一种注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂及其制备方法

摘要

本发明提供一种注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂，其采用活性成分吗替麦考酚酯与增溶剂聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯制成，其重量比为250～1250∶100～500。本发明还提供上述注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂的制备方法。本发明的优点在于，本发明的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂处方简单合理、质量稳定、使用方便；且能够避免口服制剂等引起的恶心、呕吐、腹泻等不良反应，同时还能够避免吐温80等增溶剂引起的血压下降、溶血等的毒副作用，安全性高，具有良好的应用前景。

权利要求

1.一种注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂，其特征在于，其采用活性成分吗替麦考酚酯与增溶剂聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯制成，其重量比为250～1250∶100～500。

2.根据权利要求1所述的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂，其特征在于，活性成分吗替麦考酚酯与增溶剂聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯的重量比为250∶100。

3.制备权利要求1或2所述注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)在搅拌下，将增溶剂聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯用注射用水溶解，再加入吗替麦考酚酯，然后加入1～2mol/L的盐酸，直至使吗替麦考酚酯溶解为止；用NaOH溶液或盐酸调pH值至3.5～4.5，补充注射用水后，加入活性炭搅拌吸附后过滤；

2)滤液经可见异物检测、中间体检测合格后，过滤灌装、冷冻干燥，制得冻干粉针剂。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中用2mol/L氢氧化钠或

2mol/L盐酸调节pH值。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述活性炭的加入量以重量体积百分比计为药液体积的0.05％；所述过滤使用0.45μm微孔滤膜，所述微孔滤膜为聚丙烯膜或混合醋酸纤维膜。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述过滤使用双级

0.22μm微孔滤膜，所述滤膜聚氟乙烯膜、尼龙膜或混合醋酸纤维膜。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述冷冻干燥包括预冷冻、升华干燥、再干燥三个阶段。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述预冷冻是在-40℃的温度下保温

4h，使药液冻结。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述升华干燥是在真空度≤20Pa的条件下，使冻结的药液从-40℃升温到-20℃，升温时间10～15小时，保温8～10小时；然后再升温到0℃，升温时间7～10小时，保温4～6h。

10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述再干燥是在3小时内升温至

30℃，保温6～12小时。

说明书

一种注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种吗替麦考酚酯注射剂型，具体地说，涉及一种注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂及其制备方法，属于药物制剂领域。

背景技术

[0002] 全球每年约有近七万人接受器官移植，其中绝大部分为肾移植。而中国每年也有5000多名患者接受肾脏移植，如何提高移植器官的长期生存率始终是医学界的一大难题。
人体免疫系统具有识别“自我”和“肥沃”能力，通常只对外来抗原产生免疫应答，而对自身抗原出现免疫耐受，因此免疫系统对异体移植器官的排斥反应阻碍了器官移植的成功。
虽然由大环内酯抗生素结构的免疫抑制剂、钙神经氨基酶抑制剂、肾上腺皮质激素组成的免疫抑制方案已经较为成熟，但每年仍有高达30％～50％的肾移植患者术后发生各类排斥反应，最终导致移植失败。此外，这些药物的不良反应也限制了其在临床上的应用(郭新刚等，免疫抑制剂的进展与临床和市场评价[J].中国医药用药评价与分析，2008，8(3)：
180-184)。

[0003] 新型免疫抑制剂——吗替麦考酚酯，是一种霉酚酸的2-乙基酯类衍生物，脱脂后形成具有免疫抑制活性的代谢产物霉粉酸(MPA)。MPA可逆性地抑制鸟嘌呤核苷酸(GMP)经典合成途径中的限速酶——次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)，从而阻断鸟嘌呤核苷酸的经典合成途径，使鸟嘌呤核苷酸耗竭，进而阻断DNA和RNA的合成。因此，MMF通过耗竭GMP选择性地阻断T和B淋巴细胞鸟骠呤核苷酸的经典合成，从而抑制T淋巴和B淋巴细胞增殖(叶荣等，霉酚酸酯——新一代免疫抑制药，武警医学院学报，1999，7(4)：286-288)。吗替麦考酚酯具有作用机制独特、抗排斥作用强、药动学性质优越、安全性好、性价比高的特点等，已成为器官移植术后新三联疗法中的重要组成部分。

[0004] 目前，吗替麦考酚酯上市剂型有胶囊、片剂、口服混悬液等，但这些口服制剂常引起恶心、呕吐、腹泻等不良反应。此外，患者进行移植手术后，体质下降，不能够口服给药，因此，注射剂型成为临床应用的首选剂型。将吗替麦考酚酯制备成无菌冻干粉末，方便保存、运输及临床应用。

[0005] 由于吗替麦考酚酯溶解度较小，通常会加入一定的增溶剂，增加吗替麦考酚酯在水中的溶解度。例如：CN1131420A，公开日1996年9月18日，发明名称“无水结晶霉酚酸2-(4-吗啉代)乙酯(MYCOPHENOLATE MOFETIL)及其静脉用制剂”公开了采用吐温80作为增溶剂溶解吗替麦考酚酯。但是，吐温80有一定的安全应用范围，有可能导致血压下降、溶血等毒副作用；此外，产品如含较多的吐温80，会引起冻干不完全、外观不佳、复溶效果差等问题。

[0006] 近年来，随着含吐温80的注射剂的临床不良反应报道的增多，人们对其药理活性引发的不良反应日益关注，因此，研究、开发、应用更加安全、有效的新型注射用增溶剂具有重要的意义。

发明内容

[0007] 本发明的目的在于提供一种注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂，该冻干粉针剂质量稳定、安全性高。

[0008] 本发明的另一目的在于提供上述注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂的制备方法。

[0009] 为了实现本发明的目的，本发明的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂采用活性成分吗替麦考酚酯与增溶剂聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯制成，其重量比为250～1250∶100～500，优选为250～1000∶100～400，更优选为250∶100。

[0010] 本发明还提供制备上述注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂的方法，包括如下步骤：

[0011] 1)在搅拌下，将增溶剂聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯用注射用水溶解，再加入吗替麦考酚酯，然后加入1～2mol/L的盐酸，直至使吗替麦考酚酯溶解为止；用NaOH溶液或盐酸调pH值至3.5～4.5，补充注射用水；加入活性炭搅拌吸附后过滤；

[0012] 2)滤液经可见异物检测、中间体检测合格后，过滤灌装、冷冻干燥，制得冻干粉针剂。

[0013] 其中，步骤1)中用2mol/L氢氧化钠或2mol/L盐酸调节pH值。

[0014] 步骤1)中所述活性炭的加入量以重量体积百分比计为药液体积的0.05％；所述过滤使用0.45μm微孔滤膜，所述微孔滤膜为聚丙烯膜或混合醋酸纤维膜。

[0015] 步骤2)中所述过滤使用双级0.22μm微孔滤膜，所述滤膜聚氟乙烯膜、尼龙膜或混合醋酸纤维膜。

[0016] 步骤2)所述冷冻干燥包括预冷冻、升华干燥、再干燥三个阶段。具体地说，所述预冷冻是在-40℃的温度下保温4h，使药液冻结；所述升华干燥是在真空度≤20Pa的条件下，使冻结的药液从-40℃缓慢升温-20℃，升温时间10～15小时，保温8～10小时；然后再升温到0℃，升温时间7～10小时，保温4～6h；所述再干燥是在3小时内升温至30℃，保温6～12小时。

[0017] 本发明中使用聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯替代传统增溶剂吐温80，聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯具有低组胺释放、低溶血作用、较高的生理耐受性、高增溶能力、低粘度等特点，将聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯取代吐温80能够大大降低注射剂的毒副作用。

[0018] 具体地说，本发明的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂的制备方法包括如下步骤：

[0019] 1)在约全量的80％的注射用水中，加入聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯，搅拌溶解，再加入吗替麦考酚酯，然后在搅拌下加入1～2mol/L的盐酸，直至吗替麦考酚酯溶解为止；用2mol/L氢氧化钠或2mol/L盐酸调pH值至3.5～4.5，补充注射用水至全量，制得药液；

[0020] 注射用水的用量以1000支冻干粉针剂计为6000mL；

[0021] 2)加入0.05％(g/mL)的润湿的活性炭，搅拌吸附30min，然后用0.45μm微孔滤膜过滤，所述0.45μm微孔滤膜为聚丙烯膜或混合醋酸纤维膜；

[0022] 滤液经可见异物检测、中间体检测合格后，用双级0.22μm微孔滤膜过滤，所述双级0.22μm微孔滤膜为聚氟乙烯膜、尼龙膜或混合醋酸纤维膜；

[0023] 3)然后进行灌装，灌装前应预先对玻瓶、胶塞灭菌，并检查玻瓶、胶塞、药液的可见异物，灌装过程中应检查装量及可见异物，若有结晶析出应重新溶解；

[0024] 其中，玻瓶的灭菌温度为350℃、灭菌时间大于5min；胶塞可以为干热灭菌，灭菌温度在125℃以上、灭菌时间为150min，也可以是湿热灭菌，灭菌温度在121℃以上、灭菌时间为30min；

[0025] 4)灌装后进行冷冻干燥，制得冻干粉针剂，冷冻干燥的过程为：

[0026] 预冷冻：在-40℃的温度下保温4h，使药液冻结；

[0027] 升华干燥：在真空度≤20Pa的条件下，使冻结的药液从-40℃缓慢升温-20℃，升温时间10～15小时，保温8～10小时；然后再升温到0℃，升温时间7～10小时，，保温4～6h；

[0028] 再干燥：在3小时内升温至30℃，保温6～12小时。

[0029] 本发明的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂的规格为500mg或1000mg。

[0030] 本发明的优点在于，本发明的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂处方简单合理、质量稳定、使用方便；且能够避免口服制剂等引起的恶心、呕吐、腹泻等不良反应，同时还能够避免吐温80等增溶剂引起的血压下降、溶血等的毒副作用，安全性高，具有良好的应用前景。

具体实施方式

[0031] 以下通过具体实施例来进一步说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

[0032] 实施例1 0.5g注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂

[0033] 1、处方组成(1000瓶处方量)：

[0034] 吗替麦考酚酯 500g

[0035] 聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯 200g

[0036] 注射用水 6000mL

[0037] 灌装于20mL无色管制瓶制成1000瓶。

[0038] 2、制备：

[0039] 1)在全量的80％的注射用水中，加入聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯，搅拌溶解，再加入吗替麦考酚酯，然后在搅拌下加入2mol/L的盐酸，直至吗替麦考酚酯溶解为止；用2mol/L盐酸调pH值至3.5，补充注射用水至全量，制得药液；

[0040] 2)加入0.05％(g/mL)的润湿的活性炭，搅拌吸附30min，然后用0.45μm聚丙烯微孔滤膜过滤；

[0041] 滤液经可见异物检测、中间体检测合格后，用双级0.22μm聚氟乙烯微孔滤膜过滤；

[0042] 3)然后进行灌装，灌装前应预先对玻瓶、胶塞灭菌，并检查玻瓶、胶塞、药液的可见异物，灌装过程中应检查装量及可见异物，若有结晶析出应重新溶解；

[0043] 其中，玻瓶的灭菌温度为350℃、灭菌时间大于5min；胶塞干热灭菌，灭菌温度在125℃以上、灭菌时间为150min；

[0044] 4)灌装后进行冷冻干燥，制得冻干粉针剂，冷冻干燥的过程为：

[0045] 预冷冻：在-40℃的温度下保温4h，使药液冻结；

[0046] 升华干燥：在真空度为20Pa的条件下，使冻结的药液从-40℃-20℃，升温时间为15小时，保温8小时；然后再升温到0℃，升温时间为10小时，保温4h；

[0047] 再干燥：在3小时内升温30℃，保温6h。

[0048] 实施例2 1.0g注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂

[0049] 1、处方组成(1000瓶处方量)：

[0050] 吗替麦考酚酯 1000g

[0051] 聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯 400g

[0052] 注射用水 6000mL

[0053] 灌装于20mL无色管制瓶制成1000瓶。

[0054] 2、制备：

[0055] 1)在全量的80％的注射用水中，加入聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯，搅拌溶解，再加入吗替麦考酚酯，然后在搅拌下加入1mol/L的盐酸至吗替麦考酚酯溶解为止，用2mol/L氢氧化钠调pH值4.5，补充注射用水至全量，制得药液；

[0056] 2)加0.05％(g/mL)的润湿的活性炭，搅拌吸附30min，然后用0.45μm微孔滤膜(混合醋酸纤维膜)过滤；

[0057] 滤液经可见异物检测、中间体检测合格后，用双级0.22μm尼龙制微孔滤膜过滤；

[0058] 3)然后进行灌装，灌装前应预先对玻瓶、胶塞灭菌，并检查玻瓶、胶塞、药液的可见异物，灌装过程中应检查装量及可见异物，若有结晶析出应重新溶解；

[0059] 其中，玻瓶的灭菌温度为350℃、灭菌时间8min；胶塞湿热灭菌，灭菌温度在121℃以上、灭菌时间为30min；

[0060] 4)灌装后进行冷冻干燥，制得冻干粉针剂，冷冻干燥的过程为：

[0061] 预冷冻：在-40℃的温度下保温4h，使药液冻结；

[0062] 升华干燥：在真空度为20Pa的条件下，使冻结的药液从-40℃缓慢升温-20℃，升温时间10小时，保温8小时，然后再升温到0℃，升温时间为7小时，保温6h；

[0063] 再干燥：在3小时内升温至30℃，保温12h。

[0064] 实施例3 影响因素试验

[0065] 根据中国药典2005年版二部附录X IX C(药物稳定性试验指导原则)与《化学药品和治疗用生物制品研究指导原则》中的“原料药及药物制剂稳定性重点考查项目表”的要求，对实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂进行影响因素试验，重点考察样品外观、酸度、水分、澄明度、含量及有关物质，具体过程如下：

[0066] 取三批实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂，按市售包装，进行高温(60℃)和强光照射(4500±500LX)试验，按上述重点考察项目进行测定。结果如表1所示。

[0067] 表1 影响因素试验结果

[0068]

[0069] 从表1可以看出：实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂在高温(60℃)或强光照射(4500±500LX)条件下放置5天或10天，虽然含量有所下降、有关物质有所增加，但仍在合格范围内，且其他质量指标无明显变化，说明本发明的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂质量稳定。

[0070] 实施例4 加速试验

[0071] 根据中国药典2005年版二部附录X IX C(药物稳定性试验指导原则)与《化学药品和治疗用生物制品研究指导原则》中的“原料药及药物制剂稳定性重点考查项目表”的要求，对实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂进行加速试验，重点考察样品外观、酸度、水分、澄明度、含量及有关物质。

[0072] 取三批实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂，按市售包装，在温度40±2℃、相对湿度75±5％的条件下放置6个月，分别在0、1、2、3及6月末取样一次，按上述重点考察项目进行测定。结果如表2所示。

[0073] 表2 加速试验结果

[0074]

[0075] 从表2可以看出：实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂在温度为40±2℃、相对湿度为75±5％的条件下放置6个月，虽然含量有所下降、有关物质有所增加，但仍在合格范围内，且其他质量指标无明显变化，说明本发明的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂质量稳定。

[0076] 实施例5 长期试验

[0077] 根据中国药典2005年版二部附录X IX C(药物稳定性试验指导原则)与《化学药品和治疗用生物制品研究指导原则》中的“原料药及药物制剂稳定性重点考查项目表”的要求，对实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂进行长期试验，重点考察样品外观、酸度、水分、澄明度、含量及有关物质。

[0078] 取三批实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂，按市售包装，于温度25±2℃、相对湿度60±10％的条件下放置12个月，分别于0、3、6、9、12月末取样一次，按上述重点考察项目进行测定。结果如表3所示。

[0079] 表3 长期试验结果

[0080]

[0081] 从表3可以看出：实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂在温度为25±2℃、相对湿度为60±10％的条件下放置12个月，虽然含量有所下降、有关物质有所增加，但仍在合格范围内，且其他质量指标无明显变化，说明本发明的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂质量稳定。

[0082] 实施例6 过敏性试验

[0083] 一、试验目的

[0084] 观察注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂对豚鼠有无过敏反应，为临床安全用药提供依据。

[0085] 二、供试材料

[0086] 1、受试药物

[0087] 实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂；5％葡萄糖注射液(北京双鹤药业股份有限公司)；4％鸡蛋清，临用前用5％葡萄糖注射液配制。

[0088] 2、受试动物

[0089] 豚鼠18只，体重230～250g，雌雄各半，沈阳药科大学实验动物中心提供，合格证号：SYXK(辽)2003-0012。

[0090] 三、试验方法

[0091] 1、剂量设计：

[0092] 本试验剂量设计依据注射用吗替麦考酚酯临床使用剂量(成人剂量为3g/d，浓度为6mg/mL，用5％的葡萄糖注射液溶解配制)。

[0093] 2、试验过程

[0094] 豚鼠18只，按体重、性别随机分为3组，每组6只，阴性对照组给予0.5mL 5％葡萄糖注射液致敏，并以1mL该注射液进行攻击；阳性对照组预先以0.5mL 4％鸡蛋清致敏，并以1mL该试剂进行攻击；受试药组以1mL实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂致敏进行攻击。

[0095] 首先，各组隔日腹腔注射药液0.5mL/只，共注射3次；然后，将每组豚鼠再分为2小组，其中一小组豚鼠在第一次腹腔注射药液后14天由前肢静脉注射给药1mL/只；另一小组于第一次腹腔注射药液后第21天从前肢静脉注射给药1mL/只。

[0096] 观察静脉注射后30分钟内的豚鼠过敏反应症状，并按表4评分标准进行评分。结果如表5所示。

[0097] 表4 全身性过敏反应的评分标准

[0098]

[0099] 表5 过敏性反应试验结果

[0100]

[0101] 四、试验结果

[0102] 从表5可以看出：受试药组的两小组豚鼠分别于第1次腹腔注射后14天和第21天进行攻击均未发生过敏性反应；而阳性对照组豚鼠于注射后2分钟内出现呼吸困难，抽搐倒下，而后死亡；豚鼠死亡均发生在注射后1～5分钟内。另外，阴性对照组6只豚鼠均未发生过敏反应试验结论。结果表明：在本试验条件下，本发明的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂对受试豚鼠无致敏作用。

[0103] 实施例7 溶血性试验

[0104] 一、试验目的

[0105] 观察注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂对家兔红细胞有无溶血和凝集作用，为临床安全用药提供依据。

[0106] 二、供试材料

[0107] 1、受试药物

[0108] 实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂；5％葡萄糖注射液，北京双鹤药业股份有限公司提供。

[0109] 2、受试动物

[0110] 白色家兔1只，体重2.42kg，雄性，沈阳药科大学实验动物中心提供，合格证号：SYXK(辽)2003-0012。

[0111] 三、试验方法：

[0112] 1、剂量设计

[0113] 本试验剂量设计依据注射用吗替麦考酚酯临床使用剂量(成人剂量为3g/d，浓度为6mg/mL，用5％的葡萄糖注射液溶解配制)。

[0114] 2、试验过程

[0115] 1)2％红细胞悬液的制备

[0116] 家兔颈动脉取血5mL至洁净干燥小烧杯中，用玻璃棒搅拌去纤维蛋白，加5mL 5％葡萄糖注射液，3000转/min离心10min，弃去上清液，再加10mL 5％葡萄糖注射液轻轻摇匀，离心，弃去上清液，如此反复几次至上清液不呈红色为止，然后按所得红细胞容积，用5％葡萄糖注射液配制成2％红细胞悬液，置冰箱备用。

[0117] 2)试验步骤

[0118] 取7支试管，按1～7编号。其中1～5号试管分别加入0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂，并加入5％葡萄糖注射液至
2.5mL；6号、7号试管中分别加入5％葡萄糖注射液2.5mL、蒸馏水2.5mL(完全溶血对照)；最后每支试管中均加入2％兔红细胞悬液2.5mL，轻轻摇匀，置37℃水浴中，分别记录
15min、30min、45min、1h、2h、3h、4h各管的溶血和凝集情况。

[0119] 溶血结果判断标准为：

[0120] 完全溶血：溶液澄清、红色、管底无红细胞残留；

[0121] 部分溶血：溶液澄清、红色或棕色、管底尚有少量红细胞残留；

[0122] 不溶血：红细胞全部下沉、上层液无色澄明；

[0123] 凝集：虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散，或出现药物沉淀。

[0124] 3、试验结果

[0125] 结果如表6所示。

[0126] 表6溶血试验结果

[0127]

[0128] 注：“-”不溶血；“+”部分溶血；“++”完全溶血

[0129] 从表6可以看出：实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂(1～5号管)在4h内均未引起溶血和凝集反应。结果表明：本实验条件下，本发明的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂对兔红细胞无溶血和凝集作用。

[0130] 实施例8血管刺激性试验

[0131] 一、试验目的

[0132] 观察注射用吗替麦考酚酯静脉缓慢推注对家兔耳缘静脉的刺激性作用，为临床安全用药提供依据。

[0133] 二、供试材料

[0134] 1、受试药物

[0135] 实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂；5％葡萄糖注射液，北京双鹤药业股份有限公司提供。

[0136] 2、受试动物

[0137] 白色家兔8只，体重2.45～2.67kg，雌雄各半，沈阳药科大学实验动物中心提供，合格证号：SYXK(辽)2003-0012。

[0138] 三、试验方法

[0139] 1、剂量设计：

[0140] 本试验剂量设计依据注射用吗替麦考酚酯临床使用剂量(成人剂量为3g/d，浓度为6mg/mL，用5％的葡萄糖注射液溶解配制)；给药体积根据人与家兔体型系数折算为23.3mL/kg。

[0141] 2、试验方法

[0142] 取家兔8只，随机分为2组，每组4只，对照组每日耳缘静脉缓慢推注23.3mL/kg5％葡萄糖注射液；给药组每日耳缘静脉缓慢推注23.3ml/kg溶解后的实施例1的注射用吗替麦考酚酯冻干粉针剂，连续推注7日；末次给药后24h，每组取2只家兔，木棒击毙，剪取距注射部位1cm处和5cm处兔耳，放于10％福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，HE染色，末次给药后72h，处死每组中剩余的2只家兔，剪取距推注部位1cm处和5cm处兔耳，放于10％福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，HE染色。光镜下观察给药后24h及72h对兔耳血管的刺激性反应。

[0143] 四、试验结果

[0144] 1、肉眼观察结果

[0145] 观察注射部位兔耳静脉有无充血、水肿变性、硬结及坏死现象，记录病变程度及出现血管组织变化的家兔数目，血管充血及水肿程度分为0、I、II、III度，0度为无变化、I度为轻微变化、II度为明显变化、III度为严重变化。结果如表7所示。

[0146] 表7 家兔耳缘静脉推注后肉眼观察结果

[0147]

[0148] 从表7可以看出：肉眼观察给药组与对照组无明显区别。

[0149] 2、病理组织学检查结果

[0150] 观察注射部位兔耳静脉血管扩张充血、血栓形成、水肿及炎性细胞浸润等改变，每项内容按病变程度分正常、轻、中、重，分别以-、+、++、+++表示。结果如表8所示。

[0151] 表8 家兔耳缘静脉推注后病理组织学检查结果

[0152]