孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法

摘要

本发明公开孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其步骤如下：第一步，配制基础饲料；其成分的重量百分比为，动物蛋白质20％、植物脂肪5％、葡萄糖68.005％、无机盐组合物6.750％、维生素组合物0.245％；按照上述配方混匀后，加入视黄醇200-400IU/kg并充分混匀，再加入蒸馏水制成块状，室温干燥，-20℃保存，作为维生素A缺乏母鼠实验组的饲料；第二步，选择实验动物；第三步，构建维生素A缺乏母鼠模型；第四步，构建维生素A缺乏仔鼠模型；本发明构建模型流程简单，成功率高，便于推广应用；为维生素A缺乏机理的研究、寻找最佳补充干预时间及维生素A强化食品的开发和鉴定提供了技术平台。

权利要求

1.孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其步骤如下：第一步，配制基础饲料；

基础饲料成分的重量百分比为，动物蛋白质20％、植物脂肪5％、葡萄糖68.005％、无机盐组合物6.750％、维生素组合物0.245％；

配制基础饲料所用的动物蛋白为鸡蛋蛋白；配制基础饲料所用的植物脂肪为一级大豆油；配制基础饲料所用的无机盐组合物为碳酸钠18.000g/kg、三水磷酸氢二钾25.550g/kg、二水磷酸氢钙4.550g/kg、氯化钙10.080g/kg、七水硫酸铁1.500g/kg、七水硫酸镁

7.500g/kg、碘化钾0.015g/kg、七水硫酸锌0.252g/kg、五水硫酸铜0.018g/kg、一水硫酸锰0.138g/kg；配制基础饲料所用的维生素组合物为维生素B1 5.0mg/kg、维生素B2

5.0mg/kg、维生素B6 5.0mg/kg、维生素B12 0.2mg/kg、生物素0.5mg/kg、叶酸0.5mg/kg、烟酸50.0mg/kg、泛酸钙50.0mg/kg、肌醇100.0mg/kg、氯化胆碱1000.0mg/kg、维生素D2176.0mg/kg、维生素K1 0.6mg/kg、维生素E 45.5mg/kg；

按照上述配方混匀后，再加入视黄醇200-400IU/kg，与其它成分充分混匀，加入蒸馏水制成块状，室温干燥，-20℃保存，作为维生素A缺乏母鼠实验组的饲料；

按照上述配方混匀后，再加入视黄醇6500IU/kg，与其它成分充分混匀，加入蒸馏水制成块状，室温干燥，-20℃保存，作为维生素A正常母鼠对照组及健康雄性大鼠的饲料；

第二步，选择实验动物；

选择10-12周龄，体重230-250g的清洁级健康的Wistar大鼠，雌性20只，雄性10只，随机分成实验组和对照组。

第三步，构建维生素A缺乏母鼠模型；

实验组的雌性大鼠给予维生素A缺乏饲料喂养，在喂养过程中以25g/天/只的进食量均衡喂养，以维生素A缺乏饲料喂养雌性大鼠21天后，尾静脉采血检测血清中视黄醇浓度低于0.7μmol/L时，维生素A缺乏母鼠模型构建成功；

第四步，构建维生素A缺乏仔鼠模型；

将第三步得到的维生素A缺乏母鼠2只与一只健康的雄性大鼠按照2∶1雌雄合笼，使维生素A缺乏母鼠怀孕并产仔，母鼠产仔量一般为6-14只；

在怀孕及哺乳期间，均以维生素A缺乏饲料喂养孕鼠和母鼠，直至21天断奶，获得从孕期开始的维生素A缺乏的仔鼠。

2.如权利要求1所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其特征是：所述鸡蛋蛋白的制作方法是将熟鸡蛋去壳和蛋黄，蒸馏水清洗蛋白3次后切碎，于80℃烘箱烤干后碎成粉。

说明书

孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方

法

技术领域

[0001] 本发明属于动物模型的建立方法，尤其是一种孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法。

背景技术

[0002] 维生素A(vitamin A)缺乏在世界范围内广泛存在，并与铁(Fe)缺乏、碘(I)缺乏一同被WHO、联合国儿童基金会(UNICEF)确定为世界性三大微量营养素缺乏性疾病。流行病学调查显示目前全球患维生素A缺乏性疾病的学龄前儿童高达2.5亿，其中300万为临床型维生素A缺乏。我国本世纪初进行的14省市0-5岁儿童的调查显示，我国属于维生素A缺乏中度流行地区，其发病率为11.7％，并且39.2％为可疑边缘型维生素A缺乏。西部及边远地区尤为严重，农村及小年龄儿童缺乏更为常见，而孕龄期妇女维生素A缺乏状况比儿童更加突出。因此，降低维生素A缺乏的患病率已纳入“2015年全球战略目标”和“中国儿童发展规划纲要”。

[0003] 维生素A是全反式视黄醇的一组有活性的β-紫香酮(β-ionone)的衍生物，包括视黄醇(retinol)、视黄醛(retinal)、视黄酸(retinoic acid)及视黄酯(retinyl ester)。临床上将血清中视黄醇浓度低于0.7μmol/L称为维生素A缺乏症，同时伴有夜盲症和干眼病等经典维生素A缺乏症状的称为临床型维生素A缺乏症，反之称为亚临床维生素A缺乏症；当血清中视黄醇浓度在0.7-1.05μmol/L称为可疑亚临床维生素A缺乏症。营养界又常将亚临床维生素A缺乏和可疑亚临床维生素A缺乏称为边缘型维生素A缺乏症或者轻度维生素A缺乏症。

[0004] 维生素A对儿童视觉、免疫功能、生殖系统、生长发育等均有重要作用。目前研究表明维生素A缺乏对贫血、学习记忆、脑发育，甚至老年期的认知功能等均有影响，所以维生素A缺乏是一个公共健康问题。经文献检索，国际上有关维生素A缺乏动物模型的研究文章有204篇，其中孕期维生素A缺乏动物模型有25篇(Dev.Biol 2008 Apr 15；316(2)：171-90；Ann Otol Rhinol Laryngol 2007 Oct；116(10)：785-92)，但这些研究文献中维生素A缺乏多数发生在孕中晚期，或是建立轻度维生素A缺乏的动物模型，而维生素A严重缺乏动物模型则导致胎盘功能低下、畸形和死胎。因此，从临床前研究方面，建立孕期开始的维生素A缺乏动物模型，通过动物实验研究维生素A缺乏对机体健康的影响、调节机制及其补充干预时间的探索是非常必要的。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，便于利用该动物模型在体研究维生素A缺乏对机体生长发育的调节机制，为更好地应用于临床提供实验工具。

[0006] 本发明所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其步骤如下：

[0007] 第一步，配制基础饲料；

[0008] 基础饲料成分的重量百分比为，动物蛋白质20％、植物脂肪5％、葡萄糖68.005％、无机盐组合物6.750％、维生素组合物0.245％；

[0009] 按照上述配方混匀后，再加入视黄醇200-400IU/kg，与其它成分充分混匀，加入蒸馏水制成块状，室温干燥，-20℃保存，作为维生素A缺乏母鼠实验组的饲料；

[0010] 按照上述配方混匀后，再加入视黄醇6500IU/kg，与其它成分充分混匀，加入蒸馏水制成块状，室温干燥，-20℃保存，作为维生素A正常母鼠对照组及健康雄性大鼠的饲料。

[0011] 第二步，选择实验动物；

[0012] 选择10-12周龄，体重230-250g的清洁级健康的Wistar大鼠，雌性20只，雄性10只，随机分成实验组和对照组。

[0013] 第三步，构建维生素A缺乏母鼠模型；

[0014] 实验组的雌性大鼠给予维生素A缺乏饲料喂养，在喂养过程中以25g/天/只的进食量均衡喂养，以维生素A缺乏饲料喂养雌性大鼠21天后，尾静脉采血检测血清中视黄醇浓度低于0.7μmol/L时，维生素A缺乏母鼠模型构建成功；

[0015] 第四步，构建维生素A缺乏仔鼠模型；

[0016] 将第三步得到的维生素A缺乏母鼠2只与一只健康的雄性大鼠按照2∶1雌雄合笼，使维生素A缺乏母鼠怀孕并产仔，母鼠产仔量一般为6-14只。

[0017] 在怀孕及哺乳期间，均以维生素A缺乏饲料喂养孕鼠和母鼠，直至21天断奶，获得从孕期开始的维生素A缺乏的仔鼠。

[0018] 所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其配制基础饲料所用的动物蛋白为鸡蛋蛋白，制作方法是将熟鸡蛋去壳和蛋黄，蒸馏水清洗蛋白3次后切碎，于80℃烘箱烤干后碎成粉。

[0019] 所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其配制基础饲料所用的植物脂肪为一级大豆油。

[0020] 所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其配制基础饲料所用的无机盐组合物为碳酸钠18.000g/kg、三水磷酸氢二钾25.550g/kg、二水磷酸氢钙4.550g/kg、氯化钙10.080g/kg、七水硫酸铁1.500g/kg、七水硫酸镁7.500g/kg、碘化钾0.015g/kg、七水硫酸锌0.252g/kg、五水硫酸铜0.018g/kg、一水硫酸锰0.138g/kg。

[0021] 所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其配制基础饲料所用的维生素组合物为维生素B1 5.0mg/kg、维生素B2 5.0mg/kg、维生素B6 5.0mg/kg、维生素B12 0.2mg/kg、生物素0.5mg/kg、叶酸0.5mg/kg、烟酸50.0mg/kg、泛酸钙50.0mg/kg、肌醇100.0mg/kg、氯化胆碱1000.0mg/kg、维生素D(IU)2176.0mg/kg、维生素K1
0.6mg/kg、维生素E 45.5mg/kg。

[0022] 本发明的有益效果：

[0023] (1)本模型的构建可完全模拟目前维生素A缺乏多数集中在孕妇和生后早期婴幼儿的发病机理，为维生素A缺乏机理的研究、寻找最佳补充干预时间及维生素A强化食品的开发和鉴定提供了技术平台；

[0024] (2)构建模型的成功率高，成模效果好，提高了科研经费的使用效率；

[0025] (3)构建模型流程简单，价格低廉，便于推广应用。

具体实施方式

[0026] 下面通过具体实施例对本发明做进一步的描述。

[0027] 本发明所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其步骤如下：

[0028] 第一步，配制基础饲料；

[0029] 基础饲料成分的重量百分比称取：动物蛋白质200.00g、植物脂肪50.00g、葡萄糖680.05g、无机盐组合物67.50g、维生素组合物2.45g；

[0030] 所用的动物蛋白为鸡蛋蛋白，制作方法是将熟鸡蛋去壳和蛋黄，蒸馏水清洗蛋白3次后切碎，于80℃烘箱烤干后碎成粉；所用的植物脂肪为一级大豆油；所用的无机盐组合物为碳酸钠18.000g/kg、三水磷酸氢二钾25.550g/kg、二水磷酸氢钙4.550g/kg、氯化钙10.080g/kg、七水硫酸铁1.500g/kg、七水硫酸镁7.500g/kg、碘化钾0.015g/kg、七水硫酸锌0.252g/kg、五水硫酸铜0.018g/kg、一水硫酸锰0.138g/kg；

[0031] 所用的维生素组合物为维生素B1 5.0mg/kg、维生素B2 5.0mg/kg、维生素B65.0mg/kg、维生素B12 0.2mg/kg、生物素0.5mg/kg、叶酸0.5mg/kg、烟酸50.0mg/kg、泛酸钙50.0mg/kg、肌醇100.0mg/kg、氯化胆碱1000.0mg/kg、维生素D(IU)2176.0mg/kg、维生素K10.6mg/kg、维生素E 45.5mg/kg。

[0032] 按照上述配方混匀后，再加入视黄醇400IU/kg，与其它成分充分混匀，加入蒸馏水制成块状，室温干燥，-20℃保存，作为边缘性维生素A缺乏母鼠实验组的饲料；

[0033] 按照上述配方混匀后，再加入视黄醇200IU/kg，作为维生素A完全缺乏母鼠实验组的饲料；

[0034] 按照上述配方混匀后，再加入视黄醇6500IU/kg，作为维生素A正常母鼠对照组及健康雄性大鼠的饲料。

[0035] 第二步，选择实验动物；

[0036] 选择10-12周龄，体重230-250g的清洁级健康的Wistar大鼠，雌性20只，雄性10只，随机分成实验组和对照组。

[0037] 第三步，构建维生素A缺乏母鼠模型；

[0038] 实验组的雌性大鼠给予维生素A缺乏饲料喂养，在喂养过程中以25g/天/只的进食量均衡喂养，以维生素A缺乏饲料喂养雌性大鼠21天后，尾静脉采血检测血清中视黄醇浓度低于0.7μmol/L时，维生素A缺乏母鼠模型构建成功；

[0039] 第四步，构建维生素A缺乏仔鼠模型；

[0040] 将第三步得到的维生素A缺乏母鼠2只与一只健康的雄性大鼠按照2∶1雌雄合笼，使维生素A缺乏母鼠怀孕并产仔，母鼠产仔量一般为6-14只。

[0041] 在怀孕及哺乳期间，均以维生素A缺乏饲料喂养孕鼠和母鼠，直至21天断奶，获得从孕期开始的维生素A缺乏的仔鼠。

[0042] 实施例一：边缘性维生素A缺乏大鼠模型

[0043] 动物模型：清洁级Wistar大鼠

[0044] 基础饲料组成：鸡蛋蛋白200g/kg，一级大豆油50g/kg，葡萄糖680.05g/kg，无机盐67.50g/kg，维生素2.45g/kg。

[0045] 维生素A添加量：视黄醇400IU/kg。

[0046] 维生素A正常对照组：上述同样基础饲料配方中添加视黄醇6500IU/kg。

[0047] 表2 孕鼠血清中维生素A水平

[0048]血清中视黄醇浓度(μmol/L)
维生素A正常组 1.35±0.16
维生素A缺乏组 0.87±0.14

[0049] 表3 仔鼠血清中维生素A水平

[0050]

[0051] 外观观察维生素A缺乏大鼠的皮毛较粗糙、色泽偏黄，活动频繁，偶尔易于激怒，但无仔鼠死亡。

[0052] 实施例二：维生素A完全缺乏大鼠模型

[0053] 动物模型：清洁级Wistar大鼠。

[0054] 基础饲料组成：鸡蛋蛋白200g/kg，一级大豆油50g/kg，葡萄糖680.05g/kg，无机盐67.50g/kg，维生素2.45g/kg。

[0055] 维生素A添加量：视黄醇200IU/kg。

[0056] 维生素A正常对照组：上述同样基础饲料配方中添加视黄醇6500IU/kg。

[0057] 表4 孕鼠血清中维生素A水平

[0058]血清中视黄醇浓度(μmol/L)
维生素A正常组 1.35±0.13
维生素A缺乏组 0.64±0.10

[0059] 表5 仔鼠血清中维生素A水平