一种用灵发素诱导甘蔗愈伤组织的方法

摘要

一种用灵发素诱导甘蔗愈伤组织的方法。以MS为基本培养基，添加灵发素0.05-0.5mg·L-1配制成改良型固体培养基，以甘蔗幼叶切片作外植体，按常规进行无菌培养。该方法用于甘蔗愈伤组织的诱导，诱导效率高达90％-95％，而且愈伤组织不易褐化，质地疏松不板结，增殖快，生命力强。

权利要求

1.一种用灵发素诱导甘蔗愈伤组织的方法，其特征是，以甘蔗末梢部位的幼叶切片为-1外植体，以MS固体培养基为基本培养基，添加灵发素0.05-0.50mg·L ，制成改良型MS固体培养基，在常规培养条件下用于甘蔗愈伤组织的诱导。

2.根据权利要求1所述用灵发素诱导甘蔗愈伤组织的方法，其特征是，所述诱导是在pH 5.8-6.0；光照1500-2000lx，10-12小时/天；温度：昼/夜为28/25(±1)℃的条件下进行。

说明书

一种用灵发素诱导甘蔗愈伤组织的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种用灵发素诱导甘蔗愈伤组织的方法。技术背景

[0002] 甘蔗愈伤组织的获得，被认为是甘蔗良种快速繁殖、脱毒复壮、转基因育种、辐照诱变育种等各种现代生物技术体系得以在甘蔗种植业成功建立的必要环节。而现有可查资料表明，目前用于诱导甘蔗(外植体多为蔗梢幼叶)愈伤组织发生的植物生长物质(Plant growth substances)几乎无一例外都属于生长素类(Auxin)，包括2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)，NAA(萘乙酸)和IBA(吲哚丁酸)等，其中以2，4-D的应用得最为普遍，效果也被认为最好。但是，2，4-D是人工化学合成的苯类衍生物，具有毒性和残留，其诱导甘蔗愈伤组织-1的使用浓度高达2.0-3.0mg·L ，在低浓度下诱导率往往不足50％。再者，2，4-D诱导出的愈伤组织很容易褐化和板结，直接影响愈伤组织的继续增殖与分化，严重的褐化甚至导致外植体的死亡。为此，技术人员不得不频繁地把外植体转接到新鲜的培养基上，既麻烦又费工。灵发素(Lingfasu，LFS，代号PGR-08)是一种新型的生物源植物生长物质，属于腺嘌呤衍生物，无毒害和残留。它既具有细胞分裂素(CTK)的基本化学结构和生物活性，又同时具有生长素(Auxin)的生物活性。LFS已在被公认为难以组培的中药材---三七的愈伤组织诱导中获得成功(许鸿源，等。中药材，2004，27(1)：1-3)。LFS在甘蔗愈伤组织诱导中的最佳使用浓度不到2，4-D的十分之一，但其诱导率却可高达90％以上，获得的愈伤组织不易褐化，或只轻度褐化，不易板结，增殖快，生命力强。所以，将来在甘蔗生物技术研究和应用中极有可能成为2，4-D的替代品。

发明内容

[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种用灵发素诱导甘蔗愈伤组织的方法。

[0004] 本发明以如下技术方案解决上述技术问题：一种用灵发素诱导甘蔗愈伤组织的方法，包括如下步骤：

[0005] 以甘蔗末梢部位的幼叶切片为外植体，以MS固体培养基为基本培养基，添加灵发-1素0.05-0.50mg·L ，制成改良型MS固体培养基，在常规培养条件下用于甘蔗愈伤组织的诱导。

[0006] 本发明的突出优点在于：

[0007] 本发明用于甘蔗愈伤组织的诱导，诱导效率高达90％-95％，而且愈伤组织不易褐化，质地疏松不板结，增殖快，生命力强。

具体实施方式

[0008] 以下通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明。

[0009] 本发明所述用灵发素诱导甘蔗愈伤组织的方法，包括如下步骤：

[0010] 按常规采集甘蔗末梢部位的幼叶作外植体，表面消毒杀菌后切成大约1，