针对ANGPTL3的单克隆抗体

摘要

本发明提供了特异结合ANGPTL3的单克隆抗体。本发明提供了中和ANGPTL3的至少一种活性的单克隆抗体。本发明还提供了使用中和的单克隆抗体治疗脂质代谢疾病的方法。

权利要求

1.结合ANGPTL3并中和ANGPTL3的至少一种活性的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体结合由SEQ ID NO：10的氨基酸序列组成的肽，其中所述单克隆抗体降低体内至少一种血清脂质水平。

2.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是小鼠单克隆抗体。

3.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是人源化的单克隆抗体。

4.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体。

5.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体结合具有SEQ ID NO：59的氨基酸序列的ANGPTL3的表位。

6.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体结合具有SEQ ID NO：60的氨基酸序列的ANGPTL3的表位。

7.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体包括包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的轻链可变区。

8.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体包括包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列的轻链可变区。

9.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体包括包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的轻链可变区。

10.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体包括包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列的轻链可变区。

11.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体包括包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列的轻链可变区。

12.结合ANGPTL3并中和ANGPTL3的至少一种活性的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体与包含含有SEQ ID NO：20的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：28的氨基酸序列的轻链可变区的抗体特异性结合相同的表位。

13.结合ANGPTL3并中和ANGPTL3的至少一种活性的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体与包含含有SEQ ID NO：22的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：30的氨基酸序列的轻链可变区的抗体特异性结合相同的表位。

14.结合ANGPTL3并中和ANGPTL3的至少一种活性的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体与包含含有SEQ ID NO：24的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：32的氨基酸序列的轻链可变区的抗体特异性结合相同的表位。

15.结合ANGPTL3并中和ANGPTL3的至少一种活性的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体与包含含有SEQ ID NO：64的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：68的氨基酸序列的轻链可变区的抗体特异性结合相同的表位。

16.结合ANGPTL3并中和ANGPTL3的至少一种活性的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体与包含含有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：70的氨基酸序列的轻链可变区的抗体特异性结合相同的表位。

17.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是抗体片段。

18.权利要求17的单克隆抗体，其中所述抗体片段选自scFv片段、Fab片段、F(ab’)2片段和Fab’片段。

19.特异性结合ANGPTL3的单克隆抗体，其包括重链和轻链，其中所述重链包括如SEQ ID NO：35所示的CDR1，如SEQ ID NO：36所示的CDR2，和如SEQ ID NO：37所示的CDR3；且所述轻链包括如SEQ ID NO：44所示的CDR1，如SEQ ID NO：45所示的CDR2，和如SEQ ID NO：46所示的CDR3。

20.特异性结合ANGPTL3的单克隆抗体，其包括重链和轻链，其中所述重链包括如SEQ ID NO：38所示的CDR1，如SEQ ID NO：39所示的CDR2，和如SEQ ID NO：40所示的CDR3；且所述轻链包括如SEQ ID NO：47中所示的CDR1，如SEQ ID NO：48所示的CDR2，和如SEQ ID NO：49所示的CDR3。

21.特异性结合ANGPTL3的单克隆抗体，其包括重链和轻链，其中所述重链包括如SEQ ID NO：41中所示的CDR1，如SEQ ID NO：42所示的CDR2，和如SEQ ID NO：43所示的CDR3；

且所述轻链包括如SEQ ID NO：50中所示的CDR1，如SEQ ID NO：51所示的CDR2，和如SEQ ID NO：52所示的CDR3。

22.特异性结合ANGPTL3的单克隆抗体，其包括重链和轻链，其中所述重链包括如SEQ ID NO：53所示的CDR1，如SEQ ID NO：54所示的CDR2，和如SEQ ID NO：55所示的CDR3；且所述轻链包括如SEQ ID NO：56所示的CDR1，如SEQ ID NO：57所示的CDR2，和如SEQ ID NO：58所示的CDR3。

23.特异性结合ANGPTL3的单克隆抗体，其包括重链和轻链，其中所述重链包括如SEQ ID NO：71所示的CDR1，如SEQ ID NO：72所示的CDR2，和如SEQ ID NO：73所示的CDR3；且所述轻链包括如SEQ ID NO：77所示的CDR1，如SEQ ID NO：78所示的CDR2，和如SEQ ID NO：79所示的CDR3。

24.特异性结合ANGPTL3的单克隆抗体，其包括重链和轻链，其中所述重链包括如SEQ ID NO：74所示的CDR1，如SEQ ID NO：75所示的CDR2，和如SEQ ID NO：76所示的CDR3；且所述轻链包括如SEQ ID NO：80所示的CDR1，如SEQ ID NO：81所示的CDR2，和如SEQ ID NO：82所示的CDR3。

25.权利要求19-24中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体是小鼠单克隆抗体。

26.权利要求19-24中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体是人源化单克隆抗体。

27.权利要求19-26中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体降低体内至少一种血清脂质水平。

28.权利要求19-27中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体结合具有SEQ ID NO：59的氨基酸序列的ANGPTL3的表位。

29.权利要求19-28中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体结合具有SEQ ID NO：60的氨基酸序列的ANGPTL3的表位。

30.权利要求19-29中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体结合具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列的ANGPTL3的表位。

31.权利要求19-30中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体是抗体片段。

32.权利要求31的单克隆抗体，其中所述抗体片段是scFv片段、Fab片段、F(ab’)2片段、或Fab’片段。

33.权利要求1-32中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体以小于50nM的KD结合由SEQ IDNO：10的氨基酸序列组成的肽。

34.权利要求33的单克隆抗体，其中所述抗体以小于30nM的KD结合由SEQ ID NO：10的氨基酸序列组成的肽。

35.权利要求33的单克隆抗体，其中所述抗体以小于10nM的KD结合由SEQ ID NO：10的氨基酸序列组成的肽。

36.权利要求33的单克隆抗体，其中所述抗体以小于5nM的KD结合由SEQ ID NO：10的氨基酸序列组成的肽。

37.包括权利要求1-36中任一项的单克隆抗体的药物组合物。

38.权利要求1-36中任一项的抗体在制备用于降低一种或多种血清脂质水平的药物中的应用。

39.权利要求1-36中任一项的抗体在制备用于治疗高甘油三酯血症的药物中的应用。

40.权利要求1-36中任一项的抗体在制备用于治疗高胆固醇血症的药物中的应用。

41.权利要求39或权利要求40的应用，其中所述高甘油三酯血症或高胆固醇血症与肥胖症相关。

42.权利要求39或权利要求40的应用，其中所述高甘油三酯血症或高胆固醇血症与糖尿病相关。

43.权利要求39或权利要求40的应用，其中所述高甘油三酯血症或高胆固醇血症与缺血性心脏病相关。

说明书

针对ANGPTL3的单克隆抗体

[0001] 本申请要求2006年12月8日提交的美国临时申请号60/873,834的权益，将该临时申请为了任何目的引入本文作为参考。I.技术领域

[0002] 提供了特异性结合血管生成素(angiopoietin)样蛋白3(ANGPTL3)的单克隆抗体。提供了使用特异性结合血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)的单克隆抗体的方法。还提供了包含特异性结合血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)的单克隆抗体的药物组合物。II.介绍

[0003] 血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)在几种哺乳动物物种中是保守的。Li，C.(2006)现代脂学观点(Curr.Opin.Lipidol.)17(2)：152-156。ANGPTL3含有N-末端卷曲螺旋结构域和C-末端血纤蛋白原样结构域。Conklin，D.等(1999)基因组(Genomics)62：477-482。N-末端卷曲螺旋结构域介导ANGPTL3的寡聚化。Ge等(2005)脂质研究杂志(J.Lipid Res.)46(7)：1484-1490。寡聚的ANGPTL3在体内经历蛋白水解加工，导致血纤蛋白原样结构域的裂解。Ono M.等(2003)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)278(43)：41804-41809。

[0004] ANGPTL3主要表达在肝中。Koishi，R.等(2002)自然遗传学(Nat.Genet.)30(2)：151-157。ANGPTL3似乎抑制脂蛋白脂肪酶(LPL)活性并减少极低密度脂蛋白(VLDL)清除。Shimizugawa T.等(2002)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)277(37)：33742-33748。
KK/San自发突变小鼠在Angptl3基因的外显子6中含有插入，并显示出明显的血清低脂血症。Koishi等(2002)自然遗传学(Nat.Genet.)，30(2)：151-157。腺病毒-介导的ANGPTL3表达或直接施用ANGPTL3逆转KK/San小鼠中的低脂血症。Koishi等(2002)自然遗传学(Nat.Genet.)30(2)：151-157。Angptl3敲除小鼠显示出在喂饲的雄性小鼠和在喂饲或禁食的雌性小鼠中具有降低的甘油三酯水平。Koster，A.等，(2005)内分泌学(Endocrinol.)146：4943-4950。那些小鼠还显示出在喂饲和禁食的雄性和雌性小鼠中具有降低的胆固醇水平。Koster，A.等，(2005)内分泌学(Endocrinol.)146：4943-4950。在链佐星糖尿病小鼠中，在db/db小鼠中，和在ob/ob小鼠中均显示出Angptl3表达的增加。
Inukai，K.等，(2004)生物化学生物物理研究通信(Biochem.Biophys.Res.Comm.)317(4)：
10751079；Shimamura，M.等(2004)生物化学生物物理研究通信(Biochem.Biophys.Res.Comm.)322(3)：1080-1085。
III.概述

[0005] 在一些实施方案中，提供了结合ANGPTL3并且中和ANGPTL3的至少一种活性的单克隆抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体是小鼠单克隆抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体是人源化的单克隆抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体是人单克隆抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体降低体内至少一种血清脂质的水平。

[0006] 在一些实施方案中，该单克隆抗体结合具有SEQ ID NO：59的氨基酸序列的ANGPTL3的表位。在一些实施方案中，该单克隆抗体结合具有SEQ ID NO：60的氨基酸序列的ANGPTL3的表位。在一些实施方案中，该单克隆抗体结合具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的ANGPTL3的表位。在一些实施方案中，该单克隆抗体结合具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列的ANGPTL3的表位。

[0007] 在一些实施方案中，该单克隆抗体包括包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该单克隆抗体包括包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该单克隆抗体包括包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该单克隆抗体包括包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该单克隆抗体包括包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列的轻链可变区。

[0008] 在一些实施方案中，该单克隆抗体与抗体4.7.1特异性结合相同的表位。在一些实施方案中，该单克隆抗体与抗体4.8.3特异性结合相同的表位。在一些实施方案中，该单克隆抗体与抗体4.9.1特异性结合相同的表位。在一些实施方案中，该单克隆抗体与抗体1.315.1特异性结合相同的表位。在一些实施方案中，该单克隆抗体与抗体5.35特异性结合相同的表位。在一些实施方案中，该单克隆抗体与抗体5.50特异性结合相同的表位。

[0009] 在一些实施方案中，单克隆抗体是抗体片段。在一些实施方案中，单克隆抗体是scFv片段。在一些实施方案中，单克隆抗体是Fab片段。在一些实施方案中，单克隆抗体是F(ab’)2片段。在一些实施方案中，单克隆抗体是Fab’片段。

[0010] 在一些实施方案中，提供特异性结合ANGPTL3的分离的抗体，其包括重链和轻链，其中所述重链包括：a)如SEQ ID NOs：19-26和63-66中任一个所示氨基酸序列；b)如SEQ ID NOs：35，36，和37所示的至少一个氨基酸序列；c)如SEQ ID NOs：38，39，和40所示的至少一个氨基酸序列；d)如SEQ ID NOs：41，42，或43所示的至少一个氨基酸序列；e)如SEQ ID NOs：53，54，和55所示的至少一个氨基酸序列；f)如SEQ IDNOs：71，72，和73所示的至少一个氨基酸序列；或g)如SEQ ID NOs：74，75，和76所示的至少一个氨基酸序列；其中所述抗体中和ANGPTL3的至少一种活性。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：35所示的CDR1，如SEQ ID NO：36所示的CDR2，和如SEQ ID NO：37所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：38所示的CDR1，如SEQ ID NO：39所示的CDR2，和如SEQ ID NO：40所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：41所示的CDR1，如SEQ ID NO：42所示的CDR2，和如SEQ ID NO：43所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：53所示的CDR1，如SEQ IDNO：54所示的CDR2，和如SEQ ID NO：55所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：71所示的CDR1，如SEQ ID NO：72所示的CDR2，和如SEQ ID NO：73所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：74所示的CDR1，如SEQ ID NO：75所示的CDR2，和如SEQ ID NO：
76所示的CDR3。

[0011] 在一些实施方案中，提供特异性结合ANGPTL3的分离的抗体，其包括重链和轻链，其中所述重链包括：a)如SEQ ID NOs：19-26和63-66中任一个所示氨基酸序列；b)至少一个如SEQ ID NOs：35，36，和37所示的氨基酸序列；c)至少一个如SEQ ID NOs：38，39，和40所示的氨基酸序列；d)至少一个如SEQ ID NOs：41，42，或43所示的氨基酸序列；e)至少一个如SEQ ID NOs：53，54，和55所示的氨基酸序列；f)至少一个如SEQ ID NOs：71，72，和73所示的氨基酸序列；或g)至少一个如SEQID NOs：74，75，和76所示的氨基酸序列；其中所述抗体中和ANGPTL3的至少一种活性；且其中所述轻链包括：a)如SEQ ID NOs：27-34和67-70中任一个所示氨基酸序列；b)至少一个如SEQ ID NOs：44，45，和46所示的氨基酸序列；c)至少一个如SEQ ID NOs：47，48，和49所示的氨基酸序列；d)至少一个如SEQ ID NOs：50，51，或52所示的氨基酸序列；e)至少一个如SEQ ID NOs：56，57，和58所示的氨基酸序列；f)至少一个如SEQ ID NOs：77，78，和79所示的氨基酸序列；或g)至少一个如SEQ IDNOs：80，81，和82所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：
35所示的CDR1，如SEQ ID NO：36所示的CDR2，和如SEQ ID NO：37所示的CDR3；且抗体的轻链包括如SEQ ID NO：44所示的CDR1，如SEQ ID NO：45所示的CDR2，和如SEQ ID NO：46所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：38所示的CDR1，如SEQ ID NO：39所示的CDR2，和如SEQ ID NO：40所示的CDR3；且抗体的轻链包括如SEQ ID NO：47所示的CDR1，如SEQ ID NO：48所示的CDR2，和如SEQ ID NO：49所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：41所示的CDR1，如SEQ ID NO：42所示的CDR2，和如SEQ ID NO：43所示的CDR3；且抗体的轻链包括如SEQ IDNO：50所示的CDR1，如SEQ ID NO：51所示的CDR2，和如SEQ ID NO：52所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：53所示的CDR1，如SEQ ID NO：54所示的CDR2，和如SEQ ID NO：55所示的CDR3；且抗体的轻链包括如SEQ ID NO：56所示的CDR1，如SEQ IDNO：57所示的CDR2，和如SEQ ID NO：58所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ ID NO：71所示的CDR1，如SEQ ID NO：72所示的CDR2，和如SEQ ID NO：73所示的CDR3；且抗体的轻链包括如SEQ ID NO：77所示的CDR1，如SEQ ID NO：78所示的CDR2，和如SEQID NO：79所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的重链包括如SEQ IDNO：74所示的CDR1，如SEQ ID NO：75所示的CDR2，和如SEQ ID NO：76所示的CDR3；且抗体的轻链包括如SEQ ID NO：80所示的CDR1，如SEQ ID NO：81所示的CDR2，和如SEQ ID NO：82所示的CDR3。

[0012] 在一些实施方案中，提供特异性结合ANGPTL3的分离的抗体，其包括重链和轻链，其中所述轻链包括：a)如SEQ ID NOs：27-34和67-70中任一个所示氨基酸序列；b)至少一个如SEQ ID NOs：44，45，和46所示的氨基酸序列；c)至少一个如SEQ ID NOs：47，48，和49所示的氨基酸序列；d)至少一个如SEQ ID NOs：50，51，或52所示的氨基酸序列；e)至少一个如SEQ ID NOs：56，57，和58所示的氨基酸序列；f)至少一个如SEQ ID NOs：77，78，和79所示的氨基酸序列；或g)至少一个如SEQID NOs：80，81，和82所示的氨基酸序列；其中所述抗体中和ANGPTL3的至少一种活性。在一些实施方案中，抗体的轻链包括如SEQ ID NO：44所示的CDR1，如SEQ ID NO：45所示的CDR2，和如SEQ ID NO：46所示的CDR3。在一些实施方案中，抗体的轻链包括如SEQ ID NO：47所示的CDR1，如SEQ ID NO：48所示的CDR2，和如SEQ ID NO：49所示的CDR3。在一些实施方案中，所述轻链包括如SEQ ID NO：50所示的CDR1，如SEQ ID NO：51所示的CDR2，和如SEQ ID NO：52所示的CDR3。在一些实施方案中，所述轻链包括如SEQ ID NO：56所示的CDR1，如SEQID NO：57所示的CDR2，和如SEQ ID NO：58所示的CDR3。在一些实施方案中，所述轻链包括如SEQ ID NO：77所示的CDR1，如SEQ ID NO：78所示的CDR2，和如SEQ ID NO：79所示的CDR3。在一些实施方案中，所述轻链包括如SEQ ID NO：80所示的CDR1，如SEQ ID NO：81所示的CDR2，和如SEQ ID NO：82所示的CDR3。

[0013] 在一些实施方案中，提供结合ANGPTL3并中和ANGPTL3的至少一种活性的单克隆抗体，其中所述抗体对具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的肽的亲和性至少是该抗体对具有SEQ ID NO：84，SEQ ID NO：85，SEQ ID NO：86，SEQ ID NO：87，SEQ ID NO：88，SEQ ID NO：90，和SEQID NO：92中任一氨基酸序列的肽的亲和性的至少3倍。在一些实施方案中，所述抗体对具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的肽的亲和性至少是该抗体对SEQ ID NO：85，SEQ ID NO：86，SEQ ID NO：87，SEQ ID NO：88，和SEQ ID NO：90中每一种的亲和性的至少3倍。
在一些实施方案中，提供结合ANGPTL3并中和ANGPTL3的至少一种活性的单克隆抗体，其中所述抗体以小于50nM的KD结合具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，所述抗体以小于30nM的KD结合具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，所述抗体以小于10nM的KD结合具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，所述抗体以小于5nM的KD结合具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的肽。

[0014] 在一些实施方案中，提供包括如上所述的抗体的药物组合物。在一些实施方案中，提供治疗脂质代谢病症的方法，其中所述方法包括对患者施用有效量的该药物组合物。在一些实施方案中，提供降低一种或多种血清脂质水平的方法，其中所述方法包括对患者施用有效量的该药物组合物。在一些实施方案中，提供了治疗高甘油三酯血症的方法，其中该方法包括对患者施用有效量的该药物组合物。在一些实施方案中，提供了治疗高胆固醇血症的方法，其中该方法包括对患者施用有效量的该药物组合物。在一些实施方案中，提供了治疗肥胖症的方法，其中该方法包括对患者施用有效量的该药物组合物。在一些实施方案中，提供了治疗糖尿病的方法，其中该方法包括对患者施用有效量的该药物组合物。在一些实施方案中，提供了治疗缺血性心脏病的方法，其中该方法包括对患者施用有效量的该药物组合物。在一些实施方案中，提供了治疗代谢综合征的方法，其中该方法包括对患者施用有效量的该药物组合物。IV.附图简述

[0015] 图1显示注射抗体1.315.1，4.7.1，4.8.3，4.9.1，和对照抗体抗-KLH后4天时，小鼠中的喂饲和禁食血清甘油三酯水平，如实施例J中所述。

[0016] 图2显示注射抗体1.315.1，4.7.1，4.8.3，4.9.1，和对照抗体抗-KLH后4天时，小鼠中的喂饲和禁食血清胆固醇水平，如实施例J中所述。

[0017] 图3显示注射抗-ANGPTL3抗体4.8.3、抗-ANGPTL4抗体14D12、和对照抗体抗-KLH后4天时，小鼠中的喂饲和禁食血清甘油三酯水平，如实施例J中所述。

[0018] 图4显示注射抗-ANGPTL3抗体4.8.3、抗-ANGPTL4抗体14D12、和对照抗体抗-KLH后4天时，小鼠中的喂饲和禁食血清胆固醇水平，如实施例J中所述。

[0019] 图5显示注射抗-ANGPTL3抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，抗-ANGPTL4抗体14D12，和对照抗体抗-KLH后4天时，小鼠中的喂饲和禁食血清甘油三酯水平，如实施例J中所述。

[0020] 图6显示注射抗-ANGPTL3抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，抗-ANGPTL4抗体14D12，和对照抗体抗-KLH后4天时，小鼠中的喂饲和禁食血清胆固醇水平，如实施例J中所述。

[0021] 图7显示注射抗体1.125.1，1.132.1，1.173.2，1.315.1，1.424.1，1.431.1，和对照抗体抗-KLH后4天(上版)和8天(下版)时，小鼠中的血清甘油三酯水平，如实施例J中所述。

[0022] 图8显示注射不同剂量的Ad5-hAngptl3T病毒或2×109vp对照病毒后，小鼠中的血清甘油三酯水平，如实施例B中所述。

[0023] 图9 显 示 抗 体4.1.1，4.4.1，4.6.3，4.7.1，4.8.1，4.8.2，4.8.3，和4.9.1 对ANGPTL3 SP1，ANGPTL3T，和对照蛋白BTS324的结合，如实施例H中所述。

[0024] 图10显示抗体4.7.1(SEQ ID NO：19)，4.8.3(SEQ ID NO：21)，和4.9.1(SEQ ID NO：23)的重链可变区的对比。还显示了重链共有序列(SEQ ID NO：25)，以及与信号肽(SP)、构架区1(FWR1)、互补性决定区1(CDR1)、构架区2(FWR2)、互补性决定区2(CDR2)、构架区3(FWR3)、互补性决定区3(CDR3)、和构架区4(FWR4)对应的重链序列区域。

[0025] 图11显示抗体4.7.1(SEQ ID NO：27)，4.8.3(SEQ ID NO：29)，和4.9.1(SEQ ID NO：31)的轻链可变区的对比。还显示了轻链共有序列(SEQ ID NO：33)，以及与信号肽(SP)、构架区1(FWR1)、互补性决定区1(CDR1)、构架区2(FWR2)、互补性决定区2(CDR2)、构架区3(FWR3)、互补性决定区3(CDR3)、和构架区4(FWR4)对应的轻链序列区域。

[0026] 图12显示用小鼠单克隆抗-ANGPTL3抗体4.9.1，4.8.3，1.315.1，4.7.1，和1.173.2处理后的体外LPL活性，如实施例L中所述。

[0027] 图13显示一些小鼠单克隆抗-ANGPTL3抗体的体内药物代谢动力学，如实施例N中所述。

[0028] 图14显示抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，5.35，和5.50对SP1肽的丙氨酸分区突变体的结合，如实施例H中所述。

[0029] 图15显示注射抗体5.35或5.50后4天(上版)和7天(下版)时，小鼠中的血清甘油三酯水平，如实施例J中所述。

[0030] 图16显示注射抗体5.35或5.50后4天(上版)和7天(下版)时，小鼠中的血清胆固醇水平，如实施例J中所述。

[0031] 图17显示抗体5.35和5.50的体内药物代谢动力学，如实施例N中所述。

[0032] 图18显示抗体4.7.1，4.9.1，5.35和5.50的体内药物代谢动力学，如实施例N中所述。

[0033] 图19显示注射了抗体5.35和5.50和对照抗体抗-KLH的ApoE小鼠中血清甘油三酯和血清胆固醇的减少。V.不同实施方案详述

[0034] 在本申请中，除非另外指出，单数的使用包括复数。在本申请中，词语“一个”或“一种”指“至少一个”，除非特别相反指出。在本申请中，除非指出相反意思，“或”的使用指“和/或”。此外，术语“包含(including)”以及其它形式诸如“包括(includes)”和“含有(included)”的使用不是限定性的。而且，术语如“成分”或者“组分”涵盖包括一个单位的成分或组分和包含一个以上单位的成分或组分，除非另外特别指出。

[0035] 本文使用的章节标题仅用于组织目的，并且不理解为限定所描述的主题。本申请中引用的所有文件，或者文件的部分，包括但不限于，专利、专利申请、文章、书籍和论文都特别为了任何目的完整引入本文作为参考。对于引入的文献和相似材料的一种或多种对术语的定义与本申请中对该术语的定义相矛盾的情况，以本申请为准。A.一些定义

[0036] 术语“多肽”、“肽”、和“蛋白质”在本文中可互换使用，指氨基酸残基的聚合物。该术语应用于含有天然存在的氨基酸的氨基酸聚合物以及其中一个或多个氨基酸残基是对应的天然存在的氨基酸的人工化学类似物的氨基酸聚合物。氨基酸聚合物可以是任一长度。

[0037] 本文使用的术语“抗体”指完整抗体或者与该完整抗体竞争抗原结合的抗体片段。抗体片段包括，但不限于Fab、Fab’、F(ab′)2、Fv、scFv、Fd、双抗体和保留完整抗体的可变区的至少一部分的其他抗体片段。见例如，Hudson等(2003)自然医学(Nat.Med.)9：129-134。在一些实施方案中，通过完整抗体的酶促或者化学裂解产生抗体片段。在一些实施方案中，通过重组DNA技术产生抗体片段。

[0038] 术语“天然多肽”指天然存在的多肽。术语“天然抗体”指天然存在的抗体。

[0039] 术语“单克隆抗体”指来自特异性结合同一表位的基本上同质的抗体群体的抗体。在一些实施方案中，单克隆抗体由杂交瘤分泌。在一些此类实施方案中，根据本领域技术人员已知的一些方法产生杂交瘤。见例如，Kohler和Milstein(1975)自然(Nature)，256：
495-499)。在一些实施方案中，使用重组DNA方法(见例如，美国专利号4,816,567)产生单克隆抗体。在一些实施方案中，单克隆抗体指从噬菌体展示文库分离的抗体片段(见例如，Clackson等(1991)自然(Nature)352：624-628，和Marks等(1991)分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)222：581-597)。关于多种其他单克隆抗体产生技术，见例如，Harlow和Lane(1988)抗体：实验室手册(Antibody：A Laboratory Manual)(冷泉港实验室(Cold Spring HarborLaboratory)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，NY)。

[0040] “嵌合抗体”指由来自至少两种不同来源的组分组成的抗体。在一些实施方案中，嵌合抗体包含来自第一种物种的抗体的部分，其与另一分子，例如，来自第二种物种的抗体的部分融合。在一些此类实施方案中，嵌合抗体包含来自非人动物的抗体的部分，其与来自人的抗体的部分融合。在一些此类实施方案中，嵌合抗体包含来自来自非人动物的抗体的可变区的全部或者部分，其与来自人的抗体的恒定区融合。

[0041] “人源化”抗体指被修饰使得它更密切匹配(在氨基酸序列中)人抗体的非人抗体。从而，人源化抗体是一类嵌合抗体。在一些实施方案中，修饰非人抗体的可变区的抗原结合残基外的氨基酸残基。在一些实施方案中，通过将人抗体的互补性决定区(CDR)的全部或者部分用具有合乎需要的抗原结合特异性的另一抗体如非人抗体的CDR的全部或部分替换，而构建人源化抗体。在一些实施方案中，人源化抗体包含可变区，其中所有或基本上所有CDRs对应于非人抗体的CDRs，并且所有或基本上所有构架区(FRs)对应于人抗体的FRs。在一些此类实施方案中，人源化抗体还包含人抗体的恒定区(Fc)。

[0042] 术语“人抗体”指单克隆抗体，其含有人抗体序列并且不含有来自非人动物的抗体序列。在一些实施方案中，人抗体可以含有天然抗体中没有发现的合成序列。该术语不受到制备抗体的方式的限制。例如，在多种实施方案中，人抗体可以在转基因小鼠中，通过噬菌体展示、通过人B淋巴细胞或通过重组方法制备。

[0043] 术语“中和抗体”或者“中和...的抗体”指这样的抗体，其减小包含该抗体特异性结合的表位的多肽的至少一种活性。在一些实施方案中，中和抗体在体外和/或体内减小活性。

[0044] 术语“抗原结合部位”指能够特异性结合抗原的抗体的一部分。在一些实施方案中，通过一个或多个抗体可变区提供抗原结合位点。

[0045] 术语“表位”指能够特异性结合免疫球蛋白或者T细胞受体的任何多肽决定子。在一些实施方案中，表位是抗原的被抗体特异性结合的区域。在一些实施方案中，表位可以包括分子的化学活性表面基团如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基。在一些实施方案中，表位可以具有特定三维结构特征(例如，“构象”表位)和/或特定电荷特征。

[0046] 如果特定抗体特异性结合两个表位，将一个表位定义为与另一个表位“相同”。在一些实施方案中，具有不同一级氨基酸序列的多肽可以包含相同的表位。在一些实施方案中，相同的表位可以具有不同的一级氨基酸序列。如果不同的抗体竞争特异性结合同一表位，那么说它们结合该相同表位。

[0047] 当抗体优先识别蛋白质和/或大分子的复杂混合物中抗原时，该抗体“特异性结合”该抗原。在一些实施方案中，抗体包含特异性结合特定表位的抗原结合位点。在一些此类实施方案中，抗体能够结合不同的抗原，只要不同的抗原包含该特定表位。在一些情况下，例如，来自不同物种的同源蛋白质可以包含相同表位。在一些实施方案中，当解离常数(KD)≤1μM，在一些实施方案中，当解离常数(KD)≤100nM，在一些实施方案中，当解离常数(KD)≤10nM时，说抗体特异性结合抗原。

[0048] 术语“ANGPTL3”指具有来自任一脊椎动物或哺乳动物来源的氨基酸序列的血管生成素样蛋白3，除非另外指出，所述脊椎动物或哺乳动物来源包括，但不限于，人、牛、鸡、啮齿动物、小鼠、大鼠、猪、羊、灵长类动物、猴、和豚鼠。该术语还指天然ANGPTL3的片段和变体，其保持天然ANGPTL3的至少一种体内或体外活性。该术语包括ANGPTL3的全长未加工的前体形式以及翻译后切割信号肽得到的成熟形式以及血纤蛋白原结构域的蛋白水解加工得到的形式。在一些实施方案中，全长的、未加工的小鼠ANGPTL3具有SEQ ID NO：1中给出的氨基酸序列(Genbank登记号NP_038941)。在一些实施方案中，全长的、未加工的人ANGPTL4具有SEQ ID NO：3中给出的氨基酸序列(Genbank登记号NP_055310)。

[0049] 术语“Angptl3”指编码ANGPTL3的核酸。

[0050] 术语“LPL”指具有来自任一脊椎动物或哺乳动物来源的氨基酸序列的脂蛋白脂肪酶，所述脊椎动物或哺乳动物来源包括，但不限于，人、牛、鸡、啮齿动物、小鼠、大鼠、猪、羊、灵长类动物、猴、和豚鼠。在一些实施方案中，脂蛋白脂肪酶催化乳糜微粒和极低密度脂蛋白(VLDL)中的三酰基甘油水解成二酰基甘油和游离脂肪酸阴离子。在一些实施方案中，脂蛋白脂肪酶还能够水解二酰基甘油。

[0051] 术语“试剂”指化学化合物、化学化合物的混合物、生物大分子、或者由生物材料制备的提取物。

[0052] 术语“ANGPTL3的拮抗剂”指降低ANGPTL3活性的试剂。

[0053] 术语“ANGPTL3的激动剂”指增加ANGPTL3活性的试剂。

[0054] 术语“患者”包括人和动物受试者。在一些实施方案中，患者是哺乳动物。在一些此类实施方案中，患者是人。

[0055] 参考多肽的“片段”指来自参考多肽的任一部分的一段连续氨基酸序列。片段可以是小于参考多肽的长度的任一长度。

[0056] 参考多肽的“变体”指相对于参考多肽具有一个或多个氨基酸替代、缺失或插入的多肽。

[0057] “保守”氨基酸替代指将多肽中氨基酸用具有相似性质，如大小或电荷的另一氨基酸替代。在一些实施方案中，包含保守氨基酸替代的多肽保持未替代的多肽的至少一种活性。保守氨基酸替代可以包含非天然存在的氨基酸残基，它们典型地通过化学肽合成而不是通过生物系统中的合成掺入。这些非天然存在的氨基酸残基包括，但不限于肽模拟物和氨基酸部分的其他逆转或者颠倒的形式。

[0058] 天然存在的残基可以基于共同的侧链性质分类：1)疏水的：正亮氨酸，Met，Ala，Val，Leu，Ile；2)中性亲水的：Cys，Ser，Thr，Asn，Gln；3)酸性的：Asp，Glu；4)碱性的：His，Lys，Arg；5)影响链取向的残基：Gly，Pro；和6)芳香族：Trp，Tyr，Phe。

[0059] 例如，非保守替代可以涉及这些类别之一的成员交换另一类别的成员。此类替代的残基可以引入人抗体的与非人抗体同源的区域中，或者引入所述分子的非同源区中。

[0060] 根据一些实施方案，在进行替代中，可以考虑氨基酸的亲水指数。每个氨基酸基于它的疏水和电荷特征分配一个亲水指数。它们为：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。

[0061] 本领域中理解，在一些情况下，亲水氨基酸指数在赋予蛋白质的相互作用生物功能中的重要性。Kyte等，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)，157：105-131(1982)。理解在一些情况下，某些氨基酸可以替代具有相似亲水指数或者得分的其他氨基酸并且仍然保留相似的生物活性。在基于亲水指数进行改变时，在一些实施方案中，包括亲水指数在±2内的氨基酸替代。在一些实施方案中，包括亲水指数在±1内的氨基酸替代，在一些实施方案中，包括亲水指数在±0.5内的氨基酸替代。

[0062] 本领域中还理解可以基于亲水性有效进行相似氨基酸的替代，尤其当由此产生的生物学功能蛋白质或者肽预期用于免疫学实施方案时，如本发明中的情况。在一些实施方案中，蛋白质的最大的局部平均亲水性受到它的相邻氨基酸的亲水性的控制，与它的免疫原性和抗原性，即与蛋白质的生物学性质相关。

[0063] 已经为这些氨基酸残基分配了下面的亲水指数：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)和色氨酸(-3.4)。在基于类似亲水性值进行改变时，在一些实施方案中，包括亲水性值在±2内的氨基酸替代，在一些实施方案中，包括亲水性值在±1内的氨基酸替代，在一些实施方案中，包括亲水性值在±0.5内的氨基酸替代。还可以基于亲水性从一级氨基酸序列鉴定表位。这些区域已被称作“表位核心区”。

[0064] 示例性氨基酸替代在表1中给出。表1：氨基酸替代最初残基 示例性替代
Ala Val，Leu，Ile
Arg Lys，Gln，Asn
Asn Gln
Asp Glu
Cys Ser，Ala
Gln Asn
Glu Asp
Gly Pro，Ala
His Asn，Gln，Lys，Arg
Ile Leu，Val，Met，Ala，
Phe，正亮氨酸
Leu 正亮氨酸，Ile，
Val，Met，Ala，Phe
Lys Arg，1，4二氨基-丁酸，Gln，
Asn
Met Leu，Phe，Ile
Phe Leu，Val，Ile，Ala，
Tyr
Pro Ala
Ser Thr，Ala，Cys
Thr Ser
Trp Tyr，Phe
Tyr Trp，Phe，Thr，Ser
Val Ile，Met，Leu，Phe，
Ala，正亮氨酸

[0065] 技术人员使用公知的技术将能够确定如本文给出的多肽的合适的变体。在一些实施方案中，本领域技术人员通过靶向认为对于活性不重要的区域，可以鉴定分子的可以被改变而不破坏活性的合适区域。在一些实施方案中，可以鉴定分子的在相似多肽中保守的残基和部分。在一些实施方案中，甚至对于生物活性或者结构重要的区域也可以进行保守氨基酸替代而不破坏生物活性或不会不利地影响多肽结构。

[0066] 此外，在一些实施方案中，本领域技术人员可以考虑鉴定相似多肽中对于活性或结构重要的残基的结构-功能研究。考虑到这种比较，在一些实施方案中，可以预测蛋白质中对应于在相似蛋白质中对于活性或结构重要的氨基酸残基的氨基酸残基的重要性。在一些实施方案中，本领域技术人员可以为此类预测的重要氨基酸残基选择化学上相似的氨基酸替代。

[0067] 在一些实施方案中，本领域技术人员还可以关于相似多肽中的结构分析三维结构和氨基酸序列。在一些实施方案中，考虑到这种信息，本领域技术人员可以预测抗体的氨基酸残基关于其三维结构的对比。在一些实施方案中，本领域技术人员可以选择不对预测位于蛋白质表面上的氨基酸残基进行根本改变，因为此类残基可能参与与其他分子的重要的相互作用。此外，在一些实施方案中，本领域技术人员可以产生测试变体，其在每个合乎需要的氨基酸残基上含有一个氨基酸替代。在一些实施方案中，然后可以使用本领域技术人员已知的活性测定法筛选变体。在一些实施方案中，此类变体可以用于收集关于合适的变体的信息。例如，在一些实施方案中，如果发现对特定氨基酸残基的改变导致破坏的、不希望的降低的或者不合适的活性，那么可以避免具有此类改变的变体。换句话说，在一些实施方案中，基于从此类常规实验收集的信息，本领域技术人员可以容易确定这样的氨基酸，其中应该避免单独的进一步替代或者还避免其他突变。

[0068] 许多科学出版物致力于预测二级结构。见，例如，Moult J.，现代生物技术 观 点(Curr.Op.in Biotech.)，(1996)7(4)：422-427；Chou 等，(1974)生 物 化 学(Biochemistry)，13(2)：222-245；Chou 等(1974) 生 物 化 学 (Biochemistry)113(2)：211-222；Chou等(1978)；酶学和分子生物学相关领域的进展(Adv.Enzymol.Relat.Areas Mol.Biol.)47：45-148；Chou等(1976)生物化学年度综述(Ann.Rev.Biochem.)47：
251-276；和Chou等(1979)生物物理学杂志(Biophys.J.)26：367-384。此外，当前，可以用计算机程序辅助预测二级结构。预测二级结构的一种方法是基于同源性建模。例如，具有大于30％的序列同一性或者大于40％的相似性的两个多肽或蛋白质通常具有相似的结构拓扑学。蛋白质结构数据库(PDB)的增长已经提供了对二级结构，包括多肽结构内潜在的折叠数的增强可预测性。见例如，Holm等(1999)核酸研究(Nucl.Acid.Res.)27(1)：244-247。
已经提出(Brenner等(1997)现代结构生物学观点(Curr.Op.Struct.Biol.)7(3)：
369-376)在给定多肽或蛋白质中存在有限数目的折叠并且一旦确定了临界数目的结构，那么结构预测将变得明显更准确。

[0069] 预测二级结构的其他方法包括″蛋白质结构预测线索法(threading)″(见例如，Jones，D.(1997)现代结构生物学观点(Curr.Op.Struct.Biol.)7(3)：377-387；Sippl等(1996)结构(Structure)4(1)：15-19)，″模式分析(见例如，Bowie等，(1991)科学(Science)253：164-170；Gribskov等，(1990)酶学方法(Meth.Enzym.)183：146-159；Gribskov等(1987)美国国家科学院学报(Proc.Nat.Acad.Sci.USA)84(13)：4355-4358)，和″进化连锁″(见例如，Holm等(1999)核酸研究(Nucl.Acid.Res.)27(1)：244-247；和Brenner等(1997)现代结构生物学观点(Curr.Op.Struct.Biol.)7(3)：369-376(1997))。

[0070] 在一些实施方案中，参考抗体的变体包括糖基化变体，其中已经相对于参考抗体的氨基酸序列改变了糖基化位点的数目和/或类型。在一些实施方案中，多肽的变体包含相对于天然多肽的或多或少数目的N-连接的糖基化位点。N-连接的糖基化位点的特征是序列Asn-X-Ser或Asn-X-Thr，其中表示为X的氨基酸残基可以是除了脯氨酸外的任一氨基酸残基。为了产生该序列的氨基酸残基替代为加入N-连接的糖链提供了潜在的新位点。备选地，除去该序列的替代将除去存在的N-连接的糖链。在一些实施方案中，提供了N-连接的糖链的重排，其中除去了一个或多个N-连接的糖基化位点(通常天然存在的那些)并且产生了一个或多个新的N-连接的位点。示例性抗体变体包括半胱氨酸变体，其中相对于参考抗体的氨基酸序列，缺失了一个或多个半胱氨酸残基或者用另一氨基酸(例如，丝氨酸)替代。在一些实施方案中，当抗体必须再折叠成生物活性构象时，如分离不溶性包含体后，半胱氨酸变体可以是有用的。在一些实施方案中，半胱氨酸变体具有比天然多肽更少的半胱氨酸残基。在一些实施方案中，半胱氨酸变体具有偶数个半胱氨酸残基以使不配对半胱氨酸引起的相互作用最小化。

[0071] 根据一些实施方案，氨基酸替代为这样的氨基酸替代：(1)减小对蛋白水解的敏感性，(2)减小对氧化的敏感性，(3)改变形成蛋白质复合体的结合亲和性，(4)改变结合亲和性，和/或(4)对此类多肽赋予或者修饰其他理化或者功能性质。根据一些实施方案，可以在天然存在的序列(在一些实施方案中，在多肽的形成分子间接触的结构域外部分中)中进行单个或多个氨基酸替代(在一些实施方案中，保守氨基酸替代)。在一些实施方案中，保守氨基酸替代通常可以不实质改变参考序列的结构特征(例如，在一些实施方案中，置换氨基酸将不倾向于断裂在参考序列中存在的螺旋，或者破坏表征参考序列的其他类型的二级结构)。某些本领域中公知的多肽二级和三级结构的实例在例如蛋白质、结构和分子原则(Proteins，Structures and Molecular Principles)(Creighton编，W.H.Freeman和Company，纽约(1984))；蛋白质结构入门(Introduction to ProteinStructure)(C.Branden和J.Tooze编，Garland Publishing，纽约，N.Y.(1991))；和Thornton，J.M.等(1991)自然(Nature)354：105-106中描述。

[0072] 关于核酸序列，“百分比同一性”或者“％同一性”指使用基本局部对比搜索工具(Basic Local Alignment Search Tool)(BLAST)引擎，在比对的至少两个多核苷酸序列之间相同核苷酸的百分比。见Tatusova等(1999)FEMS微生物学通讯(FEMS Microbiol Lett.)174：247-250。BLAST引擎(2.2.10版)由国家生物技术信息中心(National Center forBiotechnology Information)(NCBI)，Bethesda，MD向公众提供。为了比对两个多核苷酸序列，使用“Blast 2 Sequences”工具，其使用“blastn”程序，使用如下的设置为默认值的参数：矩阵(Matrix)：不适用(not applicable)匹配得分(Reward for match)：1错配罚分：(Penalty for mismatch)：-2打开缺口(Open gap)：5罚分延伸缺口(Extension gap)：2罚分Gap_x dropoff：50期望值(Expect)：10.0字长(Word size)：11滤器(Filter)：打开(on)

[0073] 关于多肽序列，“百分比同一性”或者“％同一性”指使用基础局部对比搜索工具(BLAST)引擎比对的至少两个多肽序列之间相同氨基酸的百分比。见Tatusova等(1999)FEMS微生物学通讯(FEMSMicrobiol Lett.)174：247-250。BLAST引擎(2.2.10版)由国家生物技术信息中心(NCBI)，Bethesda，MD向公众提供。为了比对两个多肽序列，使用“Blast 2 Sequences”工具，其使用“blastp”程序，使用如下的设置为默认值的参数：矩阵：BLOSUM62打开缺口：11罚分延伸缺口：1罚分Gap_x dropoff：50期望值：10.0字长：3滤器：打开

[0074] 术语“有效剂量”或者“有效量”指导致患者中症状减轻或者导致需要的生物学结果的试剂，例如中和抗体的量。在一些实施方案中，有效剂量或者有效量足以减小ANGPTL3的至少一种活性。在一些实施方案中，如下V.G部分所述确定有效剂量或者有效量。

[0075] 除非另外指出，术语“治疗”包括治疗和预防/防止性措施。需要治疗的那些包括但不限于，已经患有特定疾病或者病症的个体以及处于获得特定疾病或者病症的危险中的个体(例如，需要预防/防止性措施的那些)。术语“治疗”指为了治疗和/或预防/防止性目的，对患者施用试剂。

[0076] “治疗剂”指可以体内施用以引起治疗和/或预防/防止性效果的试剂。

[0077] “治疗抗体”指可以体内施用以引起治疗和/或预防/防止性效果的抗体。

[0078] 术语“分离的核酸”和“分离的多核苷酸”可以互换使用。分离的多核苷酸的实例包括，但不限于，基因组DNA、RNA、cDNA、合成DNA或RNA或其一些组合。“分离的多核苷酸”(1)不与其中天然存在该“分离的多核苷酸”的多核苷酸的全部或部分结合，(2)连接于它天然不相连的多核苷酸，或(3)天然地，不作为更大的序列的部分存在。B.天然抗体和某些抗体片段的结构

[0079] 天然抗体通常具有四聚体结构。四聚体通常包含两个相同对的多肽链，每对具有一条轻链(在一些实施方案中，约25kDa)和一条重链(在一些实施方案中，约50-70kDa)。在天然抗体中，重链包含可变区VH，和三个恒定区CH1、CH2和CH3。VH结构域在重链的氨基末端，CH3结构域在羧基末端。在天然抗体中，轻链包含可变区VL，和恒定区CL。轻链的可变区在轻链的氨基末端。在天然抗体中，每条轻/重链对的可变区通常形成抗原结合位点。
恒定区通常负责效应子功能。

[0080] 通常将天然人轻链分类成κ和λ轻链。天然人重链通常分类成μ、δ、γ、α或ε，并将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG具有亚类，包括但不限于，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。IgM具有亚类，包括但不限于，IgM1和IgM2。IgA具有亚类，包括但不限于，IgA1和IgA2。在天然人轻链和重链中，可变区和恒定区通常通过约12或者更多氨基酸的“J”区连接，重链还包括约10或更多氨基酸的“D”区。见例如，基础免疫学(Fundamental Immunology)(1989)第7章(Paul，W.编，第2版.Raven出版社，N.Y.)。

[0081] 在天然抗体中，可变区通常显示出相同的一般结构，其中相对保守的构架区(FR)通过三个高变区连接，这些高变区也称作互补性决定区(CDR)。来自每对的两条链的CDR通常与构架区对比，其可以使得结合特定表位。从N-末端到C-末端，轻链和重链可变区都通常包含结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链上的CDRs称作H1、H2和H3，而轻链上的CDRs通常称作L1、L2和L3。通常，CDR3是抗原结合部位中分子多样性的最大的来源。例如，在一些情况中，H3可以短至两个氨基酸残基或者大于26。通常根据Kabat等(1991)免疫学目的蛋白序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)(国家健康学会(National Institutes of Health)，公开号91-3242，卷1-3，Bethesda，MD)；Chothia，C.，和Lesk，A.M.(1987)分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)196：901-917；或Chothia，C.等自然(Nature)342：878-883(1989)的定义将氨基酸分配给每个结构域。在本申请中，除非另外指出，术语“CDR”指来自轻链或重链的CDR。

[0082] “Fab”片段包含一条轻链以及一条重链的CH1和可变区。Fab分子的重链不能与另一重链分子形成二硫键。“Fab’”片段包含一条轻链和一条重链，该重链包含另外的恒定区，其在CH1和CH2结构域之间延伸。可以在Fab’片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成“F(ab’)2“分子。

[0083] “Fv”片段包含来自重链和轻链的可变区，但是缺少恒定区。单链Fv(scFv)片段包含重链和轻链可变区，它们通过柔性接头连接形成具有抗原结合区的一条多肽链。示例性单链抗体在WO 88/01649和美国专利号4,946,778和5,260,203中详细讨论。在一些情况中，单可变区(即，重链可变区或轻链可变区)可以具有识别并结合抗原的能力。

[0084] 本文使用的术语“重链”指多肽，其包含足够的重链可变区序列以单独或者与轻链组合赋予抗原特异性。

[0085] 本文使用的术语“轻链”指多肽，其包含足够的轻链可变区序列以单独或者与重链组合赋予抗原特异性。C.某些抗体

[0086] 在一些实施方案中，提供了特异性结合ANGPTL3的单克隆抗体。在一些此类实施方案中，单克隆抗体是中和性单克隆抗体，其减小体内和/或体外ANGPTL3的至少一种活性。

[0087] 在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体降低了体内至少一种血清脂质水平。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体降低了体内血清甘油三酯水平。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体减少了体内总胆固醇水平。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体降低了体内游离脂肪酸(FFA)水平。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体降低了体内那些水平中的至少两种。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体降低了体内那些水平中的至少三种。

[0088] 在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体在体内降低了LDLr敲除小鼠中的血清甘油三酯。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体在体内降低了LDLr敲除小鼠中的总胆固醇。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体在体内降低了ApoE敲除小鼠中的血清甘油三酯。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体在体内降低了ApoE敲除小鼠中的总胆固醇。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体在体内降低了db/db小鼠中血清甘油三酯。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体在体内降低了db/db小鼠中的总胆固醇。

[0089] 在一些实施方案中，提供了特异性结合小鼠ANGPTL3的中和性单克隆抗体。在一些实施方案中，提供了特异性结合人ANGPTL3的中和性单克隆抗体。在一些实施方案中，提供了特异性结合来自不同物种的ANGPTL3中相同表位的中和性单克隆抗体(即，显示出交叉反应性的抗体)。在一些此类实施方案中，所述抗体特异性结合小鼠ANGPTL3和人ANGPTL3。

[0090] 在一些实施方案中，提供了特异性结合ANGPTL3的N-末端卷曲螺旋结构域内的表位的中和性单克隆抗体。在一些实施方案中，提供了特异性结合小鼠ANGPTL3的N-末端卷曲螺旋结构域内的表位的中和性单克隆抗体。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合小鼠ANGPTL3从SEQ ID NO：1残基17到残基240的区域(SEQ ID NO：59)内表位。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合小鼠ANGPTL3从SEQ ID NO：1残基32到残基57的SP1区域(SEQ ID NO：9)。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合小鼠ANGPTL3的包括SEQ IDNO：1的氨基酸34-37和40的SP1区域内的表位(SEQ ID NO：9的氨基酸3-6和9)。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合小鼠ANGPTL3的包括SEQ ID NO：1的氨基酸33-37和40的SP1区域内的表位(SEQ ID NO：9的氨基酸2-6和
9)。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合小鼠ANGPTL3的包括SEQ ID NO：1的氨基酸34-37、40、和42的SP1区域内的表位(SEQ ID NO：9的氨基酸3-6、9、和11)。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合小鼠ANGPTL3的包括SEQID NO：1的氨基酸
34-37和40-42的SP1区域内的表位(SEQ ID NO：9的氨基酸3-6和9-11)。

[0091] 在一些实施方案中，提供了特异性结合人ANGPTL3的N-末端卷曲螺旋结构域内的表位的中和性单克隆抗体。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合人ANGPTL3的从SEQ ID NO：3的残基20到残基143的区域(SEQ ID NO：60)内表位。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合人ANGPTL3从SEQ ID NO：3残基32到残基57的SP1区域(SEQ ID NO：10)。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合小鼠ANGPTL3的包括SEQ ID NO：3的氨基酸34-37和40的SP1区域内的表位(SEQ ID NO：10的氨基酸3-6和9)。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合小鼠ANGPTL3的包括SEQ ID NO：3的氨基酸33-37和40的SP1区域内的表位(SEQ ID NO：10的氨基酸2-6和9)。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合小鼠ANGPTL3的包括SEQ IDNO：3的氨基酸34-37、40、和42的SP1区域内的表位(SEQ ID NO：10的氨基酸3-6、9、和11)。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体特异性结合小鼠ANGPTL3的包括SEQ ID NO：3的氨基酸34-37和40-42的SP1区域内的表位(SEQ ID NO：10的氨基酸3-6和9-11)。

[0092] 在不同的实施方案中，中和性单克隆抗体结合具有SEQ IDNO：9的氨基酸序列的肽的亲和性是该中和性单克隆抗体结合具有SEQID NO：84，SEQ ID NO：85，SEQ ID NO：86，SEQ ID NO：87，SEQ ID NO：88，SEQ ID NO：90，和SEQ ID NO：92中任一氨基酸序列的肽的亲和性的至少2-倍、至少3-倍、至少4-倍、至少5-倍、至少7-倍、或至少10-倍。在不同的实施方案中，中和性单克隆抗体结合具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的肽的亲和性是该中和性单克隆抗体分别结合SEQ ID NO：84，SEQ ID NO：85，SEQ ID NO：86，SEQ ID NO：87，SEQ ID NO：88，SEQ IDNO：90，和SEQ ID NO：92的亲和性的至少2-倍、至少3-倍、至少
4-倍、至少5-倍、至少7-倍、或至少10-倍。在一些实施方案中，如实施例H(2)中所述地确定亲和性。

[0093] 在一些实施方案中，中和性单克隆抗体是非人单克隆抗体。在一些此类实施方案中，中和性单克隆抗体是啮齿动物单克隆抗体。在一些此类实施方案中，中和性单克隆抗体是小鼠单克隆抗体。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体是嵌合单克隆抗体。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体是人源化单克隆抗体。在一些实施方案中，中和性单克隆抗体是人单克隆抗体。在一些实施方案中，嵌合的、人源化和/或人单克隆抗体用作人中的治疗抗体。

[0094] 在一些实施方案中，中和性单克隆抗体是抗体片段。示例性抗体片段包括，但不限于，Fab、Fab’、F(ab′)2、Fv、scFv、Fd、双抗体，和其他抗体片段。

[0095] 在不同的实施方案中，中和性单克隆抗体以小于1μM，小于500nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于75nM，小于50nM，小于30nM，小于25nM，小于20nM，小于15nM，小于10nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，或小于2nM的KD结合人ANGPTL3。在不同的实施方案中，中和性单克隆抗体以小于1μM，小于500nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于75nM，小于50nM，小于30nM，小于25nM，小于20nM，小于15nM，小于10nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，或小于2nM的KD结合人SP1肽。在不同的实施方案中，中和性单克隆抗体以小于
1μM，小于500nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于75nM，小于50nM，小于30nM，小于25nM，小于20nM，小于15nM，小于10nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，或小于2nM的KD结合具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的肽。在不同的实施方案中，中和性单克隆抗体以小于
1μM，小于500nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于75nM，小于50nM，小于30nM，小于25nM，小于20nM，小于15nM，小于10nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，或小于2nM的KD结合具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列的肽。

[0096] 在不同的实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体结合小鼠ANGPTL3(SEQ ID NO：1)，其具有是其结合小鼠ANGPTL4(SEQID NO：107)的至少10-倍的亲和性，至少15-倍的亲和性，至少20-倍的亲和性，至少25-倍的亲和性，至少30-倍的亲和性，至少40-倍的亲和性，至少50-倍的亲和性，至少100-倍的亲和性，或至少200-倍的亲和性。在不同的实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体结合人ANGPTL3(SEQ ID NO：3)，其具有是其结合人ANGPTL4(SEQ ID NO：108)的至少10-倍的亲和性，至少15-倍的亲和性，至少20-倍的亲和性，至少25-倍的亲和性，至少30-倍的亲和性，至少40-倍的亲和性，至少50-倍的亲和性，至少100-倍的亲和性，或至少200-倍的亲和性。在不同的实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体结合具有小鼠ANGPTL3 SP1区氨基酸序列(SEQ ID NO：9)的肽，其具有是其结合具有小鼠ANGPTL4 SP1区氨基酸序列(SEQ ID NO：109)的肽的至少10-倍的亲和性，至少15-倍的亲和性，至少20-倍的亲和性，至少25-倍的亲和性，至少30-倍的亲和性，至少40-倍的亲和性，至少50-倍的亲和性，至少100-倍的亲和性，或至少200-倍的亲和性。在不同的实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体结合具有人ANGPTL3 SP1区氨基酸序列(SEQ ID NO：10)的肽，其具有是其结合具有人ANGPTL4 SP1区氨基酸序列(SEQ ID NO：110)的肽的至少10-倍的亲和性，至少15-倍的亲和性，至少20-倍的亲和性，至少25-倍的亲和性，至少30-倍的亲和性，至少40-倍的亲和性，至少50-倍的亲和性，至少100-倍的亲和性，或至少200-倍的亲和性。

[0097] 提供了示例性中和性单克隆抗体，称作4.7.1，4.8.3，4.9.1，1.315.1，5.35，和5.50。抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，5.35，和5.50结合小鼠ANGPTL3或人ANGPTL3的残基32到57内的表位(SEQ ID NO：9和10)。在一些实施方案中，抗体4.7.1和4.9.1结合小鼠ANGPTL3或人ANGPTL3的包括SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3的氨基酸33-37和40的SP1区内的表位(SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸2-6和9)。在一些实施方案中，抗体5.35和5.50结合小鼠ANGPTL3或人ANGPTL3的包括SEQID NO：2或SEQ ID NO：3的氨基酸序列34-37和40-42的SP1区内的表位(SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸3-6和9-11)。在一些实施方案中，抗体4.8.3结合小鼠ANGPTL3或人ANGPTL3的包括SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3的氨基酸34-37、40、和42的SP1区内的表位(SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸3-6、9、和11)。抗体1.315.1结合小鼠ANGPTL3的残基42-116(SEQ ID NO：61)内的表位。

[0098] 抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，1.315.1，5.35，和5.50中和至少一种ANGPTL3的活性。因此，将预期结合与抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，1.315.1，5.35，和5.50中的至少一种结合的表位(例如，在人或者小鼠ANGPTL3中)的抗体也具有中和活性。某些抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体结合选自SEQ ID NOs：9，10，12，13，和61中的一种或多种肽。某些抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体结合选自SEQ ID NOs：9和10中的一种或多种肽。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体结合具有SEQ ID NO：61的序列的肽。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性单克隆抗体结合具有SEQ ID NO：12的序列的肽和具有SEQ ID NO：13的序列的肽。

[0099] 在一些实施方案中，提供了与单克隆抗体4.7.1结合相同表位的中和性单克隆抗体。在一些实施方案中，提供了与单克隆抗体4.8.3结合相同表位的中和性单克隆抗体。在一些实施方案中，提供了与单克隆抗体4.9.1结合相同表位的中和性单克隆抗体。在一些实施方案中，提供了与单克隆抗体5.35结合相同表位的中和性单克隆抗体。在一些实施方案中，提供了与单克隆抗体5.50结合相同表位的中和性单克隆抗体。在一些实施方案中，提供了与单克隆抗体1.315.1结合相同表位的中和性单克隆抗体。

[0100] 某些中和抗体包含重链，该重链包含如SEQ ID NO：20给出的氨基酸序列。某些中和抗体包含重链，该重链包含如SEQ ID NO：22给出的氨基酸序列。某些中和抗体包含重链，该重链包含如SEQ ID NO：24给出的氨基酸序列。某些中和抗体包含轻链，该轻链包含如SEQ ID NO：28给出的氨基酸序列。某些中和抗体包含轻链，该轻链包含如SEQ ID NO：30给出的氨基酸序列。某些中和抗体包含轻链，该轻链包含如SEQ ID NO：32给出的氨基酸序列。

[0101] 某些中和抗体包含重链和轻链，所述重链包含如SEQ ID NO：20给出的氨基酸序列，所述轻链包含如SEQ ID NO：28给出的氨基酸序列。某些中和抗体包含重链和轻链，所述重链包含如SEQ ID NO：22给出的氨基酸序列，所述轻链包含如SEQ ID NO：30给出的氨基酸序列。某些中和抗体包含重链和轻链，所述重链包含如SEQ ID NO：24给出的氨基酸序列，所述轻链包含如SEQ ID NO：32给出的氨基酸序列。1.嵌合的和人源化单克隆抗体

[0102] 在一些实施方案中，非人抗体是嵌合的。在一些实施方案中，特异性结合人ANGPTL3的小鼠单克隆抗体是嵌合的。提供了制备嵌合抗体的某些示例性方法，例如在Morrison等(1984)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)81：6851-6855；Neuberger等(1984)自然(Nature)312：604-608；Takeda等(1985)自然(Nature)314：
452-454；和美国专利号6,075,181和5,877,397中提供。

[0103] 在一些实施方案中，非人抗体是“人源化的”。在一些实施方案中，特异性结合人ANGPTL3的小鼠单克隆抗体是人源化的。在一些实施方案中，针对小鼠ANGPTL3产生但是与人ANGPTL3特异性结合(例如，交叉反应)的小鼠单克隆抗体是人源化的。在一些实施方案中，人源化抗体保留它们的结合特异性并且当施用于人时具有减小的免疫原性(例如，减小的人抗小鼠抗体(HAMA)应答)。在一些实施方案中，通过如下详述的包括但不限于CDR移植(CDR grafting)和人工程化的方法实现了人源化。

[0104] 在人源化抗体的一些实施方案中，将来自具有理想的结合特异性的抗体(“供体”抗体)的轻链和重链可变区的一个或多个互补性决定区(CDRs)移植到“受体”抗体中的人构架区(FRs)。示例性CDR移植在例如美国专利号6,180,370，5,693,762，5,693,761，5,585,089，和5,530,101；Queen等(1989)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)86：10029-10033中描述。在一些实施方案中，将来自轻链和重链可变区的一个或多个CDRs移植到受体抗体的共有人FRs上。为了产生共有人FRs，在一些实施方案中，将来自一些人重链或轻链氨基酸序列的FRs进行比对以鉴定共有氨基酸序列。

[0105] 在一些实施方案中，用来自供体抗体的FR氨基酸替换受体抗体中某些FR氨基酸。在一些此类实施方案中，来自供体抗体的FR氨基酸是促进供体抗体对靶抗原的亲和性的氨基酸。见，例如，美国专利号6,180,370，5,693,762，5,693,761，5,585,089，和5,530,101；Queen等(1989)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)86：10029-10033。在一些实施方案中，用计算机程序对供体和/或受体抗体建模以鉴定可能涉及结合抗原和/或对抗原结合位点的结构有贡献的残基，从而辅助选择将在供体抗体中被替换的残基如FR残基。

[0106] 在一些实施方案中，将来自供体抗体的CDRs移植到包含人恒定区的受体抗体上。在一些此类实施方案中，还将FRs移植到受体上。在一些实施方案中，来自供体抗体的CDRs来自单链Fv抗体。在一些实施方案中，来自供体抗体的FRs来自单链Fv抗体。在一些实施方案中，进一步修饰(例如，通过氨基酸替代、缺失或插入)人源化抗体中移植的CDRs以增加该人源化抗体对靶抗原的亲和性。在一些实施方案中，进一步修饰(例如，通过氨基酸替代、缺失或插入)人源化抗体中移植的FRs以增加该人源化抗体对靶抗原的亲和性。

[0107] 在一些实施方案中，可以用“人工程化”方法人源化非人抗体。见例如，美国专利号5,766,886和5,869,619。在人工程化的一些实施方案中，关于抗体可变结构域的结构的信息(例如，从晶体结构和/或分子建模得到的信息)用于评估可变区中的给定氨基酸残基(a)参与抗原结合，(b)暴露于抗体表面上(即，可接近溶剂)，或者(c)埋在抗体可变区内(即，参与保持可变区的结构)的可能性。此外，在一些实施方案中，产生人可变区共有序列来鉴定在人可变区中保守的残基。在一些实施方案中，该信息提供了关于是否应该替代非人抗体的可变区中氨基酸残基的教导。

[0108] 某些中和性抗体包含重链，该重链包含4.7.1的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含重链，该重链包含4.8.3的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含重链，该重链包含4.9.1的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含重链，该重链包含5.35的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含重链，该重链包含5.50的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含重链，该重链包含1.315.1的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含重链，该重链包含4.7.1的至少一个CDR。某些中和性抗体包含重链，该重链包含4.8.3的至少一个CDR。某些中和性抗体包含重链，该重链包含4.9.1的至少一个CDR。某些中和性抗体包含重链，该重链包含5.35的至少一个CDR。某些中和性抗体包含重链，该重链包含5.50的至少一个CDR。某些中和性抗体包含重链，该重链包含1.315.1的至少一个CDR。某些中和性抗体包含重链，该重链包含4.7.1的至少两个CDRs。某些中和性抗体包含重链，该重链包含4.8.3的至少两个CDRs。某些中和性抗体包含重链，该重链包含4.9.1的至少两个CDRs。某些中和性抗体包含重链，该重链包含5.35的至少两个CDRs。某些中和性抗体包含重链，该重链包含5.50的至少两个CDRs。某些中和性抗体包含重链，该重链包含1.315.1的至少两个CDRs。

[0109] 某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含4.7.1的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含4.8.3的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含4.9.1的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含5.35的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含5.50的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含1.315.1的CDR1、CDR2和CDR3。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含4.7.1的至少一个CDR。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含4.8.3的至少一个CDR。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含4.9.1的至少一个CDR。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含5.35的至少一个CDR。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含5.50的至少一个CDR。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含1.315.1的至少一个CDR。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含4.7.1的至少两个CDRs。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含4.8.3的至少两个CDRs。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含4.9.1的至少两个CDRs。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含5.35的至少两个CDRs。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含5.50的至少两个CDRs。某些中和性抗体包含轻链，该轻链包含1.315.1的至少两个CDRs。2.抗体同种型

[0110] 在一些实施方案中，抗ANGPTL3的抗体是选自IgM、IgD、IgG、IgA、和IgE的任一同种型。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的抗体是IgG同种型。在一些此类实施方案中，抗体是亚类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的抗体。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的抗体是IgM同种型的抗体。在一些此类实施方案中，抗体是亚类IgM1或IgM2的抗体。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的抗体是IgA同种型的抗体。在一些此类实施方案中，抗体是亚类IgA1或IgA2的抗体。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的抗体包含人κ轻链和人IgG1或IgG2重链。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的抗体包含小鼠κ轻链和小鼠IgG1或IgG2重链。3.经修饰的抗体

[0111] 在多种实施方案中，修饰抗体以改变它的一种或多种性质。在一些实施方案中，经修饰的抗体可以相对于未经修饰的抗体具有优点，如增加的稳定性、延长的循环时间，或者降低的免疫原性(见例如，美国专利号4,179,337)。在一些实施方案中，通过将抗体连接到非蛋白质部分对其修饰。在一些实施方案中，通过改变抗体的糖基化状态，如通过改变抗体上糖链的数目、类型、连接和/或位置修饰该抗体。在一些实施方案中，改变抗体使得它不是糖基化的。

[0112] 在一些实施方案中，将一个或多个化学部分连接到抗体的氨基酸主链和/或糖残基。将化学部分连接到抗体的某些示例性方法是本领域技术人员已知的。此类方法包括，但不限于，酰化反应或烷基化反应。见例如，EP 0 401 384；Malik等(1992)，实验血液学(Exp.Hematol.)，20：1028-1035；Francis(1992)，聚焦生长因子(Focus on Growth Factors)，3(2)：4-10，Mediscript 出 版，Mountain Court，Friern Bamet Lane，伦 敦N20OLD，UK；EP 0 154 316；EP 0 401 384；WO 92/16221；WO 95/34326；WO95/13312；WO96/11953；WO 96/19459和WO 96/19459。在一些实施方案中，用这些反应中任一种产生在它的氨基末端化学修饰的抗体。

[0113] 在一些实施方案中，抗体连接到可检测的标记，如酶的、荧光的、同位素的或者亲和标记。在一些此类实施方案中，可检测的标记允许检测或分离抗体。在一些实施方案中，可检测的标记允许检测抗体结合的抗原。

[0114] 在一些实施方案中，通过将抗体连接到一种或多种聚合物进行修饰。在一些实施方案中，抗体连接到一种或多种水溶性聚合物。在一些此类实施方案中，连接到水溶性聚合物减小了抗体将在水性环境如生理环境中沉淀的可能性。在一些实施方案中，将治疗性抗体连接到水溶性聚合物。在一些实施方案中，本领域技术人员可以基于如下考虑选择合适的水溶性聚合物，这些考虑包括但不限于，该聚合物/抗体缀合物是否将用于治疗患者，和如果是，该抗体的药理学模式(例如，半衰期、剂量、活性、抗原性和/或其他因素)。

[0115] 某些示例性的临床上可接受的水溶性聚合物包括但不限于，聚乙二醇(PEG)；聚乙二醇丙醛；乙二醇/丙二醇的共聚物；单甲氧基-聚乙二醇；羧甲基纤维素；葡聚糖；聚乙烯醇(PVA)；聚乙烯吡咯烷酮；聚-1，3-二氧戊环；聚-1，3，6-三噁烷；乙烯/马来酸酐共聚物；聚-β-氨基酸(均聚物或者随机共聚物)；聚(正乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇；聚丙二醇均聚物(PPG)和其他聚环氧烷；聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物；聚氧乙烯化多元醇(POG)(例如，甘油)和其他聚氧乙烯化多元醇；聚氧乙烯化山梨糖醇、聚氧乙烯化葡萄糖、colonic酸或其他糖类聚合物；和聚蔗糖、葡聚糖或其混合物。某些示例性PEGs包括，但不限于本领域中已知用于抗体修饰的某些形式，如单-(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-PEG。在一些实施方案中，PEG丙醛由于其在水中的稳定性可以在生产中具有优点。

[0116] 在一些实施方案中，水溶性聚合物为任一分子量。在一些实施方案中，水溶性聚合物为分枝或未分枝的。在一些实施方案中，水溶性聚合物具有约2kDa到约100kDa的平均分子量，包括该范围终点之间的所有点。在一些实施方案中，水溶性聚合物具有约5kDa到约40kDa的平均分子量。在一些实施方案中，水溶性聚合物具有约10kDa到约35kDa的平均分子量。在一些实施方案中，水溶性聚合物具有约15kDa到约30kDa的平均分子量。

[0117] 在一些实施方案中，抗体连接到PEG(即，抗体被“加入聚乙二醇”)。在多种实施方案中，PEG在哺乳动物中具有低毒性。见Carpenter等(1971)毒物学和应用药理学(Toxicol.Appl.Pharmacol.)，18，35-40。值得注意的是，腺苷脱氨酶的PEG加合物在美国被批准用于人类治疗严重联合免疫缺陷综合征。在多种实施方案中，PEG可以减小抗体的免疫原性。例如，在一些实施方案中，PEG与具有非人序列的抗体的连接当施用于人时可以降低该抗体的抗原性。

[0118] 在一些实施方案中，将聚合物连接到抗体中的一个或多个反应性氨基酸残基。一些示例性反应性氨基酸残基包括，但不限于，氨基末端氨基酸的α氨基、赖氨酸侧链的ε氨基、半胱氨酸侧链的巯基、天冬氨酰和谷氨酰侧链的羧基、羧基末端氨基酸的α羧基、酪氨酸侧链和连接到某些天冬酰胺、丝氨酸或者苏氨酸残基的活化的糖基链。适于直接与蛋白质反应的PEG的某些示例性活化形式(“PEG试剂”)是本领域技术人员已知的。例如，在一些实施方案中，适于连接到氨基的PEG试剂包括，但不限于，羧酸的活性酯或者PEG的碳酸酯衍生物，例如，其中离去基团为N-羟基琥珀酰亚胺、对硝基苯酚、咪唑或者1-羟基-2-硝基苯-4-磺酸酯的碳酸酯衍生物。在一些实施方案中，含有马来酰亚胺基或者卤代乙酰基的PEG试剂用于修饰巯基。在一些实施方案中，含有氨基、肼基和/或酰肼基的PEG试剂可以用于与通过蛋白质中糖基的高碘酸盐氧化产生的醛反应。

[0119] 在一些实施方案中，水溶性聚合物具有至少一个反应基。在一些实施方案中，通过将水溶性聚合物与活化基团反应产生水溶性聚合物如PEG的活化衍生物。在一些实施方案中，活化基团可以是单功能的、双功能的或者多功能的。可以用于将水溶性聚合物连接到两个或多个抗体的某些示例性活化基团包括，但不限于下面的基团：砜(例如，氯代砜、乙烯砜和二乙烯砜)、马来酰亚胺、巯基、硫羟、三氟甲磺酸酯(triflate)、tresylate、azidirine、环氧乙烷和5-吡啶基。在一些实施方案中，PEG衍生物通常在约11或者更小的pH的水性环境下在长时期内对水解稳定。在一些实施方案中，连接到另一分子如抗体的PEG衍生物赋予该分子对水解的稳定性。一些示例性同双功能PEG衍生物包括，但不限于，PEG-二-氯代砜和PEG-二-乙烯砜(见WO 95/13312)。D.制备单克隆抗体的一些方法
1.一些杂交瘤方法

[0120] 在一些实施方案中，通过标准技术产生单克隆抗体。在一些实施方案中，通过基于杂交瘤的方法产生单克隆抗体。一些此类方法是本领域技术人员已知的。见例如，Kohler等(1975)自然(Nature)256：495-497；Harlow和Lane(1988)抗体：实验室手册(抗体：A Laboratory Manual)第6章(冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)，冷泉港(Cold SpringHarbor)，NY)。在一些此类实施方案中，用免疫原免疫合适的动物，如小鼠、大鼠、仓鼠、猴或者其他哺乳动物以产生分泌抗体的细胞。在一些实施方案中，分泌抗体的细胞是B细胞，如淋巴细胞或脾细胞。在一些实施方案中，在体外免疫淋巴细胞(例如，人淋巴细胞)以产生分泌抗体的细胞。见例如，Borreback等(1988)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)85：3995-3999。

[0121] 在一些实施方案中，将分泌抗体的细胞与“永生化”细胞系，如骨髓型细胞系融合，以产生杂交瘤细胞。在一些实施方案中，例如，通过ELISA鉴定了产生所需要的抗体的杂交瘤细胞。在一些实施方案中，然后可以使用标准方法亚克隆此类细胞并培养。在一些实施方案中，还可以在合适的动物宿主中在体内作为腹水肿瘤培养此类细胞。在一些实施方案中，使用标准分离步骤，如亲和层析从杂交瘤培养基、血清或者腹水分离单克隆抗体。产生根据一些实施方案的杂交瘤和纯化单克隆抗体的指导例如在Harlow和Lane(1988)抗体：实验室手册(Antibodies：A LaboratoryManual)第8章(冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，NY)中提供。

[0122] 在一些实施方案中，通过用免疫原免疫遗传改变的小鼠产生小鼠单克隆抗体。在一些此类实施方案中，小鼠是ANGPTL3缺陷小鼠，其部分或者完全缺乏ANGPTL3功能。在一些此类实施方案中，小鼠是“敲除”小鼠，其缺少编码ANGPTL3的基因的全部或部分。在一些实施方案中，用小鼠ANGPTL3免疫此类敲除小鼠。在一些实施方案中，用人ANGPTL3免疫此类敲除小鼠。

[0123] 在一些实施方案中，在能够产生人抗体的转基因动物(例如，小鼠)中产生人单克隆抗体。见例如，美国专利号6,075,181 A和6,114,598A；和WO 98/24893 A2。例如，在一些实施方案中，将人免疫球蛋白基因引入(例如，使用酵母人工染色体、人染色体片段或者种系整合)其中内源Ig基因已经失活的小鼠中。见例如，Jakobovits等(1993)自然(Nature)362：255-258；Tomizuka等(2000)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)97：722-727；和Mendez等(1997)自然遗传学(Nat.Genet.)15：146-156(描述转基因小鼠的 品系)。

[0124] 在一些实施方案中，用免疫原免疫此类转基因小鼠。在一些此类实施方案中，得到来自小鼠的表达抗体的淋巴细胞(如B细胞)。在一些此类实施方案中，将此类回收的细胞与“永生化”的细胞系，如骨髓型细胞系融合，以产生杂交瘤细胞。在一些此类实施方案中，筛选和选择杂交瘤细胞以鉴定产生对目的抗原特异的抗体的那些。适于产生人单克隆抗体的一些示例性方法和转基因小鼠在例如Jakobovits等(1993)自然(Nature)362：255-258；Jakobovits(1995)现代生物技术观点(Curr.Opin.Biotechnol.)6：561-566；
Lonberg等(1995)国际免疫学综述(Int.Rev.Immunol.)13：65-93；Fishwild等(1996)自然生物技术(Nat.Biotechnol.)14：845-851；Mendez等(1997)自然遗传学(Nat.Genet.)15：146-156；Green(1999)免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)231：11-23；
Tomizuka等(2000)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)97：722-727中描述；在Little等(2000)今日免疫学(Immunol.Today)21：364-370和WO98/24893中综述。
在一些实施方案中，抗ANGPTL3的人单克隆抗体适于用作治疗抗体。见下面的部分V.G.。
2.某些基于展示的方法

[0125] 在一些实施方案中，使用基于展示的方法，如例如下述任一种方法产生人单克隆抗体。

[0126] 在一些实施方案中，使用噬菌体展示技术产生人单克隆抗体。一些示例性抗体噬菌体展示方法是本领域技术人员已知的，并且例如在Hoogenboom，纵览抗体噬菌体-展示技术及其应用(Overview ofAntibodyPhage-Display Technology and Its Applications)，来自分子生物学方法：抗体噬菌体展示：方法和流程(Methods in Molecular Biology：Antibody PhageDisplay：Methods and Protocols)(2002)178：1-37(O’Brien和Aitken编，Human Press，Totowa，NJ)中描述。例如，在一些实施方案中，在丝状噬菌体、如非裂解性丝状噬菌体fd或M13的表面上展示抗体文库。在一些实施方案中，抗体是抗体片段，如scFvs、Fabs、Fvs，其具有工程化的分子间二硫键以稳定VH-VL对，和双抗体。在一些实施方案中，接着可以选择具有需要的结合特异性的抗体。在下面进一步描述抗体噬菌体展示方法的一些示例性实施方案。

[0127] 在一些实施方案中，可以使用本领域技术人员已知的一些方法制备抗体噬菌体展示文库。见例如，Hoogenboom，纵览抗体噬菌体-展示技术及其应用(Overview ofAntibody Phage-Display Technology and ItsApplications)，来自分子生物学方法：抗体噬菌体展示：方法和流程(Methods in Molecular Biology：抗体Phage Display：Methods andProtocols)(2002)178：1-37(O’Brien和Aitken编，Human Press，Totowa，NJ)。在一些实施方案中，通过基因组DNA或者从分泌抗体的细胞的mRNA衍生的cDNA的PCR扩增，制备可变基因所有组成成分。例如，在一些实施方案中，从B细胞的mRNA制备cDNA。在一些实施方案中，例如，通过PCR扩增编码重链和轻链的可变区的cDNA。

[0128] 在一些实施方案中，将重链cDNA和轻链cDNA克隆到合适的载体中。在一些实施方案中，重链cDNA和轻链cDNA在克隆过程中随机组合，从而导致编码多种scFvs或Fabs的cDNA文库的装配。在一些实施方案中，重链cDNA和轻链cDNA在克隆到合适的载体前连接。在一些实施方案中，重链cDNA和轻链cDNA通过逐步克隆到合适的载体中连接。

[0129] 在一些实施方案中，将cDNA克隆到噬菌体展示载体，如噬菌粒载体中。一些示例性噬菌粒载体，如pCES1，是本领域技术人员已知的。在一些实施方案中，将编码重链和轻链的cDNA呈递在相同载体上。例如，在一些实施方案中，将编码scFvs的cDNA与编码小噬菌体外壳蛋白pIII的基因III的全部或者部分符合读框地克隆。在一些此类实施方案中，噬菌粒指导scFv-pIII融合物在噬菌体表面的表达。备选地，在一些实施方案中，将编码重链(或轻链)的cDNA与基因III的全部或者部分一起符合读框地克隆，并将编码轻链(或重链)的cDNA克隆在相同载体中信号序列的下游。该信号序列指导轻链(或重链)在宿主细胞的周质中的表达，其中重链和轻链装配成Fab片段。备选地，在一些实施方案中，编码重链的cDNA和编码轻链的cDNA存在于不同的载体上。在一些此类实施方案中，分别克隆重链和轻链cDNA，一种克隆到噬菌粒中，另一种克隆到噬菌体载体中，其都含有用于体内重组到宿主细胞的信号。

[0130] 在一些实施方案中，将重组噬菌粒或者噬菌体载体引入合适的细菌宿主，如大肠杆菌(E.coli)中。在一些使用噬菌粒的实施方案中，用辅助噬菌体感染宿主以提供噬菌体结构蛋白，从而允许携带抗体-pIII融合蛋白的噬菌体颗粒在噬菌体表面表达。

[0131] 在一些实施方案中，使用在体外重排的可变基因的所有组成成分构建“合成的”抗体文库。例如，在一些实施方案中，使用PCR随机组合编码重链或轻链的各基因区段(分别为V-D-J或V-J)。在一些此类实施方案中，例如通过易错PCR，向CDRs和可能地FRs中引入另外的序列多样性。在一些此类实施方案中，向CDR3，例如，重链的H3中引入另外的序列多样性。

[0132] 在一些实施方案中，使用来自未免疫的动物的核酸，如上述构建“幼稚(naive)”或者“通用的”噬菌体展示文库。在一些实施方案中，未免疫的动物是人。在一些实施方案中，使用来自经免疫的动物的核酸，如上述构建“免疫的”噬菌体展示文库。在一些实施方案中，经免疫的动物是人、大鼠、小鼠、仓鼠或者猴。在一些此类实施方案中，用下述免疫原的任一种免疫动物。

[0133] 一些示例性通用人抗体噬菌体展示文库可以从商业来源得到。一些示例性文库包括，但不限于，来自MorphoSys AG(Martinstreid/慕尼黑，德国)的 系列文库；使用 技术的来自Crucell(莱顿(Leiden)，荷兰)的文库；来自BioInvent(Lund，TM
瑞典)的n-CoDeR Fab文库；和可从剑桥抗体技术(CambridgeAntibody Technology)(剑桥，UK)得到的文库。

[0134] 在一些实施方案中，通过连续淘选步骤实现从噬菌体展示文库选择具有需要的结合特异性的抗体。在淘选的一些实施方案中，将文库噬菌体制备物暴露于抗原。在一些此类实施方案中，洗涤噬菌体-抗原复合物，并丢弃未结合的噬菌体。在一些此类实施方案中，回收结合的噬菌体并随后通过感染大肠杆菌扩增。在一些此类实施方案中，可以通过挑选单个噬菌斑克隆产生单克隆抗体的噬菌体。在一些实施方案中，重复上述方法。

[0135] 在一些实施方案中，淘选中使用的抗原是下述免疫原的任一种。在一些实施方案中，将抗原固定到固相支持体以允许通过亲和层析纯化结合抗原的噬菌体。在一些实施方案中，将抗原生物素化，从而允许使用链霉抗生物素蛋白包被的磁珠分离结合的噬菌体与未结合的噬菌体。在一些实施方案中，可以将抗原固定在细胞(用于直接淘选)上、在组织冷冻切片中，或者在膜上(例如，尼龙膜或者硝化纤维素)。本领域技术人员可以常规地确定一些淘选步骤的其他变体方案。

[0136] 在一些实施方案中，用酵母展示系统产生单克隆抗体。在一些此类系统中，将抗体表达为具有酵母AGA2蛋白的全部或者部分的融合蛋白，其在酵母细胞壁的表面上展示。在一些此类实施方案中，然后通过将细胞暴露于荧光标记的抗原，可以鉴定表达具有所需要的结合特异性的抗体的酵母细胞。在一些此类实施方案中，然后通过流式细胞术分离结合抗原的酵母细胞。见例如，Boder等(1997)自然生物技术(Nat.Biotechnol.)15：553-557。3.一些亲和力成熟方法

[0137] 在一些实施方案中，通过在体外将抗体进行亲和力成熟(或者“定向进化”)，增加抗体对特定抗原的亲和性。在体内，天然抗体通过体细胞高度突变接着通过选择进行亲和性成熟。一些体外方法模拟该体内过程，从而允许产生具有等于或者超过天然抗体的亲和性的抗体。

[0138] 在亲和性成熟的一些实施方案中，将突变引入编码具有需要的结合特异性的抗体的可变区的核酸序列。见例如，Hudson等(2003)自然医学(Nat.Med.)9：129-134；Brekke等(2002)自然综述(Nat.Reviews)2：52-62。在一些实施方案中，将突变引入重链、轻链或者两者的可变区中。在一些实施方案中，将突变引入一个或多个CDRs中。在一些此类实施方案中，将突变引入H3、L3或者两者中。在一些实施方案中，将突变引入一个或多个FRs中。在一些实施方案中，例如，在噬菌体、核糖体或者酵母展示文库中产生突变文库，从而，可以通过标准筛选方法鉴定具有增强的亲和性的抗体。见例如，Boder等(2000)美国国家科学院学报(Proc.Nat’lAcad.Sci.USA)97：10701-10705；Foote等(2000)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)97：10679-10681；Hoogenboom，纵览抗体噬菌体-展示技术及其应用(Overview ofAntibody Phage-Display Technologyand Its Applications)，来自分子生物学方法：抗体噬菌体展示：方法和流程(Methods in Molecular Biology：
AntibodyPhage Display：Methods andProtocols)(2002)178：1-37(O’Brien和Aitken编，Human Press，Totowa，NJ)；和Hanes等(1998)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)95：14130-14135。

[0139] 在一些实施方案中，基于抗体的结构，如抗原结合位点的信息，通过位点特异性诱变引入突变。在一些实施方案中，使用组合的CDRs诱变引入突变。在一些实施方案中，例如，使用大肠杆菌增变株细胞、同源基因重排或者易错PCR，随机诱变可变区编码序列的全部或者部分。在一些实施方案中，使用“DNA改组”引入突变。见例如，Crameri等(1996)自然医学(Nat.Med.)2：100-102；Fermer等(2004)肿瘤生物学(Tumor Biol.)25：7-13。

[0140] 在一些实施方案中，用“链改组”产生具有增加的亲和性的抗体。在链改组的一些实施方案中，将一条链，如轻链，用轻链的所有组成成分替换，而另一条链，如重链不变，从而提供特异性。在一些此类实施方案中，产生链改组抗体的文库，其中未改变的重链与来自轻链所有组成成分的每条轻链组合表达。在一些实施方案中，然后对此类文库筛选具有增加的亲和性的抗体。在一些实施方案中，顺序替换重链和轻链。在一些实施方案中，仅仅替换重链和/或轻链的可变区。在一些实施方案中，仅仅替换重链和/或轻链的可变区的一部分，如CDR。见例如，Hudson等(2003)自然医学(Nat.Med.)9：129-134；Brekke等(2002)自然综述(Nat.Reviews)2：52-62；Kang等(1991)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)88：11120-11123；Marks等(1992)生物技术(Biotechnology)10：779-83。

[0141] 在一些实施方案中，对特异性结合人ANGPTL3的小鼠单克隆抗体(包括，但不限于，针对小鼠ANGPTL3产生但是特异性结合(即，交叉反应于)人ANGPTL3的小鼠单克隆抗体)进行连续的链改组。在一些实施方案中，例如，将给定小鼠单克隆抗体的重链与人轻链的新的所有组成成分组合，并选择具有需要的亲和性的抗体。在一些此类实施方案中，然后将所选抗体的轻链与人重链的新的所有组成成分组合，并选择具有需要的亲和性的抗体。从而，在一些实施方案中，选择具有所需要的抗原结合特异性和亲和性的人抗体。

[0142] 备选地，在一些实施方案中，将给定小鼠单克隆抗体的重链与人轻链的新的所有组成成分组合，并从该第一轮改组选择具有需要的亲和性的抗体。在一些实施方案中，将最初的小鼠单克隆抗体的轻链与人重链的新的所有组成成分组合，并从该第二轮改组选择具有需要的亲和性的抗体。在一些实施方案中，来自第一轮改组中选择的抗体的人轻链然后来自在第二轮改组中选择的抗体的人重链组合。从而，在一些实施方案中，选择具有需要的抗原结合特异性和亲和性的人抗体。

[0143] 在一些实施方案中，使用“核糖体展示”方法，其交替进行抗体选择和亲和性成熟。在核糖体展示方法的一些实施方案中，在选择步骤之间通过RT-PCR扩增编码抗体的核酸。
从而，在一些实施方案中，可以用易错聚合酶向核酸中引入突变。此类方法的非限制性实例在Hanes等(1998)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)95：14130-14135中详细描述。
4.一些重组方法

[0144] 在一些实施方案中，通过重组技术产生单克隆抗体。见例如，美国专利号4,816,567。在一些此类实施方案中，克隆编码单克隆抗体链的核酸并在合适的宿主细胞中表达。例如，在一些实施方案中，使用标准方法，可以从表达需要的抗体的细胞，如成熟B细胞或杂交瘤细胞制备RNA。在一些实施方案中，然后使用标准方法，可以用RNA制备cDNA。
在一些实施方案中，例如，使用特定寡核苷酸引物，通过PCR扩增编码重链或者轻链多肽的cDNA。在一些实施方案中，将cDNA克隆到合适的表达载体中。在一些实施方案中，然后将表达载体转化或者转染到合适的宿主细胞，如不内源性产生抗体的宿主细胞中。一些示例性宿主细胞包括，但不限于，大肠杆菌、COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、和骨髓瘤细胞。
在一些实施方案中，其中重链和轻链在相同宿主中共表达，可以分离重建的抗体。

[0145] 在一些实施方案中，可以修饰编码重链或轻链的cDNA。例如，在一些实施方案中，可以将小鼠重链或轻链的恒定区用人重链或轻链的恒定区替换。以这种方式，在一些实施方案中，可以产生嵌合抗体，其具有人抗体恒定区，但是保留小鼠抗体的结合特异性。

[0146] 在一些实施方案中，可以在一些细胞系中表达重组抗体。在一些实施方案中，编码特定抗体的序列可以用于转化合适的哺乳动物宿主细胞。根据一些实施方案，可以通过用于向宿主细胞中引入多核苷酸的任一种已知方法进行转化。一些示例性方法，包括，但不限于，在病毒(或者向病毒载体中)包装多核苷酸并用病毒(或者载体)转导宿主细胞，和使用本领域中已知的一些转染方法，如美国专利号4,399,216、4,912,040、4,740,461、和4,959,455示例。在一些实施方案中，使用的转化方法可以依赖于转化的宿主。用于向哺乳动物细胞引入异源多核苷酸的一些示例性方法是本领域中已知的，并且包括但不限于，葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、1，5-二甲基-1，5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物介导的转染、原生质体融合、电穿孔、多核苷酸在脂质体中的包封、和直接显微注射DNA到细胞核中。

[0147] 可用作表达宿主的一些示例性哺乳动物细胞系是本领域中已知的并且包括，但不限于，可以从美国典型培养物保藏中心(ATCC)得到的许多永生化细胞系，包括，但不限于，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如，Hep G2)，和许多其他细胞系。在一些实施方案中，通过确定哪些细胞系产生高水平的特异性结合ANGPTL3的抗体，可以选择细胞系。E一些多肽免疫原

[0148] 在一些实施方案中，为了产生抗体，用免疫原免疫动物。在一些实施方案中，免疫原是包含ANGPTL3的多肽。在一些实施方案中，免疫原是包含ANGPTL3的片段的多肽。在一些实施方案中，免疫原是包含ANGPTL3的N-末端卷曲螺旋结构域的多肽。在一些实施方案中，免疫原是包含ANGPTL3的SP1区的多肽。

[0149] 在一些实施方案中，免疫原包含小鼠ANGPTL3。在一些实施方案中，免疫原包含人ANGPTL3。在一些实施方案中，免疫原包含小鼠ANGPTL3，其包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列。在一些实施方案中，免疫原包含人ANGPTL3，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列。在一些实施方案中，免疫原包含小鼠ANGPTL3的片段。在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：1的从残基17到残基240的片段。在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列。在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：1的从残基32到残基57的片段。在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列。在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列。在一些实施方案中，免疫原包含人ANGPTL3的片段。在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：3的从残基20到残基243的片段。在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列。在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：
1的从残基32到残基57的片段。在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列。

[0150] 在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：1的从残基17到残基240的约10-20个连续氨基酸的任一肽。在一些实施方案中，免疫原包含SEQ ID NO：3的从残基20到残基243的约10-20个连续氨基酸的任一肽。在一些实施方案中，免疫原包含选自SEQ ID NOs：
9，10，12，13，59，60，和61中的一种或多种肽。在一些实施方案中，免疫原包含肽，该肽选自SEQ ID NOs：9和10。在一些实施方案中，免疫原包含肽，该肽包含选自SEQ ID NOs：59和
60的一种或多种氨基酸序列。在一些实施方案中，免疫原包含肽，该肽包含SEQ ID NOs：12、
13和61。在一些此类实施方案中，选择可能是免疫原性的肽。在一些此类实施方案中，选择预测为亲水的和/或可能暴露于折叠状态的天然ANGPTL3表面上的肽。选择合适的免疫原性肽的示例性指导在例如Ausubel等(1989)现代分子生物学流程(Current Protocols in Molecular Biology)第11.14章(John Wiley & Sons，NY)；和Harlow和Lane(1988)抗体：实验室手册(Antibody：A LaboratoryManual)第5章(冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，NY)中提供。

[0151] 本领域技术人员已知一些示例性算法用于预测蛋白质的肽片段是否为亲水的并且因此可能暴露于蛋白质的表面上。一些此类算法使用蛋白质的一级序列信息进行这种预测。一些此类算法基于例如，Hopp和Woods(1981)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)78：3824-3828，或Kyte和Doolittle(1982)分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)157：105-132的方法。本领域技术人员已知一些示例性算法用于基于蛋白质的一级氨基酸序列预测蛋白质的二级结构。见例如，Corrigan等(1982)生物医学计算机程序(Comput.Programs Biomed.)3：163-168。一些此类算法基于例如Chou和Fasman(1978)生物化学年度综述(Ann.Rev.Biochem.)47：25-276的方法。在一些实施方案中，预测形成β转角并因此可能暴露于蛋白质的表面的肽区段可以被选择作为免疫原。

[0152] 在一些实施方案中，用免疫原和一种或多种佐剂免疫动物。在一些实施方案中，取决于宿主种类，用佐剂增强免疫应答。一些示例性佐剂包括，但不限于弗氏佐剂(完全和不完全的)、矿物盐，如氢氧化铝或者磷酸铝、表面活性物质、脱乙酰壳多糖、溶血卵磷脂、泊洛沙姆多元醇、聚阴离子、肽、油乳剂、和潜在有用的人佐剂，如BCG(卡介苗)和短小棒杆菌(Corynebacterium parvum)。在一些实施方案中，通过将免疫原偶联到另一免疫原性分子或者“载体蛋白”，增强对免疫原例如肽免疫原的免疫应答。一些示例性载体蛋白包括，但不限于，匙孔血蓝蛋白(KLH)、破伤风毒素、白喉类毒素、卵清蛋白、霍乱类毒素、和其免疫原性片段。关于将肽免疫原偶联到载体蛋白的示例性教导，见例如，Ausubel等(1989)现代分子生物学流程(Current Protocols in Molecular Biology)第11.15章(John Wiley & Sons，NY)；和Harlow和Lane(1988)抗体：实验室手册(Antibodies：A Laboratory Manual)第5章(冷泉港实验室(ColdSpring Harbor Laboratory)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，NY)。

[0153] 在一些实施方案中，使用标准重组方法可以产生上述免疫原的任一种。例如，在一些实施方案中，可以将编码小鼠或者人ANGPTL3的多核苷酸或者该多核苷酸的片段克隆到合适的表达载体中。在一些实施方案中，该多核苷酸包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的核酸序列。在一些实施方案中，然后将重组载体引入合适的宿主细胞。在一些实施方案中，接着通过标准方法从宿主细胞分离多肽。关于重组蛋白质表达的一些示例性方法，见例如，Ausubel等(1991)现代分子生物学流程(Current Protocolsin Molecular Biology)第16章(John Wiley & Sons，NY)。
F.一些测定法
1.一些结合测定法

[0154] 在一些实施方案中，使用检测抗体与抗原结合的一些常规方法，筛选抗体对ANGPTL3的结合。例如，在一些实施方案中，通过标准免疫印迹方法，如蛋白质印迹，测定单克隆抗体结合ANGPTL3的能力。见例如，Ausubel等(1992)现代分子生物学流程(Current Protocols inMolecular Biology) 第 10.8 章 (John Wiley & Sons，NY)；Harlow 和Lane(1988)抗体：实验室手册(Antibodies：A Laboratory Manual)(冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，NY)。在一些实施方案中，将用于此类测定法中的ANGPTL3可以是分离的或者可以存在于蛋白质和/或大分子的复杂混合物中。

[0155] 在一些实施方案中，使用竞争结合测定法测定单克隆抗体结合ANGPTL3的能力，该测定法评价候选抗体与已知的抗ANGPTL3抗体竞争结合ANGPTL3的能力。在一些此类实施方案中，已知的抗ANGPTL3抗体是下面部分VI.J中描述的单克隆抗体的任一种。在一些实施方案中，使用ELISA进行竞争性结合测定。见例如，Harlow和Lane(1988)抗体：实验室手册(Antibodies：A Laboratory Manual)第14章(冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，NY)。

[0156] 在一些实施方案中，用结合测定法定量抗ANGPTL3的抗体的结合动力学(例如，速率常数)或者结合亲和性(例如，缔合或者解离常数)。在一些实施方案中，通过将抗原(例如，ANGPTL3)固定在固体支持体上，在“固相”中确定结合动力学或者亲和性。固定的抗原从溶液中“捕获”抗体。在一些实施方案中，通过将抗体(例如，抗ANGPTL3的抗体)固定在固体支持体上，在“固相”中确定结合动力学或者亲和性。固定的抗体从溶液中“捕获”抗原。

[0157] 在一些实施方案中，使用基于ELISA的方法确定结合动力学或者结合亲和性。在一些实施方案中，使用基于生物传感器的技术，如Biacore表面等离子体共振技术(Biacore，Piscataway，NJ)，确定结合动力学或者结合亲和性。一些此类方法是本领域技术人员已知的。见例如，McCafferty等(编)(1996)抗体工程：实践方法(Antibody Engineering：APractical Approach)(IRL，Oxford，UK)；Goldberg等(1993)现代免疫学观点(Curr.Opin.Immunol.)5：278-281；Karlsson等(1991)免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)145：229-240；Malmqvist(1993)现 代免 疫学 观 点(Curr.Opin.Immunol.)5：
282-286；综述见Hoogenboom，纵览抗体噬菌体-展示技术及其应用(Overview ofAntibody Phage-Display Technology and ItsApplications)，来自分子生物学方法：抗体噬菌体展示：方法和流程(Methods in Molecular Biology：AntibodyPhage Display：Methods andProtocols)(2002)178：1-37，在19(O’Brien和Aitken编，Human Press，Totowa，NJ)。

[0158] 在一些实施方案中，确定特异性结合ANGPTL3的Fab片段的结合动力学或者结合亲和性。在一些实例中，Fab片段具有不多聚化的性质。在一些实例中，多聚化可以使得“固相”方法中的结合动力学和结合亲和性的测量复杂化。见例如，Hoogenboom，纵览抗体噬菌体-展示技术及其应用(Overview ofAntibody Phage-Display Technology and ItsApplications)，来自分子生物学方法：抗体噬菌体展示：方法和流程(Methods in Molecular Biology：Antibody Phage Display：Methods andProtocols)(2002)178：1-37，在19(O’Brie和Aitken编，Human Press，Totowa，NJ)。从而，在一些实施方案中，特异性结合ANGPTL3的Fab片段适于用于其中抗原固定在固相支持体上的结合测定法，如例如基于ELISA的测定法或者Biacore测定法。在一些实施方案中，使用酶促方法，从特异性结合ANGPTL3的完整抗体产生Fab片段。在一些实施方案中，通过在重组表达系统，如上面部分V.D.3中描述的重组表达系统中表达编码Fab片段的核酸产生Fab片段。

[0159] 在一些实施方案中，使用“溶液相”方法测定抗体对ANGPTL3的结合动力学或者结合亲和性。在这些方法中，在溶液中测量抗体-抗原复合体的结合动力学或结合亲和性。此类方法是本领域技术人员已知的。这种方法的非限制性实例是“动力学排除测定法”，或者“KinExA”。见例如，Blake等(1996)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)271：27677-27685；
Drake等(2004)分析 生物 化学(Anal.Biochem.)328：35-43(比较Biacore“固 相”和KinExA“溶液相”方法)。在一些实施方案中，由Sapidyne仪器公司(Sapidyne Instruments，Inc.)(Boise，ID)提供了进行KinExA的仪器。

[0160] 在一些实施方案中，使用溶液相方法确定多价抗体或者多聚化抗体的结合动力学或者结合亲和性。在一些实例中，多价抗体或者多聚化抗体的结合动力学或者结合亲和性的测量适合于溶液相分析。

[0161] 在一些实施方案中，如通过其KD测量的，抗ANGPTL3抗体的结合亲和性为约10-6M-7 -8 -9或更小。在一些实施方案中，抗ANGPTL3抗体的结合亲和性为约10 M、约10 M或约10 M或更小。在一些此类实施方案中，抗ANGPTL3抗体可以用作治疗抗体。见例如，Hudson等(2003)自然医学(Nat.Med.)9：129-134。在一些实施方案中，例如，使用亲和力成熟技术，-9
可以实现小于10 M的结合亲和性(例如，约500pM到约0.5pM的结合亲和性，包括但不限于，约100pM到约5pM的结合亲和性)。见例如，Boder等(2000)美国国家科学院学报(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA)97：10701-10705。在一些实施方案中，抗ANGPTL3抗体的结-8
合亲和性小于约5×10 M。

[0162] 在一些实施方案中，对针对小鼠ANGPTL3产生的单克隆抗体使用一些常规检测方法，如诸如本文描述的方法筛选对人ANGPTL3的特异性结合。单克隆抗体结合小鼠和人ANGPTL3(即，表现“交叉反应性”)的能力表明在小鼠和人ANGPTL3中存在相同表位。在使用变性条件的检测方法(如蛋白质印迹)的一些实施方案中，交叉反应性表明小鼠单克隆抗体结合小鼠和人ANGPTL3中相同的“线性”表位。在使用非变性条件的检测方法的一些实施方案中，交叉反应性表明小鼠单克隆抗体结合小鼠和人ANGPTL3中相同的表位(例如，线性表位或构象表位)。2.表位作图的一些方法

[0163] 在多种实施方案中，通过多种测定法的任一种鉴定单克隆抗体结合的表位。一些示例性测定法例如在例如Morris，分子生物学方法(Methods in Molecular Biology)卷66：表位作图流程(Epitope MappingProtocols)(1996)(Humana Press，Totowa，NJ)中描述。例如，通过基因片段表达测定法或者基于肽的测定法可以实现表位作图。在基因片段表达测定法的一些实施方案中，例如，在原核细胞中表达编码ANGPTL3的片段的核酸并且分离。在一些此类实施方案中，然后例如，通过免疫沉淀或免疫印迹评估单克隆抗体结合这些片段的能力。在一些实施方案中，在放射性氨基酸的存在下，在体外转录和翻译编码ANGPTL3的片段的核酸。然后测试ANGPTL3的放射性标记的片段对单克隆抗体的结合。在一些实施方案中，通过蛋白水解片段化产生ANGPTL3的片段。在一些实施方案中，使用在噬菌体或酵母表面上展示的随机肽的文库鉴定表位。在一些实施方案中，通过测试ANGPTL3的重叠的合成肽片段的文库对单克隆抗体的结合，鉴定表位。在一些实施方案中，使用如下文描述的竞争测定法鉴定表位。在一些实施方案中，还可以使用如下文描述的丙氨酸-分区诱变法定义表位。
3.一些竞争测定法

[0164] 在一些实施方案中，鉴定与目的单克隆抗体结合ANGPTL3的相同表位的单克隆抗体。在一些实施方案中，通过例如上述的表位作图鉴定此类单克隆抗体。在一些实施方案中，通过常规竞争测定法鉴定此类单克隆抗体。见例如，Harlow和Lane(1988)抗体：实验室手册(Antibodies：A Laboratory Manual)第14章(冷泉港实验室(Cold Spring HarborLaboratory)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，NY)。在非限制性示例性竞争测定法中，将ANGPTL3或者其片段固定到多孔板的孔中。在一些此类实施方案中，通过标准方法用荧光标记(在一些实施方案中，异硫氰酸荧光素)标记目的单克隆抗体。在一些此类实施方案中，向孔中加入标记的目的单克隆抗体和未标记的测试单克隆抗体的混合物。在一些此类实施方案中，定量每孔中的荧光以确定未标记的测试单克隆抗体阻断标记的目的单克隆抗体的结合的程度。在一些实施方案中，如果每种单克隆抗体阻断另一单克隆抗体的结合达50％或者以上，那么认为这些单克隆抗体共有一个表位。示例性竞争性测定法还在例如Morris，分子生物学方法(Methodsin Molecular Biology)卷66：表位作图流程(Epitope Mapping Protocols)(1996)(Humana Press，Totowa，NJ)中描述。非限制性示例性竞争测定法在下面的部分VI.O中提供。
4.用于鉴定中和抗体的一些测定法

[0165] 在一些实施方案中，对单克隆抗体筛选作为中和抗体的那些，即在体内和/或体外降低ANGPTL3的活性的那些。在一些实施方案中，ANGPTL3的活性是ANGPTL3抑制LPL的能力。从而，在一些实施方案中，通过在ANGPTL3存在下，中和抗体增加LPL的活性的能力来鉴定中和抗体。在一些此类实施方案中，相对于对照抗体，中和抗体增加LPL活性至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。用于体内和体外测量LPL活性的一些示例性测定法是本领域中已知的。

[0166] 在一些实施方案中，在体内减小ANGPTL3的活性的中和抗体通过它降低至少一种血清脂质的水平的能力来鉴定。一些示例性血清脂质包括，但不限于，甘油三酯、胆固醇和游离脂肪酸。在一些此类实施方案中，相对于对照抗体，中和抗体降低至少一种血清脂质的水平至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。在一些实施方案中，在体内减小ANGPTL3的活性的中和抗体通过它抵消或者赋予对含有脂肪饮食的某些影响的保护的能力来鉴定。一些示例性效果包括，但不限于，体重增加、肥胖症、葡萄糖不耐性(高血糖症)、胰岛素不敏感性(高胰岛素血症)、肝脏脂肪变性(脂肪肝)、和肌细胞内(intramyocellular)脂质积累。G.一些药物组合物和使用中和性单克隆抗体的治疗方法

[0167] 在一些实施方案中，中和抗体可以用作治疗抗体。将用作治疗抗体的一些示例性中和抗体包括，但不限于，嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。本领域技术人员熟悉此类抗体作为治疗剂的用途。例如，从20世纪80年代中期以来FDA已经批准了十二种以上的抗体用作治疗剂。见例如，Hudson等(2003)自然医学(Nat.Med.)9：129-134；Gura(2002)自然(Nature)417：584-586；Brekke等(2002)自然综述(Nat.Reviews)2：52-62。一些FDA批准的抗体包括用于治疗多种癌症、炎症和病毒感染和预防移植物排斥的那些。见，例如，Gura(2002)自然(Nature)417：584-586；Brekke等(2002)自然综述(Nat.Reviews)2：52-62。此外，十二种以上的抗体当前正处于临床试验中。见例如，Brekke等(2002)自然综述(Nat.Reviews)2：52-62。

[0168] 在一些实施方案中，提供了治疗脂质代谢病症的方法，其包括施用有效量的抗ANGPTL3的中和抗体。在一些实施方案中，提供了治疗脂质代谢的急性病症的方法，其包括施用有效量的抗ANGPTL3的中和抗体。在一些实施方案中，提供了治疗脂质代谢的慢性病症的方法，其包括施用有效量的抗ANGPTL3的中和抗体。在一些实施方案中，治疗脂质代谢病症的方法还包括施用有效量的抗ANGPTL4的中和抗体。参见，例如，PCT公开号WO2006/074228。

[0169] 如本文使用的，“脂质代谢的病症”包括，但不限于，可以导致继发性高脂血症(包括高甘油三酯血症和高胆固醇血症)的病症。脂质代谢的一些示例性病症包括，但不限于，动脉粥样硬化、血脂障碍、高甘油三酯血症(包括药物诱导的高甘油三酯血症、利尿剂诱导的高甘油三酯血症、醇诱导的高甘油三酯血症、β-肾上腺素能阻断剂诱导的高甘油三酯血症、雌激素诱导的高甘油三酯血症、糖皮质激素诱导的高甘油三酯血症、类视色素诱导的高甘油三酯血症、西咪替丁诱导的高甘油三酯血症、和家族性高甘油三酯血症)、与高甘油三酯血症有关的急性胰腺炎、乳糜微粒综合征、乳糜微粒血症、Apo-E不足、LPL不足或者低活性、高脂血症(包括家族性联合高脂血症)、高胆固醇血症、与高胆固醇血症相关的痛风、黄瘤病(皮下胆固醇沉积)、冠状动脉病(也称作缺血性心脏病)、与冠状动脉病相关的炎症、再狭窄、外周血管病，和中风。脂质代谢的一些示例性病症包括，但不限于，与体重相关的病症，如肥胖症、代谢综合征，包括代谢综合征的独立组分(例如，向心性肥胖症、FBG/前驱糖尿病/糖尿病/高胆固醇血症、高甘油三酯血症和高血压)、甲状腺功能减退、尿毒症和与体重增加有关的其他状况(包括快速体重增加)、体重减轻、体重减轻的维持、或者体重减轻后体重再次增加的危险。脂质代谢的一些示例性病症包括，但不限于，相关的血糖病症，如糖尿病、高血压和与胰岛素耐受性相关的多囊卵巢综合征。脂质代谢的一些示例性病症包括，但不限于，肾脏移植、肾病综合征、库欣综合征、肢端肥大症、系统性红斑狼疮、血内球蛋白异常、脂质营养不良、I型糖原病和艾迪生病。

[0170] 脂质代谢的病症包括，但不限于，继发性高甘油三酯血症(HTG，包括但不限于I、V和IV型)，包括但不限于由于饮食引起的HTG(包括，但不限于，过量酒精摄入、体重增加和肥胖症)、药物(包括但不限于，外源雌激素、他莫昔芬、类视色素、噻嗪类、氯噻酮、β-阻滞剂、蛋白酶抑制剂(包括但不限于利托那韦)、异丙酚输注和肠胃外脂质输注)引起的HTG，代谢病症(包括但不限于，糖尿病、妊娠、慢性肾衰竭、甲状腺功能减退、家族性高脂血症和胰腺炎)。

[0171] 脂质代谢的病症包括，但不限于，与血管通路功能异常有关的脂质病症、与增生性疾病包括但不限于，瘤形成(包括但不限于，前列腺癌、肾癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌和胰腺癌)有关的脂质病症，响应炎症发生的病症，包括但不限于，与例如感染性疾病、伤口愈合、免疫缺陷综合征(艾滋病和其他疾病，包括但不限于与异常发育有关的那些综合征)、瘢痕形成、动脉粥样硬化、再狭窄和移植排斥、自身免疫病和慢性炎性疾病和病症，其包括但不限于，包括但不限于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮的疾病和病症，包括但不限于局限性回肠炎、结肠炎、炎性肠病、反应性关节炎、包括莱姆病、依赖胰岛素的糖尿病、器官特异性自身免疫、多发性硬化、桥本甲状腺炎和格雷夫斯病、斯耶格伦综合征、接触性皮炎、牛皮癣、硬皮病、移植物抗宿主病、结节病、疟疾、脓毒病、胰腺炎、特应性疾病，包括但不限于哮喘和变态反应，包括但不限于，变应性鼻炎、胃肠道变态反应，包括但不限于，食物变态反应、嗜酸粒细胞增多、结膜炎和肾小球肾炎、血液凝固病症、内毒素性休克和其他炎症介导的病症，如睡眠性呼吸暂停和嗜睡。

[0172] 在一些实施方案中，提供了治疗脂质代谢病症的方法，其包括施用有效量的抗ANGPTL3的抗体和至少另外一种治疗剂。在一些此类实施方案中，以有效量施用另外的治疗剂。在一些实施方案中，另外的治疗剂是针对ANGPTL3的另一抗体。在一些实施方案中，另外的治疗剂是抗ANGPTL4的中和性抗体。参见，例如，PCT公开号WO 2006/074228。在一些实施方案中，另外的治疗剂是非抗体剂。在一些实施方案中，另外的治疗剂是降低一种或多种血清脂质的水平的试剂。一些示例性的另外治疗剂包括，但不限于，胆固醇合成抑制剂(他汀类药物)，如HMG-CoA还原酶抑制剂(如洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀和氟伐地汀)；胆汁螯合剂，如考来烯胺和其他树脂；VLDL分泌抑制剂，如烟酸；亲脂性抗氧化剂，如普罗布考；酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制剂；法尼醇X受体拮抗剂；甾醇调节性结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)激活剂；微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)抑制剂；和ApoE相关肽。在一些实施方案中，另外的治疗剂是升高高密度脂蛋白(HDL)的试剂。此类试剂的非限制性实例包括，但不限于，胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制剂。

[0173] 在一些实施方案中，提供了药物组合物，其包含有效量的抗ANGPTL3的抗体和药用稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。在一些实施方案中，提供了药物组合物，其包含有效量的抗ANGPTL3的抗体和有效量的至少一种另外的治疗剂，以及药用稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂选自如上述的那些治疗剂。

[0174] 在一些实施方案中，药物组合物的制剂材料在使用的剂量和浓度下对受者是无毒的。

[0175] 在一些实施方案中，药物组合物包含用于修饰、保持或者维持例如组合物的pH、渗透性、粘度、澄清度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶解速率或者释放速率、吸附或者渗透的制剂材料。在一些实施方案中，合适的制剂材料包括，但不限于，氨基酸(例如，甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸和赖氨酸)；抗微生物剂；抗氧化剂(例如，抗坏血酸、亚硫酸钠和亚硫酸氢钠)；缓冲剂(例如，硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐和其他有机酸)；膨胀剂(例如，甘露醇和甘氨酸)；螯合剂(例如，乙二胺四乙酸(EDTA))；络合剂(例如，咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精和羟丙基-β-环糊精)；填充剂；单糖、二糖和其他糖类(例如，葡萄糖、甘露糖和糊精)；蛋白质(例如，血清白蛋白、明胶和免疫球蛋白)；着色剂、调味剂和稀释剂；乳化剂；亲水聚合物(例如，聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成盐抗衡离子(例如钠)；防腐剂(例如，苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸和过氧化氢)；溶剂(例如，甘油、丙二醇和聚乙二醇)；糖醇(例如，甘露醇和山梨醇)；悬浮剂；表面活性剂或者增湿剂(例如，泊洛沙姆、PEG、山梨坦酯、聚山梨酯(例如，聚山梨酯20和聚山梨酯80)、triton、氨丁三醇、卵磷脂、胆固醇和泰洛沙泊)；稳定性增强剂(例如，蔗糖和山梨醇)；张力增强剂(例如，碱金属卤化物(例如，氯化钠或氯化钾)、甘露醇和山梨醇)；递送载体；稀释剂；赋形剂；和药物佐剂(雷明顿制药科学(Remington′sPharmaceutical Sciences)，第18版，A.R.Gennaro编，马克出版社(MackPublishing Company)(1990)。

[0176] 在一些实施方案中，抗ANGPTL3的抗体或者其他治疗分子连接到延长半衰期的载体。一些示例性延长半衰期的载体是本领域中已知的。一些此类载体包括，但不限于，Fc结构域、聚乙二醇和葡聚糖。一些此类载体描述于例如公布的PCT申请号WO 99/25044中。

[0177] 在一些实施方案中，本领域技术人员将根据，例如预期的施用途径、递送形式和需要的剂量确定最佳的药物组合物。见例如，雷明顿制药科学(Remington′s Pharmaceutical Sciences)，如上文。在一些实施方案中，此类组合物可以影响中和抗体的物理状态、稳定性、体内释放速率、或者体内清除速率。

[0178] 在一些实施方案中，药物组合物中的基本赋形剂或载体的性质可以是水性或非水性的。例如，在一些实施方案中，合适的赋形剂或载体可以是注射用水、生理盐溶液或者人工脑脊液，可能补充肠胃外施用的组合物中常见的其他物质。一些示例性赋形剂包括，但不限于，中性缓冲盐水和与血清白蛋白混合的盐水。在一些实施方案中，药物组合物包含约pH7.0-8.5的Tris缓冲液，或者约pH 4.0-5.5的乙酸盐缓冲液，其可以还包括山梨醇或者其合适的替代物。在一些实施方案中，包含针对ANGPTL3的抗体与或不与至少一种另外的治疗剂的组合物可以如下制备用于保存：将所选的具有所需要的纯度的组合物与任选的配制试剂(雷明顿制药科学(Remington′s Pharmaceutical Sciences)，上文)以冻干饼或者水溶液的形式混合。在一些实施方案中，包含针对ANGPTL3的抗体与或不与至少一种另外的治疗剂的组合物可以用合适的赋形剂如蔗糖配制成冻干物。

[0179] 在一些实施方案中，选择药物组合物用于肠胃外递送。在一些实施方案中，选择药物组合物用于吸入或者通过消化道如经口递送。用于制备药用组合物的一些示例性技术在本领域技术人员能力之内。

[0180] 在一些实施方案中，制剂组分以施用部位可接受的浓度存在。在一些实施方案中，用缓冲剂保持组合物在生理pH或者稍低的pH，典型地在约5到约8的pH范围内。

[0181] 在一些实施方案中，当预期肠胃外施用时，药物组合物可以是无致热原的、肠胃外可接受的水溶液，其可在药用赋形剂中包含需要的针对ANGPTL3的抗体，与或者不与另外的治疗剂一起。在一些实施方案中，用于肠胃外注射的赋形剂是无菌蒸馏水，其中抗ANGPTL3的抗体，与或者不与至少一种另外的治疗剂一起配制为无菌的等渗溶液，适当保存。在一些实施方案中，制备物可以包括所需要的分子与试剂的制剂，所述试剂如可注射的微球体、可生物蚀解的颗粒、聚合物化合物(如聚乳酸或者聚乙醇酸)、珠或者脂质体，其可以提供产品的控释或者缓释，该产品可以接着通过长效制剂注射递送。在一些实施方案中，还可以使用透明质酸，其可以具有促进循环中延长的持续时间的作用。在一些实施方案中，可以用可植入的药物递送装置引入需要的分子。

[0182] 在一些实施方案中，可以配制药物组合物用于吸入。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的抗体，与或者不与至少一种另外的治疗剂一起可以配制为用于吸入的干燥粉剂。在一些实施方案中，包含抗ANGPTL3的抗体与或者不与至少一种另外的治疗剂一起的吸入溶液可以与用于气溶胶递送的推进剂一起配制。在一些实施方案中，可以雾化溶液。

[0183] 在一些实施方案中，可以经口施用制剂。在一些实施方案中，以这种方式施用的抗ANGPTL3的抗体与或者不与至少一种另外的治疗剂可以与或不与通常用于调剂固体剂型如片剂和胶囊剂的载体配制。在一些实施方案中，可以将胶囊剂设计成在胃肠道中生物利用率最大化并且系统前降解最小的时候释放制剂的活性部分。在一些实施方案中，可以包括至少一种另外的试剂以方便与或者不与任何一种另外的治疗剂一起的抗ANGPTL3的抗体的吸收。在一些实施方案中，还可以使用稀释剂、调味剂、低熔点蜡、植物油、润滑剂、悬浮剂、片剂崩解剂和/或粘合剂。

[0184] 在一些实施方案中，药物组合物包含有效量的抗ANGPTL3的抗体与或者不与至少一种另外的治疗剂，其与适于生产片剂的无毒赋形剂混合。在一些实施方案中，通过将片剂溶解在无菌水，或者另一种合适的赋形剂中，可以以单位剂型制备溶液剂。一些示例性赋形剂包括，但不限于，惰性稀释剂(例如，碳酸钙、碳酸钠、碳酸氢钠、乳糖和磷酸钙)；粘合剂(例如，淀粉、明胶和阿拉伯胶)；和润滑剂(例如，硬脂酸镁、硬脂酸和滑石粉)。

[0185] 另外的药物组合物将是本领域技术人员已知的，包括在持续或受控递送剂型中包含抗ANGPTL3的抗体与或者不与至少一种另外的治疗剂的制剂。一些示例性缓释或控制递送剂型包括，但不限于，脂质体载体、可生物蚀解的微粒、多孔珠、和长效注射剂。用于制备某些剂型的一些示例性技术是本领域技术人员已知的。在一些实施方案中，缓释制剂可以包括成形制品，例如薄膜或者微囊剂形式的半透性聚合物基质。一些示例性缓释基质包括，但不限于，聚酯、水凝胶、聚交酯(见例如，美国专利号3,773,919和EP058,481)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸的共聚物(见例如，Sidman等(1983)生物聚合物(Biopolymers)22：547-556)、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)(见例如，Langer等(1981)生物医学材料研究杂志(J.Biomed.Mater.Res.)15：167-277和Langer(1982)化学技术(Chem.Tech.)12：98-105)、乙烯乙酸乙烯酯(Langer等，上文)，和聚-D(-)-3-羟基丁酸(EP 133,988)。在一些实施方案中，缓释组合物可以包括脂质体，其可以在一些实施方案中，通过本领域中已知数种的方法的任一种制备。见例如，Eppstein等(1985)美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，82：3688-3692；EP 036,676；EP 088,046；和EP
143,949。

[0186] 在一些实施方案中，将用于体内施用的药物组合物典型地是无菌的。在一些实施方案中，这可以通过无菌滤膜过滤来完成。在一些实施方案中，当冻干组合物时，使用该方法除菌可以在冻干和重构之前或之后进行。在一些实施方案中，用于肠胃外施用的组合物可以以冻干形式或者溶液保存。在一些实施方案中，通常将肠胃外组合物置于具有无菌入口的容器中，例如具有塞子的静脉内溶液包或者瓶子中，通过皮下注射针头可以刺穿塞子。

[0187] 在一些实施方案中，一旦已经配制了药物组合物，就可以将它作为溶液剂、混悬剂、凝胶剂、乳剂、固体或者作为脱水或者冻干的粉剂保存在无菌瓶中。在一些实施方案中，这种制剂可以以即用的形式或者以施用前重构的形式(例如，冻干的形式)保存。

[0188] 在一些实施方案中，提供了用于产生单剂量施用单位的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒可以每种含有具有干燥蛋白质的第一容器和具有水性制剂的第二容器。在一些实施方案中，包括含有单个或多个腔的预先填充的注射器(例如，液体注射器和冻干注射器(lyosyringes))的试剂盒。

[0189] 在一些实施方案中，将治疗使用的包含抗ANGPTL3的抗体与或者不与至少一种另外的治疗剂的药物组合物的有效量将取决于例如治疗的背景和目的。本领域技术人员将明白根据一些实施方案，用于治疗的合适的剂量水平将从而部分随着递送的分子、与或者不与至少一种另外的治疗剂的抗ANGPTL3抗体所适用的适应症、施用途径和患者的大小(体重、体表或者器官大小)和/或状况(年龄和一般健康)而变。在一些实施方案中，临床医生可以确定剂量和修改施用途径以得到最佳的治疗效果。在一些实施方案中，典型的剂量可以为约0.1μg/kg患者体重，高达约100mg/kg或以上，这取决于上述因子。在一些实施方案中，剂量可以为0.1μg/kg到高达约100mg/kg；1μg/kg到高达约100mg/kg；或5μg/kg到高达约100mg/kg，包括前面端点任一个之间的所有点(包括分数)。在一些实施方案中，剂量为约10mg/kg体重到约60mg/kg体重。在一些实施方案中，剂量为约10mg/kg体重、约20mg/kg体重、约30mg/kg体重、约40mg/kg体重、约50mg/kg体重，或约60mg/kg体重。

[0190] 在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性抗体的人剂量基于相同抗体在小鼠中的有效剂量确定。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性抗体的人剂量利用“工业指导：在成年健康志愿者中评估治疗剂的初始临床实验中最大安全起始剂量(Guidance for Industry：Estimating theMaximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics inAdult Healthy Volunteers)”美国健康和公共事业部(U.S.Department ofHealth and Human Services)，食品和药物管理局(Food and DrugAdministration)，和药物评估和研究中心(Center for Drug Evaluation andResearch)(CDER)，2005年7月(药理学和毒物学(Pharmacology andToxicology))确定。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性抗体的人剂量是0.07mg/kg-7mg/kg。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性抗体的人剂量是0.1mg/kg-5mg/kg。在一些实施方案中，抗ANGPTL3的中和性抗体的人剂量是0.1mg/kg-2mg/kg。在不同的实施方案中，每周2次，每周1次，每两周1次，或每月1次地对患者施用抗ANGPTL3的中和性抗体。

[0191] 在一些实施方案中，合适的剂量可以由本领域中的技术人员，例如，基于动物研究确定。

[0192] 在一些实施方案中，给药频率将考虑所用的制剂中针对ANGPTL3的抗体和如果适用，任一另外的治疗剂的药物代谢动力学参数。在一些实施方案中，临床医生将施用该组合物直到剂量达到实现需要的效果。在一些实施方案中，组合物可以因此作为单次剂量或者作为两次或者多次剂量(其可以含有或不含有相同量的需要的分子)随时间施用，或者通过植入装置或者导管作为连续输注施用。在一些实施方案中，对合适剂量的进一步完善通过本领域技术人员常规地进行并且在他们进行的常规任务的范围内。在一些实施方案中，通过使用合适的剂量反应数据，可以确定合适的剂量。在一些实施方案中，患者接受一剂包含抗ANGPTL3抗体的药物组合物。在一些实施方案中，患者每天接受1、2、3或者4剂包含抗ANGPTL3抗体的药物组合物。在一些实施方案中，患者每周接受1、2、3、4、5或6剂包含抗ANGPTL3抗体的药物组合物。在一些实施方案中，患者每月接受1或2剂包含抗ANGPTL3抗体的药物组合物。

[0193] 在一些实施方案中，药物组合物的施用途径是按照已知的方法，例如，经口、通过静脉内注射、腹膜内、脑内(实质内)、脑室内、肌内、眼内、动脉内、肝门内或者病灶内途径；通过缓释系统或者通过植入装置进行。在一些实施方案中，可以通过快速浓注或者通过连续输注或者通过植入装置施用组合物。

[0194] 在一些实施方案中，可以通过已经吸收或者包封了目的分子的膜、海绵或者另一合适的材料的植入，局部施用组合物。在一些实施方案中，当使用植入装置时，可以将该装置植入任一合适的组织或者器官中，并且可以通过扩散、定时释放的丸剂或者连续施用递送目的分子。

[0195] 在一些实施方案中，可以希望以离体方式使用包含与或者不与至少一种另外的治疗剂一起的抗ANGPTL3的抗体的药物组合物。在一些此类实例中，已经从患者移去的细胞、组织和/或器官接触包含与或者不与至少一种另外的治疗剂一起的抗ANGPTL3的抗体的药物组合物，之后将该细胞、组织和/或器官植入回到患者体内。

[0196] 在一些实施方案中，通过植入某些细胞递送与或者不与至少一种另外的治疗剂一起的抗ANGPTL3的抗体，所述细胞已经用如上述的方法进行基因工程改造，以表达和分泌所述多肽。在一些实施方案中，此类细胞可以是动物或者人细胞，并且可以是自体的、异源的或者异基因的。在一些实施方案中，细胞可以是永生化的。在一些实施方案中，为了减小免疫应答的机会，可以将细胞包封以避免周围组织的浸润。在一些实施方案中，包封材料典型地是生物相容的、半透性聚合物包裹物(enclosure)或者膜，其允许蛋白质产物的释放，但是阻止患者免疫系统或者来自周围组织的其他有害因子对细胞的破坏。H.一些检测和诊断方法

[0197] 在一些实施方案中，用抗ANGPTL3的抗体在体内或体外检测ANGPTL3的存在。在一些实施方案中，体内ANGPTL3的水平与医学状况，如脂质代谢的疾病相关，从而允许诊断该医学。可以通过抗ANGPTL3的抗体诊断的一些示例性医学病症在上面给出。

[0198] 一些示例性检测方法是本领域中已知的并且包括，但不限于，ELISA、放射性免疫测定、免疫印迹、蛋白质印迹、免疫荧光、和免疫沉淀。在一些实施方案中，修饰抗ANGPTL3的抗体使得它们可以例如，通过将抗体连接到标记而直接检测。一些示例性标记包括，但不限于，荧光团、生色团、放射性原子、密电子试剂、酶和配体。在一些实施方案中，使用结合一类抗体的经标记的“次级”抗体(例如，山羊抗小鼠抗体)检测抗ANGPTL3的抗体。I.针对ANGPTL3拮抗剂和激动剂的一些筛选方法

[0199] 在一些实施方案中，提供了结合ANGPTL3的试剂的筛选方法。在一些实施方案中，筛选方法包括将ANGPTL3在合适条件下暴露于一种或多种候选试剂，并评估ANGPTL3与该一种或多种候选试剂的结合。在一些实施方案中，筛选方法包括在竞争性结合测定中使用抗ANGPTL3的抗体。在一些此类实施方案中，使用包含抗ANGPTL3的抗体和ANGPTL3的第一结合混合物。测量第一结合混合物中ANGPTL3和抗体之间结合的量(M0)。还使用第二结合混合物，其包含抗体、ANGPTL3和将筛选的试剂。测量第二结合混合物中ANGPTL3和抗体之间结合的量(M1)。例如通过计算M1/M0的比率，比较第一结合混合物中结合的量和第二结合混合物中结合的量。如果第二结合混合物中抗ANGPTL3的抗体的结合量小于第一结合混合物中抗ANGPTL3的抗体的结合量，那么认为试剂能够结合ANGPTL3。在一些实施方案中，结合ANGPTL3的试剂将抗体与ANGPTL3的结合降低了至少约10％(即，M1/M0＜0.9)、至少约30％(即，M1/M0＜0.7)、至少约50％(即，M1/M0＜0.5)、至少约70％(即，M1/M0＜0.3)、至少约80％(即，M1/M0＜0.2)、至少约90％(即，M1/M0＜0.1)或至少约95％(即，M1/M0＜0.05)。

[0200] 在一些实施方案中，将用于上述筛选方法任一种中的ANGPTL3是ANGPTL3的N-末端卷曲螺旋结构域或者其片段。基于申请人的观察，即结合在ANGPTL3的N-末端卷曲螺旋结构域内的一些抗体可以在体内降低血清甘油三酯和血清胆固醇水平，通过筛选方法鉴定为结合ANGPTL3的N-末端卷曲螺旋结构域的试剂(例如，抗体或者非抗体试剂)是ANGPTL3活性的候选拮抗剂。在一些实施方案中，通过筛选方法鉴定为结合ANGPTL3的N-末端卷曲螺旋结构域中SP1区的试剂(例如，抗体或者非抗体试剂)是ANGPTL3活性的候选拮抗剂。

[0201] 在一些实施方案中，拮抗剂活性通过如下验证：证明候选拮抗剂在体内或体外测定中中和ANGPTL4活性。一些示范性测定记述在本文中。本领域中的技术人员可以从本文中所述的那些和/或本领域中已知的那些中选择和/或改进合适的测定。在一些实施方案中，ANGPTL3的拮抗剂用于治疗脂质代谢病症。

[0202] 在一些实施方案中，提供了筛选结合ANGPTL3的血纤蛋白原结构域的试剂的方法。在一些实施方案中，在ANGPTL3的血纤蛋白原结构域内结合的试剂可以增强ANGPTL3活性。因此，通过筛选方法鉴定为结合ANGPTL3的血纤蛋白原结构域的试剂(例如，抗体或者非抗体试剂)是ANGPTL3活性的候选激动剂。在一些实施方案中，激动剂活性通过如下验证：证明候选激动剂在体外或体内测定中增强ANGPTL3活性。本领域中的技术人员可基于本领域中已知的测定法和/或本文中所述的测定法选择和/或改进合适的测定法。在一些实施方案中，ANGPTL3的激动剂用于治疗与过量体重减轻有关的一些病症，如神经性厌食症、神经性贪食症和与疾病如癌症、囊性纤维病和艾滋病相关的恶病质(消瘦)。

[0203] 可以筛选对ANGPTL3的结合的一些示例性试剂包括，但不限于，抗体、小分子(例如，有机化合物、有机金属化合物、有机化合物和有机金属化合物的盐、糖类、氨基酸、核苷、和核苷酸)、适体、肽和肽模拟物。一些示例性肽包括可溶性肽，其包括但不限于，随机肽文库的成员(见例如，Lam等(1991)自然(Nature)354：82-84；Houghten等(1991)自然(Nature)354：84-86)和由D-和/或L-构型氨基酸组成的组合化学原理衍生的分子文库的成员；和磷酸肽，其包括，但不限于，随机或者部分简并的定向磷酸肽文库的成员(见例如，Songyang(1993)细胞(Cell)72：767-778)。

[0204] 在一些实施方案中，计算机建模和检索技术允许鉴定结合ANGPTL3的化合物，或者改进已经鉴定的化合物。一些示例性分子建模系统包括，但不限于，CHARMM和QUANTA程序(Polygen公司，Waltham，MA)。CHARMM执行能量最小化和分子动力学函数。QUANTA执行分子结构的构建、图形建模和分析。QUANTA允许相互作用构建、修饰、可视化和分析分子相互的行为。J.ANGPTL3的核酸拮抗剂

[0205] 在一些实施方案中，提供了降低编码ANGPTL3的核酸的表达的分离的核酸。在一些实施方案中，编码ANGPTL3的核酸编码小鼠ANGPTL3。在一些实施方案中，编码ANGPTL3的核酸编码人ANGPTL3。在一些实施方案中，分离的核酸是反义核酸。在一些此类实施方案中，反义核酸是单链DNA分子，其通过基于RNaseH的机理促进靶mRNA的降解。在一些实施方案中，反义核酸是长约8-30个(包括端点之间的所有点)核苷酸的寡核苷酸。在一些实施方案中，反义核酸是约18-26个核苷酸长度的寡核苷酸。

[0206] 在一些实施方案中，反义核酸包含RNA分子，其通过基于RNA干扰(RNAi)的机理降低靶核酸的表达。适于RNAi的一些示例性RNA分子包括，但不限于，短干扰RNA(siRNAs)、微RNA(mRNAs)、小的非编码RNA(tncRNAs)和小调节RNA(smRNA)。关于一些示例性RNAi机理和用于RNAi中的RNA分子的综述，见例如，Novina等(2004)Nature430：161-164。

[0207] 在一些实施方案中，提供了降低编码ANGPTL3的核酸的表达的siRNA。在一些实施方案中，siRNA是长约18-26个(包括端点之间的所有点)核苷酸的寡核苷酸。在一些实施方案中，siRNA是长约20-24个核苷酸的寡核苷酸，或者长约21-23个核苷酸的寡核苷酸。在一些实施方案中，siRNA是双链RNA。在一些实施方案中，siRNA将诱导与该siRNA的反义链互补的靶mRNA分子的降解。见例如，Novina等(2004)自然(Nature)430：161-164。

[0208] 反义核酸，如反义DNA分子或者siRNA的活性通常受到靶mRNA的二级结构的影响。见例如，Vickers等(2003)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)278：7108-7118。从而，在一些实施方案中，选择与靶mRNA的可以用于碱基配对的区域互补的反义核酸。在一些实施方案中，通过进行“基因步移(gene walk)”，例如，通过经验测试许多反义寡核苷酸与沿着靶mRNA的多个区域杂交和/或减小靶mRNA表达的能力，鉴定靶mRNA的合适区域。见例如，Vickers等(2003)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)278：7108-7118；Hill等(1999)美国呼吸细胞和分子生物学杂志(Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.)21：728-737。在一些实施方案中，使用mRNA二级结构预测程序或者相关的算法鉴定不与靶mRNA的任何其他区域杂交的靶mRNA的区域，来鉴定靶mRNA的合适区域。见例如，Hill等(1999)美国呼吸细胞和分子生物学杂志(Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.)21：728-737。在一些实施方案中，上面两种方法组合用于鉴定靶mRNA的合适区域。见例如，Hill等(1999)美国呼吸细胞和分子生物学杂志(Am.J.Respir.CellMol.Biol.)21：728-737。

[0209] 在一些实施方案中，提供了通过减小编码ANGPTL3的核酸的表达，减小ANGPTL3活性的方法。在一些实施方案中，该方法包括在体外或体内减小细胞中编码ANGPTL3的核酸的表达。在一些实施方案中，该方法包括在体外或体内对细胞施用减小编码ANGPTL3的核酸的表达的反义核酸。在一些实施方案中，编码ANGPTL3的核酸编码人ANGPTL3。在一些实施方案中，编码ANGPTL3的核酸编码小鼠ANGPTL3。

[0210] 在一些实施方案中，提供了治疗脂质代谢的疾病的方法，如上述任一种方法。在一些实施方案中，该方法包括对患者施用有效量的减小编码ANGPTL3的核酸的表达的反义核酸。在一些实施方案中，将反义核酸递送到表达编码ANGPTL3的核酸的器官。

[0211] ANGPTL3主要在肝脏中表达。Oike，Y.等(2005)分子医学趋势(TRENDS Mol.Med.)11(10)：473-479。在小鼠中，表达明显不受短期禁食的影响。Oike，Y.等(2005)分子医学趋势(TRENDS Mol.Med.)11(10)：473-479。然而，用胆固醇喂饲和在一些肥胖和糖尿病的小鼠模型(例如db/db和ob/ob小鼠)，和患有链佐星-诱导的I型糖尿病小鼠中，表达增加，这提示ANGPTL3可以促成糖尿病的血脂障碍和代谢综合征。Oike，Y.等(2005)分子医学趋势(TRENDS Mol.Med.)11(10)：473-479。因此，在一些实施方案中，将反义核酸递送到肝脏中。例如，在Khan等(2004)药物靶标杂志(J.Drug Targeting)12：393-404中提供了体内施用反义核酸和持续体内递送反义核酸，包括持续递送到特定器官如肝脏的一些示例性教导。在一些实施方案中，通过施用被封或者包含在生物可降解的聚合物中的反义核酸，实现持续递送。例如，在一些实施方案中，反义核酸可以包含在聚(乙醇酸)(PLGA)微球体(例如，0.5-20μm；3000MW)内。在一些实施方案中，反义核酸缀合到亲脂部分。见Khan等(2004)药物靶标杂志(J.Drug Targeting)12：393-404。VI.实施例
A.小鼠照料和饮食研究

[0212] 根据联邦政府的指导进行小鼠研究。将小鼠饲养在24℃下固定12小时光照/12小时暗周期并且随意获得水和啮齿动物标准饮食(chow)(22％卡路里来自脂肪)(产品号5021；Purina，St.Louis，MO)，如下述。在下文中称作“禁食状态”的小鼠被剥夺食物16小时。
B.小鼠中人ANGPTL3的体内过表达

[0213] 将编码全长人ANGPTL3(SEQ ID NO：6)的cDNA插入到腺病毒载体pFAD的Ad E1缺失的区域中，从而将cDNA置于巨细胞病毒启动子的控制下。见Hitt等，“构建和增殖人腺病毒”(“Construction andpropagation of human adenovirus vectors，”)在细胞生物学：实验室手册(CellBiology：A Laboratory Handbook)卷1，第500-512页中(J.E.Celis编，第2版，1998)。得到的构建体Ad5-mAngptl-4T用于感染CHO细胞。空Ad5病毒也作为对照用于感染CHO细胞。通过受感染的CHO细胞提取物的蛋白质印迹证实人ANGPTL3的表达。

[0214] 通过尾部静脉血管将下列剂量的Ad5-hAngptl3T注射到C57BL/6J小鼠中：9 9 8 8 9
2×10vp，1×10vp，5×10vp，2×10vp。作为对照，将2×10vp的空Ad5载体通过尾部静脉注射到C57BL/6J小鼠中。每组中存在5只小鼠。4天后，收集来自腺病毒-感染小鼠的血液样品，在此期间正常喂饲(不禁食)小鼠。利用Cobas Integra 500(罗氏(Roche)，巴塞尔(Basel)，瑞士)测量血清甘油三酯水平。

[0215] 结果显示在图8中。在该实验中，注射了2×109vp或1×109vp的Ad5-hAngptl3T的小鼠与注射了空Ad5载体对照的小鼠相比较时，具有显著增加的血清甘油三酯水平。C.生成和纯化小鼠和人ANGPTL3

[0216] 为了表达重组的小鼠ANGPTL3，用1.5×1011vp的重组腺病毒Ad5-mAngptlT感染CHO细胞。Ad5-mAngptlT表达在C-末端具有His6标记物的小鼠ANGPTL3(在ANGPTL3和His6标记物之间包括甘氨酸残基)，称为mANGPTL3T(SEQ ID NO：2)。16-24小时后，将培养基改变为无血清培养基(EX-CELL 325-PF CHO培养基，14335，JRH，Lenexa，KS)。每24-36小时收获条件培养基，并替换为新鲜无血清培养基，总共收获5次。

[0217] 将条件培养基(1L)加载到10-12ml的镍-螯合树脂柱(R801-01，Invitrogen，Carlsbad，CA)上。用5倍柱体积的清洗缓冲液(10mM咪唑，20mM Tris pH 7.8，500mM NaCl)清洗该柱。结合的mANGPTL3T由洗脱缓冲液(500mM咪唑，20mM Tris pH 7.8，500mM NaCl)洗脱，并收集在一系列1.5ml的组分中。通过蛋白质印迹和仅仅蓝色染色确定收集的组分中存在mANGPTL3T。将包含mANGPTL3T的组分汇集在一起，等分试样，并冷冻在-70℃。

[0218] 为了表达重组人ANGPTL3，用1.5×1011vp的重组腺病毒Ad5-mAngptlT感染CHO细胞。Ad5-hAngptlT表达在C-末端具有His6标记物的人ANGPTL3(在ANGPTL3和His6标记物之间包括甘氨酸残基)，称为hANGPTL3T(SEQ ID NO：4)。如上关于mANGPTL3T所述地，表达和纯化hANGPTL3T。D.生成和纯化rN’-mANGPTL3T和rN’-hANGPTL3T

[0219] 将编码小鼠ANGPTL3的氨基酸17-240的多核苷酸序列克隆到表达载体pET22b(+)(Novagen)中。该载体编码N-末端pelB前导序列，以及C-末端His标记物。由此生成的表达载体称为pET-N’-mANGPTL3T。在翻译蛋白质和除去除pelB序列的11个氨基酸外的全部氨基酸后，N’-mANGPTL3T具有SEQ ID NO：7中所示的序列。该序列包含来自pelB序列的11个氨基酸，随后是小鼠ANGPTL3的氨基酸17-240(在表7中加下划线)，随后是具有2个氨基酸的接头和His6标记物。

[0220] 类似地，将编码人ANGPTL3的氨基酸20-243的多核苷酸序列克隆到表达载体pET22b(+)(Novagen)中。该载体编码N-末端pelB前导序列，以及C-末端His标记物。由此生成的表达载体称为pET-N’-hANGPTL3T。在翻译蛋白质和除去除pelB序列的11个氨基酸外的全部氨基酸后，N’-hANGPTL3T具有SEQ ID NO：8中所示的序列。该序列包含来自pelB序列的11个氨基酸，随后是人ANGPTL3的氨基酸20-243(在表7中加下划线)，随后是具有2个氨基酸的接头和His6标记物。

[0221] 由大肠杆菌(E.coli)表达和纯化N’-mANGPTL3T或N’-hANGPTL3T，如下。向包含50μg/ml氯霉素和100μg/ml羧苄青霉素的10ml LB中接种一个用pET-N’-mANGPTL3T转化的大肠杆菌菌落。培养物在37℃温育过夜。然后，将10ml培养物转移到500ml无抗生素的LB中，并在37℃温育直到OD600达到0.6(约2小时)。加入IPTG至最终浓度为1mM，并在30℃，以200rpm摇动温育培养物4小时。然后将培养物置于冰上5分钟。细胞通过在JLA16.25转子中以8000rpm离心15分钟沉淀。然后将沉淀重新混悬在50ml裂解缓冲液(50mM Tris，pH 7.5，0.5M NaCl，1％ Triton X-100，1x蛋白酶抑制剂混合物(罗氏(Roche))和0.25ml PMSF(以0.1M存在于异丙酮中))中。裂解的细胞再在JA25.5转子中以9700rpm离心30分钟。除去上清液，并通过在SW28转子中以28,000rpm对其离心30分钟进一步净化。然后，可以利用Probond(Ni)层析法(Invitrogen)，从净化的上清液中纯化重组N’-mANGPTL3T或N’-hANGPTL3T。

[0222] 为了从离心裂解的细胞后剩余的不溶性沉淀中纯化重组N’-mANGPTL3T或N’-hANGPTL3T，用30ml裂解缓冲液清洗沉淀，并在JA25.5转子中以9700rpm离心。清洗步骤重复2次，总共清洗3次。然后，将来自沉淀的不溶性蛋白质溶解在10ml变性缓冲液(50mM Tris，pH8.0，6M盐酸胍)中。然后在JA25.5转子中以28,000rpm离心该溶液30分钟。再将上清液加载到5ml Probond树脂柱上。用50ml清洗缓冲液(50mMTris，pH 8.0，1M NaCl，8M尿素，15mM咪唑)清洗该柱。重组蛋白在具有50ml从清洗缓冲液到复性缓冲液(50mM Tris，pH 8.0，1M NaCl，0.5％吐温20)的梯度的柱中重折叠。然后用洗脱缓冲液(具有250mM咪唑的复性缓冲液)洗脱重组蛋白。收集并针对储存缓冲液(50mM Tris，pH 8.0，100mMNaCl，0.2％吐温20)透析包含重组蛋白的组分。对纯化的N’-mANGPTL3T或N’-hANGPTL3T进行等分，并保存在-70℃。
E.生成和纯化SP1和SP2-KLH

[0223] 纯化 的SP1(SEQ ID NOS：9和10)和SP2-KLH(SEQ IDNO：62)商 购自 Sigma Genosys(The Woodlands，德克萨斯州)。ANGPTL3的SP1区的序列在小鼠和人中是相同的。SP2-KLH是通过下列步骤制备的：将半胱氨酸加入到SP1的COOH-末端，然后利用本领域中已知的标准方法使匙孔血蓝蛋白通过该半胱氨酸缀合于所述肽。
F.在Angptl3敲除小鼠中产生针对ANGPTL3的单克隆抗体

[0224] 利用三个5-8只小鼠的组，在Angptl3敲除小鼠中生成与人和小鼠的ANGPTL3交叉-反应的单克隆抗体，每组小鼠接受不同系列的抗原注射。用如上所述生成和纯化的mANGPTL3T(SEQ ID NO：2)激发(prime)组1。还用mANGPTL3T强化组1四次。收获淋巴组织前的最后强化使用mANGPTL3T。用如上所述生成和纯化的rN’-hANGPTL3T(SEQ ID NO：8)激发组2。用如上所述生成和纯化的rN’-mANGPTL3T(SEQ ID NO：7)强化组2一次，然后用mANGPTL3T(SEQ ID NO：2)强化三次。收获淋巴组织前的最后强化使用hANGPTL3T(SEQ ID NO：4)。用如上所述生成和纯化的hANGPTL3T(SEQ ID NO：4)激发组3，然后用hANGPTL3T强化一次和再用如上所述生成和纯化的合成肽SP2-KLH(SEQ ID NO：62)强化两次。在收获淋巴组织前，使用SP2-KLH(SEQ ID NO：62)对组3中的2只高滴度动物进行最后强化。用如上所述生成和纯化的合成肽SP2-KLH(SEQ ID NO：62)另外强化组3中剩余的动物(称为组4)四次。收获淋巴组织前对组4进行的最后强化使用SP2-KLH(SEQ ID NO：62)。

[0225] 对每只小鼠进行激发和强化，如下。用40μg处于完全弗氏佐剂中的纯化抗原腹膜内激发每只小鼠。2周后用30μg处于不完全弗氏佐剂(IFA)中的纯化抗原腹膜内强化小鼠，并且在另外2周后再用20μg处于IFA中的纯化抗原腹膜内进行强化。备选地，可以使用基于脱乙酰壳多糖的佐剂。见，例如，美国专利号5,912,000；5,965,144；和5,980,912。第二次强化后一周，利用mANGPTL3作为包被抗原的板，通过ELISA测定血清滴定，如下所述。第二次强化后两周，用10μg处于IFA中的纯化抗原腹膜内强化小鼠。第三次强化后一周，再次如上通过ELISA测量血清滴度。对于组4，继续腹膜内强化，直到获得高滴度。当高滴度产生时，利用激发抗原(组1和2)或强化的抗原(组3和4)进行最后的强化。最后的强化在倒数第二次强化后约2周半进行，并用10μg纯化的抗原静脉内进行。

[0226] 最后强化后三天时，从免疫的小鼠中收获脾细胞，并利用PEG1500作为融合剂使其与骨髓瘤细胞(NSI)融合。将由此产生的细胞融合产物稀释到杂交瘤培养基中，并接种到96-孔组织培养板中。1天后，将HAT培养基加入到杂交瘤培养物中。需要时，每3或4天改变培养基。

[0227] 选择和培养10-14天后，通过ELISA筛选杂交瘤。来自组1的杂交瘤利用mANGPTL3T，hANGPTL3T，和N’-hANGPTL3T筛选。来自组2的杂交瘤利用mANGPTL3T和hANGPTL3T筛选。来自组3和4的杂交瘤利用hANGPTL3T和代表ANGPTL3的SP1区的合成肽筛选。

[0228] 如下所示进行ELISA。G.ELISA法

[0229] 利用ELISA筛选与抗原结合的抗体。筛选来自各组的抗体，以获得与mANGPTL3T，hANGPTL3T，N’-hANGPTL3T，和/或hANGPTL3SP1肽的结合。通过添加50μl/孔的处于包被TM缓冲液(BupH 碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液，Pierce #28382，Rockford，IL)中的2.5μg/ml mANGPTL3T，hANGPTL3T，N’hANGPTL3T，和/或hANGPTL3 SP1肽溶液，在4℃包被96孔Nunc TM
Maxi-Sorp ImmunoPlates (Nunc #446612，Roskilde，Denmark)过夜。除去包被缓冲液，并TM
通过添加250μl/孔的封闭缓冲液(1％Blocker BSA，Pierce #37525，在PBS中)在室温下封闭该板2小时。将50μl杂交瘤上清液(未稀释的或稀释在封闭缓冲液中的)或分离的抗-ANGPTL3抗体(未稀释的或稀释在封闭缓冲液中的)加入到所述孔中，并在室温下温育至少1小时。用PBS/吐温20清洗孔四次。将100μl稀释(1∶5,000-1∶10,000)的HRP-缀合山羊抗-小鼠IgG(Pierce#31446)加入到该孔中，并在37℃温育1小时。用PBS/吐温20清洗孔六次。通过将50μl的TMB(四甲基联苯胺)溶液 TMB底物
试剂盒，Pierce#34021)添加到所述孔中5-10分钟检测抗-ANGPTL3抗体。利用微量培养板读数器(分子装置(Molecular Devices)，Sunnyvale，CA)，在450nm处通过分光光度法对板进行读数。
H.单克隆抗体的表位绘图
1.结合某些ANGPTL3肽的抗体

[0230] 通过抗体捕获ELISA测试来自组1的6种抗体，以获得与从小鼠ANGPTL3的N-末端到N’-mANGPTL3T的三种不同的50个氨基酸的肽的结合。测试的抗体称为1.251.1，17 66
1.132.1，1.173.2，1.315.1，1.424.1，和1.431.1。测试那些抗体，以获得与S -G 肽(SEQ
42 91 67 116
ID NO：11)，D -E 肽(SEQ ID NO：12)，Q -M 肽(SEQ ID NO：13)，和N’-mANGPTL3T(SEQ ID NO：7)的结合。

[0231] 该实验的结果显示在表2中。

[0232] 表2.结合ANGPTL3肽的抗体17 66

[0233] 测试的抗体中没有与S -G 肽结合的。抗体1.251.1，1.173.1，1.315.1，和42 91 67 116
1.424.1结合D -E 肽和N’-mANGPTL3T。抗体1.173.1还结合Q -M 肽。抗体1.132.1
17
和1.431.1不结合任何测试的肽或N’-mANGPTL3T，这提示那些抗体结合mANGPTL3的S 和
240
D 之间的区域外的表位。

[0234] 通过抗体捕获ELISA测试来自组(cohort)3的8种抗体，以获得与具有ANGPTL3的SP1区序列的合成肽(称为ANGPTL3 SP1)EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL(SEQ ID NOS：9和10)和全长HIS-标记的人ANGPTL3T：MFTIKLLLFIVPLVISSRIDQDNSSFDSLSPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQINDIFQKLNIFDQSFYDLSLQTSEIKEEEKELRRTTYKLQVKNEEVKNMSLELNSKLESLLEEKILLQQKVKYLEEQLTNLIQNQPETPEHPEVTSLKTFVEKQDNSIKDLLQTVEDQYKQLNQQHSQIKEIENQLRRTSIQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFEGHHHHHH(SEQ ID NO：4)和全长人ANGPTL3(利用ANGPTL3T，如上所述生成的)(SEQ ID NO：3)的结合。无关的重组蛋白作为对照使用。

[0235] 该实验的结果显示在图9中。抗体4.1.1，4.4.1，4.8.1，和4.8.3结合ANGPTL3 SP1优于结合全长ANGPTL3T。抗体4.7.1和4.9.1结合ANGPTL3 SP1和ANGPTL3T。抗体4.6.3结合全长ANGPTL3T，但不结合ANGPTL3 SP1。最后，抗体4.8.2结合所有测试的蛋白，包括对照蛋白。

[0236] 测试来自组4的抗体，以获得与hANGPTL3T和hANGPTL3SP1肽的结合(数据未显示)。抗体5.35和5.50结合这两种抗原并选择用于进一步的分析。2.SP1肽的丙氨酸-分区诱变法

[0237] 利用SP1肽的丙氨酸-分区诱变法进一步定义抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，5.35，和5.50的表位。野生型SP1肽具有序列EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL(SEQ ID NO：9)。制成一系列26种突变体，其中将野生型SP1肽的26个氨基酸的每一个改变为丙氨酸，如表3中所示：表3：突变SP1肽
肽 序列 SEQ ID NO：
SP1 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL 9
突变体1 APKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL 83
突变体2 EAKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL 84
突变体3 EPASRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL 85
突变体4 EPKARFAMLDDVKILANGLLQLGHGL 86
突变体5 EPKSAFAMLDDVKILANGLLQLGHGL 87
突变体6 EPKSRAAMLDDVKILANGLLQLGHGL 88
“突变体7” EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL 9
突变体8 EPKSRFAALDDVKILANGLLQLGHGL 89
突变体9 EPKSRFAMADDVKILANGLLQLGHGL 90
突变体10 EPKSRFAMLADVKILANGLLQLGHGL 91
突变体11 EPKSRFAMLDAVKILANGLLQLGHGL 92
突变体12 EPKSRFAMLDDAKILANGLLQLGHGL 93
突变体13 EPKSRF AMLDDVAILANGLLQLGHGL 94
突变体14 EPKSRFAMLDDVKALANGLLQLGHGL 95
突变体15 EPKSRFAMLDDVKIAANGLLQLGHGL 96
“突变体16” EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL 9
突变体17 EPKSRFAMLDDVKILAAGLLQLGHGL 97
突变体18 EPKSRFAMLDDVKILANALLQLGHGL 98
突变体19 EPKSRFAMLDDVKILANGALQLGHGL 99
突变体20 EPKSRFAMLDDVKILANGLAQLGHGL 100
突变体21 EPKSRFAMLDDVKILANGLLALGHGL 101
突变体22 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQAGHGL 102
突变体23 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLAHGL 103
突变体24 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGAGL 104
突变体25 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHAL 105
突变体26 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGA 106

[0238] “突变体7”和“突变体16”将野生型序列中的丙氨酸“替换”为丙氨酸。那些“突变体”因此具有野生型SP1肽序列并且因此不进行制备。

[0239] 通过抗体捕获ELISA测试抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，5.35，和5.50，以获得与表3中所示的合成肽(除“突变体7”和“突变体16”肽以外)的结合，如下所示。利用Flag-SUMO-SP1基因盒，通过点诱变PCR，生成丙氨酸突变体。“Flag”是flag标记物并且“SUMO”是小的遍在蛋白相关的调节物。每种突变体在体外翻译，并且通过蛋白质印迹，使用抗-flagM1单克隆抗体标准化浓度。通过ELISA方法确定结合每种突变体的抗体如下。野生型SP1肽和每种突变体肽分别捕获在由抗-flag M1单克隆抗体包被的ELISA板的孔中。然后，将生物素化的抗体(4.7.1，4.8.3，4.9.1，5.35，或5.50)加入到孔中。用HRP-缀合的链霉抗生物素蛋白(Pierce #21124)检测抗体与肽的结合，其是如实施例G中所讨论地，利用TMB显影的。

[0240] 该实验的结果显示在图14中。在该图的每幅柱状图中，野生型SP1肽命名为“0”，且位于每幅柱状图的最右端。在该实验中，抗体4.7.1和4.9.1的表位包括SP1肽的氨基酸2-6和9(小鼠ANGPTL3氨基酸33-37和40；人ANGPTL3氨基酸33-37和40)。在该实验中，抗体5.35和5.50的表位包括SP1肽的氨基酸3-6和9-11(小鼠ANGPTL3氨基酸34-37和
40-42；人ANGPTL3氨基酸34-37和40-42)。在该实验中，抗体4.8.3的表位包括SP1肽的氨基酸3-6、9、和11(小鼠ANGPTL3氨基酸34-37、40、和42；人ANGPTL3氨基酸34-37、40、和42)。因此，中和性抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，5.35，和5.50全部结合ANGPTL3的SP1区内的表位，所述表位包括ANGPTL3的氨基酸34-37和40。
I.同种型确定

[0241] 通过标准方法确定了抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，5.35，5.50，和1.315.1的同种型。4.7.1和5.50为IgG2b同种型；4.8.3，1.315.1，和5.35为IgG2a同种型；且4.9.1是IgG1同种型。

[0242] IgG2b抗体在血清中的预测半衰期是3-3.5天。IgG2a抗体在血清中的预测半衰期是6-12天。IgG1抗体在血清中的预测半衰期是8-11天。J.体内施用针对ANGPTL3的单克隆抗体

[0243] 将针对ANGPTL3的单克隆抗体施用于小鼠，从而确定所述抗体是否可以有效降低小鼠中甘油三酯和/或胆固醇的水平。在第一个实验中，对喂饲标准饮食的8周龄C57白化小鼠(“喂饲标准饮食”的小鼠)注射处于10μl/g体重的体积中的30μg单克隆抗体。在该实验中测试的抗-ANGPTL3抗体是1.315.1，4.7.1，4.8.3，4.9.1。抗-KLH抗体作为对照施用。对于每种抗体，注射5只小鼠。4天后测量甘油三酯和胆固醇的喂饲和禁食血清水平。

[0244] 该实验的结果显示在图1和2中。图1显示施用1.315.1，4.7.1，4.8.3，4.9.1，和抗-KLH的小鼠中4天后的喂饲和禁食甘油三酯水平。当纯化抗体4.7.1时，收集到2个峰。将那些峰中的每一个分别施用于小鼠(4.7.1-P1和4.7.1-P2)。当与施用抗KLH的小鼠相比较时，全部四种抗ANGPTL3抗体导致处于喂饲状态的小鼠中的血清甘油三酯水平在统计学上显著降低。然而，在该实验中，没有抗ANGPTL3抗体导致处于禁食状态的小鼠中的血清甘油三酯水平降低。事实上，在该实验中，抗体4.7.1导致禁食小鼠中血清甘油三酯水平增高。

[0245] 图2显示施用1.315.1，4.7.1，4.8.3，4.9.1，和抗-KLH的小鼠中4天后的喂饲和禁食胆固醇水平。如上，在该实验中测试抗体4.7.1的2个分别的峰。此外，当与施用抗KLH的小鼠相比较时，所有抗体导致处于喂饲状态的小鼠中的血清胆固醇水平在统计学上显著降低。然而，在该实验中，没有抗ANGPTL3抗体导致处于禁食状态的小鼠中的血清胆固醇水平降低。

[0246] 在第二个实验中，对喂饲标准饮食的8周龄C57白化小鼠注射处于10μl/g体重的体积中的30μg单克隆抗体。在该实验中测试抗-ANGPTL3抗体4.8.3。抗-KLH抗体作为对照施用。另外，测试抗ANGPTL4抗体14D12，以进行比较。见，例如PCT公开号WO2006/074228。对于每种抗体，注射5只小鼠。4天后测量甘油三酯和胆固醇的喂饲和禁食血清水平。

[0247] 该实验的结果显示在图3和4中。图3显示施用抗ANGPTL3抗体4.8.3、抗ANGPTL4抗体14D12、或抗-KLH抗体的小鼠中的喂饲和禁食甘油三酯水平。在该实验中，4.8.3在喂饲和禁食小鼠中，均以统计学显著程度降低血清甘油三酯水平。在另一方面，在该实验中，抗体14D12仅在禁食小鼠中以统计学显著程度降低血清甘油三酯水平。

[0248] 图4显示施用抗ANGPTL3抗体4.8.3，抗ANGPTL4抗体14D12，或抗KLH抗体的小鼠中的喂饲和禁食血清胆固醇水平。在该实验中，4.8.3在喂饲和禁食小鼠中，均以统计学显著程度降低血清胆固醇水平。在另一方面，在该实验中，抗体14D12仅在禁食小鼠中以统计学显著程度降低血清胆固醇水平。

[0249] 在第三个实验中，对喂饲标准饮食的8周龄C57白化小鼠(“喂饲标准饮食”的小鼠)注射处于10μl/g体重的体积中的30μg单克隆抗体。在该实验中测试的抗-ANGPTL3抗体是4.7.1，4.8.3，和4.9.1。抗-KLH抗体作为对照施用。另外，测试抗ANGPTL4抗体14D12，以进行比较。对于每种抗体，注射10只小鼠。4天后测量甘油三酯和胆固醇的喂饲和禁食血清水平。

[0250] 该实验的结果显示在图5和6中。图5显示施用4.7.1，4.8.3，4.9.1，14D12，和抗KLH的小鼠中4天后的喂饲和禁食甘油三酯水平。在该实验中，抗ANGPTL3抗体4.8.3和4.9.1导致处于喂饲状态的小鼠中的血清甘油三酯水平在统计学上显著降低。抗体4.7.1未能减少喂饲状态中的甘油三酯可以部分地归因于它是IgG2b抗体，其在血清中的预测半衰期仅为3-3.5天。在该实验中，抗ANGPTL3抗体4.7.1，4.8.3，和4.9.1，以及抗ANGPTL4抗体14D12导致处于禁食状态的小鼠中的血清甘油三酯水平降低。

[0251] 图6显示施用4.7.1，4.8.3，4.9.1，14D12，和抗KLH的小鼠中4天后的喂饲和禁食胆固醇水平。在该实验中，抗ANGPTL3抗体4.7.1，4.8.3，和4.9.1，以及抗ANGPTL4抗体14D12导致处于喂饲状态的小鼠中的血清胆固醇水平的降低。然而，在该实验中，只有抗ANGPTL3抗体4.9.1和抗ANGPTL4抗体14D12导致处于禁食状态的小鼠中的血清胆固醇水平的降低。

[0252] 在第四个实验中，对喂饲标准饮食的8周龄C57白化小鼠(“喂饲标准饮食”的小鼠)注射处于10μl/g体重的体积中的30μg单克隆抗体。在该实验中测试的抗-ANGPTL3抗体是1.125.1，1.132.1，1.173.2，1.315.1，1.424.1，和1.431.1。抗-KLH抗体作为对照施用。每组中存在5只小鼠。4天后和8天后测量甘油三酯的喂饲和禁食血清水平。

[0253] 该实验的结果显示在图7中。在该实验中，1.315.1在4天和8天后均以统计学显著程度减少血清甘油三酯。

[0254] 在第五个实验中，对喂饲标准饮食的8-10周龄C57白化小鼠(“喂饲标准饮食”的小鼠)注射处于10μl/g体重的体积中的0μg，3μg，10μg，30μg，或90μg单克隆抗体。在该实验中测试的抗-ANGPTL3抗体是5.35和5.50。对于处于各种剂量的各种抗体，注射
5只小鼠。4天后和7天后测量甘油三酯和胆固醇的喂饲血清水平。

[0255] 该实验的结果显示在图15和16中。图15显示注射了不同量的抗体5.35和5.50的小鼠中4天和7天后的血清甘油三酯。在该实验中，抗体5.35和5.50均在4天后减少注射了30mg/kg或90mg/kg抗体的小鼠中的血清甘油三酯。在该实验中，抗体5.50还在4天后减少注射了3mg/kg或10mg/kg抗体的小鼠中的血清甘油三酯。在该实验中，7天后，在注射了10mg/kg，30mg/kg，或90mg/kg抗体5.50的小鼠中的血清甘油三酯仍减少，而只有注射了90mg/kg抗体5.35的小鼠在7天后继续具有减少的血清甘油三酯。

[0256] 图16显示注射不同量的抗体5.35和5.50的小鼠中的血清胆固醇水平。在该实验中，注射了30mg/kg或90mg/kg的抗体5.35，或10mg/kg，30mg/kg，或90mg/kg抗体5.50的小鼠在4天后具有降低的血清胆固醇水平。注射了90mg/kg抗体5.35或90mg/kg抗体5.50的小鼠在7天后继续具有降低的血清胆固醇水平。
K.在ApoE敲除小鼠中施用针对ANGPTL3的单克隆抗体

[0257] 已经发现ApoE敲除小鼠患自发性高胆固醇血症。见例如，Piedrahita等人(1992)美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)89(10)：4471-5；和Zhang等人(1992)科学(Science)258(5081)：468-71。为了确定某些抗ANGPTL3的单克隆抗体是否可以降低ApoE敲除小鼠中血清胆固醇和甘油三酯水平，进行下面的实验。用30mg/kg抗KLH，30mg/kg抗体5.35，或30mg/kg抗体5.50腹膜内注射3组每组8只14周龄的ApoE敲除小鼠tml Unc
(Taconic动物模型(Taconic Aminal Models)，品系B6.129P2-Apoe N11)。每只小鼠在第0天接受一次注射，并在第4天接受一次注射。所有小鼠喂饲标准饮食(“喂饲标准饮食”)。在第0天(注射前)、第4天、第8天、和第12天，在每只小鼠中测量喂饲血清甘油三酯水平和喂饲胆固醇水平。

[0258] 该实验的结果显示在图19中。抗体5.35在第4天时降低血清甘油三酯水平36％。该降低持续到第8天，但在第12天时消失。抗体5.50在第4天时降低血清甘油三酯水平
60％。该降低持续到第8天，且直到第12天，剩余的血清甘油三酯显著减少。

[0259] 在该实验中，抗体5.35降低血清胆固醇水平17％，尽管该降低直到第8天才完成，且该降低在第12天时略微减小。抗体5.50在第4天时降低血清胆固醇水平，并在直到第8天和第12天时继续降低血清胆固醇水平，直到在该实验结束时总共降低30％。

[0260] 那些结果显示抗体5.35和5.50在ApoE小鼠中降低血清甘油三酯水平和血清胆固醇水平。在该实验中，抗体5.50更有效降低血清甘油三酯水平和血清胆固醇水平，这可能归因于该抗体较长的半衰期。L.体外施用针对ANGPTL3的单克隆抗体

[0261] 利用体外测定测试小鼠单克隆抗ANGPTL3对LPL活性的影响。为了获得LPL-条TM件培养基，用LPL表达载体转染HEK293F细胞(FreeStyle 293表达系统)(Invitrogen，Carlsbad，CA)，所述LPL表达载体在IRES puro质粒(Clontech，Mountain View，CA)中包括编码具有C-末端FLAG标记物的LPL的DNA。

[0262] 转化的细胞生长在选择培养基(增补了1X青霉素-链霉素-谷氨酰胺TM
(Invitrogen，Carlsbad，CA)和2.4μg/ml嘌呤霉素的FreeStyle 293系统培养基(GIBCO
6
BRL，Gaithersburg，MD))中。计数并通过离心沉淀细胞。将由此生成的细胞沉淀以1×10TM
细胞/ml的浓度，重新混悬在包含1×GPS，无嘌呤霉素的新鲜FreeStyle 293培养基中。
48小时温育后，由细胞收获包含LPL的条件培养基，将其分配在5ml的等分试样中，并且然后冷冻在-70℃直至使用。

[0263] 通过将200mg/dL (Pharmacia & Upjohn)，12mM葡萄糖，5单位/ml肝素和200μl 5％小鼠血清(作为Apo C-II的来源)加入到条件培养基的等分试样中，测定条件培养基中的LPL活性。然后在37℃温育该培养基。在2小时，4小时，和6小时收获样品，并立即冷冻在-70℃，直至进行测定。通过利用未稀释的条件培养基和1∶2，1∶4，
1∶8，1∶16，和1∶32的稀释物测量FFA水平，测定LPL条件培养基的LPL活性。利用Wako FFA试剂盒(美国Wako化学公司(Wako Chemical USA，Inc.)，Richmond，VA)，在2小时，4小时和6小时确定FFA水平。

[0264] 还确定单克隆抗体在关于LPL活性的体外测定中中和ANGPTL3活性的能力。关于LPL活性体外测定利用Wako FFA试剂盒(美国Wako化学公司(Wako Chemical USA，Inc.)，Richmond，VA)测量FFA水平。在存在25nM小鼠ANGPTL3和5种单克隆抗体(抗体4.9.1，4.8.3，1.315.1，4.7.1，和1.173.2)中每一种的四种浓度(0.8μg/ml，2μg/ml，10μg/ml和50μg/ml)的条件下，进行独立的LPL活性测定。结果显示在图12中。对于每种抗体，中和活性通过抗体增加LPL活性，即“拯救”LPL免受ANGPTL3抑制的能力证明。将拯救活性确定为存在ANGPTL3和抗ANGPTL3抗体条件下的LPL活性相对于仅存在ANGPTL3条件下LPL活性的百分比增加。四种抗体(4.9.1，4.8.3，1.315.1和4.7.1)根据它们的浓度，能够拯救LPL活性超过50％。该结果说明那些抗体能够通过中和ANGPTL3活性拯救LPL活性。
相反，抗体1.173.2不证明显著拯救LPL活性，并由此起内部阴性对照的作用。
M.针对ANGPTL3的单克隆抗体的结合亲和性

[0265] 利用 3000系统(GE健康护理(GE Healthcare)，Uppsala，瑞典)确定抗体4.7.1，4.8.3，和4.9.1对于N’-hANGPTL3T和hANGPTL3T的亲合性常数和抗体4.7.1，
4.9.1，5.35，和5.50对SP1肽的亲合性常数。 3000是用于利用表面等离子体
共振技术检测和量化蛋白质-蛋白质相互作用的实时生物分子分析系统。按照生产商关于
3000的说明确定下列亲合性常数：平衡解离常数(KD)，缔合率常数(kon)，和解
离率常数(koff)。

[0266] 分别确定4.7.1，4.8.3，和4.9.1抗体对于N’-hANGPTL3T和hANGPTL3T蛋白抗原的亲合常数，如下。用蛋白质抗原包被BIACORE CM5芯片表面，这是通过利用胺偶联试剂盒(Amine Coupling Kit)(产品号：BR-1000-50，GE健康护理(GE Healthcare)，Uppsala瑞典)使10μg/ml N’-hANGPTL3T或20μg/ml hANGPTL3T偶联于该芯片表面实现的。通过第一次以30μl/min的流速，注射抗体的Fab片段(利用Fab制备试剂盒(产品号：
44885，Pierce，Rockford，IL 61105)，按照生产商的说明生成的)进入具有包被的芯片表面的 3000系统2分钟，形成缔合相和解离相，其用于确定kon和koff常数。
测试的Fab片段的浓度是200nM，100nM，50nM，25nM，12.5nM，6.25nM，3.125nM，1.5625nM，
0.78125nM，和0nM。注射阶段用于确定缔合率常数，或kon。每次注射后，通过使BIACORE HBS-EP缓冲液(产品号：BR-1001-88，GE健康护理(GE Healthcare)，Uppsala瑞典)流过BIACORE CM5芯片表面上的抗原-Fab复合物5分钟，从蛋白质抗原中解离Fab片段。该解离相用于确定解离率常数，或koff。在下一次注射前，通过以100μl/min的流速注射10mM HCl 30秒，复原BIACORE芯片表面。通过从4.7.1，4.8.3，和4.9.1表面的Fab-特异性结合特征中减去参考表面(用相等水平的无关蛋白质固定的)的非特异性结合特征，生成用于数据分析的BIACORE传感图。通过利用BIA评估软件版本3.0(BIAevalution Software Version 3.0)(GE健康护理(GE Healthcare)，Uppsala瑞典)，使缔合和解离数据组完全拟合具有质量转移校正的1∶1的结合模型，来确定亲和性参数，包括KD，kon，和koff值。

[0267] 分别确定4.7.1，4.9.1，5.35，和5.50抗体对于SP1肽抗原的亲和性常数，如下。用抗小鼠IgG Fc包被BIACORE CM5芯片表面，这是通过利用胺偶联试剂盒(Amine Coupling Kit)(产品号：BR-1000-50，GE健康护理(GE Healthcare)，Uppsala瑞典)使90μg/ml免疫纯山羊抗小鼠IgG Fc(产品号：31170，Pierce，Rockford，IL 61105)偶联于该芯片表面实现的。然后，通过以10μl/min的流速注射抗体30秒，在抗小鼠IgG FcBIACORE芯片表面上捕获抗体。通过第一次以30μl/min的流速，注射SP1肽进入具有抗体-包被的芯片表面的
3000系统2分钟，来形成缔合和解离相，其用于确定kon和koff常数。测试的
SP1肽的浓度是200nM，100nM，50nM，25nM，12.5nM，6.25nM，3.125nM，1.5625nM，0.78125nM，和0nM。注射阶段用于确定缔合率常数，或kon。每次注射后，通过使BIACORE HBS-EP缓冲液(产品号：BR-1001-88，GE健康护理(GEHealthcare)，Uppsala瑞典)流过BIACORE CM5芯片表面上的肽-抗体复合物5分钟，从抗体中解离SP1肽。该解离阶段用于确定解离率常数，或koff。在下一次注射前，通过以100μl/min的流速注射10mM HCl 30秒，复原BIACORE芯片表面。通过从4.7.1，4.9.1，5.35，和5.50表面的抗原-特异性结合特征中减去参考表面(用相等水平的无关小鼠IgG捕获的)的非特异性结合特征，生成用于数据分析的BIACORE传感图。通过利用BIA评估软件版本3.0(BIAevalution Software Version 3.0)(GE健康护理(GE Healthcare)，Uppsala瑞典)，使缔合和解离数据组完全拟合具有质量转移校正的1∶1的结合模型，来确定亲和性参数，包括KD，kon，和koff值。

[0268] 该实验的结果显示在表4、5、和6中。一式两份地测试每种抗体，并显示关于每个实验的结果。

[0269] 表4.抗体对N’-hANGPTL3T的亲和性抗体 KD(nM) kon(M-1sec-1) koff(sec-1)
4.7.1 49.5 1.85×105 9.15×10-3
4.7.1 77.5 1.16×105 8.99×10-3
4.8.3 210 9.00×104 1.90×10-2
4.8.3 251 1.09×105 2.75×10-2
4.9.1 45.4 1.31×105 5.93×10-3
4.9.1 55 1.33×105 7.34×10-3

[0270] 表5.抗体对hANGPTL3T的亲和性抗体 KD(nM) kon(M-1sec-1) koff(sec-1)
4.7.1 45.3 1.76×105 7.96×10-3
4.7.1 117 8.12×104 9.53×10-3
4.8.3 970 2.23×104 2.16×10-2
4.8.3 450 6.00×104 2.73×10-2
5 -3
4.9.1 48.1 1.29×10 6.22×10
4.9.1 45.2 1.72×105 7.77×10-3

[0271] 表6.抗体对SP1肽的亲和性抗体 KD(nM) kon(M-1sec-1) koff(sec-1)
4.7.1 26.1 2.09×105 5.46×10-3
4.9.1 46.1 1.69×105 7.78×10-3
5.35 1.80 8.35×105 1.5×10-3
5.50 1.78 1.08×106 1.93×10-3
N.一些针对ANGPTL3的单克隆抗体的体内药物代谢动力学

[0272] 为了确定这些抗体(抗体4.7.1，4.8.3，和4.9.1)在体内的药物代谢动力学，以30mg/kg的剂量，分别将各种抗体通过腹膜内注射施用于四只不同的小鼠。在图13中显示的不同时间点时，对小鼠取血，并获得血清。通过将由抗体捕获ELISA确定的滴度和利用在抗体捕获ELISA中注射到小鼠中的相同抗体的系列稀释物构建的标准曲线进行比较，确定血清中存在的抗ANGPTL3抗体的水平。抗体捕获ELISA如实施例G中所述实施。结果可见图13中。

[0273] 为了确定抗体5.35和5.50在体内的药物代谢动力学，在实施例J的第5个实验中所述的小鼠中，在注射后4天、7天、和12天确定抗体水平。血清中存在的抗ANGPTL3抗体的水平通过利用重组人ANGPTL3-包被的板的抗体捕获ELISA确定。血清中的抗体浓度通过与利用在抗体捕获ELISA中注射到小鼠中的相同抗体的系列稀释物构建的标准曲线相比较确定。ELISA如实施例G中所述实施。

[0274] 该实验的结果显示在图17中。在该实验中，抗体5.50具有比抗体5.35更长的体内半衰期。该较长的半衰期与实施例J中所讨论的实验中抗体5.50与抗体5.35相比增高的体内功效有关，并且如图15和16中所示。

[0275] 单次30mg/kg抗体注射后，抗体4.7.1，4.9.1，5.35，和5.50在C57小鼠中的药物代谢动力学显示在图18中。抗体浓度通过抗体捕获ELISA确定，如实施例G中所述实施。血清中的抗体浓度通过与利用在抗体捕获ELISA中注射到小鼠中的相同抗体的系列稀释物构建的标准曲线确定。在该实验中，抗体5.50和4.9.1具有大致相同的半衰期。另外，抗体5.50和4.9.1的半衰期比抗体5.35和4.7.1的半衰期更长，抗体5.35和4.7.1的半衰期在该实验中彼此大致相同。此外，在该实验中，抗体5.35和5.50的Cmax大致相同，比抗体4.9.1的Cmax更大，其又高于抗体4.7.1的Cmax。
O.一些针对ANGPTL3的单克隆抗体的序列

[0276] 确定了抗体4.7.1，4.8.3，4.9.1，5.35，和5.50的重链和轻链可变区。抗体4.7.1的重链可变区显示在SEQ ID NO：19(有N-末端信号肽)中和SEQ ID NO：20(无N-末端信号肽)中。抗体4.7.1的轻链可变区显示在SEQ ID NO：27(有N-末端信号肽)中和SEQ ID NO：28(无N-末端信号肽)中。抗体4.8.3的重链可变区显示在SEQ ID NO：21(有N-末端信号肽)中和SEQ ID NO：22(无N-末端信号肽)中。抗体4.8.3的轻链可变区显示在SEQ ID NO：29(有N-末端信号肽)中和SEQ ID NO：30(无N-末端信号肽)中。抗体4.9.1的重链可变区显示在SEQ ID NO：23(有N-末端信号肽)中和SEQ ID NO：24(无N-末端信号肽)中。抗体4.9.1的轻链可变区显示在SEQ ID NO：31(有N-末端信号肽)中和SEQ ID NO：32(无N-末端信号肽)中。抗体5.35的重链可变区显示在SEQ ID NO：63(有N-末端信号肽)中和SEQ ID NO：64(无N-末端信号肽)中。抗体5.35的轻链可变区显示在SEQ ID NO：67(有N-末端信号肽)中和SEQ IDNO：68(无N-末端信号肽)中。
抗体5.50的重链可变区显示在SEQ ID NO：65(有N-末端信号肽)中和SEQ ID NO：66(无N-末端信号肽)中。抗体5.50的轻链可变区显示在SEQ ID NO：69(有N-末端信号肽)中和SEQ IDNO：70(无N-末端信号肽)中。

[0277] 抗体4.7.1，4.8.3，和4.9.1的重链可变区的对比显示在图10中。还显示了重链可变区的共有序列(SEQ ID NO：25)。无信号肽的重链可变区的共有序列显示在表7中(SEQ ID NO：26)。

[0278] 抗体4.7.1，4.8.3，和4.9.1的轻链可变区的对比显示在图11中。还显示了轻链可变区的共有序列(SEQ ID NO：33)。无信号肽的轻链可变区的共有序列显示在表7中(SEQ ID NO：34)。P.人源化一些针对ANGPTL3的单克隆抗体

[0279] 下列流程描述抗体4.7.1的人源化。抗体4.8.3，4.9.1，5.35，5.50，和1.315.1可以通过相同的方法人源化。抗体4.7.1的人源化模式称为“hu4.7.1。”抗体4.8.3，4.9.1，5.35，5.50，和1.315.1的人源化模式分别称为“hu4.8.3”、“hu4.9.1”、“hu5.35”、“hu5.50”、和“hu1.315.1”。

[0280] 每种重链和轻链的人构架区基于其与抗体4.7.1中存在的小鼠构架区的同源性选自一组家族-特异性共有人构架区中。选择的人构架区的特异性氨基酸位置是多样的，从而反映选择的V-基因家族中构架的多样性。将编码抗体4.7.1的重链的CDR1、CDR2、和CDR3的多核苷酸克隆到编码重链的多样化人构架区的多核苷酸文库中。由此产生的文库称为人源化4.7.1重链可变区文库。将编码抗体4.7.1的轻链的CDR1、CDR2、和CDR3的多核苷酸克隆到编码轻链的多样化人构架区的多核苷酸文库中。由此产生的文库称为人源化4.7.1轻链可变区文库。将人源化4.7.1重链可变区文库和人源化4.7.1轻链可变区文库克隆到处于单链Fv(scFv)形式的噬菌体展示载体中。

[0281] 然后，针对靶抗原，例如，人ANGPTL3，通过2-3轮结合来，筛选scFv噬菌体展示文库以选择高亲和性scFv。然后，以可溶形式表达scFv，并测试靶亲和性和/或体外中和性特性。然后，将针对合适的亲和性和潜力选择的scFv的重链可变区和轻链可变区表达为全长IgG或scFv-CL-PEG(CL是人恒定轻链)，并测试体内活性，例如，小鼠中血清甘油三酯和/或血清胆固醇的减少。PEG通过半胱氨酸附着在CL基团上。Q.一些针对ANGPTL3的单克隆抗体的亲和力成熟

[0282] 下列流程描述抗体4.7.1的亲和力成熟。抗体4.8.3，4.9.1，5.35，5.50，和1.315.1的亲和力成熟可以利用相同的方法执行。类似地，hu4.7.1，hu4.8.3，hu4.9.1，hu5.35，hu5.50，和hu1.315.1的亲和力成熟可以利用相同的方法执行。

[0283] 例如，利用倾向差错PCR，对编码抗体4.7.1的重链的多核苷酸进行随机诱变。利用 随机诱变试剂盒(Stratagene，LaJolla，CA)，按照生产商的说明，执行倾向差错PCR。

[0284] 例如，利用倾向差错PCR，也对编码抗体4.7.1的轻链的多核苷酸进行随机诱变。利用 随机诱变试剂盒(Stratagene，LaJolla，CA)，按照生产商的说明，执
行倾向差错PCR。将随机突变的重链多核苷酸和随机突变的轻链多核苷酸克隆到处于单链Fv(scFv)形式的噬菌体展示载体中。

[0285] 然后，针对靶抗原，例如，人ANGPTL3，通过2-3轮结合来，筛选scFv噬菌体展示文库以选择高亲和性scFv。然后，以可溶形式表达scFv，并测试靶亲和性和/或体外中和性潜力。然后，将针对合适的亲和性和潜力选择的scFv的重链可变区和轻链可变区表达为全长IgG或scFv-CL-PEG，并测试体内活性，例如，小鼠中血清甘油三酯和/或血清胆固醇的减少。

[0286] 选择的亲和力成熟抗体如果不是已经人源化的，则如实施例P中所述地对其进行人源化。

[0287] 虽然以上实施例特别描述一些针对小鼠ANGPTL3的中和性单克隆抗体以及那些抗体在小鼠中的体内作用，本领域中的技术人员应该容易公认可以生成针对人ANGPTL3的中和性单克隆抗体，并且所述抗体应该在人中具有相同或相似的体内作用。该结论部分地基于这样的观察，即人和小鼠ANGPTL3是进化保守蛋白，其共享结构和功能特性。Conklin，D.，等(1999)基因组(Genomics)62：477-482。例如，人和小鼠ANGPTL3共享约76％的氨基酸序列同一性。人和小鼠ANGPTL3还共享共同的次级结构元件，例如，N-末端卷曲螺旋结构域和C-末端血纤蛋白原样结构域。此外，人ANGPTL3与小鼠ANGPTL3具有相似的功能，这是通过人ANGPTL3在小鼠中过表达时提高血清脂质水平的能力证明的。Koishi等(2002)自然遗传学(Nat.Genet.)30(2)：151-157。

[0288] 本领域中通常公认小鼠常规用作利用中和性抗体治疗多种病症和疾病的模型。例如，中和性抗体已经被用于在小鼠中治疗朊病毒疾病、糖尿病、和炎症。参见，例如，White等(2003)自然(Nature)422：80-83；Cailleau等(1997)糖尿病(Diabetes)46：937-940；和Lochner等(2002)免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)259：149-157。在后者的研究中，中和小鼠IL-18的单克隆抗体在IL-18缺陷性小鼠中形成。那些小鼠单克隆抗体能够在野生型小鼠中抑制脂多糖-诱导的炎性应答。因此，本领域中的技术人员应该断定前述实施例支持针对人ANGPTL3的中和性单克隆抗体在治疗人医学病症中的用途。表7：序列表描述 SEQ 序列
ID
NO：
小鼠ANGPTL3 1 MHTIKLFLFV VPLVIASRVD PDLSSFDSAP SEPKSRFAML
(登记号 DDVKILANGL LQLGHGLKDF VHKTKGQIND IFQKLNIFDQ
SFYDLSLRTN EIKEEEKELR RTTSTLQVKN EEVKNMSVEL
NP_038941) NSKLESLLEE KTALQHKVRA LEEQLTNLIL SPAGAQEHPE
VTSLKSFVEQ QDNSIRELLQ SVEEQYKQLS QQHMQIKEIE
KQLRKTGIQE PSENSLSSKS RAPRTTPPLQ LNETENTEQD
DLPADCSAVY NRGEHTSGVY TIKPRNSQGF NVYCDTQSGS
PWTLIQHRKD GSQDFNETWE NYEKGFGRLD GEFWLGLEKI
YAIVQQSNYI LRLELQDWKD SKHYVEYSFH LGSHETNYTL
HVAEIAGNIP GALPEHTDLM FSTWNHRAKG QLYCPESYSG
GWWWNDICGE NNLNGKYNKP RTKSRPERRR GIYWRPQSRK
LYAIKSSKMM LQPTT
mANGPTL3T 2 MHTIKLFLFV VPLVIASRVD PDLSSFDSAP SEPKSRFAML
DDVKILANGL LQLGHGLKDF VHKTKGQIND IFQKLNIFDQ
SFYDLSLRTN EIKEEEKELR RTTSTLQVKN EEVKNMSVEL
NSKLESLLEE KTALQHKVRA LEEQLTNLIL SPAGAQEHPE
VTSLKSFVEQ QDNSIRELLQ SVEEQYKQLS QQHMQIKEIE
KQLRKTGIQE PSENSLSSKS RAPRTTPPLQ LNETENTEQD
DLPADCSAVY NRGEHTSGVY TIKPRNSQGF NVYCDTQSGS
PWTLIQHRKD GSQDFNETWE NYEKGFGRLD GEFWLGLEKI
YAIVQQSNYI LRLELQDWKD SKHYVEYSFH LGSHETNYTL
HVAEIAGNIP GALPEHTDLM FSTWNHRAKG QLYCPESYSG
GWWWNDICGE NNLNGKYNKP RTKSRPERRR GIYWRPQSRK
LYAIKSSKMM LQPTTGHHHHH H
人ANGPTL3 3 MFTIKLLLFI VPLVISSRID QDNSSFDSLS PEPKSRFAML
(登记号 DDVKILANGL LQLGHGLKDF VHKTKGQIND IFQKLNIFDQ
SFYDLSLQTS EIKEEEKELR RTTYKLQVKN EEVKNMSLEL
NP_055310) NSKLESLLEE KILLQQKVKY LEEQLTNLIQ NQPETPEHPE
VTSLKTFVEK QDNSIKDLLQ TVEDQYKQLN QQHSQIKEIE
NQLRRTSIQE PTEISLSSKP RAPRTTPFLQ LNEIRNVKHD
GIPAECTTIY NRGEHTSGMY AIRPSNSQVF HVYCDVISGS
PWTLIQHRID GSQNFNETWE NYKYGFGRLD GEFWLGLEKI
YSIVKQSNYV LRIELEDWKD NKHYIEYSFY LGNHETNYTL
HLVAITGNVP NAIPENKDLV FSTWDHKAKG HFNCPEGYSG
GWWWHDECGE NNLNGKYNKP RAKSKPERRR GLSWKSQNGR
LYSIKSTKML IHPTDSESFE
hANGPTL3T 4 MFTIKLLLFI VPLVISSRID QDNSSFDSLS PEPKSRFAML
DDVKILANGL LQLGHGLKDF VHKTKGQIND IFQKLNIFDQ
SFYDLSLQTS EIKEEEKELR RTTYKLQVKN EEVKNMSLEL
NSKLESLLEE KILLQQKVKY LEEQLTNLIQ NQPETPEHPE
VTSLKTFVEK QDNSIKDLLQ TVEDQYKQLN QQHSQIKEIE
NQLRRTSIQE PTEISLSSKP RAPRTTPFLQ LNEIRNVKHD
GIPAECTTIY NRGEHTSGMY AIRPSNSQVF HVYCDVISGS
PWTLIQHRID GSQNFNETWE NYKYGFGRLD GEFWLGLEKI
YSIVKQSNYV LRIELEDWKD NKHYIEYSFY LGNHETNYTL
HLVAITGNVP NAIPENKDLV FSTWDHKAKG HFNCPEGYSG
GWWWHDECGE NNLNGKYNKP RAKSKPERRR GLSWKSQNGR
LYSIKSTKML IHPTDSESFE GHHHHHH
小鼠Angptl3 5 TCAGGAGGGA GAAGTTCCAA ATTGCTTAAA ATTGAATAAT
(登记号 TGAGACAAAA AATGCACACA ATTAAATTAT TCCTTTTTGT
NM_013913) TGTTCCTTTA GTAATTGCAT CCAGAGTGGA TCCAGACCTT
TCATCATTTG ATTCTGCACC TTCAGAGCCA AAATCAAGAT
(mRNA/cDNA) TTGCTATGTT GGATGATGTC AAAATTTTAG CGAATGGCCT
CCTGCAGCTG GGTCATGGAC TTAAAGATTT TGTCCATAAG
ACTAAGGGAC AAATTAACGA CATATTTCAG AAGCTCAACA
TATTTGATCA GTCTTTTTAT GACCTATCAC TTCGAACCAA
TGAAATCAAA GAAGAGGAAA AGGAGCTAAG AAGAACTACA
TCTACACTAC AAGTTAAAAA CGAGGAGGTG AAGAACATGT
CAGTAGAACT GAACTCAAAG CTTGAGAGTC TGCTGGAAGA
GAAGACAGCC CTTCAACACA AGGTCAGGGC TTTGGAGGAG
CAGCTAACCA ACTTAATTCT AAGCCCAGCT GGGGCTCAGG
AGCACCCAGA AGTAACATCA CTCAAAAGTT TTGTAGAACA
GCAAGACAAC AGCATAAGAG AACTCCTCCA GAGTGTGGAA
GAACAGTATA AACAATTAAG TCAACAGCAC ATGCAGATAA
AAGAAATAGA AAAGCAGCTC AGAAAGACTG GTATTCAAGA
ACCCTCAGAA AATTCTCTTT CTTCTAAATC AAGAGCACCA
AGAACTACTC CCCCTCTTCA ACTGAACGAA ACAGAAAATA
CAGAACAAGA TGACCTTCCT GCCGACTGCT CTGCCGTTTA
TAACAGAGGC GAACATACAA GTGGCGTGTA CACTATTAAA
CCAAGAAACT CCCAAGGGTT TAATGTCTAC TGTGATACCC
AATCAGGCAG TCCATGGACA TTAATTCAAC ACCGGAAAGA
TGGCTCACAG GACTTCAACG AAACATGGGA AAACTACGAA
AAGGGCTTTG GGAGGCTCGA TGGAGAATTT TGGTTGGGCC
TAGAGAAGAT CTATGCTATA GTCCAACAGT CTAACTACAT
TTTACGACTC GAGCTACAAG ACTGGAAAGA CAGCAAGCAC
TACGTTGAAT ACTCCTTTCA CCTGGGCAGT CACGAAACCA
ACTACACGCT ACATGTGGCT GAGATTGCTG GCAATATCCC
TGGGGCCCTC CCAGAGCACA CAGACCTGAT GTTTTCTACA
TGGAATCACA GAGCAAAGGG ACAGCTCTAC TGTCCAGAAA
GTTACTCAGG TGGCTGGTGG TGGAATGACA TATGTGGAGA
AAACAACCTA AATGGAAAAT ACAACAAACC CAGAACCAAA
TCCAGACCAG AGAGAAGAAG AGGGATCTAC TGGAGACCTC
AGAGCAGAAA GCTCTATGCT ATCAAATCAT CCAAAATGAT
GCTCCAGCCC ACCACCTAAG AAGCTTCAAC TGAACTGAGA
CAAAATAAAA GATCAATAAA TTAAATATTA AAGTCCTCCC
GATCACTGTA GTAATCTGGT ATTAAAATTT TAATGGAAAG
CTTGAGAATT GAATTTCAAT TAGGTTTAAA CTCATTGTTA
AGATCAGATA TCACCGAATC AACGTAAACA AAATTTATCT
TTTTC
人Angptl3 6 TTCCAGAAGA AAACAGTTCC ACGTTGCTTG AAATTGAAAA
(登记号 TCAAGATAAA AATGTTCACA ATTAAGCTCC TTCTTTTTAT
NM_014495) TGTTCCTCTA GTTATTTCCr CCAGAATTGA TCAAGACAAT
TCATCATTTG ATTCTCTATC TCCAGAGCCA AAATCAAGAT
(mRNA/cDNA) TTGCTATGTT AGACGATGTA AAAATTTTAG CCAATGGCCT
CCTTCAGTTG GGACATGGTC TTAAAGACTT TGTCCATAAG
ACGAAGGGCC AAATTAATGA CATATTTCAA AAACTCAACA
TATTTGATCA GTCTTTTTAT GATCTATCGC TGCAAACCAG
TGAAATCAAA GAAGAAGAAA AGGAACTGAG AAGAACTACA
TATAAACTAC AAGTCAAAAA TGAAGAGGTA AAGAATATGT
CACTTGAACT CAACTCAAAA CTTGAAAGCC TCCTAGAAGA
AAAAATTCTA CTTCAACAAA AAGTGAAATA TTTAGAAGAG
CAACTAACTA ACTTAATTCA AAATCAACCT GAAACTCCAG
AACACCCAGA AGTAACTTCA CTTAAAACTT TTGTAGAAAA
ACAAGATAAT AGCATCAAAG ACCTTCTCCA GACCGTGGAA
GACCAATATA AACAATTAAA CCAACAGCAT AGTCAAATAA
AAGAAATAGA AAATCAGCTC AGAAGGACTA GTATTCAAGA
ACCCACAGAA ATTTCTCTAT CTTCCAAGCC AAGAGCACCA
AGAACTACTC CCTTTCTTCA GTTGAATGAA ATAAGAAATG
TAAAACATGA TGGCATTCCT GCTGAATGTA CCACCATTTA
TAACAGAGGT GAACATACAA GTGGCATGTA TGCCATCAGA
CCCAGCAACT CTCAAGTTTT TCATGTCTAC TGTGATGTTA
TATCAGGTAG TCCATGGACA TTAATTCAAC ATCGAATAGA
TGGATCACAA AACTTCAATG AAACGTGGGA GAACTACAAA
TATGGTTTTG GGAGGCTTGA TGGAGAATTT TGGTTGGGCC
TAGAGAAGAT ATACTCCATA GTGAAGCAAT CTAATTATGT
TTTACGAATT GAGTTGGAAG ACTGGAAAGA CAACAAACAT
TATATTGAAT ATTCTTTTTA CTTGGGAAAT CACGAAACCA
ACTATACGCT ACATCTAGTT GCGATTACTG GCAATGTCCC
CAATGCAATC CCGGAAAACA AAGATTTGGT GTTTTCTACT
TGGGATCACA AAGCAAAAGG ACACTTCAAC TGTCCAGAGG
GTTATTCAGG AGGCTGGTGG TGGCATGATG AGTGTGGAGA
AAACAACCTA AATGGTAAAT ATAACAAACC AAGAGCAAAA
TCTAAGCCAG AGAGGAGAAG AGGATTATCT TGGAAGTCTC
AAAATGGAAG GTTATACTCT ATAAAATCAA CCAAAATGTT
GATCCATCCA ACAGATTCAG AAAGCTTTGA ATGAACTGAG
GCAAATTTAA AAGGCAATAA TTTAAACATT AACCTCATTC
CAAGTTAATG TGGTCTAATA ATCTGGTATT AAATCCTTAA
GAGAAAGCTT GAGAAATAGA TTTTTTTTAT CTTAAAGTCA
CTGTCTATTT AAGATTAAAC ATACAATCAC ATAACCTTAA
AGAATACCGT TTACATTTCT CAATCAAAAT TCTTATAATA
CTATTTGTTT TAAATTTTGT GATGTGGGAA TCAATTTTAG
ATGGTCACAA TCTAGATTAT AATCAATAGG TGAACTTATT
AAATAACTTT TCTAAATAAA AAATTTAGAG ACTTTTATTT
TAAAAGGCAT CATATGAGCT AATATCACAA CTTTCCCAGT
TTAAAAAACT AGTACTCTTG TTAAAACTCT AAACTTGACT
AAATACAGAG GACTGGTAAT TGTACAGTTC TTAAATGTTG
TAGTATTAAT TTCAAAACTA AAAATCGTCA GCACAGAGTA
TGTGTAAAAA TCTGTAATAC AAATTTTTAA ACTGATGCTT
CATTTTGCTA CAAAATAATT TGGAGTAAAT GTTTGATATG
ATTTATTTAT GAAACCTAAT GAAGCAGAAT TAAATACTGT
ATTAAAATAA GTTCGCTGTC TTTAAACAAA TGGAGATGAC
TACTAAGTCA CATTGACTTT AACATGAGGT ATCACTATAC
CTTATT
rN′-mANGPTL3T 7 SRVDPD LSSFDSAPSE PKSRFAMLDD VKILANGLLQ
LGHGLKDFVH KTKGQINDIF QKLNIFDQSF YDLSLRTNEI
KEEEKELRRT TSTLQVKNEE VKNMSVELNS KLESLLEEKT
ALQHKVRALE EQLTNLILSP AGAQEHPEVT SLKSFVEQQD
NSIRELLQSV EEQYKQLSQQ HMQIKEIEKQ LRKTGIQEPS
ENSLSSKSRA PRTTPPLQLN ETENTEQDLE HHHHHH
rN′-hANGPTL3T 8 DQDNSS FDSLSPEPKS RFAMLDDVKI LANGLLQLGH
GLKDFVHKTK GQINDIFQKL NIFDQSFYDL SLQTSEIKEE
EKELRRTTYK LQVKNEEVKN MSLELNSKLE SLLEEKILLQ
QKVKYLEEQL TNLIQNQPET PEHPEVTSLK TFVEKQDNSI
KDLLQTVEDQ YKQLNQQHSQ IKEIENQLRR TSIQEPTEIS
LSSKPRAPRT TPFLQLNEIR NVKHDGIPLE HHHHHH
mANGPTL3 SP1 9 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL
区
hANGPTL3 SP1 10 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL
区
S17-G66肽 11 SRVDPDLSSFDSAPSEPKSRFAMLDDVKILANGL
LQLGHGLKDFVHKTKG
42 91
D -E 肽 12 DVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQINDIFQKLNIFDQ
SFYDLSLRTNE
Q67-M116肽 13 QINDIFQKLNIFDQSFYDLSLRTNEIKEEEKELR
RTTSTLQVKNEEVKNM
I92-L141肽 14 IKEEEKELRRTTSTLQVKNEEVKNMSVELNSKLESLLEE
KTALQHKVRAL
S117-S166肽 15 SVELNSKLESLLEEKTALQHKVRALEEQLTNLIL
SPAGAQEHPEVTSLKS
E142-Q191肽 16 EEQLTNLILSPAGAQEHPEVTSLKSFVEQQDNSIRELLQ
SVEEQYKQLSQ
F167-L216肽 17 FVEQQDNSIRELLQSVEEQYKQLSQQHMQIKEIE
KQLRKTGIQEPSENSL
192 241
Q -D 肽 18 QHMQIKEIEKQLRKTGIQEPSENSLSSKSRAPRTTPPLQ
LNETENTEQDD
4.7.1的重链可变区 19 MEWSWIFLFL LSGTAGVHSE VQLQQSGPEL VKPGASVKMS
CKASGYTFTS YVMHWVKQKP GQGLEWIGYF NPYNDGTKYN
EKFKGKATLT SDKSSSTAYM ELSSLTSEDS AVYYCAREGD
YYGYFDYWGQ GTTLTVSSA
4.7.1的无信号肽的 20 E VQLQQSGPEL VKPGASVKMS CKASGYTFTS
重链可变区 YVMHWVKQKP GQGLEWIGYF NPYNDGTKYN EKFKGKATLT
SDKSSSTAYM ELSSLTSEDS AVYYCAREGD YYGYFDYWGQ
GTTLTVSSA
4.8.3的重链可变区 21 MEWSWIFLFL LSGTAGVHSE VQLQQSGPEL VKPGASVKMS
CKASGYTFIS CVMHWVKQKP GQGLEWIGYI NPYNDGTKYN
EKFKGKATLT SDKSSSTAYM ELSSLTSEDS AVYYCAREGD
YYGYFDYWGQ GTTLTVSSA
4.8.3的无信号肽的 22 E VQLQQSGPEL VKPGASVKMS CKASGYTFIS
重链可变区 CVMHWVKQKP GQGLEWIGYI NPYNDGTKYN EKFKGKATLT
SDKSSSTAYM ELSSLTSEDS AVYYCAREGD YYGYFDYWGQ
GTTLTVSSA
4.9.1的重链可变区 23 MEWSWIFLFL LSGTAGVHSE VQLQQSGPEL VKPGASVKMS
CKASGYTFTS YVMHWVKQKP GQGLEWIGYI NPYNDGTKYN
ENFKGKATLT SDKSSSTAYM EFSSLTSEDS AVYYCAREGD
YYGYFDYWGQ GTTLTVSSA
4.9.1的无信号肽的 24 E VQLQQSGPEL VKPGASVKMS CKASGYTFTS
重链可变区 YVMHWVKQKP GQGLEWIGYI NPYNDGTKYN ENFKGKATLT
SDKSSSTAYM EFSSLTSEDS AVYYCAREGD YYGYFDYWGQ
GTTLTVSSA
重链可变区共有序列 25 MEWSWIFLFL LSGTAGVHSE VQLQQSGPEL VKPGASVKMS
CKASGYTFTS YVMHWVKQKP GQGLEWIGYI NPYNDGTKYN
EKFKGKATLT SDKSSSTAYM ELSSLTSEDS AVYYCAREGD
YYGYFDYWGQ GTTLTVSSA
无信号肽的重链可变 26 E VQLQQSGPEL VKPGASVKMS CKASGYTFTS
区共有序列 YVMHWVKQKP GQGLEWIGYI NPYNDGTKYN EKFKGKATLT
SDKSSSTAYM ELSSLTSEDS AVYYCAREGD YYGYFDYWGQ
GTTLTVSSA
4.7.1的轻链可变区 27 MSSAQFLCLL LLCFQCTRCD IQMTQTTSSL SASLGDRVTI
SCRASQDISN FLNWYQQKPD GTVKLLIYYT SRLHSGVPSR
FSGSGSGTDY SLTISNLEQE DIATYFCQQG NTLPPTFGGG
TKLEIKR
4.7.1的无信号肽的 28 D IQMTQTTSSL SASLGDRVTI SCRASQDISN
轻链可变区 FLNWYQQKPD GTVKLLIYYT SRLHSGVPSR FSGSGSGTDY
SLTISNLEQE DIATYFCQQG NTLPPTFGGG TKLEIKR
4.8.3的轻链可变区 29 MSSAQFLGLL LLCFQGIRCE IQMTQTTSSL SASLGDRVTI
SCWASQDINN YLNWYQQKPD GTVKLLIYYT SRLHSGVPSR
FSGSGSGTDY SLTISNLKQE DIATYFCQQG NTLPPTFGGG
TKLEIKR
4.8.3的无信号肽的 30 E IQMTQTTSSL SASLGDRVTl SCWASQDINN
轻链可变区 YLNWYQQKPD GTVKLLIYYT SRLHSGVPSR FSGSGSGTDY
SLTISNLKQE DIATYFCQQG NTLPPTFGGG TKLEIKR
4.9.1的轻链可变区 31 MSSAQFLGLL LLCFQGARCD IQMTQTTSSL SASLGDRVTI
SCRASQDIRN YLNWYQQKPD GTVKLLIYYT SRLHSGVPSR
FSGSGSGTDY SLTISNLEQE DIATYFCQQG NTLPPTFGGG
TKLEIKR
4.9.1的无信号肽的 32 D IQMTQTTSSL SASLGDRVTI SCRASQDIRN
轻链可变区 YLNWYQQKPD GTVKLL工YYT SRLHSGVPSR FSGSGSGTDY
SLTISNLEQE D工ATYFCQQG NTLPPTFGGG TKLEIKR
轻链可变区共有序列 33 MSSAQFLGLL LLCFQGXRCD IQMTQTTSSL SASLGDRVTI
SCRASQDIXN YLNWYQQKPD GTVKLLIYYT SRLHSGVPSR
FSGSGSGTDY SLTISNLEQE DIATYFCQQG NTLPPTFGGG
TKLEIKR
无信号肽的轻链可变 34 D IQMTQTTSSL SASLGDRVTI SCRASQDIXN
区共有序列 YLNWYQQKPD GTVKLLIYYT SRLHSGVPSR FSGSGSGTDY
SLTISNLEQE DIATYFCQQG NTLPPTFGGG TKLEIKR
4.7.1重链 35 GYTFTSYVMH
CDR1
4.7.1重链 36 YFNPYNDGTKYNEKFKG
CDR2
4.7.1重链 37 EGDYYGYFDY
CDR3
4.8.3重链 38 GYTFISCVMH
CDR1
4.8.3重链 39 YINPYNDGTKYNEKFKG
CDR2
4.8.3重链 40 EGDYYGYFDY
CDR3
4.9.1重链 41 GYTFTSYVMH
CDR1
4.9.1重链 42 YINPYNDGTKYNENFKG
CDR2
4.9.1重链 EGDYYGYFDY
43
CDR3
4.7.1轻链 44 RASQDISNFLN
CDR1
4.7.1轻链 45 YTSRLHS
CDR2
4.7.1轻链 46 QQGNTLPPT
CDR3
4.8.3轻链 47 WASQDINNYLN
CDR1
4.8.3轻链 48 YTSRLHS
CDR2
4.8.3轻链 49 QQGNTLPPT
CDR3
4.9.1轻链 50 RASQDIRNYLN
CDR1
4.9.1轻链 51 YTSRLHS
CDR2
4.9.1轻链 52 QQGNTLPPT
CDR3
重链CDR1共有序列 53 GYTFTSYVMH
重链CDR2共有序列 54 YINPYNDGTKYNEKFKG
重链CDR3共有序列 55 EGDYYGYFDY
轻链CDR1共有序列 56 RASQDIXNYLN
轻链CDR2共有序列 57 YTSRLHS
轻链CDR3共有序列 58 QQGNTLPPT
小鼠ANGPTL3 59 SRVD PDLSSFDSAP SEPKSRFAML DDVKILANGL
S17-D240 LQLGHGLKDF VHKTKGQIND IFQKLNIFDQ SFYDLSLRTN
EIKEEEKELR RTTSTLQVKN EEVKNMSVEL NSKLESLLEE
KTALQHKVRA LEEQLTNLIL SPAGAQEHPE VTSLKSFVEQ
QDNSIRELLQ SVEEQYKQLS QQHMQIKEIE KQLRKTGIQE
PSENSLSSKS RAPRTTPPLQ LNETENTEQD
人ANGPTL3 60 D QDNSSFDSLS PEPKSRFAML DDVKILANGL
D20-P243 LQLGHGLKDF VHKTKGQIND IFQKLNIFDQ SFYDLSLQTS
EIKEEEKELR RTTYKLQVKN EEVKNMSLEL NSKLESLLEE
KILLQQKVKY LEEQLTNLIQ NQPETPEHPE VTSLKTFVEK
QDNSIKDLLQ TVEDQYKQLN QQHSQIKEIE NQLRRTSIQE
PTEISLSSKP RAPRTTPFLQ LNEIRNVKHD GIP
小鼠ANGPTL3 61 DVKILANGL LQLGHGLKDF VHKTKGQIND IFQKLNIFDQ
D42-M116 SFYDLSLRTN EIKEEEKELR RTTSTLQVKN EEVKNM
SP2-KLH 62 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLC
5.35的重链可变区 63 MGRLTSSFLL LIVPAYVLSQ VTLKESGPGI LHPSQTLTLT
CSFSGFSLNT FGLAVGWIRQ PSGKGLEWLG HIWWDDHKYY
NGVLKSRLTI SKDSSKKQVF LRIANVDTAD TARYYCARLE
TGTGFAYWGQ GTLVTVSAA
5.35的无信号肽的 64 Q VTLKESGPGI LHPSQTLTLT CSFSGFSLNT
重链可变区 FGLAVGWIRQ PSGKGLEWLG HIWWDDHKYY NGVLKSRLTI
SKDSSKKQVF LRIANVDTAD TARYYCARLE TGTGFAYWGQ
GTLVTVSAA
5.50的重链可变区 65 MGWSWIFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL VKPGASVKIS
CKASGFTFTD YYMNWVKQSH GESLEWIGDI NPNNGGTIYN
QKFRGKATLT VDKSSSTAYM ELRSLTSEDS AVYYCVRLPW
YFDVWGTGTT VTVSSA
5.50的无信号肽的 66 E VQLQQSGPEL VKPGASVKIS CKASGFTFTD
重链可变区 YYMNWVKQSH GESLEWIGDI NPNNGGTIYN QKFRGKATLT
VDKSSSTAYM ELRSLTSEDS AVYYCVRLPW YFDVWGTGTT
VTVSSA
5.35的轻链可变区 67 MRCLAEFLGL LVLWIPGAIG DIVLTQSTPS VPVTPGESVS
ISCRSSKSLL DSNGITYLYW FLQRPGQSPQ LLIYRMSKLA
SGVPDRFSGS GSETAFTLRI SRVEAEDVGV YYCMQPLEYP
FTFGAGTKLE LNG
5.35的无信号肽的 68 DIVLTQSTPS VPVTPGESVS ISCRSSKSLL DSNGITYLYW
轻链可变区 FLQRPGQSPQ LLIYRMSKLA SGVPDRFSGS GSETAFTLRI
SRVEAEDVGV YYCMQPLEYP FTFGAGTKLE LNG
5.50的轻链可变区 69 MKLPVRLLVL MFWIPASSSD VLMTQTPLSL PVSLGDQASI
SCRSSQSILH SNGNTYLEWF LQKPGQSPKL LIYKVSNRFS
GVPDRFSGSG SGTDFTLKIS RVEAEDLGVY YCFQGSHVPY
TFGGGTKLEI KR
5.50的无信号肽的 70 D VLMTQTPLSL PVSLGDQASI SCRSSQSILH
轻链可变区 SNGNTYLEWF LQKPGQSPKL LIYKVSNRFS GVPDRFSGSG
SGTDFTLKIS RVEAEDLGVY YCFQGSHVPY TFGGGTKLEI
KR
5.35重链 71 GFSLNTFGLAVG
CDR1
5.35重链 72 HIWWDDHKYYNGVLKS
CDR2
5.35重链 73 LETGTGFAY
CDR3
5.50重链 74 GFTFTDYYMN
CDR1
5.50重链 75 DINPNNGGTIYNQKFRG
CDR2
5.50重链 76 LPWYFDV
CDR3
5.35轻链 77 RSSKSLLDSNGITYLY
CDR1
5.35轻链 78 RMSKLAS
CDR2
5.35轻链 79 MQPLEYPFT
CDR3
5.50轻链 80 RSSQSILHSNGNTYLE
CDR1
5.50轻链 81 KVSNRFS
CDR2
5.50轻链 82 FQGSHVPYT
CDR3
突变体1 83 APKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL
突变体2 84 EAKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL
突变体3 85 EPASRFAMLDDVKILANGLLQLGHGL
突变体4 86 EPKARFAMLDDVKILANGLLQLGHGL
突变体5 87 EPKSAFAMLDDVKILANGLLQLGHGL
突变体6 88 EPKSRAAMLDDVKILANGLLQLGHGL
突变体8 89 EPKSRFAALDDVKILANGLLQLGHGL
突变体9 90 EPKSRFAMADDVKILANGLLQLGHGL
突变体10 91 EPKSRFAMLADVKILANGLLQLGHGL
突变体11 92 EPKSRFAMLDAVKILANGLLQLGHGL
突变体12 93 EPKSRFAMLDDAKILANGLLQLGHGL
突变体13 94 EPKSRFAMLDDVAILANGLLQLGHGL
突变体14 95 EPKSRFAMLDDVKALANGLLQLGHGL
突变体15 96 EPKSRFAMLDDVKIAANGLLQLGHGL
突变体17 97 EPKSRFAMLDDVKILAAGLLQLGHGL
突变体18 98 EPKSRFAMLDDVKILANALLQLGHGL
突变体19 99 EPKSRFAMLDDVKILANGALQLGHGL
突变体20 100 EPKSRFAMLDDVKILANGLAQLGHGL
突变体21 101 EPKSRFAMLDDVKILANGLLALGHGL
突变体22 102 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQAGHGL
突变体23 103 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLAHGL
突变体24 104 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGAGL
突变体25 105 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHAL
突变体26 106 EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGA
小鼠ANGPTL4 107 mrcaptagaa lvlcaatagl lsaqgrpaqp epprfaswde
(登记号 mnllahgllq lghglrehve rtrgqlgale rrmaacgnac
qgpkgkdapf kdsedrvpeg qtpetlqslq tqlkaqnski
NP_065606) qql fqkvaqq qrylskqnlr iqnlqsqidl lapthldngv
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rhsglfqiqp lgsppflvnc emtsdggwtv iqrrlngsvd
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snlngqyfhs iprqrqerkk gifwktwkgr yyplqattll
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人ANGPTL4 108 msgaptagaa lmlcaatavl lsaqggpvqs ksprfaswde
(登记号 mnvlahgllq lgqglrehae rtrsqlsale rrlsacgsac
NP_647475) qgtegstdlp lapesrvdpe vlhslqtqlk aqnsriqqlf
hkvaqqqrhl ekqhlriqhl qsqfglldhk hldhevakpa
rrkrlpemaq pvdpahnvsr lhrlprdcqe lfqvgerqsg
lfeiqpqgsp pflvnckmts dggwtviqrr hdgsvdfnrp
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dgnaellqfs vhlggedtay slqltapvag qlgattvpps
glsvpfstwd qdhdlrrdkn cakslsggww fgtcshsnln
gqyfrsipqq rqklkkgifw ktwrgryypl qattmliqpm
aaeaas
小鼠ANGPTL4 SP1区 109 QPEPPRFASW DEMNLLAHGL LQLGHGL
人ANGPTL4 SP1区 110 SKSPRFASWD EMNVLAHGLL QLGQGL