拮抗TSH受体的四氢喹啉化合物

摘要

本发明涉及化合物、药物组合物和试剂盒在治疗或预防对TSH受体介导的途径有应答的哺乳动物的疾病中的应用，所述疾病包括，例如甲状腺功能亢进，格雷夫斯病，格雷夫斯眼病，与格雷夫斯病相关的胫骨前皮肤病，结节性甲状腺肿和甲状腺癌等疾病，该应用包括对所述哺乳动物给予有效量的式(I)的四氢喹啉化合物或其药学可接受的盐。

权利要求

1.通式I的化合物或其药学可接受的盐在制备用于治疗或预防对TSH受体介导的途径有应答的疾病中的应用，式I

其中

1

R 是H或甲基；

X是键，O，NH或N((1-4C)烷基)；

2 5 9

R 是(1-4C)烷基，R(1-4C)烷基或R(2-4C)烷基，

2 8

如果X是NH，则R 是R(1-2C)烷氧羰基；或，2

如果X是键，则R 是H，卤素或(2-5C)杂芳基或苯基，后两种基团任选被一个或多个选自(1-3C)烷基，(1-3C)烷氧基或卤素的取代基取代；

Y是键，O或NH，而

3

如果Y是键，则R 是苯基，其任选被一个或多个选自卤素，羟基，甲氧基，苯氧基，苯基，(1-4C)烷基，硝基，氨基或(二)[(1-4C)烷基]氨基的取代基取代，或

3 6 6 7

R 是R(1-6C)烷基，R(3-6C)环烷基，R 氧基(1-6C)烷基，或2-吡啶基或3

R 是5-元杂芳基，其任选被一个或多个选自(1-3C)烷氧基，(1-3C)烷基或卤素的取代基取代；

3 6 7

如果Y是O，则R 是R(1-6C)烷基，R 氧基(2-6C)烷基或(3-7C)环烷基；且

3 6 7

如果Y是NH，则R 是R(1-6C)烷基，R 氧基(2-6C)烷基；

4

R 是H，(二)[(1-3C)烷基]氨基或(1-3C)烷氧基；

5

R 是N或吡啶基；

6

R 是H，或(3-5C)环烷基，(2-5C)杂芳基或苯基，后三种基团任选被一个或多个选自卤素，(1-4C)烷氧基或(1-4C)烷基的取代基取代，后两种基团任选被一个或多个卤素取代；

7

R 是(2-5C)杂芳基或苯基，它们任选被一个或多个选自卤素，(1-4C)烷氧基或(1-4C)烷基的取代基取代；

8

R 是H或(2-5C)杂芳基或苯基，后两种基团任选被一个或多个选自(1-3C)烷基，(1-3C)烷氧基或卤素的取代基取代；且9

R 是(二)[(1-4C)烷基]氨基或(2-6C)杂环烷基。

2.权利要求1的应用，其中式I上的X是键或O。

2

3.权利要求2的应用，其中X是键，且式I上的R 是H。

2 5

4.权利要求1和2的应用，其中式I上的R 是R(1-4C)烷基，且X是O。

4

5.权利要求1-4的应用，其中式I上的R 是H或(二)[(1-3C)烷基]氨基。

6.权利要求1-5的应用，其中式I的化合物具有(+)旋光性。

7.如权利要求1-5中所述的式I的化合物，该化合物具有(+)旋光性。

8.一种化合物，选自

己酸(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺，

1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺，N-(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-5-溴-2-甲氨基-苯甲酰胺，吡啶-2-羧酸(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺，N-(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3，4-二甲基-苯甲酰胺，(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸2-苯氧基-乙酯，(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸丁酯，

1-(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-环戊基-脲，己酸[1-乙酰基-4-(4-溴-苯基)-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基]-酰胺，N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-2-苯氧基-乙酰胺，N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(3-氯-苯基)-丙酰胺，N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-噻吩-2-基-丙酰胺，

1-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(4-氯-苄基)-脲，己酸{1-乙酰基-4-[4-(3-氟-吡啶-4-基)-苯基]-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基}-酰胺，[4-(1-乙酰基-6-己酰氨基-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-4-基)-苯基]-氨基甲酸3-氯-苄酯，[4-(1-乙酰基-6-己酰氨基-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-4-基)-苯基]-氨基甲酸甲酯，环戊烷羧酸(1-乙酰基-7-二甲氨基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺，N-(1- 乙 酰 基 -7- 二 甲 氨 基 -4- 甲 基 -4- 苯 基 -1，2，3，4- 四 氢 - 喹啉-6-基)-3-(4-氯-苯基)-丙酰胺，

1-(1-乙酰基-7-二甲氨基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(2-甲氧基-苄基)-脲，(1-乙酰基-7-二甲氨基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸噻吩-2-基甲酯联苯基-4-羧酸(1-乙酰基-7-甲氧基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺，呋喃-2-羧酸[1-乙酰基-7-甲氧基-4-(4-甲氧基-苯基)-2，2，4-三甲基-1，2，3，

4-四氢-喹啉-6-基]-酰胺，

联苯-4-羧酸[1-乙酰基-4-(4-氰基甲氧基-苯基)-2，2，4-三甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基]-酰胺，联苯-4-羧酸{1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-[4-(吡啶-4-基甲氧基)-苯基]-1，2，

3，4-四氢-喹啉-6-基}-酰胺，

[4-(1-乙酰基-6-己酰氨基-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-4-基)-苯基]-氨基甲酸呋喃-2-基甲酯，N-(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(3-氯-苯基)-丙酰胺，(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸3-甲基-丁酯，(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸1-甲基-环丙基甲酯，(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸环丁基甲酯，(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸(R)-1，2-二甲基-丙酯，(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸(1R，2S，4S)-双环[2.2.1]庚-2-基酯，(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4，4a，8a-六氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸环戊酯，N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酰胺，(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸3-氯-4-氟-苄酯，

5-溴-噻吩-2-羧酸(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺，(+)-1-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(4-氯-苄基)-脲，(+)-N-(1- 乙 酰 基 -2，2，4- 三 甲 基 -4- 苯 基 -1，2，3，4- 四 氢 - 喹啉-6-基)-3-(3-氯-苯基)-丙酰胺，(+)-N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酰胺，(+)-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4，4a，8a-六氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸环戊酯，或(+)-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸

3-氯-4-氟-苄酯。

9.一种药物组合物，包含权利要求1-8中定义的化合物和药学可接受的助剂，该药物组合物用于治疗或预防对TSH，TSI或TSH受体的组成型活性的作用有应答的疾病。

10.权利要求1-6的应用，其中所述疾病、病症或障碍选自甲状腺功能亢进，格雷夫斯病，格雷夫斯眼病，与格雷夫斯病相关的胫骨前皮肤病，结节性甲状腺肿和甲状腺癌。

11.用于治疗或预防对TSH受体介导的途径有应答的疾病的试剂盒，该试剂盒包括：A)包含如权利要求1-8中定义的式I的化合物或其药学可接受的盐的药物组合物；和B)描述使用该药物组合物治疗或预防对TSH受体介导的途径有应答的疾病的方法的说明书。

说明书

拮抗TSH受体的四氢喹啉化合物

技术领域

[0001] 本发明涉及具有TSH受体拮抗剂活性的化合物，特别是四氢喹啉衍生物及其在治疗和预防TSH受体应答疾病中的应用和药物组合物和包含它的试剂盒。

背景技术

[0002] 促甲状腺素或甲状腺刺激激素(TSH)在调节代谢和发育中起重要作用。TSH在促甲状腺素释放激素的影响下从垂体前叶释放。它靶向甲状腺以刺激甲状腺激素类三碘甲状腺氨酸和甲状腺素的释放和甲状腺生长。TSH的作用由特异性G蛋白偶合受体介导，该受体优先与导致腺苷酸环化酶活化的Gs蛋白偶合。这种信号转导途径主要负责产生甲状腺激素类和甲状腺细胞增殖(Krohn等(2005)Endocrine Rev.26，504-524)。

[0003] 甲状腺上的TSH受体还直接涉及格雷夫斯病的发病机制和病理生理学。格雷夫斯病的特征在于甲状腺超刺激作为刺激循环TSH受体的持续活化该受体的免疫球蛋白类(TSI)的结果(Gerding等(2000)Clin.Endocrinol.52，267-271)。TSI还直接参与格雷夫斯眼病和与格雷夫斯病相关的胫骨前皮肤病的发病机制和病理生理学，因为TSH受体分别存在于这些患者眼眶组织和受侵害的皮肤区域中(Gerding等(2000)Clin.Endocrinol.52，267-271；Daumerie等(2002)Eur.J.Endocrinol.146，35-38)。此外，TSH受体在毒性和非毒性结节性甲状腺肿中起关键作用。在(毒性)结节性甲状腺肿中，甲状腺含有自主功能性甲状腺结节，它们分泌过量的甲状腺激素作为TSH受体突变的结果，这些TSH受体的突变赋予它们具有显著增加的cAMP水平的组成型活性(Krohn等(2005)Endocrine Rev.26，
504-524)。

[0004] 阻断TSH受体或抑制由TSH-或TSI-介导的受体刺激后诱导的、或作为TSH受体的组成型活性突变结果的信号传导会抑制甲状腺激素分泌和甲状腺细胞增殖。低分子量TSH受体拮抗剂由此可以用于治疗或预防甲状腺功能亢进，格雷夫斯病，结节性甲状腺肿，格雷夫斯眼病和格雷夫斯-相关胫骨前皮肤病。此外，低分子量TSH受体拮抗剂可以用于预防甲状腺癌的残留物或转移灶的生长刺激，认为它是由TSH受体的(过度)刺激促进的。在更一般的意义上，TSH受体拮抗剂可以用于预防或治疗所有那些其中TSH受体(过度)活化起作用的疾病。

[0005] 四氢喹啉衍生物化合物描述在WO2003/004028，WO2004/056779和WO2004/056780中。这些化合物可以用于调节生育。

[0006] 文献中报告的FSH受体调节剂对FSH受体具有高度特异性。Yanofsky等(2006，J.Biol.Chem.281，13226-13233)和Pelletier等(2005，Bioorg.& Med.Chem.13，
5986-5995)证实低纳摩尔有效的具有噻唑烷酮骨架的LMW FSH受体激动剂既不是TSH受体拮抗剂，也不是TSH受体激动剂。另外，(双)磺酸，(双)苯甲酰胺类化合物已经被鉴定为FSH受体拮抗剂，但它们显示没有或几乎没有抑制TSH受体活性的能力(Wrobel等，2002，Biorg.Med.Chem.10，639-656)。另一系列的低微摩尔FSH受体拮抗剂(重氮基萘磺酸衍生物)未表现出对TSH受体的亲和力(Arey等，2002，Endocrinology 143，3822-3829)。

[0007] 此外，对FSH受体和TSH受体的诱变研究已经证实TSH受体活化不同于FSH受体活化，表明FSH受体拮抗剂也不一定抑制TSH受体(Schulz等，1999，Mol Endocrinol13，181-190)。这种活性差别归因于如下知识：与FSH受体具有极大差异的TSH受体也通过Gq蛋白，即甲状腺激素合成所需的途径有效偶合磷脂酶C(Kero等，2007，J.Clin.Invest.117，2399-2407)，并且还被格雷夫斯病中的TSI活化。

[0008] 本发明描述了抑制TSH受体活化的四氢喹啉化合物。本发明的化合物可以用作TSH受体的(部分)拮抗剂。

发明内容

[0009] 目前已经发现下列类型的式I的四氢喹啉化合物或其药学可接受的盐具有TSH受体拮抗活性：

[0010]

[0011] 其中

[0012] R1是H或甲基；

[0013] X是键，O，NH或N((1-4C)烷基)；

[0014] R2是(1-4C)烷基，R5(1-4C)烷基或R9(2-4C)烷基，

[0015] 如果X是NH，则R2是R8(1-2C)烷氧羰基；或，

[0016] 如果X是键，则R2是H，卤素或(2-5C)杂芳基或苯基，后两种基团任选被一个或多个选自(1-3C)烷基，(1-3C)烷氧基或卤素的取代基取代；

[0017] Y是键，O或NH，而

[0018] 如果Y是键，则R3是苯基，其任选被一个或多个选自卤素，羟基，甲氧基，苯氧基，苯基，(1-4C)烷基，硝基，氨基或(二)[(1-4C)烷基]氨基的取代基取代，或

[0019] R3是R6(1-6C)烷基，R6(3-6C)环烷基，R7氧基(1-6C)烷基，或2-吡啶基或[0020] R3是5-元杂芳基，其任选被一个或多个选自(1-3C)烷氧基，(1-3C)烷基或卤素的取代基取代；

[0021] 如果Y是O，则R3是R6(1-6C)烷基，R7氧基(2-6C)烷基或(3-7C)环烷基；且[0022] 如果Y是NH，则R3是R6(1-6C)烷基，R7氧基(2-6C)烷基；

[0023] R4是H，(二)[(1-3C)烷基]氨基或(1-3C)烷氧基；

[0024] R5是CN或吡啶基；

[0025] R6是H，或(3-5C)环烷基，(2-5C)杂芳基或苯基，后三种基团任选被一个或多个选自卤素，(1-4C)烷氧基或(1-4C)烷基的取代基取代，后两种基团任选被一个或多个卤素取代；

[0026] R7是(2-5C)杂芳基或苯基，它们任选被一个或多个选自卤素，(1-4C)烷氧基或(1-4C)烷基的取代基取代；

[0027] R8是H或(2-5C)杂芳基或苯基，它们任选被一个或多个选自(1-3C)烷基，(1-3C)烷氧基或卤素的取代基取代；且

[0028] R9是(二)[(1-4C)烷基]氨基或(2-6C)杂环烷基。

[0029] 在上述式1中，两个R1基团始终相同且是H或甲基。

[0030] 特别地，本发明的化合物表现出拮抗TSH受体的活性。

[0031] 因此，本发明的TSH受体拮抗化合物可以用于治疗具有对TSH受体介导的途径有应答的疾病的哺乳动物，包括人。它们还可以用于预防这样的TSH受体介导的障碍。本发明的TSH受体拮抗化合物还以等同的效力完全抑制TSH受体-介导的磷脂酶C活性。

具体实施方式

[0032] 下列术语指定具有如下所示用于本说明书和权利要求中的所示含义。

[0033] 定义中使用的术语(1-3C)烷基意旨具有1-3个碳原子的支链或非支链烷基，是甲基、乙基、丙基或异丙基。

[0034] 定义中使用的术语(1-4C)烷基意旨具有1-4个碳原子的支链或非支链烷基，是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。

[0035] 定义中使用的术语(2-4C)烷基意旨具有2-4个碳原子的支链或非支链烷基，是乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。

[0036] 定义中使用的术语(1-6C)烷基意旨具有1-6个碳原子的支链或非支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、正戊基和正己基。优选(1-5C)烷基。

[0037] 定义中使用的术语(2-6C)烷基意旨具有2-6个碳原子的支链或非支链烷基，例如乙基、丙基、异丙基、丁基、戊基或己基。

[0038] 术语(3-6C)环烷基意旨具有3-6个碳原子的环烷基，是环丙基，环丁基，环戊基和环己基。

[0039] 术语(3-5C)环烷基意旨具有3-5个碳原子的环烷基，是环丙基，环丁基和环戊基。

[0040] 术语(3-7C)环烷基意旨具有3-7个碳原子的单或双环烷基，例如环丙基，环丁基，环戊基，环己基和降冰片基

[0041] 术语(2-5C)杂芳基意旨具有2-5个碳原子和至少包括一个选自N，O和/或S的杂原子的芳族基团。如果适宜，则可以包括一个以上杂原子，包括不同的杂原子。优选的杂芳基是噻吩基、呋喃基、吡啶基、异噁唑基、嘧啶基、吡咯基。如果适宜，则(2-5C)杂芳基可以通过碳原子或杂原子连接。

[0042] 术语5-元杂芳基意旨具有2-4个碳原子和至少包括一个选自N，O和/或S的杂原子的芳族基团。如果适宜，则可以包括一个以上杂原子，包括不同的杂原子。优选的杂芳基是噻吩基、呋喃基、咪唑基、异噁唑基、吡唑基、吡咯基、噁二唑基、噁唑基或噻唑基。如果适宜，则5-元杂芳基可以通过碳原子或杂原子连接。

[0043] 术语(1-3C)烷氧基意旨具有1-3个碳原子的烷氧基，烷基部分具有与上述定义相同的含义。

[0044] 术语(1-4C)烷氧基意旨具有1-4个碳原子的烷氧基，烷基部分具有与上述定义相同的含义。优选(1-2C)烷氧基。

[0045] 术语(1-2)烷氧羰基意旨带有具有1-2个碳原子的烷氧基的羰基。

[0046] 术语(2-6C)杂环烷基意旨具有2-6个碳原子和至少包括一个选自N，O和/或S的杂原子的杂环烷基，如果适宜，则可以通过杂原子连接，或C原子连接。如果适宜，则可以包括一个以上杂原子，包括不同的杂原子。优选的杂原子数是1-2。C-原子的优选数是3-6。优选的基团是吗啉基、高吗啉基、哌啶基和高哌啶基。最优选吗啉基。

[0047] 术语氧基(1-6C)烷基意旨具有1-6个碳原子的氧基烷基，烷基部分具有与上述定义相同的含义。

[0048] 术语氧基(2-6C)烷基意旨具有2-6个碳原子的氧基烷基，烷基部分具有与上述定义相同的含义。

[0049] 本文所用的术语(二)[(1-4C)烷基]氨基意旨被烷基单取代或二取代的氨基，所述烷基各自包含1-4个碳原子并且具有与上述定义相同的含义。

[0050] 本文所用的术语(二)[(1-3C)]烷基氨基意旨被烷基单取代或二取代的氨基，所述烷基各自包含1-3个碳原子并且具有与上述定义相同的含义。

[0051] 术语卤素意旨氟、氯、溴或碘。

[0052] 术语“药学可接受的盐”表示在合理医学判断范围内适用于接触人和/或动物组织、而没有过度毒性、刺激、过敏反应等，具有相当的合理的收益/风险比的盐。药学可接受的盐是本领域众所周知的。

[0053] 本发明的化合物具有至少一个手性碳原子且由此可以作为纯的对映体，或对映体混合物或非对映体混合物得到。

[0054] 本发明的混合物可以形成水合物或溶剂合物。本领域技术人员已知带电荷的化合物在冻干时与水形成水化种类，或在溶液中浓缩时与适当的有机溶剂形成溶剂化种类。本发明的化合物包括所列化合物的水合物或溶剂合物。

[0055] 本发明的另一个方面涉及式I的化合物和化合物的应用，其中Y是键，O或NH，而[0056] 如果Y是键，则R3是苯基，其任选被卤素，羟基，甲氧基，苯氧基，苯基，(1-4C)烷基，硝基，氨基或(二)[(1-4C)烷基]氨基单/二取代，或

[0057] R3是R6(1-6C)烷基，R6(3-6C)环烷基，R7氧基(1-6C)烷基，或2-吡啶基，或[0058] R3是5-元杂芳基，其任选被(1-3C)烷氧基，(1-3C)烷基或卤素取代；

[0059] 如果Y是O，则R3是R6(1-6C)烷基或R7氧基(2-6C)烷基；且

[0060] 如果Y是NH，则R3是R6(2-6C)烷基，R7氧基(2-6C)烷基；

[0061] 其中Y是键，O或NH，而如果Y是O，则R3是R6(1-6C)烷基或R7氧基(2-6C)烷基，3 6 7
且其中如果Y是NH，则R 是R(2-6C)烷基或R 氧基(2-6C)烷基。

[0062] 本发明的另一个方面涉及式I的化合物和化合物的应用，其中X是键或O。

[0063] 本发明的另一个方面涉及式I的化合物和化合物的应用，其中R2是H和X是键。

[0064] 本发明的另一个方面涉及式I的化合物和化合物的应用，其中R2是R5(1-4C)烷基、X＝O。

[0065] 本发明还提供了式I的化合物和化合物的应用，其中R4是H，或(二)[(1-3C)烷基]氨基。

[0066] 本发明还提供了式I的化合物和化合物的应用，其中X是键，O或NH。

[0067] 本发明还提供了式I的化合物和化合物的应用，所述化合物是表现出(+)旋光性的对映体。

[0068] 本发明的另一个方面涉及所述化合物和化合物的应用，其中将如本文所定义的基1
团R-R9和X和Y的所有具体定义合并在式I的化合物中。

[0069] 将制备本发明化合物的适当方法概括如下。

[0070] 如果R1＝Me，则可以从得到充分记录的Skraup反应开始制备式I的化合物。对N-叔-丁氧羰基(N-Boc)保护的1，4-苯二胺1进行该反应，得到1，2-二氢喹啉衍生物2。上述反应一般在升温下，在丙酮或异亚丙基丙酮中，在碘或质子酸，例如盐酸，对-甲苯磺酸或碘化氢水溶液存在下进行。或者，可以在MgSO4，4-叔-丁基儿茶酚和碘存在下使化合物1与丙酮反应制备化合物2(L.G.Hamann，R.I.Higuchi，L.Zhi，J.P.Edwards和X.-N.Wang，J.(1998)Med.Chem.41，623-639)。在另一种方法中，该反应在丙酮中，使用镧系元素三氟甲磺酸盐(例如三氟甲磺酸钪)作为催化剂进行。在这种情况中，该反应在室温或升温下使用常规加热或微波照射进行(M.E.Theoclitou和L.A.Robinson(2002)Tetrahedron Lett.43：3907-3910)。

[0071] 然后，可以使用标准条件进行化合物2的1-N-乙酰化。可以在溶剂，例如四氢呋喃中，使用乙酰氯，在碱，例如吡啶存在下酰化化合物2，得到1-N-乙酰基-4-甲基-1，2-二氢喹啉3。

[0072] 在本领域技术人员众所周知的条件下裂解Boc保护基，得到6-氨基-1，2-二氢喹啉4。该反应一般在二氯甲烷中，在三氟乙酸存在下进行。

[0073] 在二氢喹啉骨架的4位上引入必要的取代的苯基可以通过使用化合物4的苯、茴香醚或溴苯的Friedel-Crafts烷基化进行，得到式5的化合物。该反应在环境温度或升温下，在苯、茴香醚或溴苯中，在路易斯酸(例如AlCl3)催化下进行。

[0074] 然后，可以使用标准条件对式5的化合物进行6-N-官能化，得到式6的化合物，其中R3如上述定义。例如，可以使式5的化合物在溶剂，例如二氯甲烷、四氢呋喃或甲苯中与酰基卤(R3-C(O)-hal，其中hal＝Cl，Br或I)在碱，例如N，N-二异丙基乙胺或吡啶存在下反应。或者，可以通过与适当的羧酸(R3-CO2H)在偶合剂，例如O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)或O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)和叔碱，例如N，N-二异丙基乙胺的存在下，在溶剂，例如N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷中，在环境温度或升温下反应进行酰化。此外，可以通过异氰酸酯7将式5的化合物转化成氨基甲酸酯类化合物6b或脲类化合物6c。在典型的反应中，在溶剂，例如乙酸乙酯中使用氯甲酸三氯甲酯在活性炭存在下，在升温下将化合物5转化成异氰酸酯7。在溶剂，例如四氢呋喃或二氯甲烷中，在碱，例如三乙胺或N，N-二异丙基乙胺存在下，在环境温度或升温下，使用适当的醇类化合物R3-OH将异氰酸酯7转化成氨基甲酸酯类化合物6b(其中R3如上述定义)、或使用适当的胺类化合物R3-NH2，将异氰酸酯7转化成脲类化合物6c(其中R3如上述定义)。或者，在溶剂，例如四氢呋喃，二氯甲烷或N，N-二甲基甲酰胺中，使用适当的氯甲酸酯类化合物R3-O-C(O)-Cl或异氰酸酯类化合物R3-N＝C＝O，在环境温度或升温下将式5的化合物分别转化成氨基甲酸酯类化合物6b或脲类化合物6c，其中R3是如上述定义。

[0075]

[0076] 如果R1＝H，则可以从维蒂希反应开始制备式I的化合物。使用(二乙氧基-磷酰基)-乙酸乙酯进行这种与式8的酮的反应，得到式9的α，β-不饱和酯类化合物，可以在室温在乙醇中用氢氧化钠(2N)将其转化成式10的羧酸类化合物。

[0077] 然后使用标准条件用式10的酸类化合物酰化苯胺得到式11的化合物。可以在偶合剂，例如O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)或O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)和叔碱，例如N，N-二异丙基乙胺存在下，在溶剂，例如N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷中，在环境温度或升温下反应进行酰化。

[0078] 可以使用浓H2SO4在室温下对式11的化合物进行闭环，得到式12的化合物，然后使用BH3-S(CH3)2在甲苯中，在升温下进行还原，得到式13的四氢喹啉类化合物。

[0079] 可以使用标准条件对式13的化合物进行乙酰化。在典型的实验中，使式13的化合物在溶剂，例如二氯甲烷或四氢呋喃中与乙酰氯在碱，例如三乙胺或吡啶存在下反应，得到式14的化合物。

[0080] 可以通过使用硝酸和乙酐在二氯甲烷中的混合物作为溶剂，在室温下将硝基引入四氢喹啉类化合物14的6位。可以通过使用锌在作为溶剂的乙酸和四氢呋喃的存在下，在0℃下还原，将得到的式15的化合物转化成苯胺衍生物16。

[0081]

[0082] 然后如对酰化式5的化合物所述，可以使用标准条件，对式16的化合物进行6-N-酰化，得到式17a的化合物，其中R3如上述定义。类似地，可以如对氨基甲酸酯类化合物6b和脲类化合物6c所述，以式16的化合物为原料，制备氨基甲酸酯类化合物17b(其中R3如上述定义)和脲类化合物17c(其中R3如上述定义)。

[0083] 此外，如分别对式30和33的化合物所述，以式17的化合物为原料制备式20和23的化合物。

[0084] 可以通过与硼酸或硼酸酯类化合物的Suzuki反应将式17和6的化合物(如果R＝Br)转化成式24的化合物。在典型的实验中，可以使式17或6的溴化物与硼酸或硼酸酯类化合物在溶剂，例如二氯甲烷或二噁烷中使用作为碱的氟化铯或磷酸钾和靶催化剂，例如四(三苯膦)钯和二氯二(三苯膦)钯，在三苯膦和三苯胂存在下，在升温下反应。此外，可以通过Buchwald化学反应将式17和6的化合物(如果R＝Br)转化成式25的苯胺类化合物。可以使式17或6的化合物在二甲氧基乙烷中与二苯甲酮亚胺在叔丁醇钠作为碱，三(二亚苄基丙酮)二钯作为催化剂和2，2’-双(二苯基膦基)-1，1’-联萘存在下，在升温下反应，然后使用在四氢呋喃中的盐酸水溶液在环境温度下水解，得到式25的苯胺衍生物。

[0085] 可以使用适当的烷基卤(R2-hal，其中hal＝Cl，Br或I)，在溶剂，例如乙醇，四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺中，使用碱，例如三乙胺、碳酸钾、碳酸铯或碳酸氢钠，在碘化钠或碘化钾作为催化剂存在下，使式25的化合物烷基化，得到式27a的化合物，其中R2如上述定义。此外，可以通过式26的异氰酸酯类化合物将式25的化合物转化成式27b的氨基甲酸酯类化合物。在典型的反应中，可以在溶剂，例如乙酸乙酯中使用氯甲酸三氯甲酯在活性炭存在下，在升温下将式25的化合物转化成式26的异氰酸酯类化合物。可以在溶剂，例如四氢呋喃或二氯甲烷中使用适当的醇，在碱，例如三乙胺或N，N-二异丙基乙胺存在下将式26的异氰酸酯类化合物转化成式27b的氨基甲酸酯类化合物，其中R2如上述定义。或者，可以在溶剂，例如四氢呋喃，二氯甲烷或N，N-二甲基甲酰胺中，使用适当的氯甲酸酯，在环境温度或升温下，将式25的化合物转化成式27b的氨基甲酸酯类化合物，其中R2如上述定义。

[0086] 可以在环境温度或升温下通过使用(发烟)硝酸和冰醋酸在二氯甲烷或浓硫酸中的混合物进行硝化，在式27的化合物上引入硝基，得到式28的化合物。可以在环境温度或升温下通过使用锌在四氢呋喃中，在冰醋酸存在下还原式28的化合物，得到苯胺衍生物29。可以通过使用脂族醛类化合物在甲醇中，使用氰基硼氢化钠在冰醋酸存在下进行还原烷基化，将式29的化合物上的伯胺官能团转化成式30的烷基化苯胺类。

[0087] 此外，可以通过使用本领域技术人员众所周知的方法经式31的重氮盐将式29的化合物转化成式32的醇类化合物。在典型的实验中，使式29的化合物在溶剂，例如水中与NaNO2和H2SO4反应，然后在0℃或环境温度下添加脲，Cu(NO3)2和Cu2O，得到式32的醇类化合物。

[0088] 可以使用烷基卤，在溶剂，例如乙醇、四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺中，用碱，例如三乙胺、碳酸钾、碳酸铯或碳酸氢钠，在碘化钠或碘化钾作为催化剂存在下，对式32的化合物进行烷基化，得到式33的化合物。

[0089]

[0090] 得到式39的化合物的方法从在0℃下用氯甲酸9-芴基甲酯(Fmoc-Cl)在二氯甲烷中，在三乙胺存在下转化式5或16的化合物开始，得到式34的化合物。

[0091] 然后通过在环境温度下使用发烟硝酸和冰醋酸在二氯甲烷中的混合物硝化来引入硝基，得到式35的化合物。可以在环境温度下通过使用锌在四氢呋喃中，在冰醋酸存在下还原式35的化合物得到苯胺衍生物36。可以通过使用脂族醛类化合物在甲醇中，使用氰基硼氢化钠在冰醋酸存在下，进行还原烷基化，将式36的化合物上的伯胺官能团转化成式37的烷基化苯胺类。可以用哌啶在二氯甲烷中除去Fmoc-基团，得到式38的苯胺衍生物。

[0092] 然后如对式5的化合物所述，可以使用标准条件对式38的化合物进行6-N-酰化，得到式39a的化合物，其中R3如上述定义。类似地，可以如对氨基甲酸酯类化合物6b和脲类化合物6c所述，以式38的化合物为起始物，制备氨基甲酸酯类化合物39b(其中R3如上述定义)和脲类化合物39c(其中R3如上述定义)。

[0093]

[0094] 或者，可以以式35的化合物为原料制备式39的化合物。可以用哌啶在二氯甲烷中除去Fmoc-基团，得到式40的苯胺衍生物。

[0095] 然后如对制备式6的化合物所述，使用标准条件对式40的化合物进行6-N-官能化，得到式41的化合物，其中R3如上述定义。可以在环境温度下通过使用锌在四氢呋喃中，在冰醋酸存在下还原式41的化合物，得到苯胺衍生物42。可以通过使用醛类化合物在甲醇中使用氰基硼氢化钠，在冰醋酸存在下进行还原烷基化，将式42的化合物上的伯胺官能团转化成式39的烷基化苯胺类。

[0096]

[0097] 得到式51和52的化合物的方法从在0℃下使化合物43与氯甲酸9-芴基甲酯(Fmoc-Cl)在四氢呋喃中，在吡啶存在下反应开始，得到式44的化合物。可以在环境温度下通过使用锌在四氢呋喃中，在冰醋酸存在下还原式44的化合物，得到苯胺衍生物45。可以通过上述Skraup反应制备二氢喹啉衍生物46，然后使用在吡啶/二氯甲烷(1/1)中的乙酰氯作为溶剂，在N，N-二甲基苯胺存在下进行N-酰化，得到化合物47。可以使用哌啶在二氯甲烷中除去Fmoc基团，得到苯胺衍生物48。可以使用如制备式6的化合物所述的条件将6-氨基修饰成酰胺49a、氨基甲酸酯49b和脲49c。

[0098] 可以通过苯与式49的化合物的Friedel-Crafts烷基化，在二氢喹啉骨架的4位上引入苯基。该反应在环境温度或升温下在苯中，在路易斯酸(例如AlCl3)催化下进行。在这些条件下，发生去甲基化，得到式50的化合物。如果反应在茴香醚中进行，可得到式52的化合物。

[0099] 可以使用烷基卤在溶剂，例如乙腈、四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺中，在碱，例如碳酸钾、叔丁醇钾或氢化钠存在下对式50的醇类化合物进行烷基化，得到式51的化合物。

[0100]

[0101] 得到式54和57的化合物的方法从式6或17化合物的去甲基化开始，其中R＝OMe。如果R＝OMe，则去甲基化可以在溶剂，例如二氯甲烷中，在三溴化硼(BBr3)存在下，在环境温度或升温下进行，得到式53的醇类化合物。可以使用烷基卤(R2-hal)，在溶剂，例如乙醇、四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺中与碱，例如三乙胺、碳酸钾、碳酸铯或碳酸氢钠一起，在碘化钠或碘化钾作为催化剂存在下，对式53的化合物进行烷基化，得到式54的化合物。可以使用如对将式27的化合物转化成式30的化合物所述的条件在式54的化合物上引入硝基，得到式55的化合物，然后将硝基还原而得到式56的化合物，再进行氨基烷基化得到式57的化合物。

[0102]

[0103] 另外，制备本发明某些化合物的适当制备方法描述在WO2004/056779和WO2004/056780中。

[0104] 可以从药学可接受的盐形式的反应混合物中分离可以为游离碱形式的本发明的某些化合物。还可以通过使用有机或无机酸处理式I的游离碱得到药学可接受的盐，所述的有机或无机酸例如是氯化氢、溴化氢、碘化氢、硫酸、磷酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、马来酸、丙二酸、甲磺酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸和抗坏血酸。

[0105] 得到纯对映体的方法是本领域众所周知的，例如使获自旋光酸和外消旋混合物的盐结晶，或使用手性柱的色谱法。就非对映体而言，可以使用正相或反相柱。例如用偏光计易于测定旋光度。

[0106] 本发明的化合物抑制TSH受体。本领域技术人员公认期望的IC50值依赖于测试的化合物。例如，一般将具有低于1E-5M的IC50值的化合物视为药物筛选的候选者。一般而言IC50值优选低于1E-7M。然而，具有较大IC50值，但对特定受体更具选择性的化合物甚至可以是更好的候选者。本发明的化合物还可以具有FSH受体活性，但它们不具有超过TSH受体的FSH受体选择性。一般而言，可以认为本发明的化合物具有高TSH受体活性和至少对FSH和TSH受体是等效的。

[0107] 测定受体结合的方法以及测定促甲状腺素或TSH受体的生物活性的体外和体内测定法是众所周知的。在体外测定中，将表达的TSH受体与测试化合物一起孵育并且测定官能反应的受体结合或刺激/抑制。可以使用离体人或动物甲状腺细胞/甲状腺切片或甲状腺细胞系(Fuhrer等(2003)Endocrinology 144，4018-4030)。或者，可以在适当宿主细胞，例如中国仓鼠卵巢细胞中异源性表达编码TSH受体的cDNA，但其它细胞系，优选哺乳动物来源的细胞系也是合适的(Fuhrer等(2003)Endocrinology 144，4018-4030)。表达重组TSHR的细胞的构建方法是本领域众所周知的。

[0108] 用于位点定向DNA诱变、DNA连接、PCR和适当表达系统构建的技术是本领域众所周知的。可以使用标准固相技术以合成方式构建编码所需受体的部分或全部DNA，优选包括易于连接的限制位点。可以将用于所插入的编码序列的转录和翻译的适当控制元件与DNA编码序列连接。正如众所周知的，表达系统是可得到的，它们与各种宿主，包括细菌和真核宿主，例如酵母、昆虫细胞、鸟类、哺乳动物细胞等相容。

[0109] 将表达TSH受体的细胞与测试化合物一起孵育，以观察官能反应的结合、刺激或抑制。或者，可以将包含表达受体的分离细胞膜用于测定测试化合物的结合。为了测定结合，可以使用放射性标记或荧光标记的化合物。还可以进行竞争性结合测定。另一种生化测定法包括筛选TSH受体-介导的cAMP蓄积。这样的测定法包括将表达TSH受体的细胞与测试化合物一起孵育足够时间期限，并测定cAMP(通常在cAMP磷酸二酯酶抑制剂存在下进行以阻断cAMP降解)。cAMP的量可以减少或增加，这取决于结合受体时测试化合物的抑制或刺激效果。筛选TSH受体拮抗剂包括将表达TSH受体的细胞与在固定的、次最大有效的TSH浓度(即在没有化合物存在下诱导cAMP蓄积最大刺激的约80％的TSH浓度)存在下的浓度范围的测试化合物一起孵育。代替TSH，用来自格雷夫斯病患者的血清，或(部分)纯化的TSI来刺激TSH受体(Gerding等(2000)Clin.Endocrinol.52，267-271)。或者，可以异源表达组成型活性TSH受体，且测试化合物对活性受体的拮抗作用可以导致基础cAMP水平的增加下降(Fuhrer等(2003)Endocrinology 144，4018-4030)。从浓度-效应曲线中，可以测定各测试化合物的IC50值和TSH受体-诱导的cAMP蓄积的抑制百分比。

[0110] 除直接测定cAMP外，还可以使用细胞系，除用受体cDNA转染外，还使用编码报道基因的第二种cDNA转染，所述报道基因的表达依赖于cAMP胞内水平。这样的报道基因可以是cAMP-诱导型或可以以使它们与新cAMP效应元件连接的方式构建。一般而言，报道基因表达可以通过使cAMP改变水平的任何效应元件反应来控制。合适的报道基因是，例如编码荧火虫荧光素酶、β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶或β-内酰胺酶的基因。这样的反式激活测定原理是本领域众所周知的并且描述在，例如Evans等(1999)J.Clin.Endocrinol.Metab.84，374-377中。作为参比化合物，可以使用人(重组)TSH或牛TSH。

[0111] 本发明还涉及药物组合物，其包含具有式I的四氢喹啉衍生物或其药学可接受的盐与药学可接受助剂和任选其它治疗剂的混合物。所述助剂必须是“可接受的”，其含义是与组合物的其它成分相容并且对其接受者而言无害。

[0112] 组合物包括，例如适合于口服、眼用、舌下、皮下、静脉内、肌内、局部或直肠给药等的所有适于给药的单位剂型的组合物。

[0113] 就口服给药而言，可以将活性成分制成分散单位，例如片剂、胶囊、粉末、颗粒、溶液、混悬液等。

[0114] 就胃肠外给药而言，可以将本发明的药物组合物提供在单位剂量或多剂量容器中，例如预定量的注射液体，例如在密封小瓶和安瓿中，并且还可以将它们贮存在仅需要在使用前添加无菌液体载体，例如水的冷冻干燥(冻干)条件下。

[0115] 就眼用制剂而言，可以将活性成分制成施用于结膜或角膜或用于眼球后注射的溶液、混悬液、软膏剂或凝胶。

[0116] 由于与例如如标准参考书Gennaro，A.R.等，Remington：TheScience and Practice of Pharmacy(第20版，Lippincott Williams& Wilkins，2000，尤其是参见Part5：Pharmaceutical Manufacturing)中所述的药学可接受的助剂混合，所以可以将活性剂压制成固体单位剂型，例如丸剂、片剂或加工成胶囊或栓剂。借助于药学可接受的液体，可以将活性剂作为流体组合物，例如作为注射制剂，以溶液、混悬液、乳剂或喷雾剂，例如喷鼻剂的形式施用。

[0117] 为了制备固体单位剂型，可以使用常用添加剂，例如填充剂、着色剂、聚合物粘合剂等。一般而言，可以使用不干扰活性化合物功能的任意药学可接受的添加剂。可以作为固体组合物与本发明活性剂一起给予的合适的载体包括适量使用的乳糖、淀粉、纤维素衍生物等或其混合物。就胃肠外给药而言，可以使用含水混悬液、等渗盐水溶液和无菌可注射溶液，它们包含药学可接受的分散剂和/或湿润剂，例如丙二醇或丁二醇。

[0118] 本发明进一步包括如上文所述的药物组合物与适合于该组合物的包装材料的组合，所述包装材料包括用于说明如本文所述的组合物的应用的说明书。

[0119] 因此，本发明还提供了治疗对TSH受体介导的途径有应答的疾病的试剂盒。

[0120] 该试剂盒包含：A)包含式I的化合物或其药学可接受的盐的药物组合物；和B)描述使用该药物组合物治疗对TSH受体介导的途径有应答的疾病的方法的说明书。

[0121] 在另一个方面中，该试剂盒可以用于预防对TSH受体介导的途径有应答的疾病。

[0122] 本申请中使用的“试剂盒”包括用于包含所述药物组合物的容器，并且还可以包括分开的容器，例如分开的瓶或分开的箔袋。该容器可以是任意常规的形状或本领域公知的形式，由药学可接受的材料制成。

[0123] 本发明的四氢喹啉衍生物还可以以可植入药用装置的形式给予，它由活性物质芯组成，外面包有调节释放速率的膜。将这样的植入物经皮下或局部施用，且在相对长时间内，例如数周至数年，以近似恒定的速率释放活性成分。制备可植入的药用装置的方法为本领域公知的，例如如欧洲专利EP0,303,306(AKZO Nobel N.V.)中所述。

[0124] 活性成分或其药物组合物的确切给药剂量和给药方案必然依赖于所要实现的治疗效果，并且随具体化合物、给药途径和所施药的受试者个体的年龄和病情而改变。

[0125] 一般而言，胃肠外给药需要低于更依赖于吸收的给药方法的剂量。然而，用于人体的剂量优选包含0.0001-25mg/kg体重。可以将所需剂量制成一次剂量或多次亚剂量，在全天内的适当间隔给予。

[0126] 本发明的另一个方面涉及具有式I的四氢喹啉衍生物化合物在制备用于治疗对TSH受体介导的途径有应答的疾病的药物中的应用。因此，可以使用适量的本发明化合物给予有此需要的患者。

[0127] 本发明在另一个方面中涉及具有式I的四氢喹啉衍生物化合物在制备用于治疗需要抑制TSH受体的TSH、TSI或TSH受体组成型活性的作用的患者的药物中的应用。

[0128] 本发明在另一个方面中涉及具有式I的四氢喹啉衍生物化合物在治疗甲状腺功能亢进中的应用。

[0129] 本发明在另一个方面中涉及具有式I的四氢喹啉衍生物化合物在治疗格雷夫斯病中的应用。

[0130] 本发明在另一个方面中涉及具有式I的四氢喹啉衍生物化合物在治疗格雷夫斯眼病中的应用。

[0131] 本发明在另一个方面中涉及具有式I的四氢喹啉衍生物化合物在治疗与格雷夫斯病相关的胫骨前皮肤病中的应用。

[0132] 本发明的另一个方面涉及具有式I的四氢喹啉衍生物化合物在治疗结节性甲状腺肿中的应用。

[0133] 本发明的化合物还可以用于治疗甲状腺癌。

[0134] 本发明在另一个方面中涉及具有式I的四氢喹啉衍生物化合物在预防上文给鉴定的疾病中的应用。

[0135] 本发明通过下列实施例示例。

[0136] 实施例

[0137] 一般注释

[0138] 下列缩写用于实施例：DMA＝N，N-二甲基苯胺，DIPEA ＝N，N-二异丙基乙胺；TFA＝三氟乙酸，DtBAD＝偶氮二甲酸二-叔丁酯；TBTU＝O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐；HATU＝O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐；Fmoc＝9-芴基甲氧羰基；Fmoc-Cl＝9-芴基甲氧羰酰氯；DMF＝N，N-二甲基甲酰胺；Boc＝叔丁氧羰基；THF＝四氢呋喃；DMAP＝二甲基-吡啶-4-基-胺；HOAc＝乙酸；Et3N＝三乙胺；EtOAc＝乙酸乙酯；DCM＝二氯甲烷；MeOH＝甲醇；MeI＝碘甲烷；DME＝1，2-二甲氧基乙烷。

[0139] 使用Beilstein Autonom程序(版本：4.01.304)生成实施例中所述终产物的名称。

[0140] 除非另作陈述，否则下列实施例的全部终产物从水/1，4-二噁烷混合物或水/乙腈混合物中冻干。如果将化合物制备成HCl盐或TFA盐的形式，则在冻干前向溶剂混合物中加入适量的相应酸。

[0141] 实施例1

[0142] 己酸(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺[0143] (a)(2，2，4-三甲基-1，2-二氢-喹啉-6-基)-甲酸叔-丁酯

[0144] 在5分钟内向在N2气气氛中的N-boc-1，4-苯二胺(13.33g，63.9mmol)在异亚丙基丙酮(40ml，367mmol)中的搅拌溶液中逐步加入碘(3.47g，12.8mmol)。将该反应体系在100℃下搅拌3小时，然后冷却至环境温度，减少至得到标题化合物，为粗的褐色油状物(18.4g，100％)。将该产物不经进一步纯化而使用。

[0145] (b)(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-1，2-二氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸叔-丁酯[0146] 将在N2气气氛中的实施例1(a)所述的化合物(16.4g，57mmol)在THF(200ml)和吡啶(5.07ml，63mmol)中的搅拌溶液冷却至0℃(冰/水浴)。然后在15分钟内滴加在THF(50ml)中的乙酰氯(4.46ml，63mmol)。除去冷却，将该反应混合物缓慢温至环境温度，搅拌3小时。然后用水使反应停止。用EtOAc萃取有机相，用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，减少至得到油状物。通过快速色谱法纯化该油状物(庚烷/EtOAc 8∶2)，得到标题化合物(11.95g，57％)。

[0147] (c)1-(6-氨基-2，2，4-三甲基-2H-喹啉-1-基)-乙酮

[0148] 将在N2气气氛中的实施例1(b)所述的化合物(11.95g，36mmol)在DCM(250ml)中的搅拌溶液冷却至0℃(冰/水浴)。然后在15分钟内滴加三氟乙酸(27.7ml，360mmol)。除去冷却，将该反应混合物缓慢温至环境温度，搅拌1小时。然后在剧烈搅拌下通过添加碳酸钠使反应停止，加入水。用EtOAc萃取有机相，用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，减少至得到油状物。通过快速色谱法纯化该油状物(庚烷/EtOAc6∶4)，得到标题化合物(2.67g，
32％)。

[0149] (d)1-(6-氨基-2，2，4-三甲基-4-苯基-3，4-二氢-2H-喹啉-1-基)-乙酮[0150] 将在N2气气氛中的实施例1(c)所述的化合物(100mg，494μmol)在干苯(2ml)中的搅拌溶液冷却至0℃(冰/水浴)。然后在15分钟内逐步加入三氯化铝(198mg，1.48mmol)。除去冷却，将该反应混合物缓慢温至环境温度，搅拌16小时。然后用氯化铵水溶液使反应停止。用EtOAc萃取有机相，用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，减少至得到标题化合物，为粗的褐色泡沫(124mg，81％)。将产物泡沫不经进一步纯化而使用。

[0151] (e)己酸(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0152] 将在N2气气氛中的实施例1(d)所述的化合物(880mg，2.85mmol)和三乙胺(477μL，3.42mmol)在干DCM(7.5ml))中的搅拌溶液冷却至0℃(冰/水浴)。然后在15分钟内滴加己酰氯(479μL，3.42mmol)在DCM(2.5ml)中的溶液。除去冷却，将该反应混合物缓慢温至环境温度，搅拌1小时。然后用1N盐酸水溶液使反应停止。用DCM萃取有机相，用NaHCO3的水溶液，然后用水洗涤，然后干燥(PE滤膜)，减少至得到油状物。通过快速色谱法纯化该油状物，然后将该产物从EtOAc中结晶，得到标题化合物，为白色固体(871mg，+75％)。数据：(m/z)＝407.3(M+H)。

[0153] 实施例2

[0154] 1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0155] 在N2气中将在干DCM(0.75ml)中的DIPEA(70.6μL，405μmol)，HATU(46.2μL，122μmol)和N-甲基吡咯-2-羧酸(15.2mg，122μmol)一起搅拌15分钟。然后将该反应混合物冷却至0℃(冰/水浴)，然后在3分钟内滴加实施例1(d)所述的化合物(25mg，
81.1μmol)在于DCM(0.25ml)中的溶液。除去冷却，将该反应混合物缓慢温至环境温度，搅拌1小时，然后用1N盐酸水溶液使反应停止。用DCM萃取有机相，用NaHCO3的水溶液、然后用水洗涤，然后干燥(PE滤膜)，减少至得到油状物。通过快速色谱法纯化该油状物，得到+
标题化合物，为白色固体(15mg，46％)。数据：(m/z)＝416.3(M+H)。

[0156] 实施例3

[0157] N-(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-5-溴-2-甲氨基-苯甲酰胺

[0158] 按照与实施例2所述相同的方式，由实施例1(d)所述的化合物制备该化合物+(264mg，78％)。数据：(m/z)＝521(M+H)。

[0159] 实施例4

[0160] 吡啶-2-羧酸(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四 氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0161] 按照与实施例2所述相同的方式，由实施例1(d)所述的化合物制备该化合物+(320mg，46％)。数据：(m/z)＝414(M+H)。

[0162] 实施例5

[0163] N-(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3，4-二甲基-苯甲酰胺

[0164] 按照与实施例1所述相同的方式，由实施例1(d)所述的化合物制备该化合物，得+到标题化合物(320mg，46％)。数据：(m/z)＝414(M+H)。

[0165] 实施例6

[0166] (1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-甲酸2-苯氧基-乙酯

[0167] 向在N2气气氛中的实施例1(d)所述的化合物(124mg，402μmol)和催化剂量的活性炭在干EtOAc(4.6ml)中的搅拌溶液中加入氯甲酸三氯甲酯(97μl，804μmol)。将该反应体系在回流状态下搅拌2小时，然后冷却至环境温度，用dikalite过滤，减压浓缩，得到异氰酸酯，为粗油状物(134mg，100％)。

[0168] 然后在N2气气氛中将在THF(1ml)中的异氰酸酯(48.8mg，146μmol)加入到2-苯氧基乙醇(182μl，1.46mmol)和TEA(211μl，1.46mmol)在THF(2ml)中的溶液中。将该反应体系在环境温度下搅拌15小时，然后用水使反应停止，用EtOAc萃取，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，减少至得到油状物。通过快速色谱法纯化该油状物(庚烷/EtOAc)，得到标+题化合物(51mg，74％)。数据：(m/z)＝473.5(M+H)。

[0169] 实施例7

[0170] (1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸丁酯

[0171] 将在N2气气氛中的实施例1(d)所述的化合物(20mg，65μmol)在DCM(2ml)中的搅拌溶液冷却至0℃(冰/水浴)。加入N-丁基氯甲酸酯(16.7μl，130μmol)，除去冷却，将该反应混合物缓慢温至环境温度，搅拌16小时。然后用水使反应停止。用EtOAc萃取，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，减少至得到油状物。通过快速色谱法纯化该油状物(庚+烷/EtOAc)，得到标题化合物(10mg，37％)。数据：(m/z)＝409.3(M+H)。

[0172] 实施例8

[0173] 1-(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-环戊基-脲

[0174] 将在N2气气氛中的实施例1(d)所述的化合物(25mg，81.1μmol)和三乙胺(16.9μL，122μmol)在干DCM(0.75ml))中的搅拌溶液冷却至0℃(冰/水浴)。然后在3分钟内滴加异氰酸环戊酯(11.0mg，97.3μmol)在DCM(0.25ml)中的溶液。除去冷却，将该反应混合物缓慢温至环境温度，搅拌1小时。然后用1N盐酸水溶液使反应停止。用DCM萃取有机相，用NaHCO3的水溶液和水洗涤，然后干燥(PE滤膜)，减少至得到油状物。通过快速色+谱法纯化该油状物，得到标题化合物，为白色固体(3mg，9％)。数据：(m/z)＝420.5(M+H)。

[0175] 实施例9

[0176] 己酸[1-乙酰基-4-(4-溴-苯基)-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基]-酰胺

[0177] (a)(E)-3-(4-溴-苯基)-丁-2-烯酸乙酯

[0178] 在氮气气氛中搅拌叔丁醇钾(10.45g，90.43mmol)在THF(250ml)中的溶液。然后加入膦酰乙酸三乙酯(18.1ml，90.43mmol)在THF(100ml)中的溶液，将该反应混合物在室温下搅拌30分钟。然后在5分钟内滴加1-(4-溴-苯基)-乙酮(6g，30.14mmol)在THF(100ml)中的溶液。将该反应混合物加热至回流。3小时后，将该反应混合物冷却至环境温度，减压除去THF。将该反应混合物溶于H2O，用EtOAc萃取，用H2O和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物(Hept∶EtOAc 8∶2)，得到标题化合物(8.1g，99％)。

[0179] (b)(E)-3-(4-溴-苯基)-丁-2-烯酸

[0180] 向实施例9(a)所述的化合物(8.16g，30.3mmol)在乙醇(50ml)中的搅拌溶液中加入2N氢氧化钠水溶液(50ml)。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。冷却该反应混合物，用2N盐酸水溶液猝灭。将有机相萃取入EtOAc，用H2O和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到标题化合物，为白色固体(7.42g，99％)。将产物不经进一步纯化而使用。

[0181] (c)(E)-3-(4-溴-苯基)-丁-2-烯酸苯基酰胺

[0182] 向在N2气气氛中的实施例9(b)所述的化合物(2g，8.296mmol)在CH2Cl2(40ml)中的搅拌溶液中加入DIPEA(2.89ml，16.59mmol)和o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(3.79g，9.96mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌30分钟，滴加苯胺(910μl，9.96mmol)在CH2Cl2(30ml)中的溶液。将该反应混合物搅拌3.5小时，然后用3％柠檬酸水溶液(100ml)猝灭，用CH2Cl2取，用H2O洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物(Hept∶EtOAc8∶2)，得到标题化合物(2.48g，95％)。

[0183] (d)4-(4-溴-苯基)-4-甲基-3，4-二氢-1H-喹啉-2-酮

[0184] 将实施例9(c)所述的化合物(2.28g，7.2mmol)溶于浓硫酸(20ml)，搅拌45分钟。将该反应混合物倾入冰/水混合物，将有机相萃取入CH2Cl2，用NaHCO3水溶液和H2O洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物(Hept∶EtOAc 8∶2)，得到标题化合物，为黄色固体(1.9g，83％)。

[0185] (e)4-(4-溴-苯基)-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉

[0186] 在20分钟内向在N2气气氛中的实施例9(d)所述的化合物(9.09g，28.75mmol)在甲苯(475ml)中的溶液中滴加硼烷-甲基硫复合物在甲苯中的2M溶液(37.4ml，74.74mmol)。将该反应混合物加热至回流2小时，然后冷却至环境温度，用H2O猝灭，在室温下搅拌50分钟。将有机相萃取入CH2Cl2，用H2O洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到标题化合物，为油状物(8.6g，99％)。将产物不经进一步纯化而使用。

[0187] (f)1-[4-(4-溴-苯基)-4-甲基-3，4-二氢-2H-喹啉-1-基]-乙酮

[0188] 向在N2气气 氛中的实施例9(e)所述的化合物 (8.69g，28.75mmol)在CH2Cl2(240ml)中的搅拌溶液中加入吡啶(4.64ml，57.5mmol)和乙酰氯(3.08ml，
43.13mmol)，在室温下搅拌3小时。然后将该反应混合物倾入冰水。将有机相萃取入CH2Cl2，用H2O洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到标题化合物，为油状物(9.8g，99％)。将产物不经进一步纯化而使用。

[0189] (g)1-[4-(4-溴-苯基)-4-甲基-6-硝基-3，4-二氢-2H-喹啉-1-基]-乙酮

[0190] 向在N2气气氛中的实施例9(f)所述的化合物(9.8g，28.47mmol)在CH2Cl2(210ml)中的搅拌溶液中加入乙酐(267μl，2.85mmol)。然后在15分钟内滴加发烟硝酸(7.17ml，0.17mol)在CH2Cl2(10ml)中的溶液，将该反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将该反应混合物倾入冰水。将有机相萃取入CH2Cl2，用NaHCO3水溶液和H2O洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物(Hept∶EtOAc 9∶1)，得到标题化合物(7.2g，65％)。

[0191] (h)1-[6-氨基-4-(4-溴-苯基)-4-甲基-3，4-二氢-2H-喹啉-1-基]-乙酮

[0192] 将在N2气气氛中的实施例9(g)所述的化合物(7.3g，18.8mmol)和乙酸(10.73ml，187.6mmol)在THF(690ml)中的搅拌溶液冷却至0℃(冰/水浴)。然后在15分钟内逐步加入锌(粉)(38.1g，0.56mol)。将该反应混合物在0℃下搅拌30分钟。然后除去冷却，将该反应混合物缓慢温至环境温度，搅拌16小时。过滤出固体，用EtOAc和水稀释滤液。用NaHCO3水溶液和H2O洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到标题化合物，为橙色油状物(6.67g，99％)。将产物不经进一步纯化而使用。

[0193] (i)己酸[1-乙酰基-4-(4-溴-苯基)-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基]-酰胺

[0194] 将在N2气气氛中的实施例9(h)所述的化合物(7.54g，21.0mmol)和三乙胺(3.52ml，25.2mmol)在CH2Cl2(750ml)中的搅拌溶液冷却至0℃(冰/水浴)。然后在5分钟内滴加N-己酰氯(3.54ml，25.2mmol)，将该反应混合物在0℃下搅拌1小时。然后除去冷却，将该反应混合物在室温下搅拌过夜。然后用NaHCO3水溶液使反应停止。将有机相萃取入CH2Cl2，用H2O洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物(Hept∶EtOAc +1∶1)，得到标题化合物，为黄色泡沫(5.66g，59％)。数据：(m/z)＝457.3/459.3(M+H)。

[0195] 实施例10

[0196] N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-2-苯氧基-乙酰胺

[0197] (a)1-(6-氨基-4-甲基-4-苯基-3，4-二氢-2H-喹啉-1-基)-乙酮

[0198] 按照与实施例9(h)所述相同的方式制备该化合物。

[0199] (b)N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-2-苯氧基-乙酰胺

[0200] 向苯氧基乙酸(19.5mg，0.13mmol)在DCM(1ml)中的溶液中加入TBTU(52mg，0.16mmol)和DIPEA(26μl，0.15mmol)，在室温搅拌该反应混合物。10分钟后，加入实施例
10(a)所述的化合物(30mg，0.11mmol)在DCM(1ml)中的溶液。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。用饱和NaHCO3水溶液使反应停止，用DCM萃取。干燥有机层(Na2SO4)，减压浓缩。通+
过硅胶柱色谱法纯化粗产物，得到标题化合物(36mg，81％)。数据：(m/z)＝415.5(M+H)。

[0201] 实施例11

[0202] N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(3-氯-苯基)-丙酰胺

[0203] 按照与实施例10所述相同的方式，由实施例10(a)所述的化合物制备该化合物，+得到标题化合物(15mg，32％)。数据：(m/z)＝447.3(M+H)。

[0204] 实施例12

[0205] N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-噻吩-2-基-丙酰胺

[0206] 按照与实施例11所述相同的方式，由实施例10(a)所述的化合物制备该化合物，+得到标题化合物(21mg，47％)。数据：(m/z)＝419(M+H)。

[0207] 实施例13

[0208] 1-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(4-氯-苄基)-脲

[0209] 按照与实施例19(d)所述相同的方式，由实施例10(a)所述的化合物制备该化合+物，得到标题化合物(55mg，87％)。数据：(m/z)＝448(M+H)。

[0210] 实施例14

[0211] 己酸{1-乙酰基-4-[4-(3-氟-吡啶-4-基)-苯基]-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基}-酰胺

[0212] 将在N2气气氛中的实施例9中所述的化合物(50mg，0.11mmol)，3-氟吡啶-4-硼酸(42mg，0.30mmol)，磷酸三钾七水合物(44mg，0.13mmol)，双(三苯膦)钯(II)氯化物(4.6mg，6.6μmol)，三苯胂(2.3mg，7.6μmol)和H2O(0.5ml)在二噁烷(3ml)中的搅拌溶液加热至回流5小时。然后将该反应混合物冷却至环境温度，用NaHCO3水溶液猝灭，用EtOAc稀释。用H2O和盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法、然后用制备+型HPLC纯化粗产物。冷冻干燥得到标题化合物(10mg，19％)。数据：(m/z)＝474.5(M+H)。

[0213] 实施例15

[0214] [4-(1-乙酰基-6-己酰氨基-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-4-基)-苯基]-氨基甲酸3-氯-苄酯

[0215] (a)己 酸[1-乙 酰基-4-(4- 氨基- 苯基)-4- 甲基-1，2，3，4- 四氢- 喹啉-6-基]-酰胺

[0216] 向在N2气气氛中的实施例9所述的化合物(5.08g，11.1mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0)氯仿加合物(850mg，0.82mmol)，2，2′-双(二苯基膦)-1，1′-联萘(850mg，1.37mmol)和叔丁醇钠(2.13g，22.2mmol)在DME(200ml)中的搅拌溶液中加入二苯甲酮亚胺(2.8ml，16.8mmol)，加热至80℃下16小时。然后将该反应混合物冷却至环境温度，用EtOAc稀释，过滤出固体。减压浓缩滤液，通过硅胶柱色谱法纯化(Hept∶EtOAc 7∶3)，得到橙色固体。向在N2气气氛中的该橙色固体在THF中的搅拌溶液(21ml)中加入2N盐酸水溶液。3小时后，用EtOAc使反应混合物猝灭，用2N氢氧化钠水溶液使其呈碱性，用H2O和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到标题化合物，为橙色油状物(3.95g，90％)。将产物不经进一步纯化而使用。

[0217] (b)4-(1-乙酰基-6-己酰氨基-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-4-基)-苯基]-氨基甲酸3-氯-苄酯

[0218] 按照与实施例6所述相同的方式，由实施例15(a)所述的化合物制备该化合物，得+到标题化合物(16mg，54％)。数据：(m/z)＝562(M+H)。

[0219] 实施例16

[0220] [4-(1-乙酰基-6-己酰氨基-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-4-基)-苯基]-氨基甲酸甲酯

[0221] 按照与实施例6所述相同的方式，由实施例15(a)所述的化合物制备该化合物，得+到标题化合物(10mg，41％)。数据：(m/z)＝452(M+H)。

[0222] 实施例17

[0223] 环戊烷羧酸(1-乙酰基-7-二甲氨基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0224] (a)(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯

[0225] 将在N2气气氛中的实施例1(d)所述的化合物(2.39g，7.75mmol)和吡啶(660μL，8.14mmol)在干DCM(15ml)中的搅拌溶液冷却至0℃(冰/水浴)。然后在15分钟内滴加氯甲酸9-芴基甲酯(2.11g，8.14mmol)在于DCM(10ml)中的溶液。30分钟后，用H2O使反应停止。萃取有机相，减少至得到油状物。通过快速色谱法纯化该油状物。使产物从MeOH/DCM中结晶，然后过滤出来，得到标题化合物，为黄色固体(3.94g，96％)。

[0226] (b)(1-乙 酰 基 -2，2，4-三 甲 基-7- 硝 基 -4-苯 基-1，2，3，4-四 氢- 喹啉-6-基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯

[0227] 在3分钟内向在N2气气氛中的实施例17(a)所述的化合物(3.94g，7.42mmol)在冰醋酸(20ml)和干DCM(10ml)中的搅拌溶液中滴加浓硝酸(310μL，7.42mmol)。在环境温度下搅拌30分钟，然后加入浓硝酸(100μL，2.36mmol)。在环境温度下搅拌15分钟，然后用H2O使反应停止。萃取有机相。向有机相中加入MeOH(2ml)，通过旋转蒸发除去DCM。使产物从MeOH/DCM中结晶，然后过滤出来，得到标题化合物，为黄色固体(2.62g，61％)。

[0228] (c)(1-乙 酰 基 -7-氨 基 -2，2，4-三 甲 基 -4-苯 基-1，2，3，4-四 氢- 喹啉-6-基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯

[0229] 将在N2气气氛中的实施例17(b)所述的化合物(100mg，173μmol)和冰醋酸(100μL，1.73mmol)在干THF(3ml)中的搅拌溶液冷却至0℃(冰/水浴)。在10分钟内逐步加入锌粉(227mg，3.47mmol)。除去冷却，将该反应体系温至环境温度，搅拌2小时。加入新鲜冰醋酸(100μL，1.73mmol)和锌粉(227mg，3.47mmol)。10分钟后，通过C盐过滤该反应体系。加入DCM。用NaHCO3，盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤，减少至得到标题化合物，为橙色油状物(95mg，100％)。

[0230] (d)(1-乙酰基-7-二甲氨基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯

[0231] 向实施例17(c)所述的化合物(103mg，189μmol)在甲醇(2ml)和冰醋酸(135μL，2.36mmol)中的搅拌溶液中加入氰基硼氢化钠(18.8mg，302μmol)，然后加入甲醛在水中的37％溶液(14μL，189μmol)。2小时后，用NaHCO3使反应停止，将有机相萃取入EtOAc。然后用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤，减少至得到标题化合物，为红色固体(106mg，100％)。

[0232] (e)1-(6-氨基-7-二甲氨基-2，2，4-三甲基-4-苯基-3，4-二氢-2H-喹啉-1-基)-乙酮

[0233] 向实施例17(d)所述的化合物(380mg，662μmol)在干DCM(5ml)中的搅拌溶液中加入哌啶(1ml)。2分钟后，通过旋转蒸发使该反应混合物减少至得到油状物。通过快速色谱法纯化该油状物，得到标题化合物，为粉红色固体(232mg，100％)。

[0234] 环戊烷羧酸(1-乙酰基-7-二甲氨基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0235] 向HATU(224mg，590μmol)和DIPEA(340μL，1.96mmol)在DCM(5ml)中的搅拌溶液中加入环戊烷羰酰氯(128μL，1.18mmol)。在N2气气氛中搅拌15分钟，然后滴加实施例17(e)所述的化合物(138mg，393μmol)在DCM(5ml)中的溶液。18小时后，用0.5N盐酸使反应停止。用NaHCO3、H2O洗涤有机相，然后干燥(PE-滤膜)，减少至得到油状物。通过快速色谱法纯化该油状物，得到标题化合物，为白色固体(147mg，85％)。数据：(m/z)＝+448.5(M+H)。

[0236] 实施例18

[0237] N-(1-乙 酰 基-7- 二 甲 氨 基 -4-甲 基 -4-苯 基 -1，2，3，4-四 氢 - 喹啉-6-基)-3-(4-氯-苯基)-丙酰胺

[0238] 按照与实施例17所述相同的方式，由实施例10a所述的化合物制备该化合物，得+到标题化合物(14mg，46％)。数据：(m/z)＝490(M+H)。

[0239] 实施例19

[0240] 1-(1-乙 酰 基-7- 二 甲 氨 基 -4-甲 基 -4-苯 基 -1，2，3，4-四 氢 - 喹啉-6-基)-3-(2-甲氧基-苄基)-脲

[0241] (a)(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯

[0242] 按照与实施例17(a)所述相同的方式，由实施例10(a)所述的化合物制备该化合物，得到标题化合物(2.2g，82％)

[0243] (b)(1-乙酰基-4-甲基-7-硝基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯

[0244] 按照与实施例17(b)所述相同的方式，由实施例19a所述的化合物制备该化合物，得到标题化合物(1.1g，58％)

[0245] (c)1-(6-氨基-4-甲基-7-硝基-4-苯基-3，4-二氢-2H-喹啉-1-基)-乙酮

[0246] 向实施例19(b)所述的化合物(112mg，0.2mmol)在CH2Cl2(2ml)中的搅拌溶液中加入哌啶(0.2ml，2mmol)。将该反应体系在室温下搅拌过夜。将该反应混合物倾入H2O，萃取入CH2Cl2。用H2O和盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化+产物，得到标题化合物(50mg，76％)。数据：(m/z)＝326(M+H)。

[0247] (d)1-(1- 乙 酰 基 -4- 甲 基 -7- 硝 基 -4- 苯 基 -1，2，3，4- 四 氢 - 喹啉-6-基)-3-(2-甲氧基-苄基)-脲

[0248] 向实施例19(c)所述的化合物(20mg，61.5μmol)在EtOAc(3ml)中的搅拌溶液中加入催化剂量的活性炭和双光气(15μl，123μmol)。将该反应体系在回流状态下加热4小时，然后用C盐过滤，减压浓缩。将粗的异氰酸酯溶于CH2Cl2(1ml)，加入到2-甲氧基苄胺(16μl，123μmol)和Et3N(17μl，123μmol)在CH2Cl2(2ml)中的搅拌溶液中。将该反应体系在室温下搅拌3天。用H2O使该反应混合物猝灭，用2NHCl酸化。将产物萃取入CH2Cl2，+干燥，通过硅胶柱色谱法纯化，得到标题化合物(23mg，77％)。数据：(m/z)＝489(M+H)。

[0249] (e)1-(1- 乙 酰 基 -7- 氨 基 -4- 甲 基 -4- 苯 基 -1，2，3，4- 四 氢 - 喹啉-6-基)-3-(2-甲氧基-苄基)-脲

[0250] 向实施例19(d)所述的化合物(23mg，47μmol)在干THF(2ml)中的搅拌溶液中加入HOAc(27μl，470μmol)和锌(62mg，940μmol)。将该反应体系在室温下搅拌3小时。用C盐过滤该反应混合物，倾倒入H2O。将产物萃取入EtOAc。用NaHCO3水溶液和盐水洗涤有+机相，干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到标题化合物(22mg，100％)。数据：(m/z)＝459(M+H)。

[0251] (f)1-(1-乙 酰 基-7-二 甲 氨 基-4-甲 基-4- 苯 基-1，2，3，4-四 氢- 喹啉-6-基)-3-(2-甲氧基-苄基)-脲

[0252] 向实施例19(e)所述的化合物(22mg，47μmol)在MeOH(3ml)和HOAc(30μl，588μmol)中的搅拌溶液中加入甲醛(37％，在H2O中，(8μl，94μmol))和NaCNBH3(6mg，
94μmol)。将该反应体系在室温下搅拌过夜。将该反应混合物倾倒入H2O，萃取入EtOAc。
用盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化产物，得到标题化合+
物(15.7mg，69％)。数据：(m/z)＝487(M+H)。

[0253] 实施例20

[0254] (1-乙酰基-7-二甲氨基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸噻吩-2-基甲酯

[0255] 按照与实施例19所述相同的方式，由实施例19(c)所述的化合物，使用第一步中+的2-噻吩甲醇制备该化合物，得到标题化合物(12mg，56％)。数据：(m/z)＝464(M+H)。

[0256] 实施例21

[0257] 联苯-4-羧酸(1-乙酰基-7-甲氧基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0258] (a)(2-甲氧基-4-硝基-苯基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯

[0259] 将2-甲氧基-4-硝基苯胺(3g，17.8mmol)溶于THF(60ml)，加入吡啶(1.6ml，19.6mmol)。将该反应混合物冷却至0℃，分小部分加入Fmoc-Cl(5.07g，19.6mmol)。使该反应体系达到环境温度，保持5小时。减压浓缩该反应混合物。通过从CH2Cl2和MeOH中重+
结晶而纯化粗产物，得到标题化合物(6.08g，88％)。数据：(m/z)＝391(M+H)。

[0260] (b)(4-氨基-2-甲氧基-苯基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯

[0261] 将实施例21(a)所述的化合物(64.8g，0.17mol)溶于THF(1.5l)，加入乙酸(95ml，1.7mol)。将该反应混合物冷却至0℃，分小部分加入新锌(217.1g，3.4mol)。使该反应体系达到环境温度，保持0.5小时。用C盐过滤该反应混合物，用饱和NaHCO3水溶液(2x)和盐水(1x)洗涤滤液，干燥(MgSO4)，减压浓缩。通过从CH2Cl2和MeOH中重结晶来纯+化粗产物，得到标题化合物(55.6g，93％)。数据：(m/z)＝361(M+H)。

[0262] (c)(7-甲氧基-2，2，4-三甲基-1，2-二氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯

[0263] 将实 施 例21(b)所 述 的化 合 物(4.45g，12.4mmol)，I2(157mg，0.62mmol)，MgSO4(7.4g，62mmol)和儿茶酚(61mg，0.37mmol)溶于/混悬于丙酮(350ml)中。将该反应混合物加热至回流，保持5h。将该反应体系冷却至环境温度，用C盐过滤。减压浓缩滤液。+
通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，得到标题化合物(4.24g，78％)。数据：(m/z)＝441(M+H)。

[0264] (d)(1-乙酰基-7-甲氧基-2，2，4-三甲基-1，2-二氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯

[0265] 将实施例21(c)所述的化合物(4.24g，9.5mmol)溶于CH2Cl2(25ml)。首先加入吡啶(25ml)和催化剂量的DMAP，然后滴加乙酰氯(2.0ml，28.5mmol)在CH2Cl2(20ml)中的溶液。将该反应混合物在环境温度下保持15分钟。用CH2Cl2稀释该反应混合物，用H2O(3x)，0.1MHCl水溶液(3x)，0.5M HCl水溶液(1x)萃取，干燥(MgSO4)，减压浓缩。通过硅胶柱色+
谱法纯化粗产物，得到标题化合物(3.91g，85％)。数据：(m/z)＝483(M+H)。

[0266] (e)1-(6-氨基-7-甲氧基-2，2，4-三甲基-2H-喹啉-1-基)-乙酮

[0267] 将实施例21(d)所述的化合物(236mg，0.49mmol)溶于CH2Cl2(4ml)。加入哌啶(485μl，4.9mmol)，将该反应混合物保持在环境温度下1小时。减压浓缩该反应混合物，与甲苯(2x)共蒸发。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，得到标题化合物(90mg，71％)。数据：+
(m/z)＝261(M+H)。

[0268] (f)联苯-4-羧酸(1-乙酰基-7-甲氧基-2，2，4-三甲基-1，2-二氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0269] 将实施例21(e)所述的化合物(2.22g，8.5mmol)溶于甲苯(48ml)和吡啶(2ml)。加入4-联苯羰酰氯(2.21g，10.2mmol)，将该反应体系保持在环境温度下3小时。再加入等当量的4-联苯羰酰氯，将该反应体系保持在环境温度下1小时。减压浓缩该反应混合物，与甲苯(2x)共蒸发。将残余物溶于EtOAc，用饱和NaHCO3水溶液，H2O和1M HCl水溶液萃取，干燥(MgSO4)，减压浓缩。通过从CH2Cl2和MeOH中重结晶来纯化粗产物，得到标题化合+
物(3.1g，82％)。数据：(m/z)＝441(M+H)。

[0270] (g)联苯-4-羧酸(1-乙酰基-7-羟基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0271] 将实施例21(f)所述的化合物(3.1g，7.05mmol)溶于苯(100ml)。加入AlCl3(5.6g，42.3mmol)，将该反应体系保持在环境温度下20小时。用H2O使反应停止，通过添加2M NaOH水溶液(63ml)使该反应混合物达到pH 8，萃取。用H2O和盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，减压浓缩。通过从乙腈中重结晶来纯化粗产物，得到标题化合物(195mg，5％)。
+
数据：(m/z)＝505(M+H)。

[0272] 联苯-4-羧酸(1-乙酰基-7-甲氧基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0273] 将实施例21(g)所述的化合物(600mg，1.2mmol)溶于乙腈(50ml)。加入K2CO3(821mg，5.9mmol)，将该反应混合物加热至45℃，保持15分钟。加入MeI(84μl，
1.3mmol)，将该反应混合物保持在45℃下3小时。再加入0.2当量的MeI，反应在0.5小时内完成。减压浓缩该反应混合物，溶于EtOAc，用H2O和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，减压浓缩。
通过从庚烷/EtOAc中重结晶来纯化粗产物，得到标题化合物(351mg，56％)。数据：(m/z)+
＝519(M+H)。

[0274] 实施例22

[0275] 呋喃-2-羧酸[1-乙酰基-7-甲氧基-4-(4-甲氧基-苯基)-2，2，4-三甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基]-酰胺

[0276] (a)呋喃-2-羧酸(1-乙酰基-7-甲氧基-2，2，4-三甲基-1，2-二氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0277] 将实施例21(e)所述的化合物(406mg，1.56mmol)溶于CH2Cl2(5ml)。加入2-呋喃羰酰氯(170μl，1.72mmol)和DIPEA(815μl，4.68mmol)，将该反应混合物保持在环境温度下15小时。用H2O使反应停止，萃取。减压浓缩有机相，通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，+得到标题化合物(370mg，67％)。数据：(m/z)＝355(M+H)。

[0278] 呋喃-2-羧酸[1-乙酰基-7-甲氧基-4-(4-甲氧基-苯基)-2，2，4-三甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基]-酰胺

[0279] 将实施例22(a)所述的化合物(260mg，0.73mmol)和AlCl3(催化剂量)溶于苯甲醚(5ml)，保持在环境温度下15小时。用H2O和EtOAc萃取该反应混合物。通过硅胶柱色+谱法纯化粗产物，得到标题化合物(301mg，89％)。数据：(m/z)＝463(M+H)。

[0280] 实施例23

[0281] 联苯-4-羧酸[1-乙酰基-4-(4-氰基甲氧基-苯基)-2，2，4-三甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基]-酰胺

[0282] (a)联苯-4-羧酸[1-乙酰基-4-(4-甲氧基-苯基)-2，2，4-三甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基]-酰胺

[0283] 按照与实施例22所述相同的方式，由实施例1c所述的化合物制备该化合物，得到+标题化合物(466mg，60％)。数据：(m/z)＝519(M+H)。

[0284] (b)联苯-4-羧酸[1-乙酰基-4-(4-羟基-苯基)-2，2，4-三甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基]-酰

[0285] 将实施例23(a)所述的化合物(466mg，0.9mmol)溶于CH2Cl2(7ml)，将该反应混合物冷却至0℃。加入BBr3(680mg，2.7mmol)，使该反应体系达到环境温度，保持3小时。将该反应混合物冷却至0℃，缓慢加入1M NaOH在H2O和EtOAc中的溶液。酸化该混合物，萃取。干燥有机相(MgSO4)，减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，得到标题化合物(125mg，+
28％)。数据：(m/z)＝505(M+H)。

[0286] 联苯-4-羧酸[1-乙酰基-4-(4-氰基甲氧基-苯基)-2，2，4-三甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基]-酰胺

[0287] 将实 施例23(b)所 述的化 合物(118mg，0.2mmol)溶 于DMF(5ml)。加 入CsCO3(325mg，0.84mmol)和(2-氯-乙基)-二乙胺盐酸盐(43.3mg，0.25mmol)，将该反应混合物保持在环境温度下15小时。用水使反应停止，用EtOAc萃取。干燥有机相(MgSO4)，减压浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物，得到标题化合物(61mg，51％)。数据：(m/z)＝+596(M+H)。

[0288] 实施例24

[0289] 联苯-4-羧酸{1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-[4-(吡啶-4-基甲氧基)-苯基]-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基}-酰胺

[0290] 按照与实施例23所述相同的方式，由实施例23(b)所述的化合物制备该化合物，+得到标题化合物(320mg，46％)。数据：(m/z)＝414(M+H)。

[0291] 实施例25

[0292] [4-(1-乙酰基-6-己酰氨基-4-甲基-1，2，3，4-四氢-喹啉-4-基)-苯基]-氨基甲酸呋喃-2-基甲酯

[0293] 按照与实施例6所述相同的方式，由实施例实施例15(a)所述的化合物制备该化+合物，得到标题化合物(13mg，47％)。数据：(m/z)＝518(M+H)。

[0294] 实施例26

[0295] N-(1- 乙 酰 基 -2，2，4- 三 甲 基 -4- 苯 基 -1，2，3，4- 四 氢 - 喹啉-6-基)-3-(3-氯-苯基)-丙酰胺

[0296] 按照与实施例2所述相同的方式，由实施例1(d)所述的化合物制备该化合物(12mg，4％)。数据：(m/z)＝475(M+H)。

[0297] 实施例27

[0298] (1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸3-甲基-丁酯

[0299] 向在N2气气氛中的实施例10(a)所述的化合物(124mg，402μmol)和催化剂量的活性炭在干EtOAc(4.6ml)中的搅拌溶液中加入氯甲酸三氯甲酯(97μl，804μmo)。将该反应体系回流搅拌2小时，然后冷却至环境温度，用dikalite过滤，减压浓缩，得到粗油状物(134mg，100％)。在N2气气氛中，将该油状物(20mg，0.065mmol)溶于THF(1ml)，加入到3-甲基-1-丁醇(70.8μl，0.65mmol)和TEA(94μl，0.65mmol)在THF(2ml)中的溶液中。
将该反应体系在环境温度下搅拌过夜，然后用水使反应停止，用EtOAc萃取，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，减少至得到油状物。通过快速色谱法纯化该油状物(庚烷/EtOAc)，得到标题化合物(10.9mg，42.5％)。数据：(m/z)＝395(M+H)。

[0300] 实施例28

[0301] (1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸1-甲基-环丙基甲酯

[0302] 按照与实施例27所述相同的方式，使用1-甲基环丙烷甲醇制备该化合物(19.1mg，68％)。数据：(m/z)＝393(M+H)。

[0303] 实施例29

[0304] (1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸环丁基甲酯

[0305] 按照与实施例27所述相同的方式，使用环丁烷甲醇制备该化合物(11mg，40％)。数据：(m/z)＝393(M+H)。

[0306] 实施例30

[0307] (1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸(R)-1，2-二甲基-丙酯

[0308] 按照与实施例27所述相同的方式，使用(R)-(-)-3-甲基-2-丁醇制备该化合物(6mg，2％)。数据：(m/z)＝395(M+H)。

[0309] 实施例31

[0310] (1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸(1R，2S，4S)-双环[2.2.1]庚-2-基酯

[0311] 按照与实施例27所述相同的方式，使用内-降冰片制备该化合物(8mg，27％)。数据：(m/z)＝419(M+H)。

[0312] 实施例32

[0313] (1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4，4a，8a-六氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸环戊酯

[0314] 按照与实施例27所述相同的方式，使用戊烯醇制备该化合物(46％)。数据：(m/z)＝393(M+H)。

[0315] 实施例33

[0316] N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酰胺

[0317] 按照与实施例10所述相同的方式，由实施例10(a)所述的化合物制备该化合物，+得到标题化合物(35％)。数据：(m/z)＝481(M+H)。

[0318] 实施例34

[0319] (1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸3-氯-4-氟-苄酯

[0320] 按照与实施例27所述相同的方式，使用(3-氯-4-氟-苯基)-甲醇制备该化合物(73.3％)。数据：(m/z)＝467(M+H)。

[0321] 实施例35

[0322] 5-溴-噻吩-2-羧酸(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺

[0323] 按照与实施例10所述相同的方式，使用5-溴-噻吩-2-羧酸制备该化合物(66％)。数据：(m/z)＝470(M+H)。

[0324] 实施例36

[0325] (+)-1-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(4-氯-苄基)-脲

[0326] 以实施例13为原料，通过手性HPLC得到该化合物。柱AD-H(5μ)25x0.46cm。洗脱剂：庚烷/异丙醇90/10。保留时间：26.8min。

[0327] (乙醇，5mg/ml)

[0328] 实施例37

[0329] (+)-N-(1- 乙 酰 基 -2，2，4- 三 甲 基 -4- 苯 基 -1，2，3，4- 四 氢 - 喹啉-6-基)-3-(3-氯-苯基)-丙酰胺

[0330] 以实施例26为原料，通过手性HPLC得到该化合物。柱AD-H(5μ)25x0.46cm。洗脱剂：庚烷/异丙醇80/20。保留时间：7.0min。

[0331] (乙醇，5mg/ml)

[0332] 实施例38

[0333] (+)-N-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酰胺

[0334] 以实施例33为原料，通过手性HPLC得到该化合物。柱AD-H(5μ)25x0.46cm。洗脱剂：庚烷/异丙醇90/10。保留时间：26.8min。

[0335] (乙醇，5mg/ml)

[0336] 实施例39

[0337] (+)-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4，4a，8a-六氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸环戊酯

[0338] 以实施例32为原料，通过手性HPLC得到该化合物。柱OD-H(5μ)25x 0.46cm。洗脱剂：庚烷/乙醇85/15。保留时间：6.6min。

[0339] (乙醇，5mg/ml)

[0340] 实施例40

[0341] (+)-(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸3-氯-4-氟-苄酯

[0342] 以实施例34为原料，通过手性HPLC得到该化合物。柱OD(10μ)25x0.46cm。洗脱剂：庚烷/乙醇80/20。保留时间：8.1min。

[0343] (乙醇，5mg/ml)

[0344] 实施例41

[0345] 化合物对在CHO细胞中表达的人TSH受体上的TSH的拮抗活性

[0346] 在使用编码人TSH受体的质粒和具有指导荧火虫荧光素酶报道基因表达的cAMP效应元件(CRE)/启动子的第二种质粒稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中测定化合物对人TSH受体上的TSH的拮抗活性。牛TSH与Gs-偶合的TSH受体的结合导致cAMP增加，由此诱导荧光素酶报道基因的反式激活增加。使用发光计数器对荧光素酶活性进行定量。将细胞与测试化合物(浓度在0.316nM-10μM)和18nM牛TSH(在该浓度和没有测试化合物存在下诱导80％的最大荧光素酶刺激)一起孵育。使用软件程序XLfit(Excel版4.1，ID Business SolutionsLimited)测定IC50(测试化合物导致荧光素酶刺激最大可获得的抑制的半数最大(50％)抑制时的测试化合物浓度)和化合物效力。上述实施例所述的化-6
合物均具有低于10 M的IC50。实施例12，13，23，18，1，4，20，7，6，11，26，27，28，29，30，33，
31，32，34，35，36，37，38，39和40均表现出IC50低于1E-7M。

[0347] 实施例42

[0348] 化合物对在CHO细胞中表达的人TSH受体上的人TSI的拮抗活性

[0349] 在稳定表达人TSH受体和CRE-驱动的荧火虫荧光素酶报道基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(在测定前在没有血清存在下培养16h)中测试3种测试化合物对人TSH受体上的人TSI的拮抗活性。TSI通过下列步骤部分纯化自GD患者的血清：用0.45mm滤膜过滤，蛋白质G-琼脂糖柱色谱，用磷酸盐缓冲盐水透析，然后在10K超滤膜上浓缩。证实TSI制品在缺乏人TSHR的对照组CHO细胞中不会活化荧光素酶活性。在测定培养基中包括cAMP磷酸二酯酶抑制剂咯利普兰(10μM)以增加TSHR-诱导的CRE-荧光素酶合成，使用发光计数器对其进行定量。将细胞与化合物A，B或C(0.316nM-10μM)和3.16mg/ml TSI(或18nM等效浓度的牛TSH)一起孵育。化合物A是己酸(1-乙酰基-2，2，4-三甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-酰胺(参见实施例1)。化合物B是(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4，4a，8a-六氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸环戊酯的对映体(参见实施例39)。化合物C是(1-乙酰基-4-甲基-4-苯基-1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基)-氨基甲酸3-氯-4-氟-苄酯的对映体(参见实施例40)。全部3种化合物均为完全拮抗剂并且显-6
示出低于10 M的IC50(表I)。

[0350] 表I

[0351] IC50(TSI) IC50(bTSH)

[0352] 化合物A 88nM 368nM

[0353] 化合物B 12nM 48nM

[0354] 化合物C 47nM 192nM

[0355] 实施例43

[0356] 化合物对CHO细胞中表达的组成型活性人TSH受体的拮抗活性

[0357] 在对导致甲状腺功能亢进的自主功能性甲状腺结节中鉴定的5种最普遍的组成型活性人TSHR突变体(Thr632Ile，Ala623Val，Ile568Thr，Asp619Gly和Asp633Glu)(vanSande等(1995)J.Clin.Endocrinol.Metabol.80，2577-2585)之一进行编码的质粒-6瞬时转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中测定了两种化合物的拮抗活性。将细胞与10 M的实施例35或实施例1的化合物一起在10μM咯利普兰存在下孵育。使用Packard cAMP -6
Alphascreen测定法对TSH受体突变体的活性进行定量。两种化合物在10 M浓度下抑制