滋肾益精、补脑安神的组合物及制备方法

摘要

本发明涉及一种具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物，该药物组合物主要是由如下原料药制成：人参、枸杞子、金樱子肉、黄精、菟丝子、女贞子、白芍、淫羊藿等，其制备方法包括：提取、浓缩、醇沉和过滤、脱色脱碳、配液等，其质量控制方法包括：人参总皂甙的含量测定、淫羊霍甙含量测定、农药残留量的测定等。本发明组合物口服液治疗脑动脉硬化症、神经衰弱、前列腺增生症疗效确切。

权利要求

1.一种具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物的检测方法，其特征在于包括如下方法：所述药物组合物是由如下原料药制成：

检测方法包括如下方法：

人参总皂甙的含量测定：

步骤1：称取人参皂甙Re加甲醇溶解；用微量注射器分别取此溶液，并加甲醇使各份加入体积相同，分别置于试管之中，加入3-7％香草醛-冰醋酸液，高氯酸，混匀，密塞，置60℃恒温水浴中加热10-20min，取出用水流冷却，加入冰醋酸，摇匀，静置，连同空白试剂，用分光光度计于560nm处测定其吸收度，重复测定三次，绘制标准曲线；

步骤2：取该组合物制剂于试管中，用醋酸乙酯脱脂后，用水饱和的正丁醇超声提取

4-6次，合并提取液，分别用40-60％Na2Co3，0.1-0.3％NaOH，3-6％NaOH洗除黄酮，然后用蒸馏水洗涤，脱去Na2CO3，NaOH，静置分层，舍弃水相，萃取液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容到2ml备用；按上述各项步骤做阴性对照样品；取制备好的样品及阴性对照品各按标准曲线进行显色和比色测定，所得数值代入回归方程，求出人参总皂甙的初值，再扣除阴性样品测定值，得实际人参总皂甙含量；

淫羊藿甙含量测定：

条件：高效液相色谱仪，色谱柱HP ODS柱ф4.6×100mm，检测波长270nm，ABS Range

0.04，流动相：甲醇∶水＝50-65∶40-55，流量1.0ml/min，柱箱温度：36℃标准曲线绘制：取淫羊藿甙配成0.15mg/ml甲醇溶液，分别取不同量在上述分析条件下注入HPLC进行测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标得标准曲线；

样品测定：精密吸取样品置于瓶中，加入乙酸乙酯，超声20-40分钟，用吸管吸取上层清液置于蒸发皿中，如此重复萃取2-4次，将萃取液置同一蒸发皿中，挥干后，用甲醇溶解洗涤并定容于2ml容量瓶中备用，此液称为A液；精密吸取A液于试管中，精密加入8-12％NaCl溶液，摇匀，冷冻50-70分钟，用微孔滤膜过滤，滤液收集分析；

农药残留量的测定：

气相色谱条件：色谱柱：弹性毛细管柱ф：1.2mm I.D.×30m；载气：高纯N2；分流比：

20∶1；柱温：175℃；检测器温度：280℃；进样量：样品4μl；标准溶液0.4μl；

取该组合物口服液体制剂5ml，置瓶中，加入正己烷4-6次，每次超声提取30分钟，合并提取液于分液漏斗中，加入2％无水Na2SO4水溶液振摇，静置，弃去水层，再向其中加入浓硫酸，振摇后静置，分层，弃去下层酸液，按此操作重复1～2次，净化至下层酸液呈无色或浅黄色，再加2％Na2SO4水溶液于分液漏斗中，振摇静置，分层后弃去水层，按此操作重复2～

3次，至PH6～7，浓缩正己烷提取液，加入内标物环氧七氯定容，再加入无水硫酸钠，静置，取上清液进行气相色谱测定。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述药物组合物是由如下原料药制成：

说明书

滋肾益精、补脑安神的组合物及制备方法

[0001] 本发明为分案申请，原案申请号为200810104844.5，原案申请日为2008年4月24日，原案名称为滋肾益精、补脑安神的组合物及制备方法和质量控制方法。

技术领域

[0002] 本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法，特别是涉及一种具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。

背景技术

[0003] 人进入中老年时期，精神和肉体上感觉精力缺乏，脸部皱纹开始增多，憔悴不泽，常有头晕眼花，耳鸣耳聋，神疲健忘，忧郁紧张，性冷感及尿后余沥不尽等症状，这些症状，多起于肾虚，肾精虚则脑髓不足，脑髓不足则百病丛生，人们为了正常工作，需要能补肾固精，提高机体功能，延缓衰老的治疗药。

[0004] 本发明提供一种补肾固精，提高机体功能，延缓衰老的治疗药物。

发明内容

[0005] 本发明目的在于提供一种具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物；

[0006] 本发明目的还在于提供一种具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物制备方法；

[0007] 本发明目的还在于提供一种具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物的质量控制方法；

[0008] 本发明目的还在于提供一种中药组合物在制备治疗脑动脉硬化症中阳痿、早泄药物中的应用；

[0009] 本发明目的还在于提供一种中药组合物在制备治疗脑动脉硬化症中眼底动脉硬化病药物中的应用；

[0010] 本发明目的还在于提供一种中药组合物在制备具有降低脑动脉硬化症中血清总胆固醇药物中的应用；

[0011] 本发明目的还在于提供一种中药组合物在制备治疗脑动脉硬化症中高血压病药物中的应用；

[0012] 本发明目的还在于提供一种中药组合物在制备治疗前列腺增生药物中的应用。

[0013] 本发明目的是通过如下技术方案实现的：

[0014] 方案1：

[0015] 本发明所述的具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物是由如下重量比的原料药制成的：

[0016] 人参1-6重量份 枸杞子10-30重量份 金樱子肉10-30重量份

[0017] 黄精10-30重量份 菟丝子10-20重量份 女贞子10-20重量份

[0018] 白芍10-30重量份 淫羊藿15-30重量份。

[0019] 本发明所述的具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物是优选如下重量比的原料药制成的：

[0020] 人参2-4重量份 枸杞子15-30重量份 金樱子肉18-30重量份

[0021] 黄精15-30重量份 菟丝子10-20重量份 女贞子10-20重量份

[0022] 白芍15-30重量份 淫羊藿20-30重量份。

[0023] 方案2：

[0024] 本发明所述的具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物是由如下重量比的原料药制成的：

[0025] 人参1-6重量份 枸杞子10-30重量份 金樱子肉10-30重量份

[0026] 黄精10-30重量份 菟丝子10-20重量份 女贞子10-20重量份

[0027] 白芍10-30重量份 淫羊藿15-30重量份 黄芪10-30重量份。

[0028] 本发明所述的具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物是优选如下重量比的原料药制成的：

[0029] 人参2-4重量份 枸杞子15-30重量份 金樱子肉18-30重量份

[0030] 黄精15-30重量份 菟丝子10-20重量份 女贞子10-20重量份

[0031] 白芍15-30重量份 淫羊藿20-30重量份 黄芪15-30重量份。

[0032] 方案3：

[0033] 本发明所述的具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物是由如下重量比的原料药制成的：

[0034] 人参1-6重量份 枸杞子10-30重量份 金樱子肉10-30重量份

[0035] 黄精10-30重量份 菟丝子10-20重量份 女贞子10-20重量份

[0036] 白芍10-30重量份 淫羊藿15-30重量份 甘草3-8重量份

[0037] 黄芪10-30重量份 麦芽10-30重量份 蜂蜜25-45重量份。

[0038] 本发明所述的具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物是优选如下重量比的原料药制成的：

[0039] 人参2-4重量份 枸杞子15-30重量份 金樱子肉18-30重量份

[0040] 黄精15-30重量份 菟丝子10-20重量份 女贞子10-20重量份

[0041] 白芍15-30重量份 淫羊藿20-30重量份 甘草3-8重量份

[0042] 黄芪15-30重量份 麦芽15-30重量份 蜂蜜25-45重量份。

[0043] 本发明所述的具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物是由如下重量比的原料药制成的：

[0044] 人参1-6重量份 枸杞子5-10重量份 金樱子肉5-10重量份

[0045] 黄精5-10重量份 菟丝子5-10重量份 女贞子5-10重量份

[0046] 白芍5-10重量份 淫羊藿10-25重量份 甘草1-6重量份

[0047] 黄芪5-10重量份 麦芽2-10重量份 蜂蜜20-40重量份。

[0048] 本发明所述的具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物是由如下重量比的原料药制成的：

[0049] 人参1-4重量份 枸杞子5-8重量份 金樱子肉5-8重量份

[0050] 黄精5-8重量份 菟丝子5-8重量份 女贞子5-8重量份

[0051] 白芍5-8重量份 淫羊藿10-20重量 份甘草1-4重量份

[0052] 黄芪5-8重量份 麦芽4-7重量份 蜂蜜25-35重量份。

[0053] 本发明所述的具有滋肾益精、补脑安神的中药组合物是由如下重量比的原料药制成的：

[0054] 人参4重量份 枸杞子12重量份 金樱子肉15重量份

[0055] 黄精16重量份 菟丝子12重量份 女贞子15重量份

[0056] 白芍12重量份 淫羊藿25重量份 甘草3重量份

[0057] 黄芪12重量份 麦芽10重量份 蜂蜜30重量份。

[0058] 本发明所述方案1、2、3的药物组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、滴丸、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。

[0059] 本发明所述方案3的中药组合物口服液体制剂的制备方法包括如下步骤：

[0060] 步骤1：

[0061] 人参用水或乙醇提取2-4次，每次时间分别为1-3小时，过滤，合并滤液，得提取液A；其余中药材水提取2-4次，每次时间分别为1-3小时，过滤，合并滤液，得提取液B；

[0062] 步骤2：

[0063] 将提取液B采用真空浓缩方法，控制溶液相对密度70-80℃为1.05～1.15g/ml，再用过滤机过滤得浓缩液；

[0064] 步骤3：

[0065] 将浓缩液冷却后，不断搅拌，并徐徐加入95％的乙醇，调整溶液成PH＝8-9，乙醇含量达50-80％，静置沉淀48-72小时，取上清液过滤；

[0066] 步骤4：

[0067] 加入重量百分比0.3％的活性炭，然后加热沸腾，所得脱色液过滤，20℃相对密度为1.10-1.20g/ml；

[0068] 步骤5：

[0069] 醇沉后的药液中加入人参提取液A混匀，并经过脱色脱炭后再加入蜂蜜；经常规工艺制成口服液。

[0070] 本发明所述的中药组合物口服液体制剂的制备方法优选如下步骤：

[0071] 步骤1：

[0072] 人参用乙醇提取3次，每次时间分别为2小时，过滤，合并滤液，得提取液A；

[0073] 其余中药材水提取2次，每次时间分别为2小时、1.5小时，过滤，合并滤液，得水提取液B；

[0074] 步骤2：

[0075] 水提取液B，采用真空浓缩方法，控制溶液相对密度D＝1.05～1.15g/ml(70-80℃)，再用过滤机过滤得浓缩液；

[0076] 步骤3：

[0077] 将浓缩液冷却后，不断搅拌，并徐徐加入95％的乙醇，调整溶液成PH＝8-9，乙醇含量达60-75％，静置沉淀时间大于48小时后，取上液过滤；

[0078] 步骤4：

[0079] 加入0.3％的活性炭，然后加热沸腾，所得脱色液，再经过滤后药汁成棕红色液体，味微清苦，但不得有乙醇味，20℃相对密度D＝1.10-1.20g/ml；

[0080] 步骤5：

[0081] 醇沉后的药液中加入人参提取液A混匀，并经过脱色脱炭后再加入蜂蜜；加入3‰(g/g)苯甲酸或0.25‰(g/g)尼泊金，加入0.1-0.3％(g/g)奶油香精的稀释液，调成PH＝4.0-6.0，相对密度D＝1.10-1.25g/ml；将药液煮沸30分钟，灭菌。

[0082] 本发明药物组合物质量控制方法包括如下含量测定中的一种或几种：

[0083] 含量测定1：人参总皂甙的含量测定

[0084] 步骤1：绘制标准曲线

[0085] 称取人参皂甙Re加甲醇溶解；用微量注射器分别取此溶液，并加甲醇使各份加入体积相同，分别置于试管之中，加入3-7％香草醛-冰醋酸液，高氯酸，混匀，密塞，置60℃恒温水浴中加热10-20min，取出用水流冷却，加入冰醋酸，摇匀，静置，连同空白试剂，用分光光度计于560nm处测定其吸收度，重复测定三次，绘制标准曲线；

[0086] 步骤2：制剂测定

[0087] 取本发明组合物制剂于试管中，用醋酸乙酯脱脂后，用水饱和的正丁醇超声提取4-6次，合并提取液，分别用40-60％Na2Co3，0.1-0.3％NaOH，3-6％NaOH洗除黄酮，然后用蒸馏水洗涤，脱去Na2CO3，NaOH，静置分层，舍弃水相，萃取液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容到2ml备用；按上述各项步骤做阴性对照样品；取制备好的样品及阴性对照品各按标准曲线进行显色和比色测定，所得数值代入回归方程，求出人参总皂甙的初值，再扣除阴性样品测定值，得实际人参总皂甙含量。

[0088] 含量测定2：淫羊藿甙含量测定

[0089] 条件：高效液相色谱仪，色谱柱HP ODS柱ф4.6×100mm，检测波长270nm，ABS Range 0.04，流动相：甲醇∶水＝50-65∶40-55，流量1.0ml/min，柱箱温度：36℃[0090] 标准曲线绘制：取淫羊藿甙配成0.15mg/ml甲醇溶液，分别取不同量在上述分析条件下注入HPLC进行测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标得标准曲线；

[0091] 样品测定：精密吸取样品置于瓶中，加入乙酸乙酯，超声20-40分钟，用吸管吸取上层清液置于蒸发皿中，如此重复萃取2-4次，将萃取液置同一蒸发皿中，挥干后，用甲醇溶解洗涤并定容于2ml容量瓶中备用，此液称为A液；精密吸取A液于试管中，精密加入8-12％NaCl溶液，摇匀，冷冻50-70分钟，用微孔滤膜过滤，滤液收集分析。

[0092] 根据试样中淫羊藿甙含量多少，取样2～4μl注入HPLC中分析(HPLC条件同前)，然后按下列公式计算含量：

[0093] μg/ml＝W/V2×V1×a×1/V5

[0094] 式中：W：由测验样品中淫羊藿甙的峰面积查标准曲线求得的所注射样品中淫羊藿甙的重量μg。

[0095] V1：制备好的样品体积μl。

[0096] V2：注射入HPLC的样品体积μl。

[0097] V5：所取本发明组合物制剂样品量ml。

[0098] a：稀释倍数。

[0099] 含量测定3：农药残留量的测定

[0100] 气相色谱条件：

[0101] 色谱柱：弹性毛细管柱ф：1.2mm I.D.＞×30m

[0102] 载气：高纯N2

[0103] 分流比：20∶1

[0104] 柱温：175℃

[0105] 检测器温度：280℃

[0106] 进样量：样品4μl；标准溶液0.4μl。

[0107] 取本发明组合物口服液体制剂5ml，置瓶中，加入正己烷4-6次，每次超声提取30分钟，合并提取液于分液漏斗中，加入2％无水Na2SO4水溶液振摇，静置，弃去水层，再向其中加入浓硫酸，振摇后静置，分层，弃去下层酸液，按此操作重复1～2次，净化至下层酸液呈无色或浅黄色，再加2％Na2SO4水溶液于分液漏斗中，振摇静置，分层后弃去水层，按此操作重复2～3次，至PH6～7，浓缩正己烷提取液，加入内标物环氧七氯定容，再加入无水硫酸钠，静置，取上清液进行气相色谱测定。

[0108] 本发明组合物具有很好的药效，经300例临床观察结果证实：本发明组合物口服液治疗中医辩证为肾脾亏虚、心神不安之脑动脉硬化症、神经衰弱、前列腺增生症疗效确切，其治疗脑动脉硬化症的总显效率为63.33％；总有效率90.83％；治疗神经衰弱的总显效率为66.94；总有效率为93.39％；分别优于对照组的疗效。治疗前列腺增生症的总显效率为42.37％；总有效率为93.22％。

[0109] 本发明组合物口服液有明显改善肾脾亏虚、心肾不交证候的作用，脑动脉硬化症证的疗效的总显效率为66.67％，总有效率为92.50％；神经衰弱证的疗效的总显效率为67.77％，总有效率为94.21％；前列腺增生症证的疗效的显著效率为61.02％，总有效率为
94.92％。治疗组证的疗效优于对照组益龄精和老君仙灵芝口服液的疗效。

[0110] 本发明组合物口服液能明显改善脑动脉硬化症临床症状，其改善头晕等症状的作用优于对照组，并能改善脑血流图等客观指标，具有降低胆固醇的作用。本发明组合物口服液用药安全，对血液和肝肾功能无明显影响，观察过程中未见明显的毒副作用和不良反应，且服用方便，深受广大患者欢迎。

[0111] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

[0112] 实验例1脑动脉硬化症状临床试验

[0113] (一)资料与方法

[0114] 1一般资料

[0115] 1.1病例分布情况

[0116] 表1病例数分布情况

[0117]2

[0118] 1.2治疗与对照组性别分布情况：脑动脉硬化症两组性别分布情况比较，经x 检2
验，差异无显著性(x ＝0.008，P＞0.05)；神经衰弱，两组性别分布情况比较，差异亦无显
2
著性意义(x ＝0.007，P＞0.05)，有可比性。

[0119] 1.3治疗与对照组年龄分布情况

[0120] 脑动脉硬化症两组年龄分布情况比较，经Ridit分析，μ＝0.67，P＞0.05，差异亦无显著性意义，神经衰弱两组年龄分布情况比较，经Ridit分析，μ＝0.54，P＞0.05，差异亦无显著性意义，具有可比性。

[0121] 1.4治疗与对照组病程分布情况：

[0122] 经Ridit分析和t检验，脑动脉硬化症和神经衰弱、前列腺增生症治疗与对照组病程情况比较，差异无显著性意义(P＞0.05)具有可比性。

[0123] 1.5治疗与对照组治疗前症状积分值的比较：

[0124] 脑动脉硬化症和神经衰弱治疗与对照组治疗前症状积分值比较，经t检验，差异均无显著性意义(P＞0.05)，说明治疗与对照组病情相当，具有可比性。

[0125] 2病例选择及诊断标准

[0126] 本试验采用证病结合的方式，选择中医辨证为肾脾亏虚，心神失养证的脑动脉硬化症为受试对象。

[0127] 2.1辨证及诊断标准

[0128] 2.1.1肾脾亏虚、心神失养证辨证标准(参照全国高等医药院校《中医诊断学》五版教材标准

[0129] 2.1.2脑动脉硬化症诊断标准按照1981年全国第三届神经科学术会议修订的试行标准

[0130] 2.2纳入病例标准

[0131] 符合肾脾亏虚、心神失养辨证标准和西医诊断标准。

[0132] 3试验方法

[0133] 3.1分组及对照

[0134] 采用随机分组、阳性药物对照方法。先根据不同病种将病人按就诊顺序编号，再根据随机分组表按2∶1的比例分配到试验组与对照组。

[0135] 3.2试验药物

[0136] 试验药物：本发明组合物口服液，规格：10ml/支，批号9503104。

[0137] 对照药物：益龄精口服液，由长沙九芝堂制药厂生产，规格：10ml/支，批号：950209。

[0138] 3.3治疗方案

[0139] 治疗组：本发明组合物口服液，每次10ml，每日2次。

[0140] 对照物：益龄精口服液，每次10ml，每日2次，用于脑动脉硬化症对照组。

[0141] 3.4疗程：治疗与对照组疗程均为6周。

[0142] 4疗效评定标准

[0143] 4.1肾脾亏虚、心神失养证的疗效判定标准(采用“主症轻重程度记分法”评定)[0144] 临床控制：治疗后主症积分较治疗前减少91％以上；

[0145] 显效：治疗后主症积分较治疗前减少70～91％；

[0146] 有效：治疗后主症积分较治疗前减少35～69％；

[0147] 无效：治疗后主症积分较治疗前减少＜35％。

[0148] 4.2脑动脉硬化症的疗效判定标准：参照《中药新药治疗脑动脉硬化症的临床研究指导原则》制定的标准

[0149] 临床控制：临床症状全部消失，主要检查指标结果正常。

[0150] 显效：大部分症状消失，治疗后主症积分较治疗前减少70％以上，主要检查指标结果基本正常。

[0151] 有效：各种症状有好转，治疗后主症积分较治疗前减少35％～69％，主要检查指标结果有改善。

[0152] 无效：各种症状及检查指标结果均无改善，或治疗后主症积分较治疗前减少＜35％。

[0153] 5统计学处理方法

[0154] 计量资料采用t检验，计数资料采用校正X2检验(计数等级资料采用Ridit分析)。

[0155] (二)治疗结果

[0156] 1.1治疗与对照组临床疗效及其比较：见表2

[0157] 表2治疗与对照组临床疗效比较

[0158]

[0159] 从表2可以看出：治疗与对照组治疗脑动脉硬化症的临床疗效比较，经Ridit分析，差异有显著性意义(μ＝2.35，P＜0.05)，治疗组的疗效优于对照组。

[0160] 1.2治疗与对照组证候疗效及其比较：见表3

[0161] 表3治疗与对照组证候疗效比较

[0162]

[0163] 治疗与对照组治疗肾脾亏虚、心神失养证候的疗效比较，经Ridit分析，差异有显著性意义(μ＝2.07，P＜0.05)，治疗组证候的疗效优于对照组。

[0164] 1.3治疗与对照组治疗前后症状积分值的变化及其比较：见表4

[0165] 表4治疗与对照组治疗前后症状积分的变化(X±SD·分)

[0166]△△

[0167] 治疗前后比较***P＜0.01，治疗与对照组差值比较 P＜0.05

[0168] 1.4治疗与对照组主症治疗前后积分值的变化及其比较

[0169] 治疗组和对照组肾脾亏虚、心神失养证各主症治疗后积分均明显少于治疗前(p均＜0.01)，其中治疗组头晕、阳痿、早泄、夜尿频数、尿后余沥诸症较对照组减少更为明显(p＜0.01)。

[0170] 表5治疗与对照组主症治疗前后积分结果比较(X±SD)

[0171]

[0172] 与治疗前比较***p＜0.01；与对照组比较△△p＜0.05，△△△p＜0.01。

[0173] 1.5脑动脉硬化症相关客观指标检测结果

[0174] 1.5.1血压

[0175] 治疗前治疗组和对照组脑动脉硬化症患者中分别有19例、9例收缩压升高，15例、7例舒张压升高，治疗后均普遍降低，与治疗前比较差异显著或非常显著(p＜0.05～0.01)，但组间比较无差异(p均＞0.05)，详见表6。

[0176] 表6治疗与对照组脑动脉硬化症患者治疗前后血压情况比较(Kpa，X±SD)[0177]

[0178] 与治疗前比较**p＜0.05，***p＜0.01。

[0179] 1.5.2眼底

[0180] 治疗前治疗组和对照组脑动脉硬化症患者中经眼底镜检查示眼底动脉硬化者分别有35例和25例，治疗后分别有11例、2例改善，组间比较差异不显著(p＞0.05)，详见表7。

[0181] 表7治疗与对照组脑动脉硬化症患者眼底动脉硬化治疗结果比较

[0182]

[0183] X2＝3.44，P＞0.05。

[0184] 1.5.3脑血流图

[0185] 治疗前治疗组和对照组脑动脉硬化症患者中分别有37例和25例经脑血流图检查示脑血管紧张度增高、血管弹性减退，治疗后大部分患者复常或好转。组间比较无显著性差异(p＞0.05)。详见表8。

[0186] 表8治疗与对照组脑动脉硬化症患者治疗后脑血流图改变情况比较[0187]

[0188] μ＝0.933，p＞0.05.

[0189] 1.5.4血清总胆固醇

[0190] 治疗前治疗组和对照组脑动脉硬化症患者分别有42例和30例患者Tch值增高，治疗后普遍降低，与治疗前比较差异非常显著(p均＜0.001)。组间比较无显著性差异(p＞0.5)。详见表9。

[0191] 表9治疗与对照组脑动脉硬化症患者治疗前后血清总胆固醇比较(mmol/L，X±SD)

[0192]

[0193] 与治疗前比较***p＜0.01。

[0194] 实验例2神经衰弱临床试验

[0195] (一)资料与方法

[0196] 1一般资料、纳入病例标准、试验方法、疗程、统计学处理方法同实验例1。

[0197] 2疗效评定标准

[0198] 2.1肾脾亏虚、心神失养证的疗效判定标准(采用“主症轻重程度记分法”评定)[0199] 同实验例1。

[0200] 2.2神经衰弱的疗效判定标准

[0201] 参考中国人民解放军总后勤部卫生部《临床疾病诊断依据治愈好转标准》。

[0202] 痊愈：精神症状和躯体症状消失，感觉良好，恢复病前的工作能力及生活；

[0203] 显效：精神症状和躯体症状基本消失，治疗后主症积分较治疗前减少70％以上，能从事脑力和体力劳动；

[0204] 有效：精神症状和躯体症状减轻，治疗后主症积分较治疗前减少35％～69％，能短时间进行脑力和体力劳动；

[0205] 无效：精神症状和躯体症状无改善，或治疗后主症积分较治疗前减少＜35％。

[0206] 3试验方法

[0207] 3.1分组及对照

[0208] 采用随机分组、阳性药物对照方法。先根据不同病种将病人按就诊顺序编号，再根据随机分组表按2∶1的比例分配到试验组与对照组。

[0209] 3.2试验药物

[0210] 试验药物：本发明组合物口服液，规格：10ml/支，批号9503104。

[0211] 对照药物：老君仙灵芝口服液，白云山正清药业股份有限公司生产，规格：10ml/支，批号：950117。

[0212] 3.3治疗方案

[0213] 治疗组：本发明组合物口服液，每次10ml，每日2次。

[0214] 对照物：老君仙灵芝口服液，每次10ml，每日2次，用于神经衰弱对照组。

[0215] (二)治疗结果

[0216] 1治疗与对照组临床疗效及其比较：见表10

[0217] 表10治疗与对照组临床疗效比较

[0218]

[0219] 治疗与对照组治疗神经衰弱的临床疗效比较，经Ridit分析，差异有显著性意义(μ＝2.05，p＜0.05)，治疗组的疗效优于对照组。

[0220] 2治疗与对照组证候疗效及其比较：见表11

[0221] 表11治疗与对照组证候疗效比较

[0222]

[0223] 治疗与对照组治疗肾脾亏虚、心神失养证的疗效比较，经Ridit分析，差异有显著性意义(μ＝2.12，p＜0.05)，治疗组证的疗效优于对照组。

[0224] 3治疗与对照组治疗前后症状积分值的变化及比较：见表12

[0225] 表12治疗与对照组治疗前后症状积分的变化(X±SD·分)

[0226]

[0227] 注：与治疗前比较，***p＜0.01，组间比较△△p＜0.05。

[0228] 4治疗与对照组治疗前后主症积分的变化及其比较：见表13。

[0229] 治疗组和对照组肾脾亏虚、心神失养证各主症治疗后积分均较治疗前明显减少(p均＜0.01)，治疗与对照组失眠这一主症积分变化情况相当，但治疗组头晕、腰膝乏力、阳痿、早泄、夜尿频数、尿后余沥诸症较对照组减少更为明显(p＜0.05或p＜0.01)。详见表13

[0230] 表13治疗与对照组主症治疗前后积分结果比较(X±SD)

[0231]

[0232] 与治疗前比较：**p＜0.05，***p＜0.01；组间比较：△△p＜0.05，△△△p＜0.01。

[0233] 5治疗与对照组对睡眠脑电图的影响：治疗与对照组治疗前后均进行睡眠脑电图检查者32例，其中治疗组20例，对照组12例(结果见表14)，组间比较无统计学意义(p＞0.05)。

[0234] 表14治疗与对照组对睡眠脑电图的影响(例)

[0235]

[0236] 实验例3治疗前列腺增生临床试验

[0237] (一)资料与方法

[0238] 1一般资料、纳入病例标准、试验方法、治疗方案、疗程、统计学处理方法同实验例1。

[0239] 2病例选择及诊断标准：本试验采用证病结合的方式，选择中医辨证为肾脾亏虚，心神失养证的前列腺增生症患者列为受试对象。

[0240] 3辨证及诊断标准

[0241] 3.1肾脾亏虚、心神失养证辨证标准同实验例1。

[0242] 3.2前列腺增生症诊断标准按照1993年第1版《泌尿外科》(吴阶平主编，山东科技出版社出版)推荐的标准，结合1985年Rous提出的直肠指诊前列腺大小分度及估重法诊断。

[0243] 4疗效评定标准

[0244] 4.1肾脾亏虚、心神失养证的疗效判定标准(采用“主症轻重程度记分法”评定)[0245] 同实验例1。

[0246] 4.2前列腺增生症疗效标准

[0247] 临床控制：临床症状全部消失，主要检查指标结果正常。

[0248] 显效：大部分症状消失，治疗后主症积分较治疗前减少70％以上，主要检查指标结果基本正常。

[0249] 有效：临床症状好转，治疗后主症积分较治疗前减少35％～69％，主要检查指标结果有改善。

[0250] 无效：临床症状及检查结果均无改善，或者治疗后主症积分较治疗前减少＜35％。

[0251] (二)治疗结果

[0252] 1本组治疗前列腺增生症的临床疗效：本组59例中，临床控制11例，显效14例，有效30例，无效4例，总显效率为42.37％，总有效率为93.22％。

[0253] 2本组治疗肾脾亏虚、心神失养证的疗效：本组59例中，临床控制7例，显效29例，有效20例，无效3例，总显效率61.02％，总有效率为94.92％。

[0254] 3本组治疗前后证候积分的变化

[0255] 表15治疗前后证候积分的变化(X±SD·分)

[0256]

[0257] 注：与治疗前比较，***p＜0.01。

[0258] 4治疗前后前列腺直肠指检结果比较，见表16，结果表明治疗前后差异有显著性意义，说明本发明组合物口服液有控制腺体增生作用。

[0259] 表16治疗前后前列腺直肠指检结果比较

[0260]

[0261] 5治疗前后前列腺重量比较治疗前经B超检查，前列腺重量均高于正常，治疗后普遍减轻，前后比较差异有显著性意义，见表17。

[0262] 表17治疗前后前列腺B超重量比较(g，X±SD)

[0263]

[0264] 6安全性评价

[0265] 治疗与对照组治疗前后血、粪、尿常规及肝肾功能检查均未发现异常。上述指标在各种比较间皆无显著差异。

[0266] 实验例4本发明组合物制剂人参总皂甙的含量测定添加回收试验及精密度试验[0267] 1、添加回收试验

[0268] 精密称取Re2～3mg若干份，用少量无水乙醇溶解，准确加入样品(已经过多次测定其人参总皂甙含量的)或阴性对照品(已经过多次测定其人参总皂甙含量本底的)5ml，充分混合后按样品测定各项操作进行，测得添加回收率结果为：

[0269] 样品 Re添加量mg 测得添加量mg 回收率％[0270] 本发明组合物制剂成品1 0.400 0.397 99.3[0271] 本发明组合物制剂成品2 0.400 0.398 99.5[0272] 本发明组合物制剂阴性对照品1 0.400 0.408 102.0[0273] 本发明组合物制剂阴性对照品2 0.430 0.421 97.9[0274] 本发明组合物制剂阴性对照品3 0.400 0.384 96.0[0275] 2、精密度试验

[0276] 取9001030同批号样品6份，按上面实验方法进行萃取，测定其结果：

[0277] 精密度试验结果：

[0278] 人参总皂甙测得量mg/ml 绝对偏差 相对偏差％ CV％[0279] 0.568 0.013 0.023

[0280] 0.522 -0.033 -0.059

[0281] 0.560 0.005 0.009

[0282] 0.552 -0.003 -0.005

[0283] 0.582 0.027 0.049

[0284] 0.549 0.006 0.011

[0285] 实验例5淫羊霍甙的测定精密度、添加回收率试验

[0286] 1、精密度试验

[0287] 将同一批号本发明组合物制剂数支，倒入同一个干燥的具塞三角烧瓶中，摇匀后供精密度试验用。

[0288] 将上述样品分别精密吸取2ml 8份，按(六)样品测定中的方法处理并测定，测得结果于下：

[0289] 编号 结果μl/ml

[0290] 1 403

[0291] 2 404

[0292] 3 390

[0293] 4 400

[0294] 5 398

[0295] 6 399

[0296] 7 390

[0297] 8 398

[0298] 平均 398

[0299] S＝5.26

[0300] CV＝1.32％

[0301] 2、添加回收率试验

[0302] 取阴性样品数支，倒入同一个干燥具塞三角瓶中摇匀。精密吸取2ml此样品8份，分别加入600μg淫羊藿甙标准品(即300μl 1.2.0mg/ml的淫羊藿甙标准品甲醇溶液)摇匀后，按(六)样品测定中的方法处理并测定，测得结果于下：

[0303] 编号 加入量μg/ml 测得量μg/ml 回收率％

[0304] 1 300 296 98.4

[0305] 2 300 302 100.9

[0306] 3 300 304 101.3

[0307] 4 300 溶液损失

[0308] 5 300 304 101.3

[0309] 6 300 306 102.0

[0310] 7 300 310 103.5

[0311] 8 300 302 100.9

[0312] 平均 101.2

[0313] S＝1.52

[0314] CV＝1.52％

[0315] 从精密度试验和添加回收藏实验表明本方法准确可靠，可以用于检验评价本发明组合物制剂产品质量及生产工艺控制；本方法实验费用低廉，特别用短(100mm)柱就可完善分离淫羊藿甙，很适合工厂日常大批测试使用；在研究过程中发现，如不将蛋白类物质除尽，并经超声滤膜过滤，很容易损坏色谱柱，降低柱效。

[0316] 下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果

具体实施方式

[0317] 实施例1：口服液

[0318] 人参4g 枸杞子30g 金樱子肉30g 黄精15g

[0319] 菟丝子20g 女贞子20g 白芍15g 淫羊藿30g

[0320] 制备工艺：

[0321] 步骤1：

[0322] 人参用乙醇提取2次，每次时间分别为2小时、1.5小时，过滤，合并滤液，得醇提取液；

[0323] 其余中药材水提取2次，每次时间分别为2小时、1.5小时，过滤，合并滤液，得水提取液；

[0324] 步骤2：

[0325] 将水提取液，采用真空浓缩方法，控制溶液相对密度D＝1.05～1.15g/ml(75℃)，再用过滤机过滤得浓缩液；

[0326] 步骤3：

[0327] 将浓缩液冷却后，不断搅拌，并徐徐加入95％的乙醇，调整溶液成PH＝8-9，乙醇含量达50-80％，最佳60-75％，静置沉淀时间大于48小时后，取上液过滤；

[0328] 步骤4：

[0329] 加入0.3％的活性炭，然后加热沸腾，所得脱色液，再经过滤后药汁成棕红色液体，味微清苦，但不得有乙醇味，相对密度D＝1.10-1.20g/ml(20℃)；

[0330] 步骤5：

[0331] 醇沉后的药液中加入人参提取液混匀，并经过脱色脱炭后再加入蜂蜜。或者还可以在当中加入适量的助剂，即防腐剂，调香剂的稀释液，其重量百分比为0.1-0.3％，调成PH＝4.0-6.5，最佳为PH＝4.0-6.0，相对密度D＝1.10-1.25g/ml，其防腐剂可用苯甲酸或尼泊金，调香剂为奶油香精；将药液煮沸30分钟，灭菌。

[0332] 实施例2：颗粒剂

[0333] 人参3g 枸杞子25g 金樱子肉25g

[0334] 黄精30g 菟丝子20g 女贞子20g

[0335] 白芍30g 淫羊藿30g 黄芪30g

[0336] 按常规工艺制成颗粒剂。

[0337] 实施例3：胶囊剂

[0338] 人参2g 枸杞子30g 金樱子肉30g

[0339] 黄精15g 菟丝子20g 女贞子20g

[0340] 白芍30g 淫羊藿30g 黄芪30g

[0341] 按常规工艺制成胶囊剂。

[0342] 实施例4：片剂

[0343] 人参4g 枸杞子15g 金樱子肉25g

[0344] 黄精25g 菟丝子15g 女贞子15g

[0345] 白芍15g 淫羊藿30g 甘草3g

[0346] 黄芪30g 麦芽15g

[0347] 按常规工艺制成片剂。

[0348] 实施例5：口服液

[0349] 人参4g 枸杞子12g 金樱子肉15g

[0350] 黄精16g 菟丝子12g 女贞子15g

[0351] 白芍12g 淫羊藿25g 甘草3g

[0352] 黄芪12g 麦芽10g 蜂蜜30g

[0353] 制备工艺：

[0354] 步骤1：

[0355] 人参同其余中药材水提取2次，每次时间分别为2小时、1.5小时，过滤，合并滤液，得水提取液；

[0356] 步骤2：

[0357] 将水提取液，采用真空浓缩方法，控制溶液相对密度D＝1.05～1.15g/ml，再用过滤机过滤得浓缩液；

[0358] 步骤3：

[0359] 将浓缩液冷却后，不断搅拌，并徐徐加入95％的乙醇，调整溶液成(1)PH＝8-9，乙醇含量达50-80％，最佳60-75％，静置沉淀时间大于48小时后，取上液过滤；

[0360] 步骤4：

[0361] 加入0.3％的活性炭，然后加热沸腾，所得脱色液，再经过滤后药汁成棕红色液体，味微清苦，但不得有乙醇味，相对密度D＝1.10-1.20g/ml(20℃)；

[0362] 步骤5：

[0363] 醇沉后的药液中加入人参提取液混匀，并经过脱色脱炭后再加入蜂蜜。或者还可以在当中加入适量的助剂，即防腐剂，调香剂的稀释液，其重量百分比为0.1-0.3％，调成PH＝4.0-6.5，最佳为PH＝4.0-6.0，相对密度D＝1.10-1.25g/ml，其防腐剂可用苯甲酸或尼泊金，调香剂为奶油香精；将药液煮沸30分钟，灭菌。

[0364] 实施例6：口服液

[0365] 人参1-4g 枸杞子5-8g 金樱子肉5-8g

[0366] 黄精5-8g 菟丝子5-8g 女贞子5-8g

[0367] 白芍5-8g 淫羊藿10-20g 甘草1-4g

[0368] 黄芪5-8g 麦芽4-7g 蜂蜜25-35g

[0369] 制备工艺：

[0370] 步骤1：

[0371] 人参用乙醇提取2次，每次时间分别为2小时、1.5小时，过滤，合并滤液，得醇提取液A；

[0372] 其余中药材水提取2次，每次时间分别为2小时、1.5小时，过滤，合并滤液，得水提取液B；

[0373] 步骤2：

[0374] 将水提取液B采用真空浓缩方法，控制溶液相对密度D＝1.05～1.15g/ml，再用过滤机过滤得浓缩液；

[0375] 步骤3：

[0376] 将浓缩液冷却后，不断搅拌，并徐徐加入95％的乙醇，调整溶液成PH＝8-9，乙醇含量达60-75％，静置沉淀时间大于48小时后，取上液过滤；

[0377] 步骤4：

[0378] 加入0.3％的活性炭，然后加热沸腾，所得脱色液，再经过滤后药汁成棕红色液体，味微清苦，但不得有乙醇味，相对密度D＝1.10-1.20g/ml(20℃)；

[0379] 步骤5：

[0380] 醇沉后的药液中加入人参提取液A混匀，并经过脱色脱炭后再加入蜂蜜。或者还可以在当中加入适量的助剂，即防腐剂，调香剂的稀释液，其重量百分比为0.1-0.3％，调成PH＝4.0-6.5，最佳为PH＝4.0-6.0，相对密度D＝1.10-1.25g/ml，其防腐剂可用苯甲酸或尼泊金，调香剂为奶油香精；将药液煮沸30分钟，灭菌。

[0381] 实施例7：淫羊藿甙含量测定

[0382] 条件：LC-4A高效液相色谱仪，色谱柱HP ODS柱ф4.6×100mm，检测波长270nm，ABS Range 0.04，流动相：甲醇∶水＝55∶45，流量1.0ml/min，柱箱温度：36℃[0383] 标准曲线绘制：准确称取淫羊藿甙配成0.15mg/ml甲醇溶液，分别取2μl(0.03μl)、3μl(0.45μg)、4μl(0.60μg)、5μl(0.75μg)、6μl(0.9μg)，在上述分析条件下注入HPLC进行测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标得标准曲线；

[0384] 样品测定：精密吸取样品2ml，置于50ml具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯6ml，超声半小时，用吸管吸取上层清液置于50ml蒸发皿中，如此重复萃取三次，将萃取液置同一蒸发*皿中，在60℃(或室温下 )挥干后，用甲醇溶解洗涤并定容于2ml容量瓶中备用。此液称为A液。精密吸取A液1ml于具塞小试管中，精密加入10％NaCl溶液1ml，摇匀，冷冻1小时，用微孔滤膜过滤，滤液收集在具磨口塞小试管中待分析。

[0385] 根据试样中淫羊藿甙含量多少，取样2～4μl注入HPLC中分析(HPLC条件同前)，然后按下列公式计算含量：

[0386] μg/ml＝W/V2×V1×a×1/V5

[0387] 式中：W：由测验样品中淫羊藿甙的峰面积查标准曲线求得的所注射样品中淫羊藿甙的重量μg。

[0388] V1：制备好的样品体积μl。

[0389] V2：注射入HPLC的样品体积μl。

[0390] V5：所取本发明组合物制剂样品量ml。

[0391] a：稀释倍数。

[0392] 实施例8：人参总皂甙的含量测定

[0393] 称取人参皂甙Re2.00mg置2ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀备用；用微量注射器分别取此溶液30，60，90，120，150ul，并加甲醇使各份加入体积均为150ul，分别置于具塞试管之中，准确加入5％香草醛-冰醋酸液0.20ml，高氯酸0.8ml，混匀，密塞，置60℃恒温水浴中加热15min，取出用自来水流冷却，加入冰醋酸5.00ml，摇匀，静置
15min，连同试液空白，用722型分光光度计于560nm处测定其吸收度，重复测定三次，绘制标准曲线；

[0394] 样品测定：