一种阿扎胞苷的合成方法

摘要

本发明涉及药物合成工艺领域，公开了一种阿扎胞苷的合成方法。本发明所述合成方法包括在隔绝水分条件下，双三甲基二硅胺和5-氮杂胞嘧啶以甲苯为溶剂，在季铵盐类相转移催化剂催化下进行硅烷化反应，生成具有式II结构的化合物再与四乙酰核糖进行缩合反应，生成具有式IV结构的化合物在碱性环境下醇解生成阿扎胞苷。本发明所述合成方法缩短了硅烷化反应时间，同时减少了双三甲基二硅胺废液量，避免了纯化阶段甲醇和乙醇中水分对阿扎胞苷成品纯度的影响，且本发明所述合成方法所用试剂价格低廉、反应步骤少、反应条件温和，有利于工业化生产。

权利要求

1.一种阿扎胞苷的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、在隔绝水分条件下，双三甲基二硅胺和5-氮杂胞嘧啶以甲苯为溶剂，在季铵盐类相转移催化剂催化下进行硅烷化反应，生成具有式II结构的化合物，所述5-氮杂胞嘧啶与季铵盐类相转移催化剂的摩尔比为1∶0.005-0.5；

步骤2、式II化合物与四乙酰核糖进行缩合反应生成具有式IV结构的化合物，式IV化合物在碱性环境下醇解生成阿扎胞苷；

其中，步骤1所述季铵盐类相转移催化剂为四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氯化铵、四丁基碘化铵、苄基三乙基氯化铵或苄基三乙基溴化铵。

2.根据权利要求1所述合成方法，其特征在于，步骤1所述5-氮杂胞嘧啶与双三甲基二硅胺的摩尔比为1∶2.5-5。

3.根据权利要求1所述合成方法，其特征在于，步骤1所述5-氮杂胞嘧啶与双三甲基二硅胺的摩尔比为1∶2.6。

4.根据权利要求1所述合成方法，其特征在于，步骤1所述甲苯用量为每1g 5-氮杂胞嘧啶加入甲苯10-25ml。

5.根据权利要求1所述合成方法，其特征在于，步骤1所述5-氮杂胞嘧啶与季铵盐类相转移催化剂的摩尔比为1∶0.01-0.1。

6.根据权利要求1所述合成方法，其特征在于，步骤1所述隔绝水分为通入氮气隔绝水分。

7.根据权利要求1所述合成方法，其特征在于，步骤2所述在碱性环境下醇解为用NaOH的甲醇溶液进行醇解。

8.根据权利要求1所述合成方法，其特征在于，还包括用N-甲基吡咯烷酮和环己烷纯化阿扎胞苷。

9.根据权利要求8所述合成方法，其特征在于，所述N-甲基吡咯烷酮和环己烷用量为每1g阿扎胞苷加入N-甲基吡咯烷酮5-20ml和环己烷5-20ml。

说明书

一种阿扎胞苷的合成方法

技术领域

[0001] 本发明涉及药物合成工艺领域，具体涉及一种阿扎胞苷的合成方法。

背景技术

[0002] 阿扎胞苷，分子式为C8H12N4O5，英文名为Azacitidine，化学名为1-(β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮，又名5-氮杂胞苷、氮杂胞苷，具有如式V所示结构：

[0003]

[0004] 阿扎胞苷为白色针状结晶，属胞嘧啶核苷类药物，是由美国Pharmion公司开发的DNA甲基转移酶抑制剂，临床上主要用于治疗骨髓增生异常综合征。阿扎胞苷是第一个基于肿瘤表达基因异常开发的抗肿瘤药物，能直接掺入DNA中，抑制DNA和RNA合成，可杀伤处于S期的细胞，对于乳腺癌、肠癌、黑色素瘤等有一定疗效。其作用机制是阿扎胞苷经磷酸化后结合到DNA分子上，DNA甲基转移酶与阿扎胞苷发生甲基化反应，形成共价结合产物，DNA甲基转移酶的活性被抑制并发生降解，引起肿瘤组织中DNA甲基化水平降低，高甲基化抑癌基因去甲基化，使基因恢复表达从而抑制肿瘤细胞。

[0005] 目前，阿扎胞苷常用的合成方法为5-氮杂胞嘧啶与双三甲基二硅胺(HMDS)在硫酸铵的催化下进行硅烷化反应，生成的N-三甲基硅基-4-三甲基硅基氧基-2-胺-1，3，5-三嗪与四乙酰核糖在催化剂的作用下进行缩合，生成的1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮用甲醇钠的甲醇溶液或通氨气的甲醇溶液水解脱保护生成阿扎胞苷粗品，粗品经有机溶剂重结晶得到阿扎胞苷成品，如专利US7038038、US3819780和US55591012014所描述的合成方法。

[0006] 上述合成方法在进行硅烷化反应时普遍效率较低、耗时较长。同时，合成中采用大量HMDS，产生了大量HMDS废液。此外，在纯化阶段上述各方法均采用了甲醇或乙醇溶剂进行纯化，而甲醇或乙醇为亲水性溶剂，阿扎胞苷在水中极易遭到破坏，影响了阿扎胞苷成品纯度。

发明内容

[0007] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种阿扎胞苷的合成方法，该合成方法可缩短硅烷化反应时间，提高反应效率，同时降低双三甲基二硅胺(HMDS)废液量。

[0008] 本发明提供一种阿扎胞苷的合成方法，包括以下步骤：

[0009] 步骤1、在隔绝水分条件下，双三甲基二硅胺和5-氮杂胞嘧啶以甲苯为溶剂，在季铵盐类相转移催化剂催化下进行硅烷化反应，生成具有式II结构的化合物，所述5-氮杂胞嘧啶与季铵盐类相转移催化剂的摩尔比为1∶0.005-0.5；

[0010] 步骤2、式II化合物与四乙酰核糖进行缩合反应生成具有式IV结构的化合物，式IV化合物在碱性环境下醇解生成阿扎胞苷；

[0011]

[0012] 步骤1所述硅烷化反应是由双三甲基二硅胺(HMDS)对具有式I结构的5-氮杂胞嘧啶的三嗪环上的氨基和羟基进行保护，生成N-三甲基硅基-4-三甲基硅基氧基-2-胺-1，3，5-三嗪，即所述式II化合物，反应温度为70-125℃，优选为100-125℃，反应时间为4-48h，优选为6-12h，反应方程式如下：

[0013]

[0014] 其中，HMDS中文名为双三甲基二硅胺或六甲基二硅胺，分子式为C6H19NSi2，是一种碱性硅烷化保护剂。

[0015] 在现有的合成方法中，硅烷化反应普遍采用大量HMDS进行，其中一部分作为反应原料，而绝大部分作为反应溶剂，这样就使得硅烷化反应过程中产生大量HMDS废液，因此本发明把作为反应溶剂的HMDS全部用甲苯取代，这样既减少了HMDS的废液量，又节约了成本。从反应原理上讲，反应溶剂用乙腈、甲苯、二氯乙烷、三氯乙烷中的一种或者其中任意种混合液来替代作为溶剂部分的HMDS，均可以降低HMDS的废液量。但是，现有可行的溶剂中，只有甲苯的沸点较高，比较利于硅烷化反应，耗时较短，其他溶剂或者各种溶剂之间混合液的沸点均低于硅烷化反应的适宜温度，使反应时间延长。

[0016] 同时，现有合成方法中硅烷化反应通常采用硫酸铵作为催化剂，但是催化效率不高，故本发明采用季铵盐类相转移催化剂代替硫酸铵，使反应时间大大缩短。相转移催化简称PT，是20世纪70年代以来在有机合成中应用日趋广泛的一种新的合成技术。在有机合成中常遇到非均相有机反应，这类反应的通常速度很慢，收率低。但如果用水溶性无机盐，用极性小的有机溶剂溶解有机物，并加入少量(0.05mol以下)的季铵盐或季磷盐，反应则很容易进行，这类能促使提高反应速度并在两相间转移负离子的鎓盐，称为相转移催化剂。

[0017] 本发明采用甲苯作为溶剂，以季铵盐类相转移催化剂催化，不仅可以缩短硅烷化反应时间、提高反应效率，还减少了HMDS的废液量。

[0018] 其中，作为优选，所述季铵盐类相转移催化剂为四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氯化铵、四丁基碘化铵、苄基三乙基氯化铵或苄基三乙基溴化铵。

[0019] 其中，步骤1所述甲苯用量为每1g 5-氮杂胞嘧啶加入甲苯10-25ml，所述5-氮杂胞嘧啶与双三甲基二硅胺的摩尔比为1∶2.5-5。

[0020] 作为优选，步骤1所述5-氮杂胞嘧啶与双三甲基二硅胺的摩尔比为1∶2.6。

[0021] 作为优选，步骤1所述5-氮杂胞嘧啶与季铵盐类相转移催化剂的摩尔比为1∶0.01-0.1。

[0022] 步骤2中式II化合物与具有式III结构的四乙酰核糖进行缩合反应，生成1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮，即式IV化合物，式IV化合物碱性条件下醇解脱乙酰基生成具有式V结构的阿扎胞苷，反应温度为-20-50℃，优选为-5-30℃，反应时间为4-24h，优选为4-12h，反应方程式如下：

[0023]

[0024] 在现有的合成方法中，缩合反应常用的催化剂为三氟甲基三甲基硅脂(TMS-triflate)和四氯化锡，但四氯化锡在后续反应和处理中不易除净，极易造成成品重金属超标，故本发明采用三氟甲基三甲基硅脂作为缩合反应的催化剂。

[0025] 现有技术中，醇解脱乙酰基普遍采用甲醇钠的甲醇溶液或通氨气的甲醇溶液，经过深入研究，本发明水解脱保护采用NaOH的甲醇溶液进行醇解脱乙酰基，同样能够达到甲醇钠的甲醇溶液和通氨气的甲醇溶液的脱乙酰基效果，并且阿扎胞苷粗品纯度也较高。因此，本发明除了可以采用甲醇钠的甲醇溶液或通氨气的甲醇溶液进行脱乙酰基外，还可以采用NaOH的甲醇溶液进行醇解脱乙酰基，反应温度为-20-50℃，优选为-5-30℃，反应时间为0.5-10h，优选为0.5-4h，采用后者在成本上可以得到了节约。

[0026] 水分会影响整个合成反应，因此在整个合成过程中需要隔绝水分。本发明采用通入氮气隔绝水分。

[0027] 本发明所述合成方法还包括用N-甲基吡咯烷酮和环己烷纯化阿扎胞苷。目前，在纯化阶段现有各方法均采用甲醇或乙醇溶剂进行纯化，而甲醇或乙醇为亲水性溶剂，阿扎胞苷在水中极易遭到破坏，影响了阿扎胞苷成品纯度。本发明纯化时使用环己烷代替甲醇或者乙醇，环己烷为疏水性溶剂，使用环己烷纯化可以使产品在纯化和烘料时减少损失，提高产品纯度。此外，N-甲基吡咯烷酮和环己烷均为ICH(人用药物注册技术)指南中的二类溶剂，限度较高，抽滤时用无水乙醇洗涤滤饼，可确保溶剂残留合格。其中，所述N-甲基吡咯烷酮和环己烷用量为每1g阿扎胞苷加入N-甲基吡咯烷酮5-20ml和环己烷5-20ml。

[0028] 本发明所述阿扎胞苷的合成方法，缩短了硅烷化反应时间，提高了反应效率，同时降低HMDS废液量，避免纯化阶段甲醇和乙醇中水分对阿扎胞苷成品纯度的影响，并且所用试剂价格低廉、反应步骤少、反应条件温和，有利于工业化生产。

具体实施方式

[0029] 本发明公开了一种阿扎胞苷的合成方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的合成方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

[0030] 依照本发明，所述阿扎胞苷的合成方法包括以下步骤：

[0031] 步骤1、在隔绝水分条件下，双三甲基二硅胺和5-氮杂胞嘧啶以甲苯为溶剂，在季铵盐类相转移催化剂催化下进行硅烷化反应，生成具有式II结构的化合物，所述5-氮杂胞嘧啶与季铵盐类相转移催化剂的摩尔比为1∶0.005-0.5；

[0032] 步骤2、式II化合物与四乙酰核糖进行缩合反应生成具有式IV结构的化合物，式IV化合物在碱性环境下醇解生成阿扎胞苷；

[0033]

[0034] 其中，作为优选，所述季铵盐类相转移催化剂为四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氯化铵、四丁基碘化铵、苄基三乙基氯化铵或苄基三乙基溴化铵。

[0035] 其中，步骤1所述甲苯用量为每1g 5-氮杂胞嘧啶加入甲苯10-25ml，所述5-氮杂胞嘧啶与双三甲基二硅胺的摩尔比为1∶2.5-5。

[0036] 作为优选，步骤1所述5-氮杂胞嘧啶与双三甲基二硅胺的摩尔比为1∶2.6。

[0037] 作为优选，步骤1所述5-氮杂胞嘧啶与季铵盐类相转移催化剂的摩尔比为1∶0.01-0.1。

[0038] 其中，本发明所述在碱性环境下醇解为用NaOH的甲醇溶液进行醇解；所述隔绝水分为通入氮气隔绝水分。

[0039] 本发明所述合成方法还包括用N-甲基吡咯烷酮和环己烷纯化阿扎胞苷。

[0040] 其中，所述N-甲基吡咯烷酮和环己烷用量为每1g阿扎胞苷加入N-甲基吡咯烷酮5-20ml和环己烷5-20ml。

[0041] 本发明采用季铵盐类相转移催化剂催化硅烷化反应比采用硫酸铵催化硅烷化反应所用时间缩短了50％左右；由于采用甲苯代替大部分HMDS，使得HMDS废液量减少了65-85％；本发明纯化时使用环己烷代替甲醇或者乙醇，避免纯化阶段甲醇和乙醇中水分对阿扎胞苷成品纯度的影响。

[0042] 下面结合实施例，进一步阐述本发明，实施例中所用原料及试剂均为市售产品。

[0043] 实施例1：本发明所述阿扎胞苷的合成方法

[0044] 在氮气保护下，将25.8g(0.23mol)5-氮杂胞嘧啶、1.0g(0.003mol)四丁基硫酸氢铵投入到1L三口瓶中，加入125ml HMDS和500ml甲苯搅拌升温至125℃，6h左右溶液澄清，然后减压蒸掉溶剂至恒重，得N-三甲基硅基-4-三甲基硅基氧基-2-胺-1，3，5-三嗪，即式II化合物65.0g(0.25mol)。

[0045] 在氮气保护下，将65.0g(0.25mol)式II化合物用500ml四氢呋喃溶解后，投入1L三口瓶中搅拌，再加入120.0g(0.38mol)四乙酰核糖，再用100ml四氢呋喃冲洗加料漏斗，常温下缓慢滴加64.5ml(0.36mol)三氟甲基三甲基硅脂，搅拌反应，反应4h后，将反应液在55℃浓缩至干，油状物用1，1，2-三氯乙烷溶解，然后加入大量饱和碳酸钠溶液至溶液pH为9-10，分液，水层用500ml 1，1，2-三氯乙烷分两次萃取，合并有机层，有机层用无水硫酸镁干燥过夜，硅藻土过滤，减压浓缩至干，70℃干燥6h，烘至水分低于0.2％(水分越低越利于下步反应)，得1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮，即式IV化合物70.2g(0.19mol)。

[0046] 在氮气保护下，将得到的式IV化合物70.2g(0.19mol)投入2L三口瓶中，加入1000ml甲醇搅拌溶解，将4.0g氢氧化钠溶于20ml甲醇中，在搅拌下将氢氧化钠-甲醇溶液缓缓滴加进三口瓶中，搅拌反应，反应1h后，冷却抽滤，得阿扎胞苷粗品34.0g，用400ml N-甲基吡咯烷酮80℃溶解，滴加400ml环己烷析晶，抽滤，滤饼用无水乙醇洗涤得到阿扎胞苷成品26.5g。

[0047] 实施例2：本发明所述阿扎胞苷的合成方法

[0048] 在氮气保护下，将25.8g(0.23mol)5-氮杂胞嘧啶、0.4g(0.001mol)四丁基溴化铵投入到1L三口瓶中，加入120ml(0.575mol)HMDS和258ml甲苯搅拌升温至125℃，5h左右溶液澄清，然后减压蒸掉溶剂至恒重，得N-三甲基硅基-4-三甲基硅基氧基-2-胺-1，3，5-三嗪，即式II化合物62.0g(0.24mol)。

[0049] 在氮气保护下，将62.0g(0.24mol)式II化合物用500ml四氢呋喃溶解后，投入1L三口瓶中搅拌，再加入115.0g(0.36mol)四乙酰核糖，再用100ml四氢呋喃冲洗加料漏斗，常温下缓慢滴加64.5ml(0.36mol)三氟甲基三甲基硅脂，搅拌反应，反应4h后，将反应液在55℃浓缩至干，油状物用1，1，2-三氯乙烷溶解，然后加入大量饱和碳酸钠溶液至溶液pH为9-10，分液，水层用450ml 1，1，2-三氯乙烷分两次萃取，合并有机层，有机层用无水硫酸镁干燥过夜，硅藻土过滤，减压浓缩至干，70℃干燥6h，烘至水分低于0.2％(水分越低越利于下步反应)，得1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮，即式IV化合物67.0g(0.18mol)。

[0050] 在氮气保护下，将得到的式IV化合物67.0g(0.18mol)投入2L三口瓶中，加入900ml甲醇搅拌溶解，将3.8g氢氧化钠溶于20ml甲醇中，在搅拌下将氢氧化钠-甲醇溶液缓缓滴加进三口瓶中，搅拌反应，反应0.5h后，冷却抽滤，得阿扎胞苷粗品29.0g，用400ml N-甲基吡咯烷酮80℃溶解，滴加400ml环己烷析晶，抽滤，滤饼用无水乙醇洗涤得到阿扎胞苷成品24.8g。

[0051] 实施例3：本发明所述阿扎胞苷的合成方法

[0052] 在氮气保护下，将25.8g(0.23mol)5-氮杂胞嘧啶、38.2g(0.115mol)四丁基氯化铵投入到1L三口瓶中，加入150ml(0.72mol)HMDS和650ml甲苯搅拌升温至125℃，4h左右溶液澄清，然后减压蒸掉溶剂至恒重，得N-三甲基硅基-4-三甲基硅基氧基-2-胺-1，3，5-三嗪，即式II化合物85.0g(0.33mol)。

[0053] 在氮气保护下，将85.0g(0.33mol)式II化合物用500ml四氢呋喃溶解后，投入1L三口瓶中搅拌，再加入120.0g(0.38mol)四乙酰核糖，再用100ml四氢呋喃冲洗加料漏斗，常温下缓慢滴加64.5ml(0.36mol)三氟甲基三甲基硅脂，搅拌反应，反应7h后，将反应液在55℃浓缩至干，油状物用1，1，2-三氯乙烷溶解，然后加入大量饱和碳酸钠溶液至溶液pH为9-10，分液，水层用500ml 1，1，2-三氯乙烷分两次萃取，合并有机层，有机层用无水硫酸镁干燥过夜，硅藻土过滤，减压浓缩至干，70℃干燥6h，烘至水分低于0.2％(水分越低越利于下步反应)，得1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮，即式IV化合物74.0g(0.20mol)。

[0054] 在氮气保护下，将得到的式IV化合物74.0g(0.20mol)投入2L三口瓶中，加入950ml甲醇搅拌溶解，将5.0g氢氧化钠溶于20ml甲醇中，在搅拌下将氢氧化钠-甲醇溶液缓缓滴加进三口瓶中，搅拌反应，反应1h后，冷却抽滤，得阿扎胞苷粗品34.0g，用400ml N-甲基吡咯烷酮80℃溶解，滴加400ml环己烷析晶，抽滤，滤饼用无水乙醇洗涤得到阿扎胞苷成品28.5g。

[0055] 实施例4：本发明所述阿扎胞苷的合成方法

[0056] 在氮气保护下，将100.0g(0.89mol)5-氮杂胞嘧啶、3.0g(0.009mol)四丁基碘化铵投入到3L三口瓶中，加入480ml(2.3mol)HMDS和1900ml甲苯搅拌升温至125℃，8h左右溶液澄清，然后减压蒸掉溶剂至恒重，得N-三甲基硅基-4-三甲基硅基氧基-2-胺-1，3，5-三嗪，即式II化合物300.0g(1.15mol)。

[0057] 在氮气保护下，将300.0g(1.15mol)式II化合物用1500ml四氢呋喃溶解后，投入3L三口瓶中搅拌，再加入480.0g(1.52mol)四乙酰核糖，再用300ml四氢呋喃冲洗加料漏斗，常温下缓慢滴加260.0ml(1.45mol)三氟甲基三甲基硅脂，搅拌反应，反应8h后，将反应液在55℃浓缩至干，油状物用1，1，2-三氯乙烷溶解，然后加入大量饱和碳酸钠溶液至溶液pH为9-10，分液，水层用1500ml 1，1，2-三氯乙烷分两次萃取，合并有机层，有机层用无水硫酸镁干燥过夜，硅藻土过滤，减压浓缩至干，70℃干燥6h，烘至水分低于0.5％(水分越低越利于下步反应)，得1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮，即式IV化合物320.7g(0.87mol)。

[0058] 在氮气保护下，将得到的式IV化合物320.7g(0.87mol)投入5L三口瓶中，加入3000ml甲醇搅拌溶解，将20.0g氢氧化钠溶于300ml甲醇中，在搅拌下将氢氧化钠-甲醇溶液缓缓滴加进三口瓶中，搅拌反应，反应1.5h后，冷却抽滤，得阿扎胞苷粗品112.6g，用
2000ml N-甲基吡咯烷酮80℃溶解，滴加2000ml环己烷析晶，抽滤，滤饼用无水乙醇洗涤得到阿扎胞苷成品90.5g。

[0059] 实施例5：本发明所述阿扎胞苷的合成方法

[0060] 在氮气保护下，将25.8g(0.23mol)5-氮杂胞嘧啶、7.7g(0.023mol)苄基三乙基氯化铵投入到1L三口瓶中，加入144ml(0.69mol)HMDS和570ml甲苯搅拌升温至125℃，5h左右溶液澄清，然后减压蒸掉溶剂至恒重，得N-三甲基硅基-4-三甲基硅基氧基-2-胺-1，3，5-三嗪，即式II化合物68.0g(0.25mol)。

[0061] 在氮气保护下，将68.0g(0.26mol)式II化合物用500ml四氢呋喃溶解后，投入1L三口瓶中搅拌，再加入120.0g(0.38mol)四乙酰核糖，再用100ml四氢呋喃冲洗加料漏斗，常温下缓慢滴加64.5ml(0.36mol)三氟甲基三甲基硅脂，搅拌反应，反应6h后，将反应液在55℃浓缩至干，油状物用1，1，2-三氯乙烷溶解，然后加入大量饱和碳酸钠溶液至溶液pH为9-10，分液，水层用500ml 1，1，2-三氯乙烷分两次萃取，合并有机层，有机层用无水硫酸镁干燥过夜，硅藻土过滤，减压浓缩至干，70℃干燥6h，烘至水分低于0.2％(水分越低越利于下步反应)，得1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮，即式IV化合物72.1g(0.20mol)。

[0062] 在氮气保护下，将得到的式IV化合物72.1g(0.20mol)投入2L三口瓶中，加入1000ml甲醇搅拌溶解，将4.0g氢氧化钠溶于20ml甲醇中，在搅拌下将氢氧化钠-甲醇溶液缓缓滴加进三口瓶中，搅拌反应，反应0.5h后，冷却抽滤，得阿扎胞苷粗品36.0g，用360ml N-甲基吡咯烷酮80℃溶解，滴加360ml环己烷析晶，抽滤，滤饼用无水乙醇洗涤得到阿扎胞苷成品28.4g。

[0063] 实施例6：本发明所述阿扎胞苷的合成方法

[0064] 在氮气保护下，将100.0g(0.89mol)5-氮杂胞嘧啶、15.0g(0.044mol)苄基三乙基溴化铵投入到3L三口瓶中，加入593ml(3.65mol)HMDS和1500ml甲苯搅拌升温至125℃，6h左右溶液澄清，然后减压蒸掉溶剂至恒重，得N-三甲基硅基-4-三甲基硅基氧基-2-胺-1，3，5-三嗪，即式II化合物284.3g(1.09mol)。

[0065] 在氮气保护下，将284.3g(1.09mol)式II化合物用1500ml四氢呋喃溶解后，投入1L三口瓶中搅拌，再加入420.0g(1.33mol)四乙酰核糖，再用300ml四氢呋喃冲洗加料漏斗，常温下缓慢滴加260.0ml(1.45mol)三氟甲基三甲基硅脂，搅拌反应，反应8h后，将反应液在55℃浓缩至干，油状物用1，1，2-三氯乙烷溶解，然后加入大量饱和碳酸钠溶液至溶液pH为9-10，分液，水层用500ml 1，1，2-三氯乙烷分两次萃取，合并有机层，有机层用无水硫酸镁干燥过夜，硅藻土过滤，减压浓缩至干，70℃干燥6h，烘至水分低于0.5％(水分越低越利于下步反应)，得1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮，即式IV化合物314.6g(0.85mol)。

[0066] 在氮气保护下，将得到的式IV化合物314.6g(0.85mol)投入5L三口瓶中，加入3000ml甲醇搅拌溶解，将16.0g氢氧化钠溶于270ml甲醇中，在搅拌下将氢氧化钠-甲醇溶液缓缓滴加进三口瓶中，搅拌反应，反应0.7h后，冷却抽滤，得阿扎胞苷粗品136.3g，用
1500ml N-甲基吡咯烷酮80℃溶解，滴加1500ml环己烷析晶，抽滤，滤饼用无水乙醇洗涤得到阿扎胞苷成品112.5g。

[0067] 实施例7：本发明所述合成方法硅烷化反应效率分析

[0068] 分别对实施例1至实施例6合成的式II化合物进行取样，HPLC外标法检测其纯度，并依照实施例1至实施例6硅烷化反应条件，用硫酸铵替代季铵盐类相转移催化剂，分别记录硫酸铵催化生成的式II化合物达到实施例1至实施例6合成的式II化合物同等程度纯度时所需的时间，结果参见表1。

[0069] 其中，HPLC色谱柱为反相C18柱(5μm，250×4.6mm)；流动相A为15mM的磷酸氢二钾和15mM的乙酸铵混合溶液，pH用稀释的磷酸(10ml 85％磷酸和100ml水)调节至6.5-6.8；流动相B为流动相A和乙腈的混合溶液流动相A和乙腈的体积比为3∶2，具体反应条件参见表2。

[0070] 表1硅烷化反应效率分析

[0071]

[0072] 表2HPLC反应条件

[0073]运行时间 流速 检测波长 柱温 进样量 稀释液 流动相A 流动相B
50min 0.7ml/min 235nm 15℃ 2μl DMSO 55％ 45％

[0074] 结果显示，依照实施例1至实施例6硅烷化反应条件，用硫酸铵替代季铵盐类相转移催化剂进行反应，其生成的式II化合物纯度达到各实施例合成的式II化合物同等程度纯度时所需时间为13h左右，而各实施例所需时间为6-7左右。表明本发明所述合成方法的硅烷化反应时间明显缩短了50％左右。

[0075] 实施例8：HMDS废液量分析