枳壳提取物水合橙皮内酯用于制备促肠动力药物的用途及制剂

摘要

本发明公开了一种从枳壳中分离提取水合橙皮内酯的方法和水合橙皮内酯用于制备促肠动力药物的用途及制剂。粉碎枳壳，用乙酸乙酯回流提取滤液；将滤液减压浓缩后加丙酮溶解，上于硅胶柱上，以石油醚、石油醚和丙酮丙酮洗脱，合并洗脱液，减压浓缩；加醇溶解，离心，取上清液，冷冻干燥，得水合橙皮内酯。本发明从枳壳中分离提取出水合橙皮内酯，并通过实验证实了枳壳提取物水合橙皮内酯的促肠动力的作用远远超过橙皮苷和柚皮苷，从而纠正了人们一直来认为橙皮苷和柚皮苷是中药枳壳促肠动力药理作用有效成分的偏见。

权利要求

1.水合橙皮内酯用于制备促肠动力药物的用途。

说明书

枳壳提取物水合橙皮内酯用于制备促肠动力药物的用途及

制剂

技术领域

[0001] 本发明涉及中药枳壳提取物，具体涉及从枳壳中提取的水合橙皮内酯及水合橙皮内酯的用途。

背景技术

[0002] 现有研究表明，水合橙皮内酯，化学名为：7-甲氧基-8-(2’，3’-二羟基-3’-甲基丁基)-香豆素，英文名：merazin hydrate，分子量为278，化学式为：

[0003]

[0004] 主要存在于独活属重齿毛当归、芸香科蛇床子、九里香、小叶九里香等植物中，未见报道存在于枳壳(枳实)中。

[0005] 中药枳壳，拉丁名Fructus Aurantii，别名只壳、江枳壳、商壳、炒枳壳，为芸香科植物酸橙(Citrus aurantium L.)及其栽培变种的干燥未成熟果实。已知枳壳具有促进肠动力的作用，已被广泛用于治疗消化道疾病(参见《中药药理学》.侯家玉主编.2002.8，第一版.p118)。中国药典2005版记载枳壳的药理有效成分为橙皮苷和柚皮苷，但有研究(参见官福兰等.陈皮及橙皮苷对离体肠管运动的影响.时珍国医国药，2002，13(2))发现，橙皮苷和柚皮苷这两种成分的肠动力实验并无明显疗效。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于从中药枳壳中提取得到一种新的有效成分——水合橙皮内酯，并发现枳壳体内促肠动力的效应成分主要与水合橙皮内酯相关，而非橙皮苷和柚皮苷，水合橙皮内酯才是枳壳促肠动力药理作用的有效成分。

[0007] 本发明的进一步目的在于以枳壳为原料制备出包含枳壳提取物水合橙皮内酯的药学上可接受的各种药物制剂。

[0008] 发明人研究发现：枳壳体内促肠动力的效应成分主要与水合橙皮内酯相关，而非现有技术所认为的与橙皮苷和柚皮苷相关。

[0009] 从枳壳中分离提取水合橙皮内酯的方法为：粉碎枳壳，用乙酸乙酯回流提取滤液，将滤液减压浓缩后加丙酮溶解，上于硅胶柱上，先以石油醚洗脱，再用石油醚∶丙酮＝20∶1、石油醚∶丙酮＝10∶1，以及丙酮洗脱各一次，合并洗脱液，减压浓缩，加醇溶解，离心，取上清液，冷冻干燥。

[0010] 本发明纠正了人们一直来认为橙皮苷和柚皮苷是中药枳壳促肠动力药理作用有效成分的偏见，通过细致地研究发现枳壳促肠动力的效应成分原来主要与水合橙皮内酯相关，而不是橙皮苷和柚皮苷。发明人从枳壳中分离提取出水合橙皮内酯，并通过实验证实了枳壳提取物水合橙皮内酯能显著抑制离体小肠平滑肌的自发活动、拮抗Ach、BaCl2或5-HT等引起的肠道收缩痉挛，其作用远远超过橙皮苷和柚皮苷。在这一研究的基础上，发明人得到一种包含枳壳提取物水合橙皮内酯的药物，该药物将是一种很好的促肠动力药物。

附图说明

[0011] 图1：空白血清的HPLC色谱图；

[0012] 图2：含药血清的HPLC色谱图；

[0013] 图3：加味逍遥散汤剂的HPLC色谱图；

[0014] 图4：含药血清中水合橙皮内酯光谱图；

[0015] 图5：枳壳中水合橙皮内酯光谱图。

具体实施方式

[0016] 实施例1：水合橙皮内酯作为枳壳活性成分的发现

[0017] 空白血清：健康人血清，n＝6；

[0018] 含药血清：健康人口服加味逍遥散30min后血清，n＝6。

[0019] 加味逍遥散：栀枝(1g)、丹皮(1g)、柴胡(1.7g)；茯苓(1.7g)、白术(1g)、当归(1.7g)；厚朴(2g)、枳壳(2g)、白芍(1.7g)、生姜(4g)；葛根(2.7g)、大枣(1g)、薄荷(1g)、甘草(1g)十四味中药水没、浸泡半小时后上火，沸腾后文火煎煮40分钟×2次。

[0020] 样品处理：取空白血清1ml，100水浴10分钟，用匀浆机打碎，8500转/min离心20分种，取上清液用氮气流吹，定容至150μl，待测；含药血清处理方法相同。

[0021] 用高效液相色谱法对空白血清、含药血清及加味逍遥散制剂进行分析，色谱图分别见图1～图3。发明人发现：在加味逍遥散制剂中存在一个保留时间为26.020的峰，且在加味逍遥散的含药血清中与存在一个保留时间为25.803的峰，而这个未知峰在空白血清中却没有，说明是由服药引起的。通过色谱图和保留时间分析说明，这两个峰可能为同一物质(未知成分X)，且来源于加味逍遥散。含药血清中未知成分X光谱图见附图4。

[0022] 随后，将加味逍遥散十四味生药随机分为四组，按整个方制剂中的量称取：第一组：栀枝(1g)、丹皮(1g)、柴胡(1.7g)；第二组：茯苓(1.7g)、白术(1g)、当归(1.7g)；第三组：厚朴(2g)、枳壳(2g)、白芍(1.7g)、生姜(4g)；第四组：葛根(2.7g)、大枣(1g)、薄荷(1g)、甘草(1g)。对以上四组生药进行高效液相色谱分析。进样6次，由保留时间与光谱图得知，未知成分X来源于生药枳壳。枳壳中未知成分X的光谱图见附图5。

[0023] 实施例2：从生药枳壳分离提取水合橙皮内酯

[0024] 用硅胶柱层析法从枳壳中分离纯化未知成分X，具体过程如下：称取粉碎的枳壳2g，20ml乙酸乙酯回流提取1.5h，提取三次，减压浓缩后加2ml丙酮溶解，上于硅胶柱上，先以石油醚100ml洗脱，再用石油醚∶丙酮20∶1、10∶1，丙酮洗脱各100ml，合并洗脱液为洗脱液1，减压浓缩，加2ml甲醇溶解15000r/min转速离心15min。取上清液进样。经分析型HPLC检测其纯度，按峰面积归一化法计算得纯度＞98％。经制备型HPLC 5次制备，在体积超载状态下工作，进样体积10ml，得未知成分19.63mg，得率0.0098％。

[0025] 对制备物冷冻干燥后进行成分鉴定，结合图谱DMSO-C13-2006-8-2HX-0815的全炭谱，氢谱、质谱、红外以及文献报道物性数据，判断所测样品Rf(EtoAc)0.3，分子量为278，分子式为C15H18O5，结合文献资料，确定样品为水合橙皮内酯。

[0026] 实施例3：水合橙皮内酯药效学实验

[0027] 180～220g SD大鼠(雌雄兼备)随机分为6组，每组15只，分别为A(蒸馏水)组、B(水合橙皮内酯)组、C(橙皮苷)组、D(柚皮苷)组、E(水合橙皮内酯+阿托品)组、F(橙皮苷+阿托品)组、G(柚皮苷+阿托品)组。

[0028] 各组灌服药液0.3mL/d，连续灌服3d，1次/d。A组灌服199％蒸馏水；B和E组灌服水合橙皮内酯(20mg/ml)、C和F组灌服橙皮苷(20mg/ml)、D和G组灌服柚皮苷(20mg/ml)。第4d禁食12h后灌服上述药物各0.3mL，同时E组、F组和G组腹腔注射0.0003g/kg盐酸吗啡。20min后灌服葡聚糖蓝2000水溶液0.4mL，15min后脱臼处死大鼠，剖腹，分离自贲门至直肠末端，以幽门处取胃，将胃内容物充分溶解于装有1.5mL四氯化碳、0.5mL无水乙醇和2mL蒸馏水的试管内，3500r/min离心15min，取上清液，以分光光度计于九620nm处测吸光度，以蒸馏水组的吸光度均值为100％，其余各组吸光度与之相比所得百分数为相对胃内色素残留率，作为胃排空功能的指标。同时分别测量自幽门至色素最前端及至回盲部的距离，二者之比为平均小肠推进比。取出十二指肠，制备大鼠离体十二指肠肌标本，置于盛有20ml台氏液的麦氏浴槽内，通空气，38±0.5℃恒温，张力负荷1g，稳定后加入致痉剂乙酰胆碱(1ug/ml-0.1ml)、氯化钡(20％-0.1ml)、5-HT(10mg/ml-0.1ml)，待其平稳后加入上述各药液。测定其给药前后振幅，计算其拮抗率。

[0029] 对比观察水合陈皮内脂、陈皮苷及柚皮苷对大鼠小肠收缩强度的作用，水合陈皮内脂能显著抑制离体小肠平滑肌的自发活动、拮抗Ach、BaCl2或5-HT引起的肠道收缩痉挛，而后两者的作用不明显。

[0030] 橙皮内脂、橙皮苷和柚皮苷拮抗Ach、BaCl2、5-HT的作用比较

[0031]

[0032] 注：*与橙皮苷和柚皮苷比较P＜0.001

[0033] 橙皮内脂、橙皮苷和柚皮苷对平均小肠推进比和相对胃内色素残留率的作用比较[0034]

[0035] 注：N＝15，与蒸馏水组比较，p＜0.001

[0036] 实施例4：水合橙皮内酯药物组合物制备

[0037] 取实施例2中的水合橙皮内酯提取物，按本领域已知的常规方法制备各种药学上可接受的各种形式的药用组合物。

[0038] 水合橙皮内酯片：水合橙皮内酯提取物冻干粉中加入淀粉，过80目筛，充分混匀后加粘合剂，制成颗粒，于600℃干燥，整粒，加入滑料，压片，片重为0.05或0.01g，每片含水合橙皮内酯20mg。

[0039] 水合橙皮内酯胶囊：水合橙皮内酯提取物冻干粉中加入淀粉，过80目筛，充分混匀后加粘合剂，制成颗粒，于600℃干燥，整粒，装胶囊即得，每粒重0.4g。