聚明胶肽注射液的制备方法

摘要

本发明涉及一种聚明胶肽注射液的处方及其制备方法，包括：a.将明胶用注射用水溶解，调节明胶溶液的pH值为4.5～6.0，升温至116~131℃，保持温度2~3小时，停止加热，冷却至25~40℃。b.调节降解液的pH值至8.0~9.0，加入环己烷二异氰酸酯丙酮溶液，搅拌交联1.5~2.5小时。c.减压蒸馏将丙酮蒸出。d.向蒸馏后剩下的溶液中加注射用水、加入氯化钾、氯化钠和氯化钙，调pH值至6.5~7.5。d.吸附与过滤；e.灭菌、灯检、包装。该方法降解条件可控性好，水解所得的多肽重均分子量为5000-18500，满足交联反应最佳条件要求；交联度高，交联产物多肽为球状分子。制备的聚明胶肽注射液符合国家药品标准，经临床使用结果表明，该产品安全，有效。

权利要求

1.一种聚明胶肽注射液制备方法，该方法包括以下步骤：

a、明胶的热降解：将牛骨或猪骨明胶用40~90℃注射用水溶解，调节明胶溶液的pH值为4.5～6.0，升温至116~131℃，至相对粘度达到1.30~1.85时，停止加热，并冷却至

20~40℃得到降解液；

b、交联：调节降解液的pH值为8.0~9.0，在25~40℃温度条件下加入交联剂体积浓度为

4~15%的环己烷二异氰酸酯的丙酮溶液或体积浓度为4~15%的6-亚己基二异氰酸酯的丙酮溶液，不断搅拌，交联1.5~2.5小时；

c、蒸馏：将步骤b的交联产物加热升温至45~65℃，减压蒸馏45~180分钟，将丙酮蒸出；减压蒸馏的真空度为-0.08Mpa；

d、电解质的调节：向步骤c蒸馏后剩下的溶液中加注射用水，加入氯化钾、氯化钠和氯化钙，溶解后，加盐酸溶液调pH值至6.5~7.5；

e、吸附、过滤；吸附是指：加入经活化处理的0.1~0.5%硅藻土，边加入边搅拌，升温至

115~125℃，保温45～90分钟；迅速冷却至60~80℃，放置至少8小时，弃去沉淀泥浆，将溶液转移至另一容器中，加入经活化处理的0.1~0.5%硅藻土和0.1~0.5%活性炭，加入剩余量的注射用水，调pH值至6.5~7.5，搅拌吸附1.5～2.5小时；过滤是：指依次用10μm、

0.45μm和0.22μm的滤膜过滤；

f、灌封、灭菌、灯检、包装；

上述明胶、交联剂、氯化钠、氯化钾、氯化钙和注射用水的用量比为3.2kg：（0.25-0.50L）：（3.6－3.8kg）：（0.09－0.12kg）：（0.05－0.06kg）：（490－500L）；其中明胶以含N量计，交联剂以环己烷二异氰酸酯或6-亚己基二异氰酸酯的量计；所述注射用水的用量是指步骤a-e的总量。

2.如权利要求1所述的聚明胶肽注射液制备方法，其特征在于，步骤a中注射用水用量为注射用水总体积量的35%~45%。

3.如权利要求1或2所述的聚明胶肽注射液制备方法，其特征在于，步骤d中，加入的注射用水量为注射用水总体积量的35%~45%。

4.如权利要求1或2所述的聚明胶肽注射液制备方法，其特征在于，步骤f中，灭菌工序为：采用115℃灭菌30分钟。

说明书

聚明胶肽注射液的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及聚明胶肽注射液制备方法，具体涉及一种以牛骨或猪骨明胶生产聚明胶肽注射液的处方及制备工艺。

背景技术

[0002] 聚明胶肽注射液在临床上广泛用于各种原因引起的失血性休克、失体液性休克等症，具有迅速补充血容量、维持血压的作用，已替代血浆。目前，该产品存在不同的制备方法，如公开号为CN1387912A的“聚明胶肽注射液的制备工艺”发明专利申请，该申请公开了以下技术方法：1、溶胶：用注射用热水溶解牛骨、猪骨或其他明胶；2、热降解：调牛骨、猪骨或其他明胶水溶液pH值在5.0~6.0之间，升温至110~125℃，维持这一温度，测量相对粘度，至相对粘度达到2.0~2.5时，停止加热，快速冷却至30~37℃;3、交联：降解液调pH至6.5~7.5，维持温度25~35℃，加入明胶蛋白含量为0.7~1.2%的交联剂，搅拌交联1~3小时；
4、加入电解质：调pH值7.4~7.6，加入氯化钠、氯化钙和氯化钾电解质，使电解质完全溶解；
5、吸附澄清：加入活化后的0.1~1%硅藻土，边加入边搅拌，升温至115℃并保温，密封反应釜，降温冷却至35℃，静置；6、将上述静置后的液体用无菌虹吸转到无菌容器中，加入活化后的0.1%~1%硅藻土与活性炭，检测并调节pH7.0~7.6，搅拌吸附，然后经4级过滤，分装；
7、灭菌；8、灯检包装。该制备方法存在工艺参数不确切，可控性差，产品质量不稳定，存在一定的安全隐患，主要缺点在于：1、热降解程度差。当降解程度以相对密度控制为2.0~2.5，降解产物的重均分子量超过20000道尔顿，不适合环己烷二异氰酸酯交联剂的反应要求。
2、交联工序可操作性差。三种交联剂（琥珀酸酐、乙二醛或环己烷二异氰酸酯）性质各异，反应条件各不相同。环己烷二异氰酸酯不溶于水，必须以适当的溶剂溶解后方能加入，故上述交联工序不能适用以环己烷二异氰酸酯为交联剂的交联反应。3、交联度低。由于降解产物的分子量在20000以上时肽链上氨基或酰胺的活性低，增加了交联难度，导致交联度低，且交联产物为链状分子，重均分子量大于40000道尔顿（见图1）。4、由于产品主要为链状分子，临床补充血容量、维持血压的作用较差，难以保证疗效和安全性。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于提供一种以牛骨或猪骨明胶生产聚明胶肽注射液及其制备方法。

[0004] 本发明聚明胶肽注射液制备工艺技术方案为：

[0005] 一种聚明胶肽注射液制备方法，该方法包括以下步骤：

[0006] 一种聚明胶肽注射液制备方法，该方法包括以下步骤：

[0007] a、明胶的热降解：将牛骨或猪骨明胶用40~90℃注射用水溶解，调节明胶溶液的pH值为4.5～6.0，升温至116~131℃，至相对粘度达到1.30~1.85（优选相对粘度1.5~1.7）时，停止加热，并冷却至20~40℃得到降解液；

[0008] b、交联：调节降解液的pH值为8.0~9.0，在25~40℃温度条件下加入交联剂浓度为4~15%（v/v）的环己烷二异氰酸酯的丙酮溶液或6-亚己基二异氰酸酯的丙酮溶液，不断搅拌，交联1.5~2.5小时；

[0009] c、蒸馏：将步骤b的交联产物加热升温至45~65℃，减压蒸馏45~180分钟，将丙酮蒸出；

[0010] d、电解质的调节：向步骤c蒸馏后剩下的溶液中加注射用水，加入氯化钾、氯化钠和氯化钙，溶解后，加盐酸溶液调pH值至6.5~7.5；

[0011] e、吸附、过滤；

[0012] f、灌封、灭菌、灯检、包装；

[0013] 上述明胶、交联剂、氯化钠、氯化钾、氯化钙和注射用水的用量比为3.2kg：0.25-0.50L：3.6－3.8kg：0.09－0.12kg：0.05－0.06kg：490－500L（其中的用量单位kg和L仅为明确其比例关系而不限制其具体用量，也就是说同比例放大或缩小都应该在本发明范围内）；其中明胶以含N量计，交联剂以环己烷二异氰酸酯或6-亚己基二异氰酸酯的量计。

[0014] 上述步骤a中注射用水用量为注射用水总体积量的35%~45%。

[0015] 上述步骤c中，减压蒸馏的真空度为-0.08Mpa。

[0016] 上述步骤d中，加入的注射用水量为注射用水总体积量的35%~45%；步骤e中，吸附是指：加入经活化处理的0.1~0.5%硅藻土，边加入边搅拌，升温至115~125℃，保温45～90分钟；迅速冷却至60~80℃，放置至少8小时，弃去沉淀泥浆，将溶液转移至另一容器中，加入经活化处理的0.1~0.5%硅藻土和0.1~0.5%活性炭，加入剩余量的注射用水，调pH值至6.5~7.5，搅拌吸附1.5～2.5小时；过滤是：指依次用10μm、0.45μm和0.22μm的滤膜过滤。

[0017] 上述步骤f中，灭菌工序为：采用115℃灭菌30分钟。

[0018] 上述方法生产包装的聚明胶肽注射液的规格可以是：250ml:1.6g（以含氮量计）、500ml:3.2g（以含氮量计）。

[0019] 本发明有如下特点：

[0020] 1、热降解条件易于控制。分子量越大，溶液的相对粘度越大，热降解程度可用相对粘度来控制。如果溶液的相对粘度大于2.0，降解产物的重均分子量超过20000道尔顿，这不仅将增加交联难度，而且交联产物的重均分子量超过40000道尔顿，将导致产品不合格。申请人发现，溶液的相对粘度在1.30~1.85范围内时，降解产物的重均分子量在5000~18500道尔顿之间，符合环己烷二异氰酸酯（或6-亚己基二异氰酸酯）交联剂的最佳反应要求，有利于下一步的交联反应，以确保所得交联反应产物为球状分子且分子量符合要求。

[0021] 2、交联反应条件能准确控制，交联度高。将交联剂配制成5%~15%环己烷二异氰酸酯（或6-亚己基二异氰酸酯）丙酮溶液，有利于提高交联剂的稳定性、有利于交联剂的分散和交联反应完全。交联剂环己烷二异氰酸酯和6-亚己基二异氰酸酯均不溶于水，且性质均不稳定，容易与包含有活泼氢原子的化合物如醇、酸、胺、水、碱等发生反应。申请人发现在环己烷二异氰酸酯或6-亚己基二异氰酸酯加入丙酮,可起到封闭作用以提高其稳定性；且降低粘度,增加分散性,同时充当油性基和水性基的媒介，有利于交联剂的分散和交联反应完全，交联度高。

[0022] 申请人还发现本发明在弱碱性溶液中有利于交联反应的发生，在酸性溶液却很慢。反应中当碱性氨基转化为弱碱性脲基，且羧基形成盐时，溶液的pH值将变小。本发明交联反应的pH值控制在8.0~9.0时交联效果较佳。

[0023] 3、蒸馏条件能准确控制，溶剂回收完全。丙酮的沸点低、易于回收，采用加热减压蒸馏，可保证产品中无有机溶剂残留。

[0024] 4、能准确控制产品的钾、钠、钙离子浓度，使之与血电解质相等。

[0025] 5、产品质量易于控制，合格率高，稳定性好，无毒副作用，用药安全。能够延长在血液中存留时间，增加交替渗透压，从而起到补充血容量、维持血压的治疗作用。

附图说明

[0026] 图1为现有技术制得的聚明胶肽分子形状照片；

[0027] 图2~4为本发明制得的聚明胶肽分子形状照片。

[0028] 图中聚明胶肽分子形状系采用专利技术“一种物体外轮廓非线性多级放大光学成像技术原理、装置和摄像方法”（申请号/专利号：200910060951）拍摄。

具体实施方式

[0029] 一、聚明胶肽注射液的处方：

[0030]明胶（以含N量计） 3.2kg
环己烷二异氰酸酯 0.34L
氢氧化钠 0.36kg
氯化钠 3.71kg
氯化钾 0.11kg
氯化钙 55.5g
盐酸 适量
注射用水 适量
500L（pH值6.5～7.5）

[0031] 二、按处方组成和技术方案要求生产聚明胶肽注射液：

[0032] 1、溶胶：取牛骨或猪骨明胶按处方量投入注射用水的温度为42℃。

[0033] 2、明胶的热降解：用盐酸或氢氧化钠溶液调节明胶溶液的pH值在4.5～6.0范围内（pH值优选5.5～5.8），升温至116~131℃（优选120~125℃），保持温度2~3小时，至溶液的相对粘度达到1.30～1.85（25℃测定）范围内时（优选相对粘度1.5~1.7），立即停止加热，迅速使溶液冷却至25~40℃。

[0034] 3、肽链的交联：用NaOH溶液调节降解液的pH值至8.0~9.0（优选pH值8.5），维持溶液温度25~40℃，缓慢加入4%~15%（v/v）环己烷二异氰酸酯丙酮（或6-亚己基二异氰酸酯）溶液3.4L（优选10%环己烷二异氰酸酯丙酮溶液），并不断搅拌1.5~2.5小时。

[0035] 4、蒸馏：加热升温至45~65℃，减压蒸馏45~180分钟，将丙酮蒸出。

[0036] 5、电解质的调节：向蒸馏后剩下的溶液中加注射用水至总量的70%~90%，混匀，按处方量加入氯化钾、氯化钠和氯化钙，搅拌使溶解后，加盐酸溶液调pH值至6.5~7.5。

[0037] 6、吸附、过滤：加入经活化处理过的0.1~0.5%硅藻土，边加入边搅拌，升温至115~125℃，保温45～90分钟，测定溶液的相对粘度应在1.85～2.20（25℃测定）范围内。
迅速冷却，放置至少8小时，弃去沉淀泥浆，将上清液转移至另一容器中，加入经活化处理过的0.1~0.5%硅藻土和0.1~0.5%活性炭，加入注射用水至处方总量，调pH值至6.5~7.5，搅拌吸附1.5～2.5小时，依次用10μm、0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，灌封。 [0038] 7、灭菌：115℃灭菌30分钟。

[0039] 8、灯检、包装。

[0040] 依上述工艺生产包装的聚明胶肽注射液的规格有： 250ml:1.6g（以含氮量计）、500ml:3.2 g（以含氮量计）。

[0041] 依上述工艺生产的聚明胶肽注射液，按聚明胶肽注射液国家药品标准检验，结果均符合国家标准。且制得的聚明胶肽分子呈球状分子（见图2）。

[0042] 实施例1：

[0043] 1、取猪骨明胶200g，加温度为40℃的注射用水1750ml，搅拌使溶解。用盐酸或氢氧化钠溶液调节明胶溶液的pH值至4.5，升温至116℃，保持温度3小时，至溶液的相对粘度达到1.85，使水解所得肽链的重均分子量为16000-18500，立即停止加热，迅速（如采用常规的冷循环冷却）使溶液冷却至25℃。

[0044] 2、用NaOH溶液调节上述降解液的pH值至8.0，维持溶液温度25℃，缓慢（以28ml/小时的速度）加入环己烷二异氰酸酯丙酮溶液（由3.4ml环己烷二异氰酸酯溶于68ml丙酮中得到环己烷二异氰酸酯丙酮溶液），不断搅拌2.5小时，每隔20分钟，测量溶液的pH值，并用NaOH溶液调节以保持溶液的pH值为8.0。

[0045] 3、将上述溶液在真空度-0.08Mpa、温度50℃条件下，减压蒸馏180分钟，至不再有丙酮被蒸出。

[0046] 4、向蒸馏后剩下的溶液中加注射用水2250ml，混匀，加入氯化钾1.1g、氯化钠37.1g和氯化钙555mg，搅拌使溶解后，加盐酸溶液调pH值至6.5。

[0047] 6、加入经活化处理过的0.1%硅藻土，边加入边搅拌，升温至115℃，保温90分钟，测定溶液的相对粘度为1.85，所得聚明胶肽的重均分子量为29006，其形状为球状分子，见图2。迅速冷却，放置8小时，弃去沉淀泥浆，将上清液转移至另一容器中，加入经活化处理过的0.5%硅藻土和0.1%活性炭，加入注射用水1000ml，调pH值至6.8左右，搅拌吸附1.5小时，依次用10μm、0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，灌封。

[0048] 7、灭菌：115℃灭菌30分钟。

[0049] 8、灯检、包装。分装规格为：500ml:3.2g（以含氮量计）。

[0050] 实施例2：

[0051] 1、取牛骨明胶200g，加温度为65℃的注射用水1900ml，搅拌使溶解。用盐酸或氢氧化钠溶液调节明胶溶液的pH值至5.5，升温至121℃，保持温度2.5小时，至溶液的相对粘度达到1.60，使水解所得肽链的重均分子量为10000-15500，立即停止加热，迅速使溶液冷却至35℃。

[0052] 2、用NaOH溶液调节上述降解液的pH值至8.5，维持溶液温度35℃，缓慢加入环己烷二异氰酸酯丙酮溶液（由3.4ml环己烷二异氰酸酯溶于34ml丙酮中得到），不断搅拌2小时，每隔20分钟，测量溶液的pH值，并用NaOH溶液调节以保持溶液的pH值为8.5。

[0053] 3、将上述溶液在真空度-0.08Mpa、温度65℃条件下，减压蒸馏45分钟，至不再有丙酮被蒸出。

[0054] 4、向蒸馏后剩下的溶液中加注射用水2750ml，混匀，加入氯化钾1.1g、氯化钠37.1g和氯化钙555mg，搅拌使溶解后，加盐酸溶液调pH值至7.0。

[0055] 6、加入经活化处理过的0.3 %硅藻土，边加入边搅拌，升温至115℃，保温70分钟，测定溶液的相对粘度为2.20，所得聚明胶肽的重均分子量为33924，其形状为球状分子，见图3。迅速冷却，放置12小时，弃去沉淀泥浆，将上清液转移至另一容器中，加入经活化处理过的0.1%硅藻土和0.3 %活性炭，加入注射用水350ml，调pH值至7.0左右，搅拌吸附2小时，依次用10μm、0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，灌封。

[0056] 7、灭菌：115℃灭菌30分钟。

[0057] 8、灯检、包装。分装规格为：250ml:1.6 g（以含氮量计）。

[0058] 实施例3：

[0059] 1、取猪骨明胶200g，加温度为90℃的注射用水2000ml，搅拌使溶解。用盐酸或氢氧化钠溶液调节明胶溶液的pH值至6.0，升温至131℃，保持温度2小时，至溶液的相对粘度达到1.3，使水解所得肽链的重均分子量为5500-9000，立即停止加热，迅速使溶液冷却至40℃。

[0060] 2、用NaOH溶液调节上述降解液的pH值至9.0，维持溶液温度40℃，缓慢加入环己烷二异氰酸酯丙酮溶液（由3.4ml环己烷二异氰酸酯溶于24ml丙酮中得到），不断搅拌1.5小时，每隔20分钟，测量溶液的pH值，并用NaOH溶液调节以保持溶液的pH值为9.0。

[0061] 3、将上述溶液在真空度-0.08Mpa、温度45℃条件下，减压蒸馏100分钟，至不再有丙酮被蒸出。

[0062] 4、向蒸馏后剩下的溶液中加注射用水2500ml，混匀，加入氯化钾1.1g、氯化钠37.1g和氯化钙555mg，搅拌使溶解后，加盐酸溶液调pH值至6.5。

[0063] 6、吸附、过滤：加入经活化处理过的0.5 %硅藻土，边加入边搅拌，升温至125℃，保温45分钟，测定溶液的相对粘度应为2.0，所得聚明胶肽的重均分子量为31783，其形状为球状分子，见图4。迅速冷却，放置16小时，弃去沉淀泥浆，将上清液转移至另一容器中，加入经活化处理过的0.3%硅藻土和0.3%活性炭，加入注射用水500ml，调pH值至7.3左右，搅拌吸附2.5小时，依次用10μm、0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，灌封。

[0064] 7、灭菌：115℃灭菌30分钟。

[0065] 8、灯检、包装。分装规格为：500ml:3.2g（以含氮量计）。

[0066] 表1. 本发明聚明胶肽注射液的检验结果：

[0067]