一种天竺桂多酚类化合物，及制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种天竺桂多酚类化合物，以及制备方法和医药用途。天竺桂多酚类化合物是以中药天竺桂为原料制备而来的，其的制备方法为：(1)天竺桂样品液的制备：取天竺桂粗粉，以水或醇水溶液或丙酮水溶液提取，提取液合并过滤，滤液减压回收乙醇或丙酮至无醇味或无丙酮味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液；(2)天竺桂多酚类化合物的制备：精密量取天竺桂样品液，上大孔树脂柱，预吸附，水洗脱，弃去水洗脱液，然后用30％以下的稀醇洗脱，收集稀醇洗脱液，回收溶剂，制成干浸膏。该类化合物通过胰岛素增敏的途径发挥了降血糖作用，可作为治疗糖尿病的药物或保健食品的原料。

权利要求

1.一种天竺桂多酚类提取物，其特征是从植物天竺桂中制备而来的，方法如下：(1)天竺桂样品液的制备：取天竺桂粗粉，以乙醇水溶液或丙酮水溶液提取，提取液合并过滤，滤液减压回收乙醇或丙酮至无乙醇味或无丙酮味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液；

(2)天竺桂多酚类提取物的制备：精密量取天竺桂样品液，上大孔树脂柱，预吸附，水洗脱，弃去水洗脱液，然后用30％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，制成干浸膏。

2.如权利要求1所述一种天竺桂多酚类提取物，其特征是天竺桂样品液的制备中：天竺桂粗粉，以4-20倍量20％-70％丙酮水溶液冷浸或回流提取2-3次，提取液合并过滤，滤液减压回收丙酮至无丙酮味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液。

3.如权利要求1所述一种天竺桂多酚类提取物，其特征是天竺桂样品液的制备中：天竺桂粗粉，以4-20倍量20％-80％乙醇水溶液冷浸或回流提取2-3次，提取液合并过滤，滤液减压回收乙醇至无乙醇味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液。

4.如权利要求1所述一种天竺桂多酚类提取物，其特征是所上大孔树脂柱是DM-130树脂柱。

5.一种天竺桂多酚类提取物，其特征是从植物天竺桂中制备而来的，方法如下：(1)天竺桂样品液的制备：天竺桂粗粉，以4-20倍量水溶液煎煮提取2-3次，提取液合并，静置，滤过，得天竺桂样品液。

(2)天竺桂多酚类提取物的制备：精密量取天竺桂样品液，上大孔树脂柱，预吸附，水洗脱，弃去水洗脱液，然后用30％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，制成干浸膏。

6.如权利要求1-5任意一项所述的天竺桂多酚类提取物在制备治疗或预防糖尿病的药物或保健食品中应用。

说明书

一种天竺桂多酚类化合物，及制备方法和用途

技术领域

[0001] 本发明涉及一种天竺桂多酚类化合物，以及该化合物的制备方法和在制备治疗或预防糖尿病的药物和保健食品中应用，属于医药技术领域。

背景技术

[0002] 糖尿病是由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用缺陷导致的以慢性血糖水平增高为特征的代谢疾病群，除碳水化合物代谢紊乱外，尚伴随蛋白质、脂肪代谢异常等。病情严重或应激时可发生急性代谢紊乱，长期糖尿病可导致严重的并发症，使患者生活质量降低，寿命缩短，病死率增高。糖尿病在临床上分为两种类型：I型糖尿病，即胰岛素依赖型，发病原因为胰岛β细胞损伤导致胰岛素分泌不足而致，约占患者的10％，治疗只能依赖外源性给予胰岛素维持。另一大类为II型糖尿病，即胰岛素非依赖型，发病原因主要为胰岛素依赖组织对胰岛素生物学效应减弱及胰岛β细胞缺陷导致的以高血糖为标志的代谢综合症，约占患者人群的90％。目前我国糖尿病患者约5千万，居世界第2位，20年后中国的糖尿病患者和糖尿病前期病人可能达到1亿。据“2007上海第十六届世界糖尿病日大型主题会”上发布的数据，2007年全球近2.5亿糖尿病患者。糖尿病已成为发达国家继心血管和肿瘤之后的第三大非传染性疾病，给社会和经济带来了沉重的负担，是严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。

[0003] 目前降糖药物主要以西药为主。但各种西药用后均有一定的局限性：大多数西药作用靶点单一，具有严重的不良反应，如可导致低血糖、乳酸酸中毒等，长期服用有引起并发症的可能。而天然药物在治疗糖尿病方面具有西药不可替代的优势：疗效稳定、作用温和、毒性和不良反应小，许多单味中药或复方制剂都显示了多种抗糖尿病机制，且对其并发症有显著的针对性和防治作用，其作用机理具有多途径、多靶点、多向性的药理特点。因此，从天然药物中筛选出高效、低毒、又能防治糖尿病并发症的药物，具有很大的优势和开发研究价值，成为降血糖药物研究的重要手段和途径。

[0004] 中医药治疗糖尿病(中医诊为消渴证)有悠久的历史。应用现代科学，国内外对很多常用中药的降血糖作用作了大量研究。但目前的研究很多还停留在体外或动物实验阶段，临床研究报道较少或可重复率低。在这些研究中，近年来，中药肉桂中多酚类成分的降血糖活性由于其作用机制明确和临床疗效较为肯定而引起了人们的重视。

[0005] 肉桂是一味常用中药。以往对肉桂化学和药理的研究主要集中在脂溶性部位和桂皮醛成分，发现它们具有抗菌、抗溃疡、扩张血管、降低血小板黏度、抗炎等活性，但对其它部位的研究极少。2001年，美国农业部所属Beltsville人类营养研究中心的著名科学家Anderson教授报道了肉桂降血糖作用与其水溶性部位中多酚类成分增强胰岛素的活性有关，引起了人们的广泛注意。许多单位在国际知名的学术刊物发表了多篇论文，从分子水平、动物和临床的角度报道了肉桂水溶性提取物的降血糖活性。例如体外实验中，Broadhurst等报道肉桂多酚能增强附睾脂肪细胞中胰岛素的活；Imparl-Radosevich等报道肉桂多酚能作用于3T3-L1细胞上胰岛素受体结合部位的酪氨酸磷酸化酶，从而激活胰岛素受体激酶的作用，Anderson等发现肉桂多酚在脂肪细胞中起到胰岛素样作用等。动物试验中，Sung等报道肉桂水溶性提取物对db/db高血糖模型小鼠有显著降血糖作用，在50mg/kg-200mg/kg的剂量范围内有较好的量效相关性，同时肉桂多酚能升高小鼠的HDL高密度脂蛋白水平，提示肉桂有显著的调节血糖和血脂的作用。临床试验中，《美国临床营养学杂志》2007年6月报道，两组II型糖尿病人的其中一组食用布丁并加服6g肉桂粉，另一组人则只食用布丁，随后对两组病人的餐后血糖进行测定，结果表明：吃布丁并加服肉桂粉的一组，餐后血糖要比对照组病人平均低25％。《欧洲临床研究杂志》2006年5月号报道，
79名II型糖尿病人连续4个月每人每天口服相当于3g生药的肉桂水提物，虽然这些病人的HbA1C与血脂未见改善，但空腹血糖平均下降了10.3％，由此可见，肉桂水提物对II型糖尿病有一定的改善作用。

[0006] 但在很多阳性报道的同时，国外也有少量肉桂无降糖作用的临床研究报告。如2006年4月《营养学杂志》上报道称，25名II型糖尿病人连续6周每人每天口服相当于生药1.5g的肉桂水提物，与安慰剂组相比，这些病人的胰岛素敏感性及糖耐量未见任何变化。

[0007] 从研究结果看出，目前国际上对肉桂提取物具有降血糖作用和其中的有效成分为多酚类成分较为肯定，但药理实验结果有不确定因素。我们对这些文献结果进行了分析，发现很多研究中对所使用的肉桂提取物并没有作详细的定义，有些研究甚至对所使用的肉桂品种也不明确，对其中起作用的多酚单体成分更没有作深入的分离纯化，作用机制的探讨。这可能与国外学者获得中药肉桂资源的局限性有关。因而了解不同品种肉桂中植物多酚成分和含量的差异，找出富含有效多酚成分的肉桂品种，制定合理的提取工艺，成为开发具有稳定降血糖作用肉桂中药制剂的关键。

[0008] 由于肉桂在我国有数千年的应用历史，对不同种肉桂的资源分布也较为明确，这为我们深入了解不同品种肉桂中的多酚类成分在结构和含量上的差异创造了条件。

[0009] 在涉及肉桂降血糖活性的中国专利中，专利申请号CN200710065461、CN200710065468、CN200710034719、CN03124760等专利中都涉及了制备具有降血糖作用的复方中成药或保健食品中应用了肉桂，但这些专利大多涉及复方中成药的配方组成，制备和应用，而不是肉桂多酚的提取有效部位和成分分离的新药制备。在申请号CN200610023280中国专利中涉及应用二氧化碳超临界萃取和无水乙醇提取方法制备α-葡萄糖苷酶抑制剂，但此提取方法无法得到肉桂多酚类成分，专利中也未涉及它们具有增强胰岛素活性的作用。

[0010] 在涉及肉桂降血糖活性的国外专利中，美国专利US6200569中涉及何首乌和肉桂提取物具有降血糖作用，但未涉及肉桂多酚类成分和它们具有增强胰岛素活性的作用。也未明确肉桂的何种植物资源富含肉桂多酚类成分和怎样的提取工艺在生产中能富积肉桂多酚。对天竺桂的多酚类成分研究未见任何专利报道。

发明内容

[0011] 本发明的目的是提供一种从中草药天竺桂中提取的多酚类成分，本发明的另一个目的是提供该多酚类成分的制备方法及降血糖作用。

[0012] 本发明是通过如下技术方案实现的：

[0013] 本发明所述的天竺桂多酚类化合物，其特征是以植物天竺桂为原料制备而来的。

[0014] 本发明所述的天竺桂多酚类化合物，其特征是通过如下方法从植物天竺桂中制备而来的：

[0015] (1)天竺桂样品液的制备：取天竺桂粗粉，以水或醇水溶液或丙酮水溶液提取，提取液合并过滤，滤液减压回收乙醇或丙酮至无醇味或无丙酮味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液；

[0016] (2)天竺桂多酚类化合物的制备：精密量取天竺桂样品液，上大孔树脂柱，预吸附，水洗脱，弃去水洗脱液，然后用30％以下的稀醇洗脱，收集稀醇洗脱液，回收溶剂，制成千浸膏。

[0017] 在上述的(1)天竺桂样品液的制备中，天竺桂以丙酮水溶液提取特征是天竺桂粗粉，以4-20倍量20％-70％丙酮水溶液冷浸或回流提取2-3次。提取液合并过滤，滤液减压回收丙酮至无丙酮味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液。

[0018] 在上述的(1)天竺桂样品液的制备中，天竺桂以水溶液提取特征是天竺桂粗粉，以4-20倍量水溶液煎煮提取2-3次。提取液合并，静置，滤过，得天竺桂样品液。

[0019] 在上述的(1)天竺桂样品液的制备中，天竺桂以乙醇水溶液提取特征是天竺桂粗粉，以4-20倍量20％-80％乙醇水溶液冷浸或回流提取2-3次。提取液合并过滤，滤液减压回收乙醇至无乙醇味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液。

[0020] 在上述的(2)天竺桂多酚类化合物的制备中，所用的大孔树脂是DM-130树脂。

[0021] 通过药理学实验，发现富含天竺桂多酚的样品对STZ诱导的大鼠高血糖模型有较好的降血糖作用，并且能促进胰岛素含量的升高，这说明天竺桂多酚可能通过胰岛素增敏的途径发挥了降血糖作用。

[0022] 说明书附图

[0023] 图1天竺桂DM-130树脂层析30％乙醇洗脱部位不同剂量下正常大鼠糖耐量实验中的血糖水平随时间变化曲线

[0024] 图2天竺桂DM-130树脂层析30％乙醇洗脱部位的HPLC指纹图谱

具体实施方式

[0025] 实施例1-8是天竺桂样品液的制备，实施例9-14是天竺桂多酚类提取物的制备。

[0026] 实施例1

[0027] 称取天竺桂粗粉50g，以1000ml 70％丙酮水溶液冷浸提取3次，提取液合并过滤，滤液减压回收丙酮至无丙酮味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液100ml(0.50g生药/mL)。

[0028] 实施例2

[0029] 称取天竺桂粗粉50g，以500ml 70％丙酮水溶液回流提取3次，提取液合并过滤，滤液减压回收丙酮至无丙酮味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液100ml(0.50g生药/mL)。

[0030] 实施例3

[0031] 称取天竺桂粗粉50g，以200ml 20％丙酮水溶液冷浸提取2次，提取液合并过滤，滤液减压回收丙酮至无丙酮味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液100ml(0.50g生药/mL)。

[0032] 实施例4

[0033] 称取天竺桂粗粉50g，以200ml 20％丙酮水溶液回流提取2次，提取液合并过滤，滤液减压回收丙酮至无丙酮味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液100ml(0.50g生药/mL)。

[0034] 实施例5

[0035] 称取天竺桂粗粉50g，以1000ml水煎煮提取3次，提取液合并过滤，浓缩，静置，滤过，加水适量，得天竺桂样品液100ml(0.50g生药/mL)。

[0036] 实施例6

[0037] 称取天竺桂粗粉50g，以200ml水煎煮提取3次，提取液合并过滤，浓缩，静置，滤过，加水适量，得天竺桂样品液100ml(0.50g生药/mL)

[0038] 实施例7

[0039] 称取天竺桂粗粉50g，以1000ml 80％乙醇水溶液回流提取3次，提取液合并过滤，滤液减压回收乙醇至无乙醇味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液100ml(0.50g生药/mL)。

[0040] 实施例8

[0041] 称取天竺桂粗粉50g，以200ml 20％乙醇水溶液冷浸提取2次，提取液合并过滤，滤液减压回收乙醇至无乙醇味，加水适量，静置，滤过，得天竺桂样品液100ml(0.50g生药/mL)。

[0042] 实施例9

[0043] 按照实施例1-8制备出的天竺桂样品液，精密量取30mL，上10g DM-130树脂柱，预吸附1小时，用去离子水1000ml洗脱，弃去水洗脱液，然后用200ml 30％的乙醇洗脱，控制流速为2mL/min左右。将200ml的乙醇洗脱液回收溶剂，制成203mg干浸膏。

[0044] 实施例10

[0045] 按照实施例1-8制备出的天竺桂样品液，精密量取30mL，上100g DM-130树脂柱，预吸附2天，用去离子水10000ml洗脱，弃去水洗脱液，然后用2000ml 30％的乙醇洗脱，控制流速为2mL/min左右。将2000ml的乙醇洗脱液回收溶剂，制成627mg干浸膏。

[0046] 实施例11

[0047] 按照实施例1-8制备出的天竺桂样品液，精密量取30mL，上100g DM-130树脂柱，预吸附1小时，用去离子水10000ml洗脱，弃去水洗脱液，然后用2000ml 20％的乙醇洗脱，控制流速为2mL/min左右。将2000ml的乙醇洗脱液回收溶剂，制成512mg干浸膏。

[0048] 实施例12

[0049] 按照实施例1-8制备出的天竺桂样品液，精密量取30mL，上100g D-1400树脂柱，预吸附1小时，用去离子水10000ml洗脱，弃去水洗脱液，然后用2000ml 30％的乙醇洗脱，控制流速为2mL/min左右。将2000ml的乙醇洗脱液回收溶剂，制成426mg干浸膏。

[0050] 实施例13

[0051] 按照实施例1-8制备出的天竺桂样品液，精密量取30mL，上100g D101树脂柱，预吸附1小时，用去离子水10000ml洗脱，弃去水洗脱液，然后用2000ml 30％的乙醇洗脱，控制流速为2mL/min左右。将2000ml的乙醇洗脱液回收溶剂，制成553mg干浸膏。

[0052] 实施例14

[0053] 按照实施例1-8制备出的天竺桂样品液，精密量取30mL，上100g XAD树脂柱，预吸附1小时，用去离子水10000ml洗脱，弃去水洗脱液，然后用2000ml 30％的乙醇洗脱，控制流速为2mL/min左右。将2000ml的乙醇洗脱液回收溶剂，制成576mg干浸膏。以下是实验例，用以说明权利要求中各优选参数的选择。

[0054] 实验例1比较不同型号的多种树脂对天竺桂样品液的吸附能力差别[0055] 选用D101，XAD，D-1300，D-1400，DM-130，LSA-20等多种树脂，观察树脂的吸附能力。精密吸取天竺桂样品液10mL上柱，(1.5cm×11cm，相当于5g干树脂)，预吸附1h，过柱流出液重吸附1次，先用水洗20倍柱体积，弃去水洗脱液，用70％的乙醇洗脱，控制流速在2mL/min左右。洗脱至无FeCl3检测阳性反应，收集醇洗脱液，回收溶剂，干燥称重。计算醇洗脱量，作为树脂吸附量，结果见表1。

[0056] 表1不同大孔吸附树脂对天竺桂样品液的吸附量

[0057]树脂型号 树脂量(g) 吸附量/mg
D101 5 98.2
XAD 5 117.7
D-1300 5 88.2
D-1400 5 96.3
DM-130 5 140.5
LSA-20 5 67.4

[0058] 根据上述结果，DM-130树脂吸附能力最强，故选择DM-130树脂。

[0059] 实验例2比较不同洗脱浓度的乙醇进行分离

[0060] 精密量取天竺桂样品液30mL，上DM-130树脂柱(2.8cm×18cm，相当于20g干树脂)，预吸附1h，用去离子水洗20倍柱体积，弃去水洗脱液，然后依次用30％，60％，95％的乙醇梯度洗脱，控制流速为2mL/min左右。每个浓度洗脱6个柱体积。合并每个浓度下的样品液，回收溶剂，制成干浸膏。

[0061] 实验例3不同洗脱部位天竺桂降血糖作用的比较

[0062] 药理实验中，我们选用Wistar大鼠，测试正常血糖值。然后给予30mg/kg STZ诱导造模，2周后测试血糖值，选择高血糖大鼠随机分组，每组10只。高血糖模型对照组(10mL/kg蒸馏水)、天竺桂总提取物和30％，60％，95％的乙醇洗脱部位(100mg/kg)，阳性对照组格列美脲glimepiride(5mg/kg)。每天各组大鼠按设计剂量灌胃给药(或蒸馏水)1次，给药前禁食(不禁水)12h。连续10天后大鼠眼眶取血，离心分离血清，按试剂盒的说明测定血糖值。从表1的测试结果可以看出，在相同剂量的各样品中，天竺桂30％乙醇洗脱部位对STZ诱导的糖尿病大鼠有明显的降糖作用，其他部位无明显降血糖作用。

[0063] 表1不同洗脱部位天竺桂降血糖作用

[0064]

[0065] **P＜0.01与治疗前相比

[0066] 我们进一步对30％乙醇洗脱部位降血糖作用进行量-效关系研究，如表2所示，30％乙醇洗脱部位降血糖作用具有剂量依赖性。

[0067] 表230％乙醇洗脱部位对STZ所致糖尿病大鼠血糖值的影响(X±S)[0068]

[0069] **P＜0.01与治疗前相比

[0070] 在糖耐量试验中，预先给予大鼠天竺桂30％乙醇洗脱部位，大鼠口服葡萄糖后血糖明显降低，并呈明显的量-效关系(图1)。我们还对天竺桂30％乙醇洗脱部位的降血糖作用机制进行了初步探讨，发现它对糖尿病大鼠血清中胰岛素水平有明显的升高作用，并有一定的量-效关系(表3)，初步明确天竺桂30％乙醇洗脱部位具有胰岛素增敏作用。

[0071] 表3天竺桂30％乙醇洗脱部位对糖尿病大鼠血清胰岛素水平的影响(X±S)[0072]

[0073] **P＜0.01与治疗前比较

[0074] 实验例4天竺桂活性部分的成分分析

[0075] 将显示降糖活性的30％乙醇洗脱部位，应用LC-MS进行分析。如HPLC指纹图谱(图2所示)，P1-P4为图2中的主要成分，从这些化合物的阳离子和阴离子模式高效液相-电喷雾质谱图(图2A和图2B)看出，天竺桂的30％乙醇洗脱部位富含多酚成分，主要为以分子量为578的二聚体多酚化合物P1，分子量为866的三聚体多酚化合物P2、P3和分子量为1154的四聚体多酚化合物P4为主。