

[0308] 各试样管特异性结合CPM值＝各试样管总结合CPM值-非特异性管CPM值。[待测化合物对阿片受体不同亚型的竞争结合抑制率(％)＝(100％-试样管特异性结合(CPM值)/溶剂组特异性结合(CPM值))×100％。

[0309] 各试药每次试验做双三复管取均值，重复实验2次以上，数据以mean±SE表示，用方差分析法作统计学比较。测定的5个化合物对阿片受体三种不同亚型均无高亲和力。实验结果详见表6。

[0310] 表6.化合物与阿片受体亚型μ、δ、κ的竞争性结合实验结果

[0311]

[0312] 实施例31