一种用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法

摘要

一种用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法。是将甘蔗茎尖分生组织在MS+LFS+NAA培养基中进行诱导分化丛生芽苗、增殖以及生根培养，获得完整的甘蔗植株。该方法在诱导分化丛生芽苗的成苗时间比用6-BA提前5～10天，大大提高组培苗的繁殖速度及质量；在延长培养时间的情况下，蔗苗仍保持较旺盛生长；在无NAA条件下，低浓度灵发素培养基可完成生根培养，生根苗素质高，且组培苗仍具有一定的增殖能力，室外移栽成活率高。

权利要求

1.一种用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，该方法是将甘蔗茎尖分生组织进行诱导分化丛生芽苗、增殖以及生根培养，获得完整的甘蔗植株，具体方法步骤为：所述诱导分化丛生芽苗培养，是将茎尖分生组织在MS+LFS1.5～3.0mg/L+NAA0.01～

0.5mg/L条件下培养，每个茎尖分生组织经30-40天培养后长成2株以上丛生小芽苗，所述增殖培养，是将所述丛生小芽苗在培养基MS+LFS2.0～4.0mg/L+NAA0.01～

0.5mg/L下进行繁育，每20-30天更换一次MS+LFS2.0～4.0mg/L+NAA0.01～0.5mg/L培养基，得到增殖苗，所述生根培养，是将所述增殖苗在MS+LFS0.01～0.5mg/L的条件下培养，15-20天获得完整的甘蔗植株。

2.根据权利要求1所述用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，所述甘蔗茎尖分生组织，是在无菌条件下从甘蔗项芽剥离的带1-2个叶原基，其大小为0.1～

0.2mm的茎尖组织。

3.根据权利要求1所述用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，所述完整的甘蔗植株，是指含有根、假茎、叶并能移栽室外成活的植株。

说明书

一种用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及植物组织培养领域，尤其是一种用灵发素(LFS)进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法。

背景技术

[0002] 应用植物组培技术生产甘蔗组培苗，可获得无病无毒的健康种苗，外植体主要采用甘蔗幼嫩的心叶组织和茎尖分生组织。传统的甘蔗组培苗快速繁殖方法，不同培养阶段需添加不同种类的外源激素。其中，幼嫩心叶组织主要应用生长素2，4-D诱导愈伤组织，然后在细胞分裂素作用下分化成芽，而愈伤组织产生的组培苗其遗传性不稳定，变异率高，6 6
导致种质变劣；在分化成苗与增殖培养基中，主要应用细胞分裂素6-BA(N-BA，N-基腺嘌呤)，并添加一定量的生长素NAA(萘乙酸)，主要作用是促进芽的形成，增殖效果一般，每代增殖2倍左右，且在增殖过程中，蔗苗容易变黄，更换新鲜培养基的频率较高；在生根培养中，主要应用高浓度生长素NAA或IBA(吲哚丁酸)，且生根培养过程中也存在蔗苗容易变黄衰退的现象，对甘蔗组培苗的快速繁殖存在十分不利的影响。

发明内容

[0003] 本发明目的是提供一种用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法，该方法能够有效地解决甘蔗组培苗繁育过程中增殖苗与生根苗容易变黄衰退，生根率不高的问题，并且简化培养程序。

[0004] 本发明所采取的技术方案是：一种用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法，是将甘蔗茎尖分生组织在MS+LFS+NAA培养基中进行诱导分化丛生芽苗、增殖以及生根培养，获得完整的甘蔗植株，具体方法步骤为：

[0005] 所述诱导分化丛生芽苗培养，是将茎尖分生组织在MS+LFS1.5～3.0mg/L+NAA0.01～0.5mg/L条件下培养，每个茎尖分生组织经30-40天培养后长成2株以上丛生小芽苗，

[0006] 所述增殖培养，是将所述丛生小芽苗在培养基MS+LFS2.0～4.0mg/L+NAA0.01～0.5mg/L下进行繁育，每20-30天更换一次培养基MS+LFS2.0～4.0mg/L+NAA0.01～0.5mg/L，得到增殖苗，

[0007] 所述生根培养，是所述增殖苗在MS+LFS0.01～0.5mg/L的条件下培养，15-20天获得完整的甘蔗植株。

[0008] 所述甘蔗茎尖分生组织，是在无菌条件下从甘蔗顶芽剥离的带1-2个叶原基，其大小为0.1～0.2mm的茎尖组织。

[0009] 所述完整的甘蔗植株，是指含有根、假茎、叶并能移栽室外成活的植株。

[0010] 生长素萘乙酸，简写为NAA；灵发素(Lingfasu，LFS，代号PGR-08)简写为LFS；MS植物组织培养普遍使用的一种培养基代号，由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

[0011] 本发明有益效果在于：

[0012] 1.茎尖分生组织诱导分化丛生芽苗，成苗时间提前5～10天，大大提高组培苗的繁殖速度及质量。

[0013] 2.在分化及增殖培养阶段，在培养时间延长的情况下，蔗苗仍保持较旺盛的生长。

[0014] 3.在生根培养阶段，在无NAA条件下，低浓度灵发素培养基可完成生根培养，生根苗素质高，且组培苗仍具有一定的增殖能力，室外移栽成活率高，降低生产成本。

具体实施方式

[0015] 以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步详细说明。

[0016] 实施例1

[0017] 一种用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法，包括如下步骤：

[0018] (1)丛生芽苗诱导分化培养

[0019] 从田间选取生长粗壮且无病虫害的健康甘蔗主茎，砍成单芽段，在38～40℃温度条件培养15～20天，待蔗苗长成2～4片叶时，取蔗茎顶芽进行灭菌处理，剥离的带1～2个叶原基其大小为0.1～0.2mm的茎尖作组织培养外植体，培养基为MS+LFS1.5mg/L+NAA0.01mg/L液体滤纸桥培养3～4代，每代培养时间20-30天，获得丛生小芽苗。

[0020] (2)增殖培养

[0021] 将上述丛生小芽苗转入MS+LFS2.0mg/L+NAA0.01mg/L的液体培养基中进行增殖1～2代，每代培养时间20-30天，得到增殖苗。

[0022] (3)生根培养

[0023] 将上述增殖苗转入MS+LFS0.01mg/L的液体培养基中，培养7天，开始有根的生长，20天可把生根瓶苗移出室外炼苗3～5天后，假植育苗床。

[0024] 实施例2

[0025] 一种用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法，包括如下步骤：

[0026] (1)丛生芽苗诱导分化培养

[0027] 从田间选取生长粗壮且无病虫害的健康甘蔗主茎，砍成单芽段，在38～40℃温度条件培养15～20天，待蔗苗长成2～4片叶时，取蔗茎顶芽进行灭菌处理，剥离的带1～2个叶原基其大小为0.1～0.2mm的茎尖作组织培养外植体，培养基为MS+LFS2.0mg/L+NAA0.3mg/L的液体滤纸桥培养3～4代，每代培养时间20-30天，获得丛生小芽苗。

[0028] (2)增殖培养

[0029] 将上述丛生小芽苗转入MS+LFS3.0mg/L+NAA0.3mg/L的液体培养基中进行增殖1～2代，每代培养时间20-30天，得到增殖苗。

[0030] (3)生根培养

[0031] 将上述增殖苗转入MS+LFS0.3mg/L的液体培养基中，培养7天，开始有根的生长，20天可把生根瓶苗移出室外炼苗3～5天后，假植育苗床。

[0032] 实施例3

[0033] 一种用灵发素进行甘蔗组织培养快速繁殖的方法，包括如下步骤：

[0034] (1)丛生芽苗诱导分化培养

[0035] 从田间选取生长粗壮且无病虫害的健康甘蔗主茎，砍成单芽段，在38～40℃温