一种枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂和水分散粒剂

摘要

本发明公开了一种以枯草芽孢杆菌Bs-03为活性成分的可湿性粉剂和水分散粒剂。枯草芽孢杆菌Bs-03水分散粒剂由枯草芽孢杆菌Bs-03原粉、轻质碳酸钙、葡萄糖、湿润剂1004、鱼粉和CMC制成。枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂由枯草芽孢杆菌Bs-03原粉、白炭黑、葡萄糖、淀粉、湿润剂1004、分散剂NNO和CMC制成。本发明枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂和水分散粒剂性质稳定，便于长期放置，且对棉花枯萎病防治效果显著，防治效果大于60％。

权利要求

1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bs-03水分散粒剂，其特征是，由下述重量份的原料制成，枯草芽孢杆菌Bs-03原粉1-30，轻质碳酸钙1-60，葡萄糖0.5-60，湿润剂

1004 0.5-30，鱼粉0.2-30，CMC 0.02-10，其枯草芽孢杆菌Bs-03含量为0.1-100亿活菌/克；所述枯草芽孢杆菌Bs-03的保藏编号为CGMCC No.3038。

2.如权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌Bs-03水分散粒剂，其特征是，所述枯草芽孢杆菌Bs-03水分散粒剂水分质量百分含量为6-8％，pH为7-7.5。

3.一种枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂，其特征是，由下述重量份的原料制成，枯草芽孢杆菌Bs-03原粉1-30，白炭黑1-60，葡萄糖0.5-60，淀粉0.5-30，湿润剂1004 0.5-30，分散剂NNO 0.5-20，CMC 0.02-10，其枯草芽孢杆菌Bs-03含量为0.1-100亿活菌/克；所述枯草芽孢杆菌Bs-03的保藏编号为CGMCCNo.3038。

4.如权利要求3所述的一种枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂，其特征是，所述枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂水分质量百分含量为6-8％，pH为7-7.5。

说明书

一种枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂和水分散粒剂

技术领域

[0001] 本发明涉及一种微生物菌剂，尤其是涉及一种以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)Bs-03为活性成分的可湿性粉剂和水分散粒剂。

背景技术

[0002] 剂型是农药应用中关键技术之一，不仅因为便于使用和提高药效，而且也便于标准化生产与管理。但生物农药尤其是活体制剂的剂型选择必须经过双向确定，一是必须获得稳定的物理性状与标准化生产基本模式，而且必须在制剂菌体存活与防治效果上有一定时间，否则就不能进行规模化生产。对此，剂型的确定必须进行设计与测试，以获得一定保藏时间和药效的稳定产品。由于微生物活体制剂的特殊性，目前可以选择的有可湿性粉剂、可湿性片剂、水分散粒剂(WDG或WG)、干拌种剂、颗粒剂、微粒剂、微悬浮囊剂、细粒剂、悬浮剂、干悬浮剂10种剂型。

[0003] 申请人在专利“一株枯草芽孢杆菌及其应用”(专利申请号：200910018092.5，申请日：2009.8.25)中公开一株新的枯草芽孢杆菌菌株Bs-03，它是从山东省林业科学研究院实验苗圃土壤中采用土壤稀释分离法分离获得到的，已于2009年04月23日保藏于中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCC No.3038。该菌株可以用作生物肥料以及生物农药，并通过实验证明该菌株发酵液防治棉花黄萎病效果显著，防治效果达到71.11％，且棉花生长健壮，无药害产生。单纯的枯草芽孢杆菌Bs-03发酵液稳定性不好，其存活的菌量随着时间推移迅速减少，因此不能长期放置。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于克服枯草芽孢杆菌Bs-03发酵液不能长期放置的缺点，根据枯草芽孢杆菌Bs-03的特点与对病原菌的防治谱，确定防治土传病害和合叶部病害，水分维持在6-8％为宜，而提供一种稳定性好的枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂和水分散粒剂。

[0005] 本发明的技术方案是：一种枯草芽孢杆菌Bs-03水分散粒剂(WG)，其特征是，由下述重量份的原料制成，枯草芽孢杆菌Bs-03原粉1-30，轻质碳酸钙1-60，葡萄糖0.5-60，湿润剂1004 0.5-30，鱼粉0.2-30，CMC(羧甲基纤维素钠)0.02-10，其枯草芽孢杆菌Bs-03含量为0.1-100亿活菌/克。

[0006] 制备方法：将上述原料混合均匀，控制加工温度0-50℃，在气流粉碎机或其它高目粉碎机中，粉碎到150筛目以上，再进行沸腾造粒或挤压造粒，水分控制在6-8％(质量百分含量)，pH控制在7-7.5。

[0007] 本发明的另一种技术方案是：一种枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂(WP)，其特征是，由下述重量份的原料制成，枯草芽孢杆菌Bs-03原粉1-30，白炭黑1-60，葡萄糖0.5-60，淀粉0.5-30，湿润剂1004 0.5-30，分散剂NNO0.5-20，CMC(羧甲基纤维素钠)0.02-10，其枯草芽孢杆菌Bs-03含量为0.1-100亿活菌/克。

[0008] 制造方法：将上述原料混合均匀，控制加工温度0-50℃，在气流粉碎机或其它高目粉碎机中，粉碎到150筛目以上水分控制在6-8％(质量百分含量)，pH控制在7-7.5。

[0009] 本发明所述枯草芽孢杆菌Bs-03原粉为枯草芽孢杆菌Bs-03发酵液经喷雾干燥后的枯草芽孢杆菌Bs-03含量为80-300亿活菌/克的干粉，其具体发酵方法见专利200910018092.5。所述湿润剂1004由山东邹平德兴精细化工有限公司生产。

[0010] 使用方法：可以使用枯草芽孢杆菌Bs-03水分散粒剂或可湿性粉剂500-600倍叶面喷雾，或用该含量制剂0.2％(99.8重量份的土和0.2重量份的制剂)拌种，也可以兑水1500-2000倍灌根。

[0011] 枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂和水分散粒剂不同含水量，对分别放置0、10、30、180、360天的枯草芽孢杆菌Bs-03的活力影响见表1和表2。

[0012] 表1 可湿性粉剂在不同含水量对枯草芽孢杆菌Bs-03的活力影响[0013]水分含量(％) 0天 10天 30天 180天 360天
4 22.5 21.7(96.5) 20.7(91.8) 11.9(52.7) 4.5(20.1)
6 27.4 26.4(96.2) 26.1(95.1) 20.7(75.3) 18.7(68.0)
8 23.7 23.3(98.5) 21.6(91.4) 19.9(84.0) 16.9(71.3)
10 26.1 23.1(88.8) 17.6(67.8) 12.7(68.8) 5.2(20.2)
12 27.8 21.7(77.9) 16.9(60.5) 7.9(28.3) 1.6(5.9)

[0014] 注：表中数字为三次测定平均值，单位为10cfu/g，括号内为菌体存活百分数。

[0015] 表2 水分散粒剂在不同含水量对枯草芽孢杆菌Bs-03的活力影响[0016]水分含量(％) 0天 10天 30天 180天 360天
4 22.9 22.1(96.7) 20.9(91.4) 12.7(55.4) 5.2(22.9)
6 24.8 24.5(98.7) 23.7(95.3) 19.7(79.4) 17.7(71.2)
8 24.5 23.9(97.4) 22.9(93.3) 21.2(86.6) 18.9(77.0)
10 23.5 22.4(95.6) 18.0(76.8) 15.3(65.1) 11.9(50.6)
12 64.2 21.3(82.9) 17.7(68.6) 10.1(39.2) 3.7(14.5)

[0017] 注：表中数字为三次测定平均值，单位为10cfu/g，括号内为菌体存活百分数。

[0018] 从表1和表2可以看出，枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂和水分散粒剂在水分控制在6-8％时放置一段时间后活力较好，菌体存活率大于68％。

[0019] 将两种制剂各自分成3份，用聚乙烯塑料膜包装，封口，置于自然荫凉条件下，避免阳光直射，放置两年抽检结果与枯草芽孢杆菌Bs-03原粉同样条件下放置2年的抽检结果对比数据见表3、表4和表5：

[0020] 表3 20×108cfu/g枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂产品检测结果[0021]时间 活菌数 悬浮率％ 细度 湿润时间s 水分％ PH
(108cfu/g)
07.12.5 22.5 91.4 98 3.2 7.3 7.3
08.6.6 16.7 90.2 97 3.6 7.3 7.2
08.12.6 15.2 87.5 96 3.5 7.2 6.7
09.6.6 11.9 86.7 95 4.5 7.1 6.5
09.12.6 8.8 85.4 95 4.5 6.9 6.5

[0022] 注：抽样数量为2.76吨，细度为通过250筛目粒子百分数。

[0023] 表4 20×108cfu/g枯草芽孢杆菌Bs-03水分散粒剂产品检测结果[0024]时间 活菌数 悬浮率％ 湿润时间s 水分％ PH
(108cfu/g)
07.12.5 21.1 90.8 3.5 7.1 7.5
08.6.6 19.7 88.6 3.8 6.9 7.4
08.12.6 16.9 86.4 3.9 6.9 6.9
09.6.6 12.5 85.5 4.6 6.8 6.6
09.12.6 9.7 85.1 4.7 6.8 6.5

[0025] 注：抽样数量为1.92吨。

[0026] 表5 同样存贮条件下原粉成分变化

[0027]时间 07.12.5 08.6.6 08.12.6 09.6.6 09.12.6
活菌数(108cfu/g) 196.7 109.6 49.8 21.4 4.2
水分％ 7.7 7.6 7.4 7.4 7.3
PH 7.3 7.3 7.2 7.2 7.1

[0028] 注：抽样数量为1.23吨。

[0029] 从表3、表4和表5可以看出，原粉不经过加工，其存活的菌量随着时间推移迅速减少，在两年后只有最初的2.1％，而可湿性粉剂和水分散粒剂分别为39.1％和46.0％，充分说明制剂加工的重要性。

[0030] 本发明的有益效果是：本发明枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂和水分散粒剂性质稳定，便于长期放置，且对棉花枯萎病防治效果显著，防治效果大于60％。

[0031] 为了明确枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂和水分散粒剂对棉花枯萎病的防治效果，为其推广应用提供依据，我们进行了盆栽试验：

[0032] 1供试材料及方法

[0033] 1.1供试药剂

[0034] WP0为枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂(菌落数20.9×108cfu/g)，WP1为WP0贮8
存1年后的产品(菌落数15.2×10cfu/g)，WG0为枯草芽孢杆菌Bs-03水分散粒剂(菌落
8 8
数20.4×10cfu/g)，WG1为WG0贮存1年后的产品(菌落数16.9×10cfu/g)。

[0035] 1.2供试作物与防治对象：供试作物为棉花，品种为中棉17；防治对象：枯萎病[0036] 1.3试验方法：

[0037] 1.3.1病菌及病土制备：将中棉17脱绒棉花种子于三角瓶中121℃灭菌30分钟，降至室温时接入枯萎病病菌的菌丝块，28℃培养7天至菌丝丰满，风干后磨碎，取20-40目间的颗粒用于接种。菌土准备：将上述风干后磨碎的枯萎病菌粉，掺于土中，掺量为土重的0.2％，再浇水至相对湿度70-80％即可播种。

[0038] 1.3.2健康棉种处理：先将棉种用55℃水浸泡20分钟，然后在常温下继续浸泡24小时，捞出并除去多余水分，在30℃左右催芽。

[0039] 1.3.3当种子露白时按种子量的2％将上述药剂(上述含有枯草芽孢杆菌Bs-03的制剂)拌种，稍加晾干，就播于盆中，每盆5粒，重复5次，对照为变性淀粉和草炭包衣。

[0040] 1.4调查与记载方法

[0041] 当棉花长至3-4片真叶时，进行调查。根据棉苗枯死数，计算出防治效果。

[0042] 表6 枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂和水分散粒剂对棉花枯萎病防治效果[0043]WP0 WP1 WG0 WG1 对照
试验株数 25 25 25 25 25
枯死株数 7 7 8 9 23
死苗率％ 28 28 32 36 92
防治效果％ 69.6 69.6 65.2 60.9 \

[0044] 从表6可以看出，枯草芽孢杆菌Bs-03可湿性粉剂和水分散粒剂对棉花枯萎病防治效果显著，防治效果大于60％。

具体实施方式

[0045] 实施例1：枯草芽孢杆菌Bs-03水分散粒剂