芫根总黄酮制备减肥降血脂药物的用途

摘要

本发明涉及从芫根植株中提取得到的芫根总黄酮制备减肥降血脂药物的用途，尤其是减少体重，达到减肥的目的，同时还能降低血清中TC、TG和LDL-C含量并升高HDL-C水平含量。

权利要求

1.芫根总黄酮用于制备减肥降血脂药物的用途，其中芫根总黄酮是通过如下方法制备得到的：(1)将芫根原料用5～15倍体积的蒸馏水煮沸；

(2)搅拌的同时缓慢加入石灰乳或者NaOH碱性溶液，调pH至8～10，持续煮沸20～

60min，趁热用4层纱布抽滤，滤液用中速滤纸进行再次过滤；

(3)滤渣再用5～15倍体积蒸馏水煎煮，趁热抽滤，重复提取1～3次，(4)合并两次滤液，在60～80℃条件下，用浓盐酸调pH至4～6，搅匀后静置24h，抽滤；

(5)用蒸馏水将沉淀物洗至中性，干燥后得到粗制总黄酮，(6)用沸水重结晶，干燥后得到精制总黄酮，得率为0.1～0.4重量％，纯度为60％～

75％。

2.芫根总黄酮用于制备减肥降血脂药物的用途，其中芫根总黄酮是通过如下方法制备得到的：(1)用5～15倍体积的50～95％乙醇或甲醇作为溶剂，于50～80℃对芫根原料进行回流提取1～4h，进行1～4次重复提取；

(2)用中速滤纸过滤提取液，合并滤液，减压浓缩至滤液无醇味；

(3)在滤液中，按1∶1～3体积加入石油醚萃取3～5次，60℃水浴挥发掉溶液中的石油醚，又按1∶1～3体积加入乙酸乙酯对浓缩液进行萃取3～5次，将乙酸乙酯部分的溶液减压浓缩、干燥，得到粗总黄酮浸膏；

(4)将粗总黄酮浸膏溶于少量50～95％乙醇，得到总黄酮上柱液，利用大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗到流出液无色后，以流速为1～2.5ml/min，用2～8倍柱体积的20～

95％的乙醇进行梯度洗脱至无色，收集洗脱液，将洗脱液50～80℃减压浓缩、干燥得到精制的总黄酮，得率为0.3～0.7重量％，纯度为75％～95％，所述大孔吸附树脂为D101或AB-8。

3.芫根总黄酮用于制备减肥降血脂药物的用途，其中芫根总黄酮是通过如下方法制备得到的：(1)将芫根原料用10～30倍体积的60～95％乙醇浸泡1～3h；

(2)在常压下，以微波功率500～900w，微波辐射20～60s，间歇辐射2～5次，进行微波辅助浸取；

(3)过滤收集滤液，将滤液浓缩成无醇味的浸膏；

(4)将浸膏溶于少量热水中，按1∶1～3体积比先后用石油醚和乙酸乙酯对浸膏液进行萃取，收集乙酸乙酯部分，减压回收溶剂，干燥后得到粗总黄酮浸膏；

(5)将粗总黄酮浸膏溶于少量50～95％乙醇，得到总黄酮上柱液；利用大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗到流出液无色后，以流速为1～2.5ml/min，用2～8倍柱体积的20～

95％的乙醇进行梯度洗脱至无色，收集洗脱液；将洗脱液50～80℃减压浓缩、干燥得到精制的芫根总黄酮；得率为0.3～0.9重量％，芫根总黄酮含量为65％～75％，所述大孔吸附树脂为D101或AB-8。

说明书

芫根总黄酮制备减肥降血脂药物的用途

技术领域

[0001] 本发明涉及从芫根植株中提取得到的芫根总黄酮制备减肥降血脂药物的用途，属于药用天然产物领域。

背景技术

[0002] 肥胖本身就是一种威胁人类健康的慢性疾病，同时也会伴随高血脂症、心脑血管疾病的发生，目前肥胖症已经成为全球关注的健康问题之一，因此研究开发出安全有效的减肥降血脂药物具有极大的临床和社会意义。

[0003] 芫根(Brassica rapa L.)，又名蔓菁，二年生草本，现广泛栽种于青藏高原。芫根生长在海拔高、温差大、日照强的高原环境中，适应能力强，产量高，营养丰富，通常作为饲料应用于畜牧业，其肉质根还可以作为蔬菜或果品供人食用，具有清热解毒、滋补增氧的功效。目前开发利用芫根已公开的方法中，尚未见关于芫根总黄酮减肥降血脂功效方面的报道。黄酮类化合物指化学结构上属于黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类、花色素类、黄烷醇类、双苯吡酮类、异黄酮类等化合物及其与单糖或寡糖形成的糖苷或其他形式的衍生物。它们广泛存在于自然界，尤其是高等植物和羊齿类植物中，是一类重要的天然有机化合物，其生理活性多种多样。大量研究表明黄酮类化合物具有防治高血压、治疗冠心病、抑制血栓形成、抗肝毒、抗炎、泻下、降血脂、雌激素样作用等功效。因此，开发利用植物黄酮具有巨大的生物学、医学意义。本发明通过提取芫根总黄酮并对其进行减肥降血脂活性检测，拓宽了芫根综合开发的途径，为探索天然的、有效的减肥降血脂药物提供了理论依据，符合高原植物资源的有效利用和藏药新药开发的需要，有利于推动民族地区经济的发展。

发明内容

[0004] 本发明的目的之一是提供以黄酮类化合物为主要成分的芫根总黄酮提取物；

[0005] 本发明还提供上述芫根总黄酮提取物的制备方法；

[0006] 本发明还提供上述芫根总黄酮提取物在治疗和/预防肥胖症、高血脂症的药物制备中的用途。

[0007] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

[0008] 从芫根根块中提取到总黄酮，得率为0.5～1重量％，呈固态淡黄色，易溶于乙醇，易溶于水。以高脂饲料饲养的营养性肥胖大鼠作为模型对芫根总黄酮进行体内减肥降血脂活性检测；以大鼠前提脂肪细胞培养为模型对芫根总黄酮进行体外减肥活性检测，除非另有说明，本发明中的％为重量百分比。

[0009] 本发明芫根总黄酮的制备方法具体为：

[0010] 方法A：

[0011] (1)将芫根原料用5～15倍体积的蒸馏水煮沸；

[0012] (2)搅拌的同时缓慢加入石灰乳或者NaOH碱性溶液，调pH至8～10，持续煮沸20～60min，趁热用4层纱布抽滤，滤液用中速滤纸进行再次过滤；

[0013] (3)滤渣再用5～15倍体积蒸馏水煎煮，趁热抽滤，重复提取1～3次，[0014] (4)合并两次滤液，在60～80℃条件下，用浓盐酸调pH至4～6，搅匀后静置24h，抽滤；

[0015] (5)用蒸馏水将沉淀物洗至中性，干燥后得到粗制总黄酮，

[0016] (6)用沸水重结晶，干燥后得到精制总黄酮，得率为0.1～0.4重量％，纯度为60％～75％。

[0017] 方法B：

[0018] (1)用5～15倍体积的50～95％乙醇或甲醇作为溶剂，于50～80℃对芫根原料进行回流提取1～4h，进行1～4次重复提取；

[0019] (2)用中速滤纸过滤提取液，合并滤液，减压浓缩至滤液无醇味；

[0020] (3)在滤液中，按1∶1～3体积加入石油醚萃取3～5次，60℃水浴挥发掉溶液中的石油醚，又按1∶1～3体积加入乙酸乙酯对浓缩液进行萃取3～5次，将乙酸乙酯部分的溶液减压浓缩、干燥，得到粗总黄酮浸膏；

[0021] (4)将粗总黄酮浸膏溶于少量50～95％乙醇，得到总黄酮上柱液，利用大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗到流出液无色后，以流速为1～2.5ml/min，用2～8倍柱体积的20～95％的乙醇进行梯度洗脱至无色，收集洗脱液，将洗脱液50～80℃减压浓缩、干燥得到精制的总黄酮，得率为0.3～0.7重量％，纯度为75％～95％。

[0022] 方法C

[0023] (1)将芫根原料用10～30倍体积的60～95％乙醇浸泡1～3h；

[0024] (2)在常压下，以微波功率500～900w，微波辐射20～60s，间歇辐射2～5次，进行微波辅助浸取；

[0025] (3)过滤收集滤液，将滤液浓缩成无醇味的浸膏；

[0026] (4)将浸膏溶于少量热水中，按1∶1～3体积比先后用石油醚和乙酸乙酯对浸膏液进行萃取，收集乙酸乙酯部分，减压回收溶剂，干燥后得到粗总黄酮浸膏；

[0027] (5)将粗总黄酮浸膏溶于少量50～95％乙醇，得到总黄酮上柱液。利用大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗到流出液无色后，以流速为1～2.5ml/min，用2～8倍柱体积的20～95％的乙醇进行梯度洗脱至无色，收集洗脱液。将洗脱液50～80℃减压浓缩、干燥得到精制的芫根总黄酮。得率为0.3～0.9重量％。芫根总黄酮含量为65％～75％。

[0028] 所述制备方法中的芫根原料均为芫根的块根，经切片后自然风干，然后粉碎得到粉状物，粉碎细度达到40～200目；

[0029] 上述方法B中所用的大孔吸附树脂为D101或AB-8；

[0030] 所述干燥方法为减压真空干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。

[0031] 将芫根总黄酮制备成各种，例如粉剂、片剂、胶囊、颗粒剂、缓释片、缓释胶囊、滴丸或液体制剂。所述制剂应用于临床治疗肥胖症、高血脂症及制成含芫根总黄酮减肥降脂保健品。

[0032] 本发明用盐酸-镁粉反应检测所提的芫根总黄酮，泡沫处呈现紫红色；取样品的60％乙醇溶液滴在滤纸上后，与1％AlCl3乙醇溶液反应在可见光下呈现灰黄色，在紫外光下呈现黄色荧光斑点；取样品乙醇的60％溶液滴在滤纸上，用浓氨水熏过后，在紫外光下呈现黄褐色荧光斑点，说明提取物确实为黄酮。芫根总黄酮的定量测定是利用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法，以芦丁为标准品绘制标准曲线，利用紫外分光光度法测定芫根总黄酮含量。

[0033] 通过上述方法制备的芫根总黄酮在减肥降血脂方面有显著的效果。在营养性肥胖大鼠体内实验中，当芫根总黄酮的剂量≥0.8g/kg·d时，大鼠体重、lee’s指数、睾丸周围脂肪系数及血脂指标均显示出显著减肥降血脂效果。在大鼠前体脂肪细胞培养实验中，当芫根总黄酮的剂量≥200μg/ml时，芫根总黄酮显示出显著的抑制大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的作用。

[0034] 本发明方法得到的芫根总黄酮原料易得，方法简单，生产成本低，产品中总黄酮含量较高，质量稳定、易于控制。具体实施方式：

[0035] 实施例1

[0036] 采用方法A，取晒干芫根块根粉碎至100目，用5倍体积的蒸馏水煮沸，煮沸后不停搅拌的同时，缓缓加入NaOH，将溶液PH调至10。继续保持煮沸20min。趁热用四层纱布垫在布氏漏斗上进行抽滤，抽滤完毕用中速滤纸对滤液再次过滤。收集滤液。将滤渣用5倍体积的蒸馏水再次煎煮20min，抽滤、过滤，这样对滤渣重复提取3次，合并滤液。将滤液加热到60℃，缓缓加入浓盐酸，将溶液PH调至4，搅拌均匀后，静置24h后，抽滤，收集沉淀物。用大量蒸馏水冲洗沉淀物，直至PH为7，60℃减压真空干燥沉淀物，得到粗总黄酮。用沸水将得到的粗总黄酮重结晶，60℃减压真空干燥结晶，得到淡黄色的精制芫根总黄酮，得率为
0.22％，纯度为63％。

[0037] 实施例2

[0038] 采用方法A，取晒干芫根块根粉碎至40目，用15倍体积的蒸馏水煮沸，煮沸后不停搅拌的同时，缓缓加入石灰乳，将溶液PH调至9。继续保持煮沸60min。趁热用四层纱布垫在布氏漏斗上进行抽滤，抽滤完毕用中速滤纸对滤液再次过滤。收集滤液。将滤渣用15倍体积的蒸馏水再次煎煮60min，抽滤、过滤，这样对滤渣重复提取1次，合并滤液。将滤液加热到80℃，缓缓加入浓盐酸，将溶液PH调至4，搅拌均匀后，静置24h后，抽滤，收集沉淀物。用大量蒸馏水冲洗沉淀物，直至PH为7，80℃干燥沉淀物，得到粗总黄酮。用沸水将得到的粗总黄酮重结晶，冷冻干燥所得结晶，得到淡黄色的精制芫根总黄酮，得率为0.12％，纯度为61％。

[0039] 实施例3

[0040] 采用方法A，取晒干芫根块根粉碎至200目，用10倍体积的蒸馏水煮沸，煮沸后不停搅拌的同时，缓缓加入石灰乳，将溶液PH调至8。继续保持煮沸40min。趁热用四层纱布垫在布氏漏斗上进行抽滤，抽滤完毕用中速滤纸对滤液再次过滤。收集滤液。将滤渣用5倍体积的蒸馏水再次煎煮40min，抽滤、过滤，这样对滤渣重复提取2次，合并滤液。将滤液加热到70℃，缓缓加入浓盐酸，将溶液PH调至4，搅拌均匀后，静置24h后，抽滤，收集沉淀物。用大量蒸馏水冲洗沉淀物，直至PH为7，70℃减压真空干燥沉淀物，得到粗总黄酮。用沸水将得到的粗总黄酮重结晶，70℃减压真空干燥结晶，得到淡黄色的精制芫根总黄酮，得率为0.24％，纯度为73％。

[0041] 实施例4

[0042] 采用方法B，用5倍体积的95％乙醇作为溶剂，于50℃对芫根原料进行回流提取1h，进行4次重复提取。用中速滤纸过滤提取液，合并滤液，减压浓缩至滤液无醇味。在滤液中，按1∶1体积加入石油醚萃取3次，60℃挥去石油醚，又按1∶2体积加入乙酸乙酯对浓缩液进行萃取3次，将乙酸乙酯部分的溶液减压浓缩、干燥，得到粗总黄酮浸膏。将粗总黄酮浸膏溶于少量95％乙醇，得到总黄酮上柱液。利用D101大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗到流出液无色后，以流速为2.5ml/min，用8倍柱体积的20％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱至无色，收集洗脱液。将洗脱液50℃减压浓缩、减压真空干燥得到淡黄色的精制总黄酮，得率为0.33％纯度为85％。

[0043] 实施例5

[0044] 采用方法B，用10倍体积的50％乙醇作为溶剂，于60℃对芫根原料进行回流提取1h，进行5次重复提取。用中速滤纸过滤提取液，合并滤液，减压浓缩至滤液无醇味。在滤液中，按1∶1体积加入石油醚萃取4次，60℃挥去石油醚，又按1∶1体积加入乙酸乙酯对浓缩液进行萃取4次，将乙酸乙酯部分的溶液减压浓缩、干燥，得到粗总黄酮浸膏。将粗总黄酮浸膏溶于少量60％乙醇，得到总黄酮上柱液。利用AB-8大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗到流出液无色后，以流速为2ml/min，用4倍柱体积的30％、50％、80％、95％的乙醇进行梯度洗脱至无色，收集洗脱液。将洗脱液60℃减压浓缩、冷冻干燥得到淡黄色的精制总黄酮，得率为0.63％，纯度为77％。

[0045] 实施例6

[0046] 采用方法B，用15倍体积的70％乙醇作为溶剂，于70℃对芫根原料进行回流提取1h，进行3次重复提取。用中速滤纸过滤提取液，合并滤液，减压浓缩至滤液无醇味。在滤液中，按1∶1体积加入石油醚萃取4次，60℃挥去石油醚，又按1∶3体积加入乙酸乙酯对浓缩液进行萃取4次，将乙酸乙酯部分的溶液减压浓缩、干燥，得到粗总黄酮浸膏。将粗总黄酮浸膏溶于少量70％乙醇，得到总黄酮上柱液。利用AB-8大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗到流出液无色后，以流速为1ml/min，用2倍柱体积的30％、60％、95％的乙醇进行梯度洗脱至无色，收集洗脱液。将洗脱液60℃减压浓缩、冷冻干燥得到淡黄色的精制总黄酮，得率为0.43％，纯度为91％。

[0047] 实施例7

[0048] 采用方法C，将芫根原料用20倍体积的60％乙醇浸泡1h。在常压下，以微波功率700w，微波辐射40s，间歇辐射3次，进行微波辅助浸取。过滤收集滤液，将滤液浓缩成无醇味的浸膏。将浸膏溶于少量热水中，按1∶3体积比先后用石油醚和乙酸乙酯对浸膏液进行萃取，收集乙酸乙酯部分，减压回收溶剂，干燥后得到粗总黄酮浸膏。将粗总黄酮浸膏溶于少量60％乙醇，得到总黄酮上柱液。利用大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗到流出液无色后，以流速为2ml/min，用5倍柱体积的20％、50％、80％、95％的乙醇进行梯度洗脱至无色，收集洗脱液。将洗脱液60℃减压浓缩、干燥得到淡黄色的精制芫根总黄酮，得率为0.83％，纯度为65％。

[0049] 实施例8

[0050] 采用方法C，将芫根原料用10倍体积的75％乙醇浸泡3h。在常压下，以微波功率500w，微波辐射60s，间歇辐射2次，进行微波辅助浸取。过滤收集滤液，将滤液浓缩成无醇味的浸膏。将浸膏溶于少量热水中，按1∶1体积比先后用石油醚和乙酸乙酯对浸膏液进行萃取，收集乙酸乙酯部分，减压回收溶剂，干燥后得到粗总黄酮浸膏。将粗总黄酮浸膏溶于少量75％乙醇，得到总黄酮上柱液。利用大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗到流出液无色后，以流速为1ml/min，用3倍柱体积的30％、60％、90％的乙醇进行梯度洗脱至无色，收集洗脱液。将洗脱液60℃减压浓缩、干燥得到淡黄色的精制芫根总黄酮，得率为0.46％，纯度为66％。

[0051] 实施例9

[0052] 采用方法C，将芫根原料用30倍体积的、95％乙醇浸泡2h。在常压下，以微波功率900w，微波辐射20s，间歇辐射5次，进行微波辅助浸取。过滤收集滤液，将滤液浓缩成无醇味的浸膏。将浸膏溶于少量热水中，按1∶2体积比先后用石油醚和乙酸乙酯对浸膏液进行萃取，收集乙酸乙酯部分，减压回收溶剂，干燥后得到粗总黄酮浸膏。将粗总黄酮浸膏溶于少量95％乙醇，得到总黄酮上柱液。利用大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗到流出液无色后，以流速为2.5ml/min，用8倍柱体积的30％、60％、90％的乙醇进行梯度洗脱至无色，收集洗脱液。将洗脱液50～80℃减压浓缩、干燥得到淡黄色的精制芫根总黄酮，得率为
0.59％，纯度为72％。

[0053] 实施例10

[0054] 片剂：取芫根总黄酮50g，加入50g可压淀粉和40g羧甲基淀粉钠，混合均匀，以70％的乙醇为润湿剂，制软材，18目筛制粒，烘干，16目筛整粒，加入3g硬脂酸镁为润滑剂，混合均匀，压片、包衣，制成1000片包衣片。

[0055] 实施例11

[0056] 胶囊：取芫根总黄酮50g，加入80g可压淀粉和20g羧甲基纤维素钠，混合均匀，以70％的乙醇为湿润剂，制软材，24目筛制粒，烘干，20目筛整粒，加入3g硬脂酸镁，混合均匀，装胶囊，制成1000粒胶囊。

[0057] 实施例12

[0058] 颗粒剂：取芫根总黄酮100g，加入450g蔗糖粉、100g梭甲基纤维素钠、100g微晶纤维素和50g柠檬酸，混合均匀，以3％PVP为润湿剂制软材，20目筛制粒，烘干，18目筛整粒，分装，制成粒径为830～880μm的1000袋颗粒剂。每袋重0.72～0.78g。

[0059] 实施例13

[0060] 粉针剂：取芫根总黄酮12g，羟丙基-p-环糊精135g，加注射用水3L，搅成糊状，再加70℃～85℃的注射用水3L，溶解时温度控制在70℃～85℃，加甘露醇450g溶解，再用1moL/L盐酸溶液调pH值至5.6，加入针用炭后室温搅拌，过滤脱炭，精滤.滤液按每只2ml进行分装，采用速冻法干燥，将制品取出，进行封口，即得到性状为白色疏松块状物或粉末，即得粉针剂。

[0061] 实施例14

[0062] 滴丸：将150g聚乙二醇4000在水浴上加热得熔融液，趁热加入芫根总黄酮50g，搅拌均匀，65℃保温1小时，用滴丸机滴制，滴速120滴/分钟，滴制温度65～75℃，在15℃左右的液体石蜡中冷却，制得丸重约60mg，干燥，包衣，即得滴丸。

[0063] 实施例15

[0064] 口服液：取蒸馏水适量，加入20g芫根总黄酮、180g蔗糖粉、20g柠檬酸，搅拌溶解，过滤，滤液补充蒸馏水至10000ml，加入香精适量，搅拌均匀，分装，每支10ml，压盖，100℃消毒1小时，检查合格，即得口服液。

[0065] 实施例16

[0066] 粉剂：取芫根总黄酮30g，粉碎成粒径为20μm粉状物，加入500g蔗糖粉、100g梭甲基纤维素钠、100g微晶纤维素混合均匀，分装，制成1000袋粉剂。每袋重0.68～0.73g。添加量为食品或饲料的0.01～1％。

[0067] 将上述制备实施例5所得的芫根总黄酮进行如下效果实验：

[0068] 1、营养性肥胖大鼠检测芫根总黄酮减肥降血脂活性实验

[0069] SD大鼠60只(80±20g)随机分为6组，除空白组喂食基础饲料以外，每组均给予等量高脂饲料，每只每天20g。4周以后测得体重高于空白组15％，开始灌胃。实验组每天分别灌胃50mg/kg·d、200mg/kg·d、800mg/kg·d芫根总黄酮。空白组、高脂组灌以等量蒸馏水，阳性对照组灌以盐酸西布曲明2.5mg/kg·d。给药3周之后检测大鼠体重、身长，计算lee’s指数，眼眶静脉丛采血，用试剂盒测血清中总胆固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-c、低密度脂蛋白LDL-c值。处死后解剖检测大鼠睾丸脂肪湿重。结果见表1、表2、表3、表4。

[0070] 表1.芫根总黄酮对大鼠体重、身长和lee’s指数的影响

[0071]

[0072] *表示与高脂组比较，0.01＜p＜0.05，**表示与高脂组比较p＜0.01[0073] 表2、芫根总黄酮对大鼠睾丸周围脂肪湿重及其脂肪系数的影响

[0074]

[0075] *表示与高脂组比较，0.01＜p＜0.05，**表示与高脂组比较p＜0.01[0076] 表3、大鼠血清总胆固醇TC、甘油三酯TG

[0077] TC mmol/l TG mmol/l

[0078] 空白组 2.001±0.115** 0.640±0.063**

[0079] 高脂组 3.661±0.444 0.997±0.153

[0080] 阳性对照 2.601±0.402** 0.989±0.183

[0081] 50mg/kg·d 3.011±0.846 0.698±0.633*

[0082] 200mg/kg·d 2.552±0.559** 0.703±0.631*

[0083] 800mg/kg·d 2.511±0.672** 0.699±0.584*

[0084] *表示与高脂组比较，0.01＜p＜0.05，**表示与高脂组比较p＜0.01[0085] 表4.大鼠血清高密度脂蛋白HDL-c、低密度脂蛋白LDL-c

[0086] HDL-C mmol/l LDL-C mmol/l

[0087] 空白组 0.701±0.132** 2.796±0.260

[0088] 高脂组 0.455±0.122 3.191±0.766

[0089] 阳性对照 0.681±0.014** 2.162±0.162*

[0090] 50mg/kg·d 0.667±0.060** 2.321±0.362*

[0091] 200mg/kg·d 0.774±0.122** 2.009±0.268*

[0092] 800mg/kg·d 0.697±0.082** 2.159±0.177*

[0093] *表示与高脂组比较，0.01＜p＜0.05，**表示与高脂组比较p＜0.01[0094] 2、大鼠前体脂肪细胞培养

[0095] 将体重为80g的幼年SD大鼠断颈处死，无菌操作取出睾丸周围脂肪组织，剪成1mm3左右的碎块，用I型胶原酶37℃消化1h～2h。用200目尼龙筛过滤后，1000～1500rpm离心10～20min。弃去上清液，加入红细胞裂解液，室温放置10min，加入10％小牛血清的αMEM，按5×104个/cm2密度接种于2个96孔培养板，至于37℃50ml/LCO2培养箱培养。1天后如下更换培养液：空白组为不含样品的10％小牛血清的αMEM；含总黄酮分别50μg/ml，100μg/ml，200g/ml的三个剂量的10％小牛血清αMEM培养液，每2天更换一次培养液，8天后用MTT法检测细胞增殖情况。另一块96孔板用基础培养液培养4天后更换为上述含样品培养液，培养72h，用油红O染色法检测细胞分化情况。结果如表5、表6。

[0096] 表5、MTT法检测前体脂肪细胞增殖各组OD490nm